Способ определения аномального липопротеида в сыворотке крови больных гепатитом
Изобретение относится к медицине и касается способов определения аномального липопротеида в сыворотке( крови больных гепатитом. Целью изобретения является упрощение и ускорение способа. Способ осуществляется посредством проведения встречного электрофореза сыворотки больных в присутствии детергента тритона Х-100 или Твина-80, или сульфанола в концентрации 0,5-1% в градиенте потенциала 15-20 в/см в течение 50-60 мин.
СООЗ СОВЕТСНИХ
СОЦИМИСТИЧЕСНИХ
РЕСПУ БЛИН (51)5 С 01 N 33 48
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ
ПО ИЭОБРЕТЕНИЯМ И QTHPbfTHAM
ПРИ ГКНТ СССР !
Б»...=,„,,;":: Т=. КА
К АВТОРСНОМ,Ф СВИДЕТЕЛЬСТВУ
{21) 4490676/14 (22) 03. 10.89 (46) 15. 12.91. Бюл. № 46 (71) Витебский медицинский институт (72) К.С.Азаренок и Н.В.Железняк (53) 616.003.215 (088.8) (56) тапсе, 1970, № 2, р. 579-581. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНОМАПЬНОГО
ЛИПОПРОТЕИДА В CblBOPOTKE КРОВИ БОЛЬНЫХ ГЕПАТИТОМ (57) Изобретение относится к медициИзобретение относится к медицине и касается способов определения аномального липопротеида в сыворотке крови больных гепатитом ., Целью изобретения является упрощение и ускорение способа..
Пример конкретного осуществления способа.
На стеклянную пластинку наливают прозрачный 1Х-ный агар (фирма "Диф-» ко") или 1Х-ный бактоагар (фирма "Фе- .рок"), приготовленный на натрий-ацетат-барбиталовом буфере рН 8, 1-8,6.
Для приготовления 1 л буфера требуется 8,14 rp барбитала натрия (медикал), 6,48 г уксусно-кислого натрия, 90 мл 0,1 мо нормального раствора соляной кислоты.
После застывания агара в нем делают лунки на расстоянии 6 мм друг от друга. Со стороны катода в лунки помещают испытуемые сыворотки, а со стороны анода детергент (0,5-1%-ный; раствор тритон Х-100 или твин-80, или сульфанола в дистиллированной водЕ) . Затем стекло помещают в прибор
„„ЯЦ„„1698763 Д 1
2 не и касается способов определения аномального липопротеида в сыворотке» крови больных гепатитом. Целью изобретения является упрощение и ускорение способа. Способ осуществляется посредством проведения встречного электрофореза сыворотки больных в присутствии детергента тритона Х-100. или Твина-80, или сульфанола в концентрации 0,5-1% в градиенте потенциала 15-20 B/ñì в течение 50-60 мин. для электрофореза. В электродные сосуды наливают натрий-ацетат-барбиталовый буфер рН 8,1 — 8,6, разведенный 1:10 дистиллированной водой.
Электрофорез проводят при силе тока !
5-20 ма, напряжении 300-400 В и градиенте потенциала 15-20 ма напряжении 3 в/см в течение 50-60 мин.
Для учета результата пластинку просматривают в косом проходящем свете. При наличии аномального липопротеида s сыворотке крови между лунками обнаруживается, четкая полоса преципитации, не исчезающая после обработки пластины 10Х-ным раствором КС1, эта полоса преципитации принадлежит ! аномальному лупопротеиду (АПП).
При изучении морфологических и физико-химических свойств миланского антигена было выявлено, что он .является липопротеидом низкой плотности, плавучая плотность которого в градиенте сахарозы 1,06, не окрашивается суданом черным, но окрашивается жировым красным 7 В и нафталиновым черным, при электронной микроскопии
1698763
Т а б л и ц а 1
Частота обнаружения АЛП при различных заболеваниях
Обсле- Продолжи- Частодовано тельный та, 7. результат
Пример Заболевания
1 Вирусный гепатит А
2 Вирусный гепатит В
77,4
48
55,5
3 Недиференць(рованный вирусный гепатит
12 3
1136 14
803 15
25,0
1,23
1,87
4 Доноры
5 Другие заболевания
Достоверность различий:
Р > 0,005
P c 0,001
P (0,001
P С 0,05
Р а 0,05 р (0,01
P с 0,001
P (0,001 представляет собой дископодобные частицы величиной 40-50 нм. Однако в сыворотке больных и перенесших гепатит
А из-за его слабых антигенных свойств.5
Таким образом при упрощении и ускорении способа обнаружена довольно высокая частота обнаружения АПП в сыворотках больных гепатитом.
В табл. 1 и 2, 3 представлены дан- 10 ные по частоте обнаружения АЛП при различных гепатитах в зависимости от тяжести заболевания, а также в зависимости от положительной реакции аланиновой аминотрансферазы.. Из пред» ставленных данных следует, что имеет-. ся положительная корреляция на обнаружение АЛП и тяжестью заболевания, данные табл. 3 свидетельствуют о бо-, лее высокой чувствительности обнаружения АЛП по сравнению с тестом А и
AT. При этом упрощение способа. дости-! гается эа счет исключения использова" ния специфической BHTHcblBopoTKH> также значительно ускоряется и время проведения реакции с 18-24 ч до 1 ч (вреиени,проведения встречного элект" рофореэа).
Формула и э обретения
Способ определения аномального липопротеида в сыворотке крови больных гепатитом путем исследования сыворотки больных в реакции преципитации, отличающийся тем, что, с целью упрощения и ускорения способа, преципитацию осуществляют встречным электрофорезом в присутствии детергента тритона х-100.или твииа-80, или сульфанола в концентрации 0,5-1Х, в градиенте потенциала 15-20 в/см в течение 50-60 мин.
1698763 Таблица 2
««»«»»Ь««««L
День желтухи
Тяжесть
Всего
1-5
16-20 20 и более
t 1-15
6-10
42/О 145/39
0Х 26,9X
19/О
0Х
29/8 14/О
27,6% 0Х
41/31
75, 6Х
Легкая
Среднетяжелая
6/5 13/8 8/5 11/1 56/33
83,3Х 61,5Х „ 62,5Х .9,1Х 58,9Х
18/14
77,8%
2/2 3/3 2/1 5/5 . 15/14
100% 100Х 50Х 100Х 93,3Х
3/3
100%
Тяжелая
37/15 30/11 29/6 58/6 217/86 .
40,5% 36,7Х 20,7Х 10,3Х 39,8Х
62/48
77,4%
Всего
АпП обнаружен » «»»э»ю
Та блица 3
Частота обнаружения АЛП и повышенная активность АлАТ у детей.и взрослых в организованных детских коллективах.
Учреждения и возраст
АлАТ, 0,68 ммоль/л-ч
1 абс доверит инт.
Х при P .0,05Х
° » ««Й«4» «««Ь Ь» абс
Х оверит. интерв. при р 0,05 в Х
0-4,8Х
Достоверность различий
А-Б
Р,в (0,001
Р », > 0;05
Составитель С «Мельникова
Редактор В«Фельдман Техред К.Дрык Корректор А.Обручар
Заказ 4391 Тираж; .Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета по Изобретениям и открытиям при ГКНТ;СССР.
113035, Москва, Ж-35, Раушская неб., д. 4/5
Производственно-издательский комбинат "Патент", г.Ужгород, ул. Гагарииа Ю1
А Учреждения, где наблюдались случаи гепатита А/42/
1 Дети (1041)
2 Взрослые (145) Б Учреждения, где гепатит А не наблюдался в течение года (2) 1 Дети (50)
2 Взрослые (8) 125
12Х
22
14,2%
10Х-14%
8,6%-19,8Х
3,9Х-6,УХ
0-.5,8Х
