Способ определения спонтанной деформабельности эритроцитов на препарате

 

Изобретение относится к медицине, а именно, к гематологии. Целью является повышение точности способа путем выявления степени деформабельности эритроцитов . Это достигается тем, что кровь инкуибируют с 0,15 М раствором хлорида натрия, приготовленным на 0,1 М фосфатном буфере рН 7,4. При этом инкубацию проводят при комнатной температуре в течение 60-65 мин. Далее к крови добавляют глютаровый альдегид и готовят препарат раздавленной капли. Под микроскопом просчитывают количество шиповато-измененных эритроцитов и по их содержанию определяют степень деформабельности эритроцитов.

союз соВетских социАлистических

РЕСПУБЛИК (я)5 G 01 N. 1/28, ЗЗ/48

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И OTKPblTNRM

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4436832/14 (22) 06.06,88 (46) 15,12.91.Бюл. М 46 (71) Ставропольский государственный медицинский институт (72) В,Н,Игнатьев (53) 616-0.89,9(088,8) (56) Сьггу И,D, et al„Biophysiology У, 1978, v 21, и 1, р 19 — 24. (54 СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СПОНТАННО;il ДЕФОРМАБЕЛЬНОСТИ ЭРИТРОЦИT0B НА ПРЕПАРАТЕ (57) Изобретение относится к медицине, а именно, к гематологии, Целью является поИзобретение относится к медицине, а именно к физико-химическим исследованиям крови, и может быть использовано для изучения пластичности и стабильности мембраны эритроцитов при патологии.

Способ осуществляется следующим образом, Кровь в количестве 1-2 мкл, взятую из пальца, переносят в одну из лунок планшета .для иммунологических исследований, которую предварительно заполняют 0,18-0,2 мл физиологической среды; 0,15 M раствор хлорида натрия на 0,1 M фосфатном буфере р Н 7,4. Перемеш и вают смесь пластиковым наконечником микропипетки или осторожно пипетируют. Затем закрывают планшет крышкой и оставляют B таком виде при комнатной температуре 21 2 С. Эритроциты при этом спонтанно изменяют свою форму без воздействия внешней силы.

Спустя 1 ч для остановки процесса в лунку вносят 0,02 мл 25 фиксатора — глютаральдегида, перемешивают содержимое

„„5U„„1698678 А1 вышение точности способа путем выявления степени деформабельности эритроцитов, Это достигается тем, что кровь инкуибируют с 0,15 M раствором хлорида натрия, приготовленным на 0 1 М фосфатном буфере рН 7,4. При этом инкубацию проводят при комнатной температуре в течение 60 — 65 мин. Далее к крови добавляют глютаровый альдегид и готовят препарат раздавленной капли, Под микроскопом просчитывают количество шиповато-измененных эритроцитов и по их содержанию определяют степень деформабельности эритроцитов. и через 3 — 5 мин на предметном стекле готовят препарат "раздавленной капли", который затем микроскопируют, Учет результатов спонтанно протекающей деформации эритроцитов проводят путем подсчета не менее 200 клеток, встречающихся в поле зрения. При этом дифференцируют следующие клетки; дискоциты— клетки нормальной формы с двояковогнутой поверхностью, эхиноциты — с зубчатой или шиповидной поверхностью и все остальные клетки, обозначенные как "другие формы", Основную часть других форм клеток обычно составляют стомациты и книзоциты. Результаты выражают в процентах.

С целью упрощения условий спонтанно протекающей деформации клеток, инкубацию их проводили при комнатной температуре. при которой оптимально необходимое время экспозиции составило 1 ч или 60 — 65 мин. После добавления в лунку фиксатора приготовление препарата "раздавленной капли" для микроскопии объекта вовсе не обязательно

Составитель Л.Стебаева

Редактор М.Недолуженко Техред М.МОргентал Корректор Т.Палий

Заказ 4387 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент",. r Ужгород, ул.Гагарина, 101 проводить немедленно, Форма клеток остается стабильной в течение 3 — 4 сут наблюдения и меняется лишь при высыхании содержимого лунки, Это очень удобно как при серийных исследованиях в эксперимен- 5 те, так и в повседневной работе клинической лаборатории.

Пример 1, Пробу крови (1 мкл) здоророго человека переносят в лунку 96-луночного планшета, смешивают с помещенной в 10 нее физиологической средой (0,2 мл), накрывают крышкой и оставляют стоять на столе при обычных условиях. Спустя 60 мин в лунку добавляют 0,02 мл 25;4 глюторальдегида и через 3-5 мин готовят препарат "раздав- 15 ленной капли" для микроскопии, Дифференцированный подсчет клеток показал; суммарное количество эхиноцитов 46,5;4, всех других форм 8,5 ь, дискоцитов 45, что расценено как хорОшее состояние пла- 20 стичности зритроцитов при достаточной стабильности их наружной мембраны.

Пример 2, Пробу крови (1 мкл) больного хронической пневмонией переносили в физиологическую среду, инкубировали и 25 фиксировали потакой же методике. Подсчет клеток обнаружил 32,5"-,ь эхиноцитов, 24% других форм и 43,5 j дискоцитов„что расце-, нено как снижение пластичности эритроцитов при достаточной стабильности их 30 наружной мембраны.

Пример 3. Пробу крови (1 мкл) больного острой пневмонией переносили в физиологическу о среду, инкубировали и фиксировали по описанной методике. Под- 35 счет клеток выявил 90,5 эхиноцитов,9,5 дискоцитов и полное отсутствие других форм клеток, что расценено как повышение пластичности эритроцитов при нестабильном состоянии их наружной мембраны. 40

При обследовании установлено, что наибольшее число шиповидно-деформированных эритроцитов (эхиноцитов) образовывалось у больных острой неспецифической пневмонией 65,5+4,37, 45 затем у здоровых лиц 48,4 + 4,4;/ и больных хронической пневмонией в фазе Обострения 36,97+ 6,67;, а наименьшее их количество у больных сахарным диабетом

16,1 -2,7 . Напротив, наибольшее число 50 всех других деформированных клеенок оказалось у пациентов с сахарным диабетом

62,8 3,4%, а наименьшее — у больных хронической пневмонией 19,4 + 3,27.

Деформабельность эритроцитов является одним из параметров, определяющим реалогию крови. 8 предлагаемом способе число эхиноцитов, образующихся в физиологической среде, прямо пропорционально способности эритроцитов изменять свою форму, т.е, пластичности, а число образующихся других форм клеток в такой же мере соответствует стабильности их наружной мембраны, поскольку не сопровождается образованием локальных выпячиваний мембранного вещества.

Таким образом, предлагаемый способ определения спонтанно протекающей деформации эритроцитов в физиологической среде отражает существенные биологические сдвиги в организме.

Предлагаемый способ позволяет характеризовать специфическое сострян. е мембраны эритроцитов не только больных и здоровых лиц, но и при том или ином патологическом процессе, и может быть использован как дополнительный тест в динамическом контроле за течением заболевания.

Формула изобретения

Способ определения спонтанной деформабельности эритроцитов на препарате путем забора крови, инкубации в среде, . содержащей раствор хлорида натрия, изготовления препарата раздавленной капли и выявления шиповато-деформированных эритроцитов, отл ич а ющийс ятем,что, с целью повышения точности способа путем выявления степени деформабельности, инкубацию проводят при (21+2) С в течение

60 — 65 мин, при этом 0,15 М раствор хлорида натрия готовят на 0,1 М фосфатном буфере рН 7,4, а перед изготовлением препарата раздавленной капли в среду добавляют раствор глютарового альдегида до 2,53,0%-ной концентрации, и при наличии на препарате до 60-100 $ шиповато-деформированных эритроцитов определяют высокую степень деформабельности эритроцитов. а при наличии до 30 — 59 шиповато-деформированных эритроцитов низкую.