Способ определения фосфатазной активности микроорганизмов

 

Использование: медицинская микробиология , определение фосфатазной активности микроорганизмов. Сущность: микробную культуру суспендируют в капле физраствора в присутствии среды, выполненной в виде карандаша. Смесь инкубируют 15-20 мин, подщелачивают введением бумажного сухого диска, пропитанного гипероксидом калия . По изменению окраски диска учитывают результаты опыта. Среда содержит (в мас.%): полиэтиленгликоль 4000 60,6-62,5: сахарозу 7.58-7,81; бычий сывороточный альбумин 6,06-6.25; глицерин 7,58-7,81; фенолфталеинфосфат натрия 15,63-18,18. ратуре 15-20 мин, подщелачивают введением сухого бумажного диска, пропитанного гипероксидом калия, по изменению окраски которого учитывают результаты опыта. Для осуществления способа предварительно готовят компоненты необходимые для его постановки: субстратный карандаш, содержащий в качестве специфического субстрата фенолфталеинфосфат натрия, и бумажные диски, пропитанные гипероксидом калия для учета результатов опыта. Пример. Для приготовления субстратного карандаша в фарфоровую ступку последовательно вносят полиэтиленгликоль 4000 2 г, сахарозу 0,25 г, бычий сывороточный альбумин 0,15 г и тщательно растирают 10 мин до получения мелкой пудры. Затем ступку вносят b мл 1и%-ного раствора фенолфталеинфосфата натрия и 0,2 мл глицерина и продолжают растирать под струей теплого воздуха до образования однородной массы вязкой консистенции, которую формуют в виде карандаша и оставляют на 5 сут при 4°С для стабилизации физико-хи- f Ё

СОК)З СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (19) (11) (s1)s С 12 Q 1/04, 1/42

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ дицинской сабам опсти микрое способа ности микиссл едуендируют в среды,соэтиленглиороточный щем соот0,6 — 62,5 ,58 — 7,81

6,06 — 6,25

7,58 — 7,81 (21) 4807319/13 (22) 27.03.90 (46) 15.04.92. Бюл. М 14 (71) Кишиневский государственный медицинский институт (72) Н.Н.Морарь, В.М.Никитин, Ф.И.Георгица и В.Д.Олареску (53) 576.8.093.4(088.8) (56) Никитин В.М. Справочник методов биохимической экспресс-индикации микробов.

Кишинев: Картя Молдовеняскэ, 1986, с. 171. (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФОСФАТАЗНОЙ АКТИВНОСТИ МИКРООРГАНИЗМОВ

Изобретение относится к ме микробиологии, в частности к спо ределения фосфатазной активно организмов.

Цель изобретения — ускорени определения фосфатазной актив роорганизмов.

Для осуществления способ мую микробную культуру суспе капле физраствора в присутствии держащей дополнительно поли коль 4000, сахарозу, бычий сыв альбумин и глицерин при следую ношении компонентов, мас.%:

Полиэтиленгликол ь 6

Сахароза 7

Бычий сывороточный альбумин

Глицерин

Фенолфталеинфосфат натрия 15,63 — 18,18, и выполненной в виде карандаша, штрих которого. наносят на предметное стекло, смесь инкубируют при оптимальной темпе(57) Использование: медицинская микробиология, определение фосфатазной активности микроорганизмов. Сущность: микробную культуру суспендируют в капле физраствора в присутствии среды, выполненной в виде карандаша. Смесь инкубируют 15-20 мин, подщелачивают введением бумажного сухого диска, пропитанного гипероксидом калия, По изменению окраски диска учитывают результаты опыта. Среда содержит (в мас, ): полиэтиленгликоль 4000

60,6 — 62,5: сахарозу 7,58-7,81; бычий сывороточный альбумин 6,06-6,25; глицерин

7,58-7,81; фенолфталеинфосфат натрия

15,63-18,18. ратуре 15 — 20 мин, подщелачивают введением сухого бумажного диска, пропитанного гипероксидом калия, по изменению окраски которого учитывают результаты опыта.

Для осуществления способа предварительно готовят компоненты необходимые для его постановки: субстратный карандаш, содержащий в качестве специфического субстрата фенолфталеинфосфат натрия, и бумажные диски, пропитанные гипероксидом калия для учета результатов опыта, Пример. Для приготовления субстратного карандаша в фарфоровую ступку последовател ьно вносят пол иэтиленгл икол ь

4000 2 г, сахарозу 0,25 г, бычий сывороточный альбумин 0,15 г и тщательно растирают

10 мин до получения мелкой пудры. Затем ступку вносят Ь мл 10 -ного раствора фенолфталеинфосфата натрия и 0,2 мл глицерина и продолжают растирать под струей теплого воздуха до образования однородной массы вязкой консистенции, которую формуют в виде карандаша и оставляют на

5 сут при 4 С для стабилизации физико-хи1726516

Для определения фосфатазной активности микроорганизмов на чистое предметное стекло наносят субстратным карандашом штрих длиной до 1 см. Затем на штрих наносят каплю физраствора и в ней эмульгируют полную бактериологическую петлю суточной агаровой исследуемой микробной культуры, Предметное стекло помещают во влажную камеру чашки Петри и инкубируют при 37 С 15-20 мин, после чего извлекают чашку из термостата и вносят в культурально-субстратную смесь бумажный диск, пропитанный гипероксидом калия. Учет результатов опыта проводят по хромогенной реакции. При положительном результате диск мгновенно окрашивается в розовый цвет вследствие взаимодействия фенолфталеина с гипероксидом калия. При

Составитель Н.Морарь

Техред М.Моргентал КоРРектоР И,Муска

Редактор Н.Горват

Заказ 1249 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул,Гагарина, 101 мическ их свойств. Субстрат н ый кара нда ш приобретает твердопластичную консистенцию, имеет белый цвет и обладает хорошими пишущими свойствами по стеклу, фарфору и другим поверхностям.

Все субстратные карандаши на фосфатазу, содержащие ингредиенты в пределах граничных значений их количественного содержания, изготовляются строго аналогично приведенному примеру и обладают хорошими пишущими свойствами, пластичностью, длительной сохранностью и обеспечивают высокую скорость прохождения реакции.

Бумажные диски для учета результатов опыта готовят следующим образом.

Берут обеззоленный фильтр площадью

70 — 80 см, опускают в чашку Петри с 1 г ным раствором гипероксида калия и выдерживают 3 мин для равномерного пропитывания щелочью, затем диск высушивают и разрезают на диски или квадратные пластины площадью 1 см и хранят в темном, сухом месте при комнатной температуре, отрицательном результате диск сохраняет инициальную белую окраску.

Сравнительное определение фосфатазной активности микроорганизмов с по5 мощью субстратного карандаша и классическим способами 13 музейных и 351 клинических штаммов показало 100 -ное совпадение результатов, что свидетельствует о высокой специфичности способа.

10 Кроме того, способ отличается экспрессностью анализа, экономичностью и простотой в постановке, что делает его доступным для любой лаборатории.

Формула изобретения

15 Способ определения фосфатазной активности микроорганизмов, предусматривающий внесение исследуемой культуры в среду, содержащую субстрат — фенолфталеинфосфат натрия, инкубирование получен20 ной смеси при оптимальной температуре, подщелачивание и учет результатов по хромогенной реакции, отличающийся тем, что, с целью ускорения способа, исследуемую культуру суспендируют в капле физ25 раствора в присутствии среды, дополнительно содержащей полиэтиленгликоль 4000, сахарозу, бычий сывороточный альбумин и глицерин при следующем соотношении компонентов, мас. :

30 Полиэтиленгликоль 4000 60,6 — 62,5

Сахароза 7,58 — 7,81

Бычий сывороточный альбумин 6,06 — 6,25

35 Глицерин 7,58 — 7,81

Фенолфталеинфосфат натрия 15,63 — 18,18. и выполненной в виде карандаша, штрих которого наносят на предметное стекло, 40 смесь инкубируют 15 — 20 мин, подщелачивание проводят введением сухого бумажного диска, пропитанного гипероксидом калия, по изменению окраски которого учитывают результаты опыта.