Способ получения производных трипептидов или их фармацевтически приемлемых солей

 

Изобретение относится к пептидам, в частности к получению производных трипептидов общей ф-лы Ri-W-CO-NH- ЦСНДОНа CO-NH-CH(COOH)-(CH2)2-CO-R3, где Ri-C4-Ce - циклоалкильная группа, группа циклогексил - низший алкил, фенильная группа, необязательно замещенная заместителем , группа фенил - низший С1-С2-алкил, где бензольное кольцо необязательно замещено заместителем мдроксизамеИзобретение относится к способу получения производных трипептидов или их фармацевтически приемлемых солей - новых биологически активных соединений, которые могут найти применение в медицине . Цель изобретения - получение новых производных пептидов -- малотоксичных соединений , обладающих более высокой противогипертонической активностью. щенная нафтильная группа, группа нафтил - низший алкил, пиридильная группа, необязательно замещенная заместителем, пирролидинильная группа, 2-тиенильная группа, 3-хинолильная группа, 2-индолильная группа, тианафтен-2-ильная группа, хиноксалин-2-ильнаягруппа, изохинолин-2-ильная группа, 2-пиразинильная группа, группа пиридия - низший алкил или группа имидазолилвинил, W-одинарная связь, -О- или -NH-, при соответствующих значениях Ra, или их фармацевтически приемлемых солей,которые обладают противогипертонической активностью. Цель - разработка способа получения более активных соединений. Получение ведут реакцией соединения общей ф-лы Ri-W-COOH, где RI имеет указанные значения или его реакционно способного производного по карбоксильной группе с соединением ф-лы H2N-CH-(CH2)4-NH-Ri -CO-NH-CH(COOR21)- -(CH2)2-CO-Rs, где R2 , RA - Н или группа, защищающая аминогруппу или с его кислотно-аддитивной солью и при необходимости удаляют защитную гоуппу и целевой продукт выделяют в свободном виде или в виде соли 1 табл Пример 1.1 {N (4-имидазолил)- пропеноил -1-лизил-гамма- D-глутамил} индолин-2(5)-карбонозая кислота. Формиат аммония (0,56 г) и 0,4 г 10%- ного палладия на угле добавляют к этанольному раствору 2,1 г этил 1-(N -бензилоксикарСонил-N -тоет-бутокс - икарбонил- -лизил-0 - этил-гамма-0-глутамил) индолин-2(5)-карбоксилата и полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч. Катализатор удасо С -ч Јь CJ OJ ел о со

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕ НТУ (21) 4202607/04 (22) 08.05,87 (31) 107,394/86; 156,693/86; 16.361/87 (32) 09.05.86; 03.07.86; 26.01.87 (33) JP (46) 23,06.92. Бюл. ¹ 23 (71) Дайниппон фармасьютикал Ко., Лтд (J P) (72) Тадахиро Саваяма, Масатоси Тсукамото, Такаси Сасадава, Казия Нисимура, Каноо

Хосоки и Кунихико Такеяма (J P) (53) 547,944.4.07(088.8) (56) Шредер Э,. Любке К. Пептиды. — M.:

Мир, ч.1, 1967, с,116. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПРОИЗВОДНЫХ ТРИПЕПТИДОВ ИЛИ ИХ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИ ПРИЕМЛЕМЫХ СОЛЕЙ (57) Изобретение относится к пептидам, в частности к получению производных трии ептидов общей ф-л ы R<-W-СО-NH((СНфМН2) СО NH-СН(СООН)-(СН2)2 СО-ВЗ, где R1-С4-СБ — циклоалкильная группа, группа циклогексил — низший алкил, фенильная группа, необязательно замещенная заместителем, группа фенил — низший С вЂ” С2-алкил, где бензольное кольцо необязательно замещено заместителеп.. -идроксизамеИзобретение относится к способу получения производных трипептидов или их фармацевтически приемлемых солей — новых биологически активных соединений, которые могут найти применение в медицине.

Цель изобретения — получение новых производных пептидов — малотоксичн ых соединений, обладающих более высокой противогипертонической активностью. АХ» 1743356 АЗ (я;,л С 07 К 5/08//А 61 К 37/02, С 07 К 5/06 щенная нафтильная группа, группа нафтил — низший алкил, пиридильная группа, необязательно замещенная заместителем, пирролидинильная группа, 2-тиенильная группа, 3-хинолильная группа, 2-индолильная группа, тианафтен-2-ильная группа, хиноксалин-2-ильная группа, изохинолин-2-ильная группа, 2-пиразинильная группа, группа пиридил — низший алкил или группа имидазолилвинил, W-одинарная связь, -О- или -NH-, при соответствующих значениях Вз, или их фармацевтически приемлемых солей, которые обладают противогипертонической активностью. Цель— разработка способа получения более активных соединений, Получение ведут реакцией соединения общей ф-лы Ri — W — СООН, где К1 имеет указанные значения или его реакционно способного производного по карбоксильной группе с соединением ф-лы

H2N-ÑÍ-((CH2)4-NH R 1) СО NH CH(COOR2 )-(СН2)2-СО-КЗ, где R2, R4 — Н или группа, защищающая аминогруппу или с его кислотно-аддитивной солью и при необходимости удаляют защитную группу и целевой продукт выделяют в свободном виде или в виде соли. 1 табл.

Пример 1. 1-(N -(3-(4-имидазолил)2 пропеноил)-1-лизил-гамма- D-глутамил) индолин-2(S)-карбоно юя кислота.

Формиат аммония (0,56 г) и 0,4 г 10%ного палладия на угле добавляют к этанольному раствору 2,1 г этил

1-(N -бензилоксикарСонил-N -трет-бутоксб

1 ика рбонил-1=лизил-Π— этил-гамма-D-глутаMMfi) индолин-2(S) êàðáoêñèëàòà и полученчую смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч, Катализатор уда1743356 ляют фильтрацией и маточную жидкость концентрируют при пониженном давлении, .

К остатку добавляют этил ацетат и полученную смесь промывают насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и насыщенным водным раствором хлористого натрия и .затем сушат над безводным сульфатом натрия с образованием 1,7 r этил 1-(N -третб, бутоксикарбонил-L.-лизил-Π— атил-гамма1

D-глутамил) индолин-2(S)-карбоксилата (т.пл 114 — 117 С), К раствору 1,4 г полученного продукта и 0,4 r урокановой кислоты в сис1 еме диметилформамид (ДМФ) — метилен хлорид добавляют 1,17 г водорастворимого карбодиимид гидрохлорида и полученную смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Растворитель упаривают при пониженном давлении. Остаток перекристаллизовывают из насыщенного водного раствора бикарбоната натрия, фильтруют. Кристаллы промывают водой, повторно осаждают из смеси эфир: этанол. Получают 1.4 г порошкообразного продукта. Чистят колоночной хроматографией на силикагеле. Элюируют смесью метанол: хлороформ 1:9. получают

1,0 г порошкообразного продукта. Аликвоту (0,9 r) полученного порошка растворяют в

20 мл диоксана, добавляют 3.8 мл 1н. раствора NaQH. Полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение

3 ч, нейтрализуют водным раствором кислого сульфата калия, концентрируют при пониженном давлении. Полученный остаток растворяют в воде. рН раствора устанавливают равным 5 с помощью водного раствора кислого сульфата калия. подвергают хроматографической очистке на колонне CHP 20

P (градиент ацетонитрил — вода 0 - 60 o) с образованием 0.65 г порошка. Аликвоту (0,55 г) порошка оставляют в 20 мл трифторуксусной кислоты на 30 мин при охлаждении льдом, затем трифторуксусную кислоту упаривают при понижненном давлении. при комнатной температуре. Остаток подвергают хроматографической очистке на колонке с CHP 20 P (градиент ацетонитрил — вода

0 o 30 o), полученные фракции конце - трируют Остаток лиофилизируют. Получают

0,33 i целевого продукта. (;<)о — 43,5 (1 н. раствор NaOH)

Зычислено, ", С 52,52: Н 6,44, N 14 13.

"г6НЗгИ607. Знго

Найдено, уo : С 52,38: Н 6,50; N 14,14, Л р и м е р 2. (2$, ÇaS, 7aS)-1-(N -никог тиноил- =лизил -гамма-D-глутамил)октагидро-1Н-индол-2-карбоновая кислота.

К смеси 20 мл ТГФ и 3 мл воды добавляют 4.42 r N -бензил-оксикарбочил-N -трет6 г

55 бутоксикарбонил-L-лизин N-гидрооксисукцинимидового эфира, 2,89 г (2S, ÇaS, 7aS)-1-(гамма-D-глутамил) октагидро-1Н-индол-2-карбоновой кислоты и 2,6 мл триэтиламина и полученную смесь перемешивают

s течение 5 ч при комнатной температуре.

Реакционную смесь концентрируют при пониженном давлении, Остаток смешивают с водным насыщенным раствором хлористого натрия и промывают эгилацетатом. Водный слой подкисляют 1 -ной лимонной кислотой и экстрагируют этилацетатом. Органический слой промывают насыщенным раствором хлорида нагрия, сушат над безводным сульфагом натрия и концентрируют досуха при пониженном давлении с образованием 5,19 г остатка. Остаток очищают методом колонной хроматографии (колонка с

СНР20Р; градиент ацетонитрил — вода О

- 60 ). Полученные в результате фракции концентрируют досуха при пониженном давлении. Остаток растворяют в системе диоксан — вода лиофил .зируют с образованием 4 7 r (2S, ÇaS, 7aS)-1-(N -бензолоксикарбонил-N -трет-бу

6 г токсик рабонил -L-лизил-гамма-D-глутамил) октагидро-1Н-гондол-2. карбоновой кислоты.

Аликвоту (2,27 ) продукта растворяют в 50 мл трифторуксусной кислоты и выстаивают в течение 15 мин при охлаждении системы льдом, после чего проводят концентрирование досуха при пониженном давлении. Остаток растворяют в воде, устанавливают рН равным 4 и подвергают хроматографической очистке на колонке с СНР 20 P (градиент ацетонитрил — вода 0 — 50 o), Желаемые фракции концентрируют при йониженном давлении с образованием 1,15 г (2S, 3aS, 7aS)-1-(N -бензилоксикарбонил- = лизил-гамма-D- глута мил)окта гидро-1 Н-ин дол-2-карбоновой кислоты в виде стеклообразного вещества, Алк,квоту (1,0 г) такого стеклообразного вещества растворяют в смеси N,N-диметилфо мамида и тетрагидрофурана и добавляют 0,5 мл триэтиламина и 0.39 г N-(никотиноилокси)сукцинимида. после чего полученную смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. В реакционную смесь добавляют разбавленную:<лористоводородную кислоту и полученную смесь экстрагируют этилацетатом. Экстр акт сушат над безводным сульфатом натрия и концентрируют досуха при пониженнсм давлении. Полученное в результате стеклообразное вещество растворяют в 25 мл этанолэ и в систему добавляют 0,6 г формиата аммония и 0,3 г

10 -ного палладия на угле, Смесь перемешивают в течение 3 ч при комнатной темпе1743356 ратуре. Катализатор удаляют фильтрацией и маточную жидкость концентрируют досуха при пониженном давлении. Остаток подвергают хроматографической очистке на колонке с СНР20Р (градиент ацетонитрил — вода

О /о - 60 ). Желаемые фракции концентрируют досуха при пониженном давлении. Остаток лиофилизируют с получением 0,5 г целевого соединения. (а)о — 27,2 (НгО).

Вычислено, %; С 54,58; Н 7,31; N 12,24, С28Н37Й507 2,25 Н20

Найдено, /: С 54,62; Н 7,25 N 12,20.

Следующие вещества (примеры 3 — 9) синтезируют таким же образом. как и в примере 2, Пример 3. 1-(N -циклогексилметок2 сикарбонил-L-лизил- гамма-D-глутамил} индолин-2(S)-крабоновая кислота.

Выход 0 34 г (46 /). Исходные соединен ия; 1 (N -бензилоксикарбонил-L-лизилгамма-0-глутамил)октагидро1 Н-индол-2(S)-карбоновая кислота (соединение I) и N-(циклогексилметоксикарбонилокси) сгукцинимид. Т.пл. 186 — 191 С (а)о = -84,4 (1 н, раствор NaOH).

Вычислено. /О. С 57,23. Н 7,38. N 9.53.

С28Н40М408 " 5НгО

Найдено, : С 57.33; Н 7,67.: N 9,64. (I р и м е р 4. 1-(D-пролил-L-лизил-гамма-D-глутамил) и ндал ин-2(S)-крабоновая кислота. Т.пл. 209 — 216" С (разлагается), (и)р = -66.3 (1 н. раствор NaOH), Выход 0,20 г (23%). Исходные соединения: соединение и N-(D-промилокси)сукцинимид, Вычислено, o/o. С 51.71: Н 7.29; N 12,06, C25H35N5O7 З,Ь Н20

Найдено, /: С 51.58; Н 7.40: N 12,08.

Пример 5. (2S. ÇaS. 7aS)-1-(N -циклобутанкарбонил-!.— лизил-гамма-0-глутамил)октагидро-1 Н-индол-2-карбоновая кислота.

Выход 0.51 г (67 o). Исходные соединения (2S, ÇaS, 7aS)-1-(N -бензилоксикарбо8 нил- -лизил-гамма-0-глутамил)октагидро1 Н-индол-2-карбоновая кислота (соединение II) и N-(циклобутанкарбонилокси)сукцинимид. (

Вычислено, /О. С 55,11; H 8,18; N 9,89. 25H40N507 2Н20 0.25 С4Н802.

Найдено, : С 55.16: Н 7.98; N 9.78.

Пример 6, (2$. ÇaS. 7aS)-1-(N -(пиридин-2-карбонил)-I - лизил-гамма-D-глутамил)октагидро- i й-индол-2-карбонозая кислота.

Выход 0,35 г (23 /). Исходные соединения:соединение II u N-(пиридин-2-карбонилокси)с кцинимид. (а)п = -19,2 (в воде).

5 Вычислено, о ; С 5545: Н 7,25; N 12,44.

C28H37N507 1,75 Н20

Найдено, : С 55,74; Н 7,05; N 12,42.

Пример 7, (2S, ÇaS, 7aS)-1-(N -(4-метоксибензоил)-1 — лизил-гамма-0-;лута10 мил)октагидро-1Н-индол-2-карбоновая кислота.

Выход 0,05 г (3,5 ). Исходные соединения; соединение II u N-(4-метоксибензоилокси)с кцинимид.

15 (а)п = -15.2 (в воде).

Вычислено, /о, С 53,92; Н 7,60; N 8,98.

С28Наойа08 3,5 Н20

Найдено, /: С 53,77; Н 7,33; N 9,13, Пример 8. (2$,3а$, 7а$)-1-(N -бензил20 карбамоил)-1 - лизил-гамма-0-глутамил)октагидро-1Н-индол-2-крабоновая кислота.

B 5 мл пиридина растворяют 0,56 г (2$, 3a S, 7а S)-1-(N -бензилоксикарбонил-L-лизил-гамма-D-глутамил) октагидро-1Н-ин25 дол-2-карбоновой кислоты и 0,14 г бензилизоцианата. Смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре.

Добавляют раствор бикарбонат натрия и смесь промывают этилацетатом. Водный

30 раствор подкисляют 10 -ной лимонной кислотой и зкс1 рагиру от зтилацетатом. Органический слой промывают рассолом, сушат и концентрируют досуха при пониженном давлении, получая 0,66 г по35 рошка. Полученный пооошок (0,65 г) растворяют в 15 мл метанола и добавляют 0,3 г формиата аммония и 0,1 г катализатора—

10/,-ного палладия на угле. Смесь перемешивают при 60 С в течение 40 мин. Катали40 затор удаляют и растворитель выпаривают.

Остаток очищают на хроматографической колонке СНР20Р (градиент от 0 до 50/ ацетонитрил — вода). Фракции, содержащие целевой продукт. концентрируют досуха при

45 пониженном давлении и остаток подвергают лиофильной сушке, получая

0.109 г (выход 20 ) указанного соединения. (a)p = -32,3 (1 н. раствор NaOH).

50 Вычислено. : С 56,46; Н 7,61; N 11,76, С28Н41М507. 2Н20

Найдено, /; С 56,:9; Н 7,32; N 11,41.

Следующие соединения (примеры 9 и

10) синтезируюг таким же образом, как и в

55 примере 8.

Пример 3. (2S, ÇaS, 7aS)-1-(N -циклогексилкарбамоил- = лизил-гамма-D-глутамил)октагидрс-1Н-индел-2-карбоновая кислота.

1743356

Выход 0,46 г (43%). Исходные соединения; соединение 11 и циклогексилзоцианат. (й)п =-31,1 (1 н. раствор NaOH).

Вычислено, %: С 56,41; Н 8,37; N 11,75, Сг7Н46К607.1,25 Нг0.0,25 С4НвОг

Найдено, %: С 56,23; Н 8,07; N 11,67, Пример 10. (2S. ÇaS. 7aS)-1-(N2-фен ил кар бам оил-1 -лизил -гамма-D-глутамил)октагидро-1 Н-индол-2-карбоновая кислота, Выход 0,65 г (64%) Исходные соединения: соездгинение I I и фенилизоцианат, (c)D = -42 (1 н. раствор NaOH), Вычислено, %: С 56,63; Н 7.39; N 12,23.

Сг7Н39К607 1,5НгО

Найдено, %; С 56,80; Н 7,23; N 12,03.

Пример 11. (2S. ÇaS, 7aS)-1-(N— бензоил-1-лизил-гамма-D- глутамил)локтагидро-1 Н-индол-2-карбоновая кислота, Карбонат натрия (2.0 г) растворяют в

10 мл воды и добавляют 4.83 г (2S, ÇaS.

7aS)-1-(гамма-0-глутамил) октагидро-1Н-индол-2-карбоновой кислоты. После образования раствора добавляют 40 мл тетрагидрофурана. При интенсивном перемешивании постепенно дбобавляют 7,46 г

N -бензилоксикарбонил-N -трет-бутоксикг арбонил-L-лизин-N -i идроксисукцинимидного сложного эфира. Смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре.

Реакционную смесь концентрируют до половины объема, подкисляют 10%-ной лимонной кислотой и экстрагируют этилацетатом, Органический слой промывают насыщенным водным раствором хлорида натрия, сушат над безводным сульфатом натрия и концентрируют досуха при пониженном давлении. Получают 9.17 г (2S, ÇaS, 7aS)-1-(N -бензилоксикарбонил-N - трет-бу6

ToKcv êàðáo Hèë-L-лизил-гамма-D-глутамил) окта идро-1Н-индол-2-карбоновой кислоты.

Аликвоту (6,2 г) полученной карбоновой кислоты растворяют в 60 мл этанола и до6aer:ÿют 1,0 г катализатора 10%-ного палладия на угле, При перемешивании малыми частями добавляют 2.5 г формиата аммония.

Смесь перемешивают в течение 4 ч. Катализатор удаляют фильтрацией. Маточный раствор концентрируют досуха и к остатку добавляют этилацетат. Образовавшийся порошок собирают посредством фильтрации, получая 3,9 r (2S, ÇaS. 7aS)-1-(N -трет-буток6 сикарбонил-1 -лизил-гамма-D-глутамил) октагидро-1Н-индол-2-карбоновой кислоты.

Аликвоту полученной карбоновой кислоты (1,0 г) растворяют в 7,0 мл воды и добавляют 0,55 г бикарбоната натрия и 12 мл тетрагидрофурана, При тщательном пере5 мешивании добавляют 0,46 г N-бензоилоксисукцинимида и смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре.

Реакционную смесь концентрируют до половины объема, подкисляют 10%-ной ли10 монной кислотой и экстрагируют хлористым метиленом. Органический слой промывают водой, сушат над безводным сульфатом натрия и концентрируют досуха при пониженном давлении.

К остатку добавляют 20 мл трифторуксусной кислоты при охлаждении льдом и смесь перемешивают в течение 15 мин.

Трифторуксусную кислоту выпаривают при

20 пониженном давлении. Остаток разделяют хроматографически на колонке СНР20Р, используя ацетонитрил и воду (градиент от О до 50%). Фракции, содержащие целевой продукт, концентрируют досуха при пони25 женном давлении. Остаток подвергают лиофильной сушке, получая 0,50 г (46%) вещества, указанного в заготовке. (а)р = -23,1 (в воде).

Вычислено, %: С 56,78; Н 7,50; N 9,81.

ЗО Сг7Н38Й407 2,25 НгО

Найдено, %: С 56,91; Н 7,29; N 10,03.

Следующие вещества (примеры 12 — 31) синтезируют таким же образом, как и в примере 11.

35 Пример 12, 1-(N -(4-метоксифенилэ2 токсикарбонил)-L- лизил-гамма-D-глутамил)индолин-2(S)-карбоновая кислота.

Выход 0,26 г (31%). Исходные соединения: соединение I u N-(4-метоксифенэтилок40 сикарбонилокси)сукцинимид, Вычислено, %; С 58,83; Н 6.39; N 9,10.

СЗОИ37Й409 Нго

Найдено, : С 58, 3; Н 643; N 9,14.

Пример 13. (2S, ÇaS, 7aS)-1-(N -изо45 никотиноил-1-лизил- гамма-D-глутамил)октагидро-1 Н-индол-2-каобоновая кислота.

Выход 0,29 г (47%). Исходные соединения: соединение 11 и N-(изоникотиноилокси)сукцинимид.

50 (а)п = -29,8 (в воде).

Вычислено. %; С 54,16; Н 7,34; N 12.15, Сг6Н37М607 2,5 НгО

Найдено, оo: С 54,25; Н 7,06; N 12.23.

Пример 14, (2S ÇaS, 7aS)-1-(N -цик55 лопентилоксикарбон: гл-1 -лизил-гамма-0-глутамил)октагидро-1 Н-индол-2-карбоновая кислота. (а)о = — 37.1 (в ваде).

1743356

Выход 0,42 г {39 ). Исходн е соединения: соединение II u N-(циклопентилоксикарбонилокси)сукцинимид.

Вычислено, /,: С 55,21: Н 8,02; N 9.90.

Сг8Н4гй408 ° 1,5 НгО

Найдено, : С 55,05; Н 7,77; N 10 05.

Пример 15, (2S, ÇaS, 7aS)-1-(N -циклогексилоксикарбонил -! -лизил-гамма-Dглутамил)октагидро-1 Н-индол-2-карбонов ая кислота. (a)D = -31,9 (в воде), Вычислено, : С 55,51: Н 8,20; N 9,59.

Сг7Н44М408 ° 1,75 НгО

Найдено, /: С 55,53; Н 8,42: N 9,55.

Выход 0,50 г (56 ). Исходные соединения: соединение II u N-(циклогексилоксикарбонилокси)сукцинимид.

Пример 16. (2S. ÇaS, 7aS)-1-(N -цикг лобутилоксикарбонил -! -лизил-гамма-Dглута мил)окта гидро-1 Н-и ндол-2-карбоновая кислота, Выход 0,69 г (56 /,). Исходные соединения: соединение II u N-(циклобутилоксикарбонилокси)сукцинимид, (а)р = -40,7" (в воде).

Вычислено,,С 53.56: Н 7.91: N 9.99.

Сг5Н40Й408 2нго

Найдено, /: С 53,57; Н 7,60; N 9,93.

Пример 17. 1-(N -циклобутилоксикар г бонил-!=лизил-гамма-D- глутамил)-индолин2(S)-карбоновая кислота.

Выход 0,50 r (63 /о). Исходные соединения: соединение и N-(циклобутилоксикрабонилокси)сукцинимид. T,пл. 197 — 204 С, (и)р = -84,0" (1 н. раствор NaOH).

Вычислено, /: С 54,49: Н 7.12: N 9,78.

Сг5Н34М. 08 ° 1.75 НгО

Найдено, jo С 54,67: Н 7.40: N 9,53.

Пример 18, 1-(N -циклогексилэтоксикарбонил-!=лизил-гамма- 0-глутамил} индолин-2-(S)-карбоновая кислота.

Выход 0,51 г (62 /). Исходные соединения: соединение и N-(циклогексилэтоксикарбонилокси)сукцинимид, Т.пл.

192 — 195 С, (а)р "= -78,8 (1 н. раствор NaOH).

Вычислено. /: С 57.89: Н 7.54: N 9.31.

СгэH42N408 1.5НгО

Найдено, /: С 57.82: Н 7,74: N 9,36, Пример 19. 1-(N2-никотиноил-! -лизил-гамма-D-глутамил) индолин-2-(S)-карбоновая кислота, Е ыход 0,58 г (70 /). Исходные соединения: соединение и N-(никотиноилокси)сукцинимиу, Т,пл. 218 — 222 C. (a)D = -66,5" (1 н. раствор NaOH), Вычислено. /: С 55,16: Н 6.32: N 12,37.

Сг8H3)N507 2.25НгО

Найдено, /: С 55.24: Н 6.57: N 12,24, Пример 20. 1-(N -циклобутанкарбог нил-! -лизил-гамма-0- глутамил)-индолин2(S)-карбоновая кислота (пример 36).

Исходные соединения: соединение I u

5 N-(циклобутанкарбонилокси)сукцинимид.

Т,пл. 209 — 215 С. (а)рг4 = -96,6 (1 н. раствор NaOH).

Вычислено, : С 56,70; Н 7,04; N 10,58.

CZ5H34N40 1 i 1,5 H Z 0

10 Найдено, /о, С 56,64; Н 7,06; N 10,46.

Пример 21. 1-(N -циклопентилоксиг карбонил-!=лизил-гамма- О-глутамил)индолин-2(S)-карбоновая кислота..

Выход 0,52 г (63 ). Исходные соедине"5 ния: соединение и N-(циклопентиловый или карбонилокси)сукцинимид. Т.пл, 198—

203 С. (и)р = -79.3 (1 н. раствор NaOH).

Вычислено. ; С 54,49; Н 7,12; N 9,78, 20 C25H35N408 2,25 НгО

Найдено, /: С 54,67; Н 7,40; N 9.53, Пример 22. 1-(И -(2-пиридинэтоксиг карбонил)-!=лизил-гамма- 0-глутамил) индолин-2(S)-карбоновая кислота.

25 Выход 0,23 r (23 <>). Исходные соединения: соединение и N-(2-пиридинэтоксикарбонилокси)сукцинимид. (и)р = -69.3 (1 н. раствор NaÎH).

Вычислено, /: С 55,12; Н 6,53, N 11,48.

Сг8Н35М408 2,25 НгО

Найдено, /; С 54 91. Н 6,37; N 11,33, Пример 23. 1-(N -бензоил-L-лизилг гамма-О-глутамил)- индоли н-2-(S)-карбоно35 вая кислота, Выход 0,44 г (44о j. Исходные соединения: соединение I u N-(бензоилокси)сукцинимид, Т.пл, 202 — 208 С. (а)р = -77,2 (1 н. раствор NaOH), 40 Вычислено, /: С 57,85; Н 6,47; N 9,99.

C27H32N407 2 Нг0

Найдено, : С 57,97; Н 6,32; N 10,20.

Пример 24. (2S, ЗаЗ, 7aS)-1-(N -(4хлорбензилоксикарбонил) -L-лизил-гамма45 D-глутамил)октагидро-1Н-индол-2-карбоно вая кислота.

Выход 0,80 г (42 ). Исходные соединения: соединение II u N-(4-хлорбензилоксикарбонилокси)сукцинимид, 50 (и)рзг = 30,8О (1 н, раствор NaOH), Вычислено. /о: С 54,06; Н 6.81; N 9,01;

CI 5.70.

Сг8Н39С!К408 1,5 НгО

Найдено, /.: С 53,95; Н 6,65; N 8.80: CI

55 556.

Пример 25. (2S, ЗаЯ, 7aS)-1-(N -(4-метилбензилоксикарбонил) -L-лизил-гамма-Dглутамил)октагидро-1Н-индол-2-крабонов ая кислота.

1743356

Выход 0,13 г (81%). Исходные соединения; соединение II u N-(4-метилбензилоксикарбонилокси)сукцинимид, (а)0 = -31,9 (1н, раствор NaOH).

Вычислено, %: С 57,46: Н 7.57; N 9,24.

Сг9Н4гй40в 1,75 Нго

Найдено, %: С 57,37; Н 7/51; N 9,07, Пример 26. (2$, ÇaS, 7aS)-1-(N -(2хлорбензилоксикарбонил) -L-лизил-гаммаD-глутамил)окта гидро-1 Н-индол-2-карбоновая кислота.

Выход 0,94 г (59%), Исходные соединения: соединение II u N-(2-хлорбензилоксикарбонилокси)сукцинимид. (a)pзг = -32,8 (1 н. раствор NaOH), 15

Вычислено, %: С 54,45; Н 6.77: N 9,07;

CI 5,74.

СгвНзцС1Й40в 1,25 НгО

Найдено, %: С 54,55; Н 6,81; N 8,90; CI

560, 20

Пример 27. (2S, ÇaS. 7aS)-1-(N -(2-мег тилбензилоксикарбонил) -L-лизил-гамма-Dглутамил)октагидро-1Н-индол-2-карбоновая кислота.

Выход 0,82 г (55%). Исходные соедине- 2- > ния: соединение II u N-(2-метилбензилоксикарбонилокси)сукцинимид. (а)д =-35,8 (1 н. раствор NaOH), Вычислено, %; С 57,46; Н 7,57; N 9,24.

Сг9Н4гй40в 1,75 Нг0

Найдено, %: С 57,68; Н 7,63; N 9,01.

Пример 28. (2S, ÇaS, 7aS)-1-(N -(2фторбензилоксикарбонил) -L-лизил-гаммаD-глутамил)окта гидро-1 Н-индол-2-карбоно вая кислота.

Выход 0,35 r (28%). Исходные соединения: соединение II u N-(2-фторбензилоксикарбонилокси)сукцинимид, (а)0 = -32,5 (1 н, раствор NaOH).

Вычислено, %: С 55,46: Н 7,14: N 8,62: F 40

2,92, СгвНз9РМ40в 1,5 С4НвОг

Найдено, %: С 55,63: Н 7.08; N 8,54;

F 3,01.

Пример 29, (2S; Ça S, 7a S)-1-(N -(аль- 45 фа-нафтилметоксикарбонил)-L-лизил-гамма-D- глутамил)октагидро-1 Н-индол-2-карбоновая кислота, Выход 0,40 r (34%). Исходные соединения: соединение II u N-(1-нафтилметокси- 50 карбонилокси)сукцинимид, (a)D = -36,30 (1 н, раствор NaOH).

Вычислено, %: С 60 08, Н 7,18; N 8,49.

СзгН4гй40в 1,5 НгО 0,25 С4НвОг

Найдено, %: С 59,78; Н 7,41; N 8,37. 55

Пример 30. (2$, За$,7aS)-1-(N -(альфа-нафтилэтоксикарбонил)- -лизил-гамма

-0- глутамил)октагидро-1 Н-индол-2-крабоновая кислота.

Выход 0,37 г (29%), Исходные соединения: соединение II u N-(L- нафтилэтоксикарбонилокси) сукцинимид. (а)о =-38,8 (1 н. раствор NaOH).

Вычислено, %: С 59,64; Н 7,44, N 7,95, СззН44М40в.2 НгО 0,5 С4НвОг

Найдено, %: С 59,87, Н 7,17; N 7,91.

Пример 31. (2S, ÇaS, 7aS)-1-(М -(4-фенилбензилоксикарбонил) -L-лизил-гамма-Dглутамил)октагидро-1 Н-индол-2-карбоновая кислота, Выход 0,23 г (13%). Исходные соединения: соединение II u N-(4-фенилбензилоксикарбонилокси)сукцинимид, (a)p = -39,1 (1 н. раствор NaOH), Вычислено, %: С 61,09; Н 7,26; N 7,92, СЗ4Н44%0в 1,5 НгО ° 0,5 С4НвОг

Найдено, % .С 61,23; Н 7,26; N 7,85.

Пример 32. (2S,ÇaS,7а$)-1-(М -(4-гидроксибензоил)-1 - лизил-гамма-D-глутамил)окта гидро-1 Н-и ндал-2-ка рбон овая кислота.

В 5 мл воды растворяют 1,30 г (2S, ÇaS, 7а$)-1-(N -бензилоксикарбонил-L-лизил-гб амма-D-глутамил) октагидро-1Н-индол-2карбоновой кислоты и 0,25 г карбоната натрия и добавляют 10 мл тетрагидрофурана.

При интенсивном перемешивании добавляют 0,7 г N-(4-гидроксибензоилокси)сукцинимида и смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Реакционную смесь концентрируют до половины объема. подкисляют 10%-ной лимонной кислотой и экстрагируют хлористым метиленом, Органический слой промывают водой, сушат над безводным сульфатом натрия и концентрируют досуха при пониженном давлении. Остаток разделяют хроматографически на колонке СН Р20Р (диаметр 2,5 см, длина

40 см), используя в качестве элюента смесь ацетонитрил — вода (градиент от 30 до 70%).

Фракции, содержащие целевой продукт, концентрируют досуха при пониженном давлении, получая 0,6 г остатка, Остаток растворяют в смеси 25% HBr — уксусная кислота (10 мл) и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 1 ч. Затем добавляют 100 мл простого эфира и образовавшийся белый осадок собирают посредством фильтрации и разделяют его хроматографически на колонке СНР20Р (диаметр 2,5 см, длина 40 см), используя смесь ацетонитрил — вода (градиент от 0 до 40%), Фракции, содержащие целевой продукт, концентрируют досуха при пониженном давлении. Остаток одвергают лиофильной сушке, получая 0,3 г(59%) вещества, указанного в заголовке. (а)п 7 = -17,4 (в воде).

1743356

Вычислено, : С 56,63: Н 7.20: N 9,77.

Сг7НЗ8(")408 ° 1,5 НгО

Найдено, о ; С 56,71; Н 7,09; N 9,95.

Следующие соединения синтезируют таким же образом, что в примере 32.

Пример 33. (2S, ÇaS, 7а$)-1-(N -(2-тиофенкарбонил)-1 — лизил-гамма-D-глутамил)октагидро-1 Н-карбоновая кислота.

Выход 0,24 г (19/). Исходные соединения: соединение 11 и N-(2-тиофенкарбонилокси)с кцинимид. (a)D = -23,1 (в воде), Вычислено, : С 54,14, Н 6,91; N 10,10;

S 5,78.

С25Н36М407$ -Н20

Найдено, /; С 54 09 Н 6,74; N 0,14; S

5,99.

Пример 34. (2S, ÇaS, 7aS)-1-(N -(3-хин олин ка рбо н ил)-L- л из ил-гамма-D-глутамил)октагидро-1 Н-индол-2-карбоновая кислота.

Выход 0,30 г (21 /), Исходные соединения: соединение II u N-(3-хинолинкарбонилокси)с кцинимид. (а)г) 4 = -25,8 (1 н. раствор NaOH).

Вычислено, /: С 58,33: Н 7.02 N 11,34.

C8OH8gN6O7 2HZO

Найдено, /. С 58,46; Н 7,30; N 11,24.

Пример 35, (2$, За$, 7aS)-1-(N -(2хлорникотиноил)-L- лизил-гамма-D-глутамил)октагидро-1 Н-индол-2-карбоновая кислота, B ыход 0,20 г (15 ). Исходн ы е соединения: соединение II u N-(2-хлорникотиноилокси)с кцинимид. (а)г = -42,6 (в воде).

Вычислено, /: С 52.66; Н 6.63; N 11,81;

С! 5,98.

С26Нз8С N507 1,5 Н2О

Найдено, : С 52.75; Н 6,68: N 11,76; CI

5,89, Пример 36. (2S, ÇaS. 7aS)-1-(N -(4хлорбензоил)- -лизил -гамма-D-глутам ил)о кта гид р о-1 Н-и н дол-2-ка р бо. о в а я кислота.

Выход 0,40 г (25/), Исходные соединения: соединение II u N-(4-хлорбензоилокси)сукцинимид. (а)о = -25,9 (1 н. раствор NaOH), Вычислено, /: С 54,77: Н 6.81; N 9,46;

CI 5,99.

C27H37CIN4O7 1,5 Н20

Найдено, /о.. С 55,07: Н 7,09; N 9,26; CI

5,79.

Пример 37, (2$, ÇaS, 7aS)-1-{N -(индолин-2-(S)-ка рбо ксил)- -л изил-гамма-0глутамил)октагидро-1 Н-индол-2-карбоновая кислота.

Выход 0,25 г (18/о). Исходные соединение: соединение ((и N-(неделин-2 (S)-карбониклоси сукцинимид. (а)о --64,3 (1 н. раствор NaQH).

5 Вычислено, : С 56,90; Н 7,47; N 11,44.

С29Н41М609 ° 1,25 Н20

Найдено, /: С 56,99; Н 7,61; N 11,15.

Пример 38. (2$, За$, 7aS)-1-(N -(2-тианафтенкарбонил)-1= лизил-гамма-D-глута10 мил)окта гидро-1 Н-и н дол-2-карбоновая кислота, Выход 0,3 г (31,). Исходные соединения: соединение II u N-(2-тианафтенкарбонилокси)сукцинимид.

15 (а)г) 6=-16,5 (1 н. раствор йаОН).

Вычислено, о/о.(С 55,93; Н 6,80; N 9,00; S

5,15, С29Ь88 N407.2Н20

Найдено, /,: С 56.08; Н 6,63; N 8,87; S

20 4,94, Пример 39. (2S, ÇaS; 7aS)-1-(N2-(2-хинаксолин карбонил)-L- лизил-гамма-0-глутамил)окта гидро-1 Н-и ндол-2-крабоновая кислота.

25 Выход 0,30 г (21/). Исходные соединения: соединение II u N-(2-хиноксалин-крабонилокси1сукцинимид. (a)D = -15,3 (1 н.,раствор NaOH), Вычислено, : С 57,56; Н 6,75; N 13,89.

С29НЗ8М607.1,25 Н20

Найдено, ; С 57.48; Н 7,00; N 13,96, Пример 40. (2S, ÇaS, 7aS) -1(N (2-изохинолинкарбонил)-L- лизил-гамма-D-глутамил)октагидро-1 Н-индол-2-карбоновая

35 кислота.

Выход 0,30 г (22,) Исходные соединения: соединение И и N-(2-изохинолинкарбон ил о кси1сукци н имид. (а)о = -51,8 (1 н. раствор NaOH).

40 Вычислено, : С 60,09; Н 6,89; N 11,68.

СзоНз9(ч807 "1 Н20

Найдено, : С 59,89; Н 6,66; N 11,61.

Пример 41. (2S, ÇaS,7а$)-1-(N -(6-метоксин и коти ноил)-L- лизил-гамма-D-глута45 мил)октагидро-1Н-индол-2-крабоновая кислота.

Выход 0.24 г (23 ). исходные соединения: соединение II u N-(6-метоксиникотиноилокси)су7кцинимид.

50 (г))р = -18,0О (e воде), Вычислено, о : С 55,09; Н 7,19; N 11,90.

С27НЗ9М508 1,5 Н20

Найдено, /: С 55,09; Н 7,44; N 11,77, Пример 42. (2S, ÇaS, 7aS)-1-(N -(6этоксиникотиноил)-(= лизил-гамма-D-глутамил)акта гидро-1 Н-индол-2-карбоновая кислота, Выход 01 5 г (14 ). Исходные соединения; соединение II u N-(6-этоксиникотиноилокси)сукцинимид.

16

1743356

15 (a)p = -16,4 (в воде), Вычислено, /; С 54,98; Н 7,42; N 11,45.

C28H41N50g 2 Н20

Найдено, /,: С 55,00: Н 7.70: N 11,27.

Пример 43, (2S, ЗаЯ, 7aS)-1-(N -(6хлорникотиноил)-L- лизил-гамма-D-глутамил)окта гидро-1 Н-индол-2-карбоновая кислота.

Выход 2,0 r (55/). Исходные соединения: соединение il u N-(6-хлорникотиноилокси)с кцинимид. (a)p = -21,4 (вода).

Вычислено, /; С 51,87: Н 6,70; N 11,63;

Cl 5,89.

С26Н 36CI N g07 2 Н20

Найдено, /: С 51,78; Н 6,44: N 11,88; CI

6,05, Пример 44. (2S, ЗаЯ, 7aS)-1-(N -(6-нпропоксиникотиноил)-L- лизил-гамма-Dглута мил)окта гидро-1 Н-и ндол-2-ка рбо н о вая кислота.

Выход 0,25 г (23%), Исходные соединения: соединение II u N-(6-н-пропоксиникотиноилокси)сукцинимид, (Q)p = -25,2 (1 н. раствор NaOH), Вычислено, : С 56,48: Н 7.52: N 11,36.

С29Н43М508. 1.5 Н20

Найдено, /,: С 56.56; Н 7,22; N 11,36, Пример 45. (2S, За S, 7а S)-1-(N2-(2-изопропоксиникотиноил)- L-лизил-гамма-Dглутамил)октагидро-1Н-индол-2-карбоновая кислота.

Выход 0,20 г (18 ). Исходные соединения: соединение II u N-(2-изопропоксиникотиноилокси)сукцинимид. (а)о = -26,4 (1 н, раствор NaOH).

Вычислено, : С 55,67: Н 7.57: N 11,19.

С29Н43Й508 2Н20

Найдено, /: С 55,41; Н 7,80; N 11,05.

Пример 46, (2S, ÇaS. 7aS)-1-(N -(3-гидроксибензоил)- - лизил-гамма-D-глутамил)октагидро-1 Н-индол-2-карбоновая кислота.

Выход 0,50 г (49/). Исходные соединения: соединение II u N-(3-гидроксибензоилокси)сукцинимид.

Вычислено, /о, С 56,98; Н 7,17; N 9,84, C27H38N408 1,25 Н20

Найдено, /: С 57,07; Н 7.16: N 9,79.

Пример 47. (2S. ÇaS. 7аБ)-1-(N -(3-гидрокси-4-метоксибензоил)-L-лизил-гамма-D

-глутамил) октагидро-1Н-индол-2-карбоновая кислота, Выход 0,30 г (27О/), Исходные соединения: соединение II u N-(3-гидрокси-метоксибензоилокси)сукцинимид. (a)p = -40,0 (1 н, раствор NaOH), Вычислено, /: С 52,95; Н 7.38; N 8,82.

C28H4ON40g 3,25 Н20

Найдено, /: С 52,86; Н 7.07: N 8,97.

Пример 48, (2S, ЗаЯ, 7aS)-1-(N -(6-гидг рокси-бета-нафтоил)- 1 -лизил-гамма-D-глутамил)акта гидро-1 Н-индол-2-карбоновая кислота.

Выход 0,35 r (31 /), Исходные соединения: соединение II u N-(6-гидрокси-j3- нафтилокси) сзукцинимид. (гх)р =-2,8 (1 н. раствор NaOH), Вычислено, /: С 58,02; N 7,07; N 8,73, C31H4ON408- 2,5 Н20

Найдено, ; С 57,90; Н 7,09; N 8,58, Пример 49, 1-(N -пиразиноил-1=ли2 зил-гамма-D-глутамил)- индолин-2(S)-карбоновая кислота.

Растворяют 0,26 г пиразиновой кислоты в смеси 3 мл диметилформамида и 20 мл хлористого метилена и добавляют 1,1 г этилового эфира 1-(N -трет-бутоксикарбонил-1=

6 лизил-О -этил-гамма-0-глутамил)

1 индолин-2(S)-карбоновой кислоты и 0,84 г

1-этил-3-(3-диметиламинопропил)карбодиимид-гидрохлорида. Смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре.

Реакционную смесь последовательно промывают насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и водой, сушат над безводным сульфатом натрия и концентрируют досуха при пониженном давлении, Остаток очищают хроматографически на колонке с силикагелем, элюируемой смесью (метанол — хлороформ (2 ). Получают 0,8 r этилового эфира 1-(N -трет-бутоксикарбонил-N -пиразиноил-(-лизил- О -этил-гамма2

D-глутамил) индолин-2(S)-карбоновой кислоты в виде вязкого маслянистого вещества.

Полученное вещество (0,8 r) растворяют в диоксане и добавляют 3,5 мл 1 н, раствора

NaOH, Смесь перемешивают при охлажденнии льдом в течение 1,5 ч. Реакционную смесь концентрируют, подкисляют 10/-ной лимонной кислотой и разделяют на хроматографической колонке СНР20Р, используя в качестве элюента смесь ацетонитрил — вода (градиент от 0 до 60 0), Фракции, содержащие целевой продукт, концентрируют досуха при пониженном давлении, Остаток повторно осаждают из смеси петролейного эфира и этилацетата. Пос зедством фильтрации получают 0,55 г 1-(N -трет-бутоксикарбонил-N -пиразиноил-1 -лизил-гамма-D4 глутамил) индоил-2(S)-карбоновой кислоты, Добавляют 10 мл трифторуксусной кислоты к аликвоте (0,45 г) конечного соединения и смесь перемешивают при охлаждении льдом в течение 20 мин. Трифторуксусную кислоту выпаривают и остаток разделяют хроматографичефски на колонке СНР20Р, используя в качестве элюента смесь ацетонитрил — вода (градиент от 0 до 30 ). Фрак17

1743356

18 ции, содержащие целевой продукт, концентрируют досуха при пониженном давлении.

Остаток подвергают лиофильной сушке, получая 0,27 г соединения, указанного в заголовке. (а)о = -74,4 (1 н. раствор NaOH).

Вычислено, : С 52,53: Н 6.17: N 14,70.

С25нзОМ607 2,5 Н20

Найдено, : С 52,52; Н 6,27; N 14,54.

Пример 50. Мононатриевая соль (2S, 3aS, 7aS)-1-(N -никотиноил-L-лизил-гамма- г

D-глутамил)акта гидро-1 Н- индол-2-ка рбоновой кислоты, В 5 мл воды растворяют 0,57 г (2S, ÇaS, 7aS)-1-(N -никотиноил- 1 -лизил-гамма-Dг глутамил)октагидро-1 Н-индол-2-карбонов ой кислоты и добавляют 1 мл 1 н. раствора

NaOH, Образовавшийся водный раствор разделяют на хроматографической колонке

СН Р20Р (градиент от 0 до 20 / и ри испол ьзовании смеси ацетонитрил — вода), Фракции, содержащие целевой продукт, концентрируют досуха при пониженном давлении. Остаток подвергают лиофильной сушке и получают 0,25 г соединения, указанного в заготовке, (а)п = -24,6 (в воде).

Пример 51. (2S, 3a S. 7aS)-1-(N -(2-мег токсибензоил)- - лизил-гамма-D-глутамил)октагидро-1 Н-индол-2-карбоновая кислота.

Растворяют в 15 мл хлористого метилена 1,0 г орто-анисовой кислоты. 0,76 r N-гидроксисукцинимида и 1,39 г водорастворимого гидрохлорида крабодиимида v. раствор перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Осадок отделяют посредством фильтрации. Маточный раствор концентрируют при пониженном давлении и остаток подвергают перекристаллизации из изопропанола, получая 1,47 r N-(2-метоксибензоилокси) сукцинимида. Т,пл. 180-182 С. (2 $, Ça S, 7a S)-1-(N -бензилокси рабоб нил-1 -лизил-гамма-D- глутамил)октагидро1 H-и ндол-2-ка рбон овую кислоту растворяют в 6 мл воды и добавляют карбонат натрия и 10 мл тетрагидрофурана, При тщательном перемешивании добавляют N(2-метоксибензоилокси) сукцинимид. Эту смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Реакционную смесь подкисляют 10/-ной лимонной кислотой и зкстрагируют хлористым метиленом, Органический слой сушат над безводным сульфатом натрия и концентрируют досуха при пониженном давлении. Остаток разделяют хроматографически на колонке СНР20Р, используя в качестве злюента смесь ацетонитрид — вода (градиент от

30 до 70/). Фракции, содержащие целевой продукт, концентрируют досуха при пониженном давлении, получая 1,0 г (2S, ÇaS, 7aS)-1-(N -бензилоксикарбонил-N -(2-мето

6 2

5 ксибензоил)-1 -лизил- гамма-D-глутамил)октагидро-1Н-индол-2-карбоновой кислоты.

В 10 мл зтанола растворяют 1,0 г (2$, За$, 7aS)-1-(N — бензилоксикарбонил-N -(2б метоксибензоил)-1 -лизил-гамма-D- глута10 мил) акта гидро-1 Н-индол-2-кар боновой кислоты и добавляют 1,18 г циклогексена и

0,2 г катализатора — 10 -ного палладия ан угле. Смесь перемешивают при 60 С в течение 2 ч. Катализатор удаляют путем фильт15 рации и маточный раствор концентрируют досуха при пониженном давлении, Остаток подвергают хроматографическому разделению на колонке СНР20Р (градиент от 0 до

50/ при использовании смеси ацетонит20 рил — вода). Фракции. содержащие целевой продукт, концентрируют при пониженном давлении. Остаток подвергают лиофильной сушке, получая 0,34 г соединения, указанного в заготовке.

25 (а)о = -14,9 (в воде).

Вычислено, /: С 56,36; Н 7,43; N 9,39.

CZgH4PN406 2 Н20

Найдено, /: С 56,63 Н 7,1 N 9,33, Пример 52. 1-(N -циклогексикарбо30 нил-L-лизил-гамма-О- глутамил) индолин2($)-карбоновая кислота.

Выход 0,28 г (42,). Исходные соединения: соединение II- u N-(циклогексилкарбонилокси1сукцинимид. Т. пл. 207 — 212 С, (а)п = -90,3 (1 н, раствор NaOH), Вычислено, /О. С 57,23; Н 7,47; N 9,89.

СПНЗбй407 2Н20

Найдено, /: С 57,42; Н 7,52; N 9,94.

Пример 53. (2S, ÇaS, 7aS)-1-(N -(4-фенилбензоил)-L- лизил-гамма-D-глутамил) октагидро-1Н-индоил-2-карбоновая кислота.

Выход 0.36 г (21 ). Исходные соединения: соединение И и N-(4-фенилбензоилокси)сукцинимид, (а)о = -11,6 (1 н. раствор NaQH), Вычислено, : С 62,02; Н 7,29; N 8,27.

СЗЗН42Й407 1,5 Н20 0,5 С4Н802

Найдено, : С 61,98; Н 7,15, N 8,35.

Пример 54. (2$, ÇaS, 7aS)-1-(М -(4фторбензоил)-1-лизил- гамма-0-глутамил) октагидро-1Н-индол-2-карбоновая кислота.

Выход 0,37 г (67 ). Исходные соединения: соединение II u N-(4-фторбензоилокси) сукцинимид, Вычислено, /О. С 55,47: Н 7,07; N 9,58; F

3,25, С27НЗ7М407Р.2 Н20

Найдено, /: С 55,59; Н 7,36; N 9,46; F

3,03.

1743356

Пример 55, 1-(N -(3,4-метилендиок2 сибензилоксикарбонил)- L-лизил-гамма-Dглутамил)индолин-2(S)-карбоновая кислота.

Растворяют в хлористом метилене 2,5 г

N -трет-бутокси-карбонил-N -(3-нитро-2-иг 6 иридинсульфенил)-L-лизина и 2,2 r этилового эфира 1-(0 -атил-гамма-D-глутамил) ин1 долин-2(S)-карбоновой кислоты и добавляют 2,0 г 1-этил-3-(3-диметиламинопропил)-карбодиимид-гидрохлорида. Эту смесь перемешивают в течение ночи при комнатной температуре, Реакционную смесь последовательно промывают насыщенным водным раствором бикарбоната натрия 5О/-ным водным раствором бисульфата калия и водным раствором хлорида натрия. Сушат над безводным сульфатом натрия и концентрируют досуха при пониженном давлении. Остаток перекристаллизовывают из этанола, чтобы получить 3,6 r этилового эфира 1-(N -трет-бутоксикарбо 2 нил-1-N -(3-нитро-2- пиридинсульфенил)-L6 лизил-О -атил-гамма-D-глутамил)

1 индолин-2-(S)-карбоновой кислоты. (а)027 = -28,2 (в диметилформамиде).

3,5 г этого сложного эфира перемешивают с 30 мл трифторуксусной кислоты при охлаждении льдом в течение 30 мин. Выпаривают трифторусусную кислоту и к остатку добавляют этилацетат и 5 / карбоната калия. Смесь интенсивно встряхивают. Органический слой промывают водным раствором хлорида натрия, сушат над безводным сульфатом натрия и концентрируют при пониженном давлении, Остаток подвергают перекристаллизации из смеси простого эфира и этанола, получая 2,6 г этилового эфира 1-(N -(3-нитро-2-пиридинсульфенил)—

1=лизил-О -атил-гамма-0-глутамил)-индол

1 ин-2(S)-карбоновой кислоты. Т. пл, 95—

102 С. (а)о = -39,6 (в диметилформамиде).

Аликвоту (1,0 г) образовавшегося сложного эфира растворяют в 30 мл хлористого метилена и добавляют 0,21 г N-метил-морфолина и 1,07 г N-(3,4-метилендиоксибензилоксикарбонилокси) сукцинимида и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 3 ч, Реакционную смесь последовательно промывают насыщенным водным раствором бикарбоната натрия. 5 /-ным водным раствором бисульфата калия и водой. Сушат над безводным сульфатом натрия и концентрируют досуха при пониженном давлении. Остаток подвергают перекристаллизации из смеси этанола и метанола, получая 1,1 г этилового эфира 1-(N—

2 (3 4-метилен-диоксибензилоксикарбонил)N -(3-нитро-2-пиридинсульфенил)-L-лизил

-О -этил-гамма-0-глутамил) индолин-2(S)1 карбоновой кислоты. Т.пл. 130 — 135 С. (а)п = -23,2 (в диметилформамиде).

Аликвоту (1,0 r) этого продукта обрабатывают как на второй стадии примера 68, получая 0,8 г 1-(N -(3,4-метилендиоксибензилоксикарбонил)-N -(3-н итро-2- пиридинсульфенил)-1 -лизил-гамма-D-глутамил)индолин-2(S)-карбоновой кислоты, Т, пл. 100—

"0 110 С. (ajD = -70,5 (1 н. раствор NaOH), Аликвоту (0,74 r) продукта растворяют в

10 мл диоксана и добавляют 19 мл диоксана и 10 мл 0,5 н. раствора соляной кислоты.

Смесь перемешивают при 45 С в течение

4 ч. Реакционную смесь нейтрализуют и концентрируют, а остаток подкисляют 1 н. раствором соляной кислоты и разделяют хроматографически на колонке СНР20Р (градиент от 0 до 50 при использовании смеси ацетонитрила и воды), Фракции, содержащие целевой продукт, концентрируют, и выпавшие в осадок кристаллы собирают фильтрацией, получая 4 мг (7,7 / ) указанного в головке соединения. Т,пл, 19802о (а)о = -67.,3 (1 н. раствор NaOH).

Вычислено, /о. С 54,88; Н 6,04; N 8,83.

С29Нз4М401о 2 Н20

Найдено, / .С 55.16; Н 6.14, N 8,83.

Пример 56. (2 S. За Я, 7a S)-1-(N -(2-гидрокси-3-метил-бензоил)-L-лизил-гамма-D-r лутамил) октагидро-1Н-индол-2-карбоновая кислота.

Выход 0,16 r (14 О), Исходные соединения,соединение II u N-(2-гидрокси-3-метилбензоил окси) сук ци н имид. (а)о =+45,2 (в 1 н. раствор NaOH), Вычислено, /,; С 57,71; Н 7,54; N 9,11.

40 C2oH4oN406 3 Н20

Найдено, : С 54,78; Н 7,46; N 8,82, Пример 57. (2S, 3aS. 7aS)-1-(N -(2-гидрокси-5-хлорбензоил) -L-лизил-гамма-D-глутамил)окта гидро-1 Н-индол-2-карбоновая

45 кислота.

Выход 0,32 r (29 /). Исходные соединения; соединение II u N-(2-гидрокси-5-хлорбензоилокси) сукцинимид, (а)о =+17,2 (1 н. раствор NaOH).

Вычислено, /о. С 53,33; Н 6,63; N 9,21;

С! 5,83.

С27Н37С!М406 1,5 Н20

Найдено, ; Г 53,21; Н 6,75; N 9.23: CI

5.65.

Проведены биологические испытания соединений, полученных в условиях описываемого способа.

Противогипертоническая активность, Самцам крыс вида Sprague Dawley (возра21

1743356

22 стом 5 недель) под легкой анестезией с, помощью эфира пережимали серебряным зажимом (внутренний диаметр 0,22 мм) левую почечную артерию, Правую почку и почечную артерию составляли нетронутой. Через

6-10 недель после зажима отбирали крыс, имеющих давление крови выше 180 мм Hg.

Таким крыс называли двухпочечными ренально гипертензивными крысами Гольдблаттовского типа и их рассматривали как типичную модель ренинангиотензинзависимой гипертонии, Кровяное давление измеряли методом хвост - манжета tailcuff с использованием программированного электросфигмоманометра (PŠ— 300, Нарко Биосистем. СLUA) после нагревания в течение 10 мин и ри 38 С в нагревательной камере.

Противогипертоническую активность испытуемых соединений оценивали после однократного орального применения этих соединений на крысах с почечной гипертонией (3 — 5 крыс / группа).

Полученные результаты представлены в таблице, ln vitro АСŠ— ингибитораня активность в отношении АСЕ в лабораторных условиях.

Среда для анализа содержала препарат АСЕ (легкие кролика), синтетический субстрат (гиппурил- =гистидил-L-лейцин 5 mM), NaCI (300 mM) и фосфатный буффер (100 mM, рН

8,3), Компоненты смешивали до конечного объема 0,300 мл и инкубировали в течение

30 мин при 37 С в присутствии или отсутствии используемого соединения. После прекращения реакции в результате добавления

300 1 н. раствора NaOH образовавшуюся гиппуровую кислоту экстрагировали 2 объемамп этилацета. а. После выпаривания этилацетат и добавления дистиллированной воды гиппуровую кислоту определяли по ее поглощению в области 228 нм с использованием спектрофотометра (Хитачи 100 — 41).

Степень АСŠ— ингибирование. ACi рассчитывали из активностей. полученных в присутствии и отсутствии испытуемых соединений. Значение IG>o (молярная концентрация, требуемая для 50% ингибирования активности АСЕ) получали из кривой, построенной в координатах доза — ингибирвоание, Токсичность. В опытах использовали самцов мышей штамма ТД вЂ” ddy весом 22—

25 r. Было обнаружено. что значение riAso при оральном применении испытуемых соединений (примеры 15 и 51) на мышах составили более 3,000 кг на 1 кг веса тела, Полу ченные результаты показывают, чтп испытанные соединения обладают очень сла бой токсичностью.

Проведенные испытания показали, что соединения, полученные в условиях описываемого способа, обладают очень низкой токсичностью (3000 мгlкг), их терапевтический индекс 300 и более, т.е. они относятся к соединениям исключительно низкой токсичности, Из таблицы видно, что структурные аналоги (2 последних соединения) при введе10 нии в организм животного вызывают понижение кровяного давления лишь на 3 и

2 мм рт.ст, при дозе 30 мг/кг. Увеличение вводимого количества этих аналогов не ведет к существенному понижению кровяного давления. Эти сравнительные соединения не обнаруживают терапевтически эффективного понижения кровяного давления.

Таким образом, соединения, получен- ные по предлагаемому способу, обладают более высокой противогипертонической активностью и относятся к категории практически нетоксичных соединений, Формула изобретения

1, Способ получения производных трипептидов общей формулы (ЩИ4

CZ COOK

I I

Й -W-С0-MH-СК-С0 NK-СН-(СК ) -СО-R30 где R — C4 — Сс-циклоалкильная группа, группа циклогексил — низший алкил; фенильная группа, необязательно замещенная заместителем, выбранным из галогена, метила, метоксигруппы, фенила и гидроксигруппы; группы фенил — низший C> — Cz-алкил, где бензольное кольцо необязательно замещено заместителем, выбранным из галогена, метила, метоксигруппы, фенила и 3,4-метилендиоксигруппы, г дроксизамещенная

40 нафтильная группа; группа нафтил — низший алкил, пиридильная группа. необязательно замещенная заместителем, выбранным из -алогена и низшей алкоксигруппы C> — С4-группы, пирролидинильная группа, 2-тиенильная группа, 3-хинолильная группа; 2-индолильная группа, тианафтен-2-ильная группа, хиноксалин-2-ильная группа, изохинолин-2-ильная группа, 2-пиразинильная группа. группа пиридил — низший алкил или группа имидазолилвинил, W — одинарная связь, -О- или -NH-;

R2 — водорсд;

Вз — 2(S)-карбоксииндолильная группа или 2-карбокси (2S, 3aS, 7aS)-октагидроиндолильная группа, при условии, что если

И/ — одинарная связь, то R1 — цикло-C4 — CIалкильная группа, фенильная группа, необязательно замещенная галогеном. метилом, меток=игрупгой, фенилом или гидроксигруппой. гидроксизамещенная наф174335б

АСЕ-ингибиторна активность

R -Ы (Соединение по примеру

RZ кровяного давления, мм рт.ст. через 9ч после введения н — 1 просп сн и

© II СООН

95х10

-23

3 II

Простая связь ооон

6 >4 10

lI

1,3х10

2,1х10

7,5 10

С -сн;о,,3..о :1. н

-21

3 н н»

Простая связь

1 - и сооп

-42

6,8х10 з н

:щ,Ж

3 н

6,4-10

Не измеряли тильная группа, пиридильная группа, необязательно замещенная галогеном и низшей алкокси-C> — Сз-группой, пи рролидинильная группа, 2-тиенильная группа; 3-хинолильная группа, 2-индолильная группа, тианафтен-2-ильная группа, хиноксалин-2-ильная группа, изохиноилн-2-ильная группа, 2-пиразинильная группа, имидазолилвинильная группа, либо, если И/ — -О-, то R) — цикло-С4Сб-алкильная группа, группа циклогексил— низший алкил, группа фенил-С1 — С2-алкил, а бензольное кольцо необязательно замещено галогеном, метилом. метоксигруппой, фенилом или 3.4-метилендиоксигруппой, группой нафтил — низший алкил, группой пиридил — низший алкил, или. если W -NH-, то R> — цикло-Сб-алкильная группа, фенильная группа, фенил-C> — С2-алкильная группа, или их фармацевтически приемлемых солей, отличающийся тем. что осуществляют взаимодействие соединения общей формулы

К1 — W — СООН, где F > и W имеют указанные значения, или его реакционноспособного производного по крабоксильной группе. такого как галоидангидрид кислоты. изоцианат или активированный амид. с соединением об(٠— ХН-К4

54 C 0m

Н 1НН-СО-КЙ-СК-(ь.й1)1 00-К где Rz, R4 — водород или группа. защищаю1 щая аминогруппу;

В2 и R4 имеют указанные значения. или с его кислотно-аддитивной солью и при необходимости удаляют защитную группу, и целевой продукт выделяют в свободном виде или в виде соли, 5 Приоритет по признакам:

09.05.86 при R> — цикло-Са-алкильная группа, группа циклогексил — низший алкил, группа фенил — низший алкил, в которой

10 бензольное кольцо может быть необязательно замещено метоксигруппой, пиридильная группа, которая может быть необязательно замещена заместителем, выбранным из галогена и низшей алкоксигруп- .

15 пы, или имидазолилвинильная группа; Rz— водород; Кз — 2(S)-крабоксииндолильная или

2-карбокси(23, 3aS, 7aS) октагидроиндоильная группа;\И вЂ” одинарная связь или -О, 03.07.86 при R> — цикло-С4-алкильная

20 или пирролидинильная группа; R2 — водород, Вз — 2(S)-карбоксииндолильная или

2-карбокси (2S, За$, 7аЯ)октагидроиндолильнэя группа: W — одинарная связь или

-О-.

25 2б.01.87 при R1 — цикло-С5-алкильная группа, фенильная группа, необязательно замещенная, метокси- или гидроксигруп пой, группа фенил — низший алкил, в которой бензольное кольцо необязательно замеще30 но 3,4-метилендиоксигруппой, 2-тиенильная группа, 3-хинолильная группа.

2-пиразинильная группа либо группа пиридил — низший алкил: R2 — водород; Яз—

2(S)-карбоксииндолильная либо 2-карбокси

35 (2S, 3aS, 7аЯоктагидроиндолильная группа;

W — одинарная связь ибо -О-.

1743356

Продолжение таблицы

Изменение кровяного

Соедине" ние по примеру

R -W (Rz

АСЕ-ингибиторна активность 0s0 давления, мм рт.ст. через 9ч после введения

© — 1 н-сссн

l (О -сн,1иQ-сн,кн«l l

» I l

С и -сссн

»11

11»

«1!» (0)-кн©3

11» 10

3 Н

Одинарная связь мес- дО -(СН )!О(о, „н 11 СССН

-29

« I I»

13

5,8xl О

0-0С O-38

5,0х10

4,6х10

-23

11

3 Н

Одинарная связь

1,4x10

«11«

-40

8,0xl 0

Q-(OK,О-24

11»

18 ф

l,lx10 а .2,2хl 0

-38

» I l

«23

» I l

5,1х10

1,2х10

-23

ll

21.к(сн,),а (о(3

Одинарная связь

Qo-27

C((00-СНгс

I 1»

24 кс40 ;сх,-с3

25 и

С

О сн,-оке бО сн,-с

«27

3,6х10

1 !»

-27

I

СО сн„-с4,7х10

-55

Простая связь сн1-с©ф

Не изме- 3,6хl О

HRllOC ь

»11»

29 (OKER!-с îî

Il

l I»

©©-сн!-о

„,.©

»11

-52

-29

»11»

3 — -27 К COOK

1 (к -ссюн

-27

8,4х10 в

7,3х10

1,0"10

5,4x10

1,1х10 а

7,2x10

l,lх10

4,7х10

5, Ох10

5,0х10

3,9х10

5,2х10

5,2xl, О

4,6х10

1743356

27

Продолжение таблицы

Соедине ние по примеру

R -W (Rz

АСЕ-ингибитор" на активность

1ово

4,6х10

Он -сюн

©ЯУ

»27

3 Н

Простая связь

5,9х10

6,2х10

Ф

„©

-41

11

II»

Il

© —, л

8,2х10

-72

Прост ал связь

©р

©о)512х10

11

II»

-з

Не измор. б,áx10

I

Е.,-он

7,2х10

MeG Н

l!Iе;<имер. 7 !х10

41

Простая связь

11»

3

44

1,0х10

l l»

-20

5,2õ10 Ite0-ф-21

3 Н, Простая связь

4,)х! 1

- 1

» ".4

1Л1-

l,ох10

1 r ° S

-77

-44

7,8х10

Н (монон-: триЕБая соль) 50

5,11х10

-38

I »

5 и, ж1»30

2,7х10

5,бх10

Простая связь

",6õ10

1,88xl0

-32

55

6,1х10 47

"1-Й ф тО

/61 г"О Н

1 О, О .

:":1 .. .1;> г2т

I

\ ф.С ,,Хсх,„, 3

1-(I;-лизил-tl"-D-глутамил) индолин-2(S)-карбоновая кислота

1- (И, К -дибензилоксикарбо1ил -1;ливия- гамма-D-глута лил-индолин-2(S)-карбоновая ки1-ло га

Значения получения при оральнсн пр1лменении с дозой 30 мг/к1Изменение кровяного давления, MM PT,СТ ° через 9ч после введения

4,0-10

6,0х10 9

5,0х10

6,4х10