Способ выявления патологического состояния организма
Изобретение относится к медицине , а именно к иммунологии, и может быть использовано для динамической характеристики и прогнозирования течения воспалительных заболеваний путем оценки активности системы комплемента Целью изобретения является Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для динамической характеристики и прогнозирования течения воспалительных заболеваний. Целью изобретения является повышение точности, сокращение времени и снижение трудоемкости. Способ осуществляется следующим образом. Кровь центрифугируют в режиме 4000 g 5 мин, сыворотку сразу отделяют от сгустка и при необходимости хранят до использования при -70°С. повышение точности способа, сокращение времени, снижение трудоемкости. Для осуществления способа кровь центрифугируют в режиме 4000 g 5 мин. Готовят реакционную смесь, включающую соответствующий буфер, исследуемую сыворотку и взвесь эритроцитов кролика (альтернативный путь активации комплемента) или сенсибилизированных эритроцитов барана (классически . путь). Измерения производит путем периодической регистрации количестваэритроцитов, подвергающихся лизису в процессе активации системы комплемента с помощью лабораторного счетчика частиц Picoseal при комнатной температуре . В соответствии с данными динамического измерения строят кривые лизиса эритроцитов, отражающие функциональные возможности системы комплемента у здоровых и больных детей . Положительный эффект способа подтверждается клиническим материалом . I IB Для исследования кинетики активации системы комплемента по классическому пути готовили изотонический раствор вероналмединалового буфера (рй 7,4), состоящего из 2,875 г веронала , 1500 мг мединалаи 42,500 г хлорида натрия в 1,0 мл дистиллированно 4 воды, к полученному раствору добавляли 2,5 мл 1 М хлорида магния и 0,75 мл 1 М хлорида кальция. Исследование кинетики активации комплемента по альтернативному пути проводили с использованием 100 мл 0,1 М этиленгликольтетрауксусС со 00 00
„SU„169
СОЮЗ СОВЕТСНИХ
СОЦ ИАЛИСТРНЕСНИХ
РЕСПУБЛИК (gl)5 G 01 N 33/53
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ
ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ
ПРИ ГННТ СССР
ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ =- =
К А ВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ
С5 сй, Об
1 (21) 4626893/14 . ,1 (22) 06. 12. 88 (46) 15. 12 ° 91. Бюл. № 46 (71) Московский научно-исследовательский институт педиатрии и детской хирургии (72) Е.С.Леонова, Г.В:Ляликова и Т. В.Косенкова (53) 615.373 (088.8) . (66) НауЬу D. À., Kleinheue F M. Biesecker J.L. Determination of alternative pathnay of complement kinetics ,.Ъу electron spin resonance spectro- .
scopy. Am. J. Glim. Pathol. 1983, v. 79, 6, 673-677. (54) СПОСОБ ВЫЯВЛЕНИЯ ПАТОЛОГИЧЕСКОГО СОСТОЯНИЯ ОРГАНИЗМА (57) Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для динамической характеристики и прогнозирования течения воспалительных заболеваний путем оценки активности системы комп.лемента. Целью изобретения является
Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть
:использовано для динамической характеристики и прогнозирования течения воспалительных заболеваний.
Целью изобретения является повьппение точности, сокращение времени и сншкение трудоемкости.
Способ осуществляется следующим образом.
Кровь центрифугируют в режиме
4000 g 5 мин, сыворотку сразу отделяют от сгустка и при необходимости хранят до использования при -70 С.
2 повынение точности способа, сокращение времени, снижение трудоемкостью.
Для осуществления способа кровь цвнтрифугируют в режиме 4000 g 5 мин. Готовят реакционную смесь, включающую соответствующий буфер, исследуемую сыворотку и взвесь. эритроцитов кролика (альтернативный путь активации комплемента) или сенсибилиэиро1ванных эритроцитов барана (классический путь). Измерения производйт путем аериодической регистрации количества. эритроцитов, подвергающихся лиэису в процессе активации системы комплемента с помощью лабораторного счетчика частиц "Picoscal" при комнатной температуре. В соответствии с данньааи ф динамического измерения строят криBble- лизиса эритроцитов, отражающие функциональные возможности системы комплемента у здоровых и больных де-.. тей. Положительный эффект способа подтверждается клиническим материалом.
М
Для исследования кинетики актива- . { © ции системы комплемента по классическому пути готовили изотонический раствор вероналиединалового буфера (рН 7,4), состоящего иэ 2,875 r веронала, 1500 мг мединалаи 42,500 r хлорида натрия в 1,0 мл дистиллированной воды, к полученному раствору добавляли 2,5 мл 1 М хлорида магния и 0,75 мл 1 М хлорида кальция.
Исследование кинетики актива- ции комплемента по альтернативному пути проводили с использованием
100 мл О, 1 М этиленгликольтетрауксус1698780
Формула изобретения
Составитель Б.Мануйлов
Редактор H.Ñèëüíÿãèíà Техред: М.Дидык Корректор А ОбРучаР
Заказ 4391, Тираж Подписное
ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР
113035, Москва, Ж-35, Раушская наб;, д. 4/5
° Ь
Производственно-издательский комбинат Патент", г.ужгород, ул. Гагарина, 101
3 йой кислоты и 50 мп 0,1 М хлорида магния (рН,7,4).
Сенсибилизированные" эритроциты .6a-. рана, йредставляющие собой иммунные комплексы антиген-антитело, использовали для..активации классического пути системы комплемента, эритроциты кролика — для активации альтернативного пути. Эритроциты разводили перед 10 использованием соответствующим буфеpbM до концентрации 10 клеток/мл.
Все измерения производили с помощью лабораторного прибора для подсчета
"частиц "Р1созса1". . 1S
К 1,5 мл. буфера .добавляли 300 мкл исследуемой сыворотки и 7,5 мкл сус" пензии эритроцитов. Измерение количЕства эритроцитов производили сразу
xk после смешивания всех компонентов реакции и затем через 10 мин в теченйе 30 мин. Реакция протекает при комнатной температуре.
В соответствии. с . данными динами.ческого измерения строили кривые кинетики лизиса эритроцитов, выражающиеся соотношением N = f(T), где 0 число гемолитических единиц, соответ-. ствующее показаниям счетчика эритро«; цитов "Picoscal Т - время исследоФ
30 вания.
,. Способ подтверждается следующими гримерами .
Пример 1. Больной А. Диаг.н з: двусторонняя бронхопневмонЬя, федне-тяжелая форма.
Кровь в количестве 50 мкл брали у детей в день исследования и центрифу-. .гировали 5 мин при 4000 8. Для опре-: 40 деления кинетики активации системы комплемента по классическому пути к
1,5 мл веронал-мединалового буфера, содержащего ионы кальция и магния, добавляли 30 мкл исследуемой сыворотки и 7 5 мкл сенсибилиэированных эритt
Ф роцитов барана в концентрации 10 клеток/мл. Измерение числа эритроцитов в смеси производили через каждые
1О мин в течение 30 мич при комнатной температуре с помощью лабораторного счетчика, частиц "Picoscal
Результаты кинетического исследования системы .комплемента у больных представлены графически. Отклонение кривой Ч. от норьы составляет
+ 120 гем.ед., а кривойА †-180 гем.ед, что свидетельствует о нарушении резервов иммунной системы у этих детей в связи с развитием у них тяжелых воспалительных заболеваний.
Положительный эффект способа подтверждается данными, показывающими достижение цели изобретения. Способ выявления патологического состояния организма путем определения активности. системы комплемента по лизису эритроцитов в исследуемой сыворотке, отличающийся тем, что, с целью повышения точности, сокращения времени, снижения трудоемкости способа при обследовании детей, готовят одно разведение исследуемой сыворотки, проводят прямой подсчет количества оставшихся нелизнрованных эритроцитов в течение 30 мин н оценивают патологическое состояние организма по отклонению полученной кинетической кривой от эталонной кривой здоровых доноров.
