Способ определения количества тканевых структур на гистоцитологическом препарате и устройство для его осуществления

 

Изобретение относится к медици- , не, а именно к гистологической техяиа ке. Целью является повышение точности способа. Цель достигается тем, что. на препарате после спектрофотометрии определяют длины волн наибольшей ин-; тенсивности свечения, далее измеряют спектр свечения всего поля зрения при данной длине волны, а количество тканевых структур на препарате рассчитьН вают по разнице между значениями тенсивности свечения всего поля и каждой выделенной структуры. Способ позволяет значительно повысить информативность исследований, 2 с,п,ф-лы 1 ил.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

А1.

„„SU„„1698677 (51)5 G 01 N 1/28

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ. ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ Гннт СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ

К А ВТОРСНОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

1 ил. и

;5:т„(Ф,) s „

Ф и

ХТ („) s„

- т„(,)s 8

z „„(A„) soÁ ° ния, длина волны и интегральная площадь (21) 4422878/14 ! (22) 25 ° 03.88 (46) 15, 12,91. Бюл. Р 46 (72) Н.Н.Петровичев, В.JI.ÍàáàðoB, А.В.Иванов, В.В.Чвыков, А,Я .Фаенов, В.И,Пустовойт. В.Н.Ыеховцов и И.Ю,Скобелев (53) 818.0.89.9(088.8) (56) Люминисцентный анализ в гастроэнтерологии, Ленинград, Наука. 1984, 64-90. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ КОЛИЧЕСТВА

ТКАНЕВЧХ СТРУКТУР НА Н1СТОЦИТОЛОГИ ЧЕСКОМ ПРЕПАРАТЕ И УСТРОЙСТВО ДЛЯ

ЕГО ОСУЦЕСТВЛЕНИЯ

Изобретение относится к медицине, а именно к морфометрическим исследованиям в гистологии и цитологии, и может быть использовано в медико-биологических.и биофизических исследованиях для излучения, обработки морфо-. метрических и спектральных характеристик микропрепаратов, Целью иэобретения является повыше- ние точности способа, Способ осуществляют следующим образом.

Сначала производят контрастирование изучаемых тканевых структур микропрепарата, например, ядер, цито.плазмы митохондрий и т.д., любым из известных способов, например мег тодами гистохимического окрашивания, Затем измеряют спектры свечения отдельных тканевых структур, количество которых необходимо измерить, Затем

2 (57) Изобретение относится к медицине, а именно к гистологической техни ке. Целью является повышение точности способа, Цель достигается тем, что. на препарате после спектрофотометрин определяют длины волн наибольшей ин-. тенсивности свечения, далее измеряют спектр свечения всего поля зрения ррй

/ данной длине волны, а количество тка невых структур на препарате рассчиты

t вают по разнице между значениями ин у тенсивности свечения всего поля и каждой выделенной структуры. Способ позволяет значительно повысить инфор" мативность исследований. 2 c ° п.ф-лы

l путем сравнения спектров выбирают длины волн, на которых интенсивность, свечения отдельных измеряемых тканевых структур особенно сильно pasличается. После этого измеряют на выбранных длинах волн свечение всего, 1 поля зрения, на котором необходимо измерить количество выделенных ткане+ вых структур. Затем составляют и решают следующее уравнение: где ?„,Ъп, S „— интенсивность свече-

1698677 занимаемой тканевой структурой.

Решение этого уравнения относительно неизвестных 8 осуществляют способом $1 = dn/d где Ь вЂ” главный определитель системы

Qn — дополнительный определитель системы.

Полученные величины соответствуют количеству выделенных тканевых структур, находящихся в поле зрения микро, скопа. 15

Способ осуществляется с помощью устройства, приведенного на чертеже, где имеются тракты освещения микрообъекта 1 в проходящем, отраженном и возбуждающем люминесценцию свете, включающи в себя источник излучения

2.и оптическую систему, направляю- щую излучение на исследуемый микрообъект 3. Особенностью этих. схем является необходимость иметь в микроскопе стабилизированный широкополостный источник излучения, Лучше всего эти функции выполняют ксеноновые лампы со стабилизированным питанием.

Диафрагма 4 с переменной аппертурой, расположенная в плоскости изображения

5 объектива 6 служит для выделения тканевых стРУктУР микропрепарата,количество которых необходимо определить. Полупрозрачные пластинки 7,8 позволяют проводить визуальные исследования при одновременном измерении спектральной информации,. окуляр

9 микроскопа, согласующий объектйв 10, в фокусе которого расположен входной 40 торец приемного смесительного световода 11, который согласуются с ним по числовой и угловой аппертурам во избежание потерь информации за счет невыполнения полного внутреннего отражения световода или диафрагМирования, части изображения аппертуРой световода. Линза 12 согласует выходной торец световода 1 3 с фоточувствительным элементом 14 акусто„. 50 оптического фильтра, который позволяет производить измерения спектров на заданных длинах волн, выбираемых заранее блоком управления и обработки

15, связанным с микроЭВМ 16;

Устройство работает следующим образом. В плоскости диафрагмы 4 объективом 6 строится изображение 5 микропрепарата 1, освещаемого проходящим, отраженным или возбуждающим люминесценцию излучением. Диафрагмой

4 выбирают поле зрения, с которого снимается спектральная информация.

Выбор поля зрения производят при визуальном наблюдении через окуляр

9. Излучение, пройдя пластинки 7 и 8 и согласующий объектив 10, попадает в смесительйое волокно световода 11, где происходит оптическое перемешивание пучков излучения полученных от; различных участков поля зрения и несущих различную спектральную информацию. Полученное на выходе волокна однородное по спектральным свойствам излучение. проходит согласующий объектив 10 и акустооптический спек грофотометр, где преобразуется в электрический сигнал и запоминается в блоке управления и обработки 15 с помощью микроЭВМ 16, соединенной с блоком 15. Обработка измеренных спектров, выбор характеристических длин волн и вычисления морфологических характеристик исследуемого микропрепарата осуществляют по выше приведенному алгоритму.

Пример. При окраске препарата

I фуксином определялось количество межклеточной ткани и всех остальных тканевых структур, В процессе измерения методом точечного счета производилось 8 замеров при различных положениях окуляра.

Так для поля 1 получены следующие значения количества межклеточной ткани по отношению ко всем остальным i структурам,Е: 76,7?,68,76,92,88,88.

Время измерения по одному полю зрения составило 20 мин.

Точность измерений не превышала

;1-Е в диапазоне от 400 до 650 нм, где ! наблюдались, наибольшие различия интенсивности излучения прошедшего через различные тканевые структу ры препарата, Максимальное различие наблюдалось при длине волны 550 нм. Отсчеты интенсивности составили для межклеточной ткани 0,175 для остальных структур 1. Получены следующие значения количества межклеточной ткани по отношению ко всему полю зрения. Для поля 1 — 77,6+1%, Для поля 2 — 49,8+1 Е, Время, затраченное на измерение одного поля зрения, включая подготовку к исследованию, составило не более 3 мин.

Формула изобретения

1. Способ определения количества тканевых структур на гистоцитологи- ческом препарате путем его окрашива-. ния с последующей спектрофотометрической оценкой выделенных структур о т л.и ч а ю шийся тем, что, с целЬю повышения точности способа на препарате после спектрофотометрии

Составитель Л.Стебаева

Техред M.Moðãåíòàë

Корректор Л,Патай Редактор В.Фельдман

Заказ 4386 Тираж Подписное ,ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Чроизводственно-полиграфическое предприятие, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

169

Использование предлагаемого спосо-: ба определения количества тканевых структур и устройство для его осуществлейия обеспечивает повышение чувствительности измерений, так как производится выбор длин волн во всем диапазоне, на которых сравниваемые тканевые структуры имеют наибольший контраст. Кроме того, имеет место сокращение времени, упрощение методики и применяемой аппаратуры.

677

6 определяют длины волн наибольшей интенсивности свечения, далее измеряют спектр свечения всего поля зре ния при данной длине волны, а количество тканевых структур на препарате рассчитывают по разнице между значениями интенсивности свечения всего поля и каждой выделенной струк10 TyPbI °

2. Устройство для определения коли -,. чества тканевых структур на гистоцито) логическом препарате, содержащее оптический микроскоп с переменной диафрагмой и измерительный элемент, о тл и ч а ю щ е е с я тем, что, с целью повышения точности, оно снабже-, ! но смесителем световых пучков, состоящее из входного согласующего элемен-

20 та, моноволокна и выходного согласующего объектива,а измерительный элемент выполнен в виде спектрофотометра.