Способ подготовки эпителиальных клеток желудочно-кишечного тракта к исследованию

 

Изобретение относится к медицине, а именно к гистологическим методам исследования . Целью является получение большего выхода клеток и их лучшей сохранности. Цель достигается тем, что клетки извлекают соскобом, а измельчение проводят в сыворотке крови АВ с последующим промыванием клеток в той же сыворотке . Окрашивание мазков полученных клеток проводят азур II и эозином. При этом перед окрашиванием мазки обрабатывают 1 Н. HCI при 60°С в течение 2-3 мин. Способ позволяет получить качественные препараты эпителиальных клеток, на которых хорошо видна структура ядра и микроядер.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

tsi)s G 01 N 1/28

ГОСУДАРСТВЕННЫИ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4733221/14 (22) 31,08.89 (46) 23.05.92. Бюл. М 19 (71) Научно-исследовательский институт общей и коммунальной гигиены им. А.Н.Сысинэ и Всесоюзный онкологический научный. .„.e.íTp АМН СССР (72) И.Ф.Выскубенко и Н.И.Шеренешева (53) 616-0.88.8(088.8)

" ...6> Ferri G, et al., Separation and whole mount ргерагэс!оп of gut layers. — l, Pathology,1982, 137, и 1, 92. (54) СПОСОБ ПОДГОТОВКИ ЭПИТЕЛИАЛЬН ЫХ КЛЕТОК ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНОГО

ТРАКТА К ИССЛЕДОВАНИЮ

Изобретение относится к медицине, а именно к гистологии.

Целью изобретения является получение большего выхода клеток и их лучшей сохранности, Способ осуществляют следующим образом.

Получают биоптат желудочно-кишечного тракта, извлекают, промывают в человеческой сыворотке группы АВ (И).

Далее измельчают в чашке Петри сухими ножницами в капле человеческой сыворотки группы АВ, Затем измельченную массу фильтруют в центрифужные пробирки через капроновую сеточку с последующим смыванием остатком ткани на сетке несколько раз сывороткой. Центрифугируют в режиме 1500 об/мин в течение 10 мин, Удаляют недостаточную жидкость. оставляя небольшое количество (высотой 1-2 мм) над осадком. Полученную суспензию пипетируют и раскапывают на сухое предметное стекло с последующим размазыванием ка„„5U„„1735737 А1 (57) Изобретение относится к медицине, а именно к гистологическим методам исследования. Целью является получение большего выхода клеток и их лучшей сохранности. Цель достигается тем, что клетки извлекают соскобом, а измельчение проводят в сыворотке крови АВ с последующим промыванием клеток в той же сыворотке. Окоашивание мазков полученных клеток проводят азур ll и эозином. При этом перед окрашиванием мазки обрабатывают 1 Н.

НС! при 60 С в течение 2 — 3 мин. Способ позволяет получить качественные препараты зпителиальных клеток, нэ которых хорошо видна структура ядра и микроядер. пель. Препарат высушивают на воздухе и фиксируют в растворе метилового спирта и ледяной уксусной кислоты в соотношении

3:1. Затем проводят. гидролиэ 1н. НС! при . комнатной температуре в течение 2 мин, затем при 60 С 6 мин. Остужают стекла при комнатной температуре и промывают дистиллированной водой. Препарат окрашивают в течение 15 мин раствором азурэ II u эозина, Краска готовится перед употреблением следующим образом: 10 мл дистиллированной води, 7 капель 5%-ного Иа2СОэ. 5 мл

0,1% -ного раствора азурэ II и 2 мл 0,1%-ного раствора зозина.

При микроскопическом анализе мазок представляет собой расположенные по одиночке или группами по 2 — 3 клетки, из которых 80 — 90% с ненарушенной ядерной и цитоплазматической оболочкой. Структура ядра и цитоплазмы нормальной морфоло гии. Достаточно четко выявляются клеточ ные границы. Цитоплазма окрашена в

1735737

Формула изобретения

Способ подготовки зпителиальных клеток желудочно-кишечного тракта к исследованию путем измельчения ткани, извлечении клеток, их центрифугировании с последующим приготовлением мазков и окрашивании в красителе, о т л и ч э ю щ и йс я тем, что, с целью большего выхода клеток и их лучшей сохранности, клетки извлекают соскобом, а измельчение проводят в сыворотке крови АВ с последующим их промыванием в той же сыворотке; при этом перед окрашиванием мазки обрабатывают

1 н, HCI при температуре 60 С в течение 2-3 мин, а в качестве красителя используют аэур

II и зозин.

Составитель 3, Вальковская

Техред М.Моргентал Корректор А.Осауленко

Редактор Н.Рогулич

Заказ 1811 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР . 113035, Москва. Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно издательский комбинат Патент, г. Ужгород., ул,Гагарина, 101 синевато-сиреневый цвет (или сиреневый), ядро и микроядра — в густой синий. Микроядра представляют собой образование округлой или слегка овальной формы, диаметром 1/3 до 1/4 м диаметра ядра. 5

Микроядра его выявляются и дифференцируются QT других образований неядерного происхождения.

Пример 1. Участок кишки, желудок или преджелудок промывают в растворе Хе- 10 никсэ. Выворачивают слизистой оболочкой наверх и с помощью предметного стекла, делают соскоб. Соскоб помещают в 0,25%- . ный раствор трипсина. Перемешивают на магнитной мешалке в течение 15 мин. Филь- 15 труют через капроновую сеточку. Центрифугируют в режиме 3000 об/мин в течение 10 мин, Надосадочную жидкость удаляют. В осадок добавляют фиксатор (метанол — уксусная кислота в соотношении 3:1), выдер- 20 живают в холодильнике в течение 15 мин, Меняют фиксатор до тех пор, пока осадок не становился белым (2 — 3 раза). Раскапывают на мокрые предметные стекла (по 6 — 8 капель на стекло). Высушивают на воздухе. 25

Окрашивают препарат азуром II и эозином, При просмотре все клетки разобщены, лежат отдельно и легко анализируются., Пример 2. Извлеченные органы желудочно-кишечного тракта промывают в че- 30 ловеческой сыворотке группы АВ.

Измельчают в чашке Петри сухими ножницами в капле человеческой сыворотки той же группы, Измельченную массу фильтруют в центрифух<ных пробирках через капроновую сЕточку с последующим смыванием остатков. ткани на сетке несколько.раэ сывороткой, Центрифугируют в режиме

1500 об/мин в течение 10 мин. Удаляют нэдосадочную жидкость, оставляя неболь- 40 шое количество (высотой 1-2 мм) над осадком. Сусаензию пипетируют и раскапывают нз сухое предметное стекло с последующим размазыванием капель. Препарат высушивают на воздухе,.Фиксируют 45 в растворе метилового спирта и ледяной уксусной кислоты в соотношении 3:1, Проводят гидролиз 1 í. H Cl при комнатной температуре в течение 2 мин, затем при 60ОС 6

50 мин. Остужают стекла при комнатной температуре и промывают дистиллированной водой. Препарат окрашивают в течение 15 мин раствором азура II и эозина.

При микроскопическом анализе препарат представляет собой расположенные по одиночке или по 2-4 клетки, иэ которых 8090% с целостной ядерной и цитоплазменной оболочкой, Структура цитоплазмы и ядра нормальной морфологии, Достаточно четко выявляются клеточные границы, Цитоплазма окрашена в синевато-сиреневый или в сиреневый цвет, ядро и микроядра — в густой синий. Микроядра представляют собой образования-округлой или слегка овальной формы, диаметром от 1/3 до 1/4 мм диаметра ядра. Препарат является пригодным для выявления микроядер, Способ позволяет получить одиночные, расположенные по одной или по 2-4 клетки, иэ которых 80 — 90% с целостной ядерной и цитоплазменной оболочкой. Структура цитоплазмы и ядра нормальной морфологии.

Достаточно четко выявляются клеточные границы. Цитоплазма окрашена в синеватосиреневый или в сиреневый цвет, ядро и микроядра — в густой синий, Микроядра представляют собой образования округлой или слегка овальной формы, диаметром от

1/3 до 1/4 мм диаметра ядра. Препарат является пригодным для выявления микроядер и последующего исследования.