Способ получения пептидов или их фармацевтически приемлемых солей

 

Изобретение касается производства пептидов или их фармацевтически приемлемых солей общей ф-лы I- RiR2CH-C(0)-NH- chr3-C(0)NH-CH(CH2R4)-CH(OH)-CH2-CH2-C

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я >s С 07 К 5/06, А 61 К 37/02

ГОС УДАРСТВЕ H> IblA КОМИТЕТ пО изОБРетениям и ОткРытиям

ПРИ ГКНТ СССР %ОРВИ « ® EA" <(1» »

"ИВЛИ Ъ i g li q

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ (л (21) 3987362/04 (22) 28.11.85 (31) 59 — 252878; 59-268035; 60 — 15177 (32) 30.11.84: 19.12.84; 29.01.85 (33) JP (46) 07.09.91, Бюл, М 33 (71) Санкио Компани Лимитед (JP) (72) Ясухиро Морисава, Юитиро Ябе, Мипуро Катаока, Ясутеру Идзима, Тацуо Кокубу и

Кунио Хивада(JP) (53) 547.964.407(088.8) (56) Шедер Э., Лк". ке К. Пептиды. — М,: Мир.

1967, ч.1. с.116. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПЕПТИДОВ

ИЛИ ИХ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИ ПРИЕМЛЕМЫХ СОЛЕЙ (57) Изобретение касается производства пептидов или их фармацевтически приемлемых солей общей ф-лы 1: Й1Р2СН-С(0)-NHСН йз-C(0)NH-С Н(С Нуйа)-С Н(ОН) СН2-СН2-С (0)й5, где Rl = Rz — A-Вб при А — Cl-C4-алкиИзобретение относится к способу получения пептидов или их фармацевтически приемлемых солей — новых биологически активных соединений, которые могуг найти применение в медицине, Цель изобретения — способ получения новых производных пептидов, обладающих низкой токсичностью и более высокой реннин-ингибирующей активностью.

l1 р и м е р 1. Бис(1-нафтилметил)уксусная кислота.

2,86 г (0,12 ммоль) натрия растворяют в

250 мл безводно о этанола и при охлажде„„Я „„ ) 676454 АЗ лен ил, Вв - нафтил; йз — С1-Cz-ал кил, 5-имидаэолилметил, 4-тиазолилметил или 2-(метилсульфинил)-атил,R4 — иэо и ро и ил о в а я группа, КБ — N йвй9 при Яв — Н и йя — С1 — Саалкил (он может быть замещен С1-С4-алкокси-, окси-, диметоксифенильной или ди-((С1-Са-алкил)аминогруппой) 1-бензил-4пиперидинил, ингибирующих активность реннина для использования в медицине, Цель— создание новых более активных пептидов.

Их синтез ведут реакцией соединений ф-л

I I и III: RiRz СН-С(0)-Yr-OH(ll), НУб-NHCH(CHzR<)CH(OH)CHz-C(0)-Rs(lII), где Y — NHC H Вз-С(О)-; s = 0 или 1: Г = 0 или 1, (s + Г) = 1;

R>-КБ — см. выше. При необходимости превращают любую включенную группу в необходимую другую группу указанных определений для настоящего ряда веществ и целевой продукт выделяют в свободном виде или в виде соли. Новые пептиды до

99% (против 65% для известного Z-PheHis-лейцинола) ингибируют реннин. 1 табл. нии льдом к полученному раствору добавляют 19,95 r (0,12 ммоль) диэтилмалоната. Затем реакционный раствор перемешивают в течение 1 ч, после чего по каплям добавляют

22,00 г (0,12 ммоль) 1-хлорметилнафталина и полученный раствор перемешивают в течение 3 ч при комнатной температуре, а затем перемешивают в течение 3 ч при 50 С.

Выделившуюся соль отфильтровывают, а полученный фильтрат концентрируют, выпаривая при пониженном давлении. Остаток очищают с помощью жидкостной хроматографии среднего давления на колонке с силикагелем до получения 15,2 r

1676454

35 (58%) указанного соединения в виде бес- 40 (41,3%) диэтип(1-нафтилметил)мапоната и

9,8 r (17,8%) диэтилди(1-нафтилметил)малоната.

9,8 г (22,2 г ммоль) диэтилди(1-нафтилметил)малоната растворяют в 100 мл смеси

1:1 по объему бутанола и воды, 10 г гидроокиси калия добавляют к полученному раствору и полученную смесь нагревают при кипении с обратным холодильником при

150 С в течение 8 ч, Затем реакционную смесь концентрируют, выпаривая при пониженном давлении. Остаток смешивают с водой, а затем добавляют концентрированную соляную кислоту до рН 1. Выделившиеся кристаллы отфильтровывают до получения 6,2 г (82%) указанного соединения в виде белых кристаллов с т.пл, 172174 С.

Пример 2. 2-(1-Нафтилметил)-6-фенилгексановая кислота.

1,3 г(57 ммопь) натрия растворяют в 200 мл безводного этанопа, Этот раствор смешивают с 14,8 г (50 ммопь) диэтип(1-нафтипметил)малоната при охлаждении льдом и перемешивают в течение 1 ч. 11,7 г (55 ммоль) 4-фенилбутипбромида добавляют затем по каплям и полученную смесь перемешивают в течение 6 ч при 50 С, Выделившуюся соль отфильтровывают и полученный фильтрат концентрируют, выпаривая при пониженном давлении. Остаток очищают на хроматографической колонке с сипикагелем (злюируя смесью 1;4 по объему зтилацетата и гексана) до получения 15,4 г (71%) диэтил2-(1-нафтилметил)-2-(4-фен ил бутил)малоната.

Это соединение обрабатывают так же, как описано в примере 1, гидроокисью калия в водном бутаноле до получения 6,8 r цветного маслянистого вещества.

Пример 3, Диэтил-(1-нафтилметил)малонат.

Этилат натрия, полученный из 2,3 г (0,1 грамм-атом) натрия суспендируют в 250 мл диметилформамида. Добавляют 16,0 r диэ1илмалоната при охлаждении льдом до получения суспензии и полученную смесь перемешивают при 0 С в течение 30 мин, а затем при комнатной температуре в течение

1 ч. К этому раствору добавляют 100 мл

° диметилформамида, содержащего 17,6 r (0,1 ммоль) 1-хлорметилнафталина, в течение 2 ч. Затем смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи, после чего растворитель отгоняют при пониженном давлении. Остаток смешивают с водой, а затем экстрагируют этилацетатом.

Этилацетатный слой промывают насыщенным водным раствором натрийхлорида, су5

20 шат над безводным сульфатом натрия и концентрируют, выпаривая при пониженном давлении. После выпаривания остатка при пониженном давлении получают 21,3 г указанного соединения в виде бесцветной вязкой жидкости с т.кип. 210 С (5 мм рт,ст„667

Па).

Пример 4. Диэтилбензил(1-нафтилметип)малонат.

1,05 г (25 ммоль) 55 мас,%/ìàñ. суспензии натрийгидрида в минеральном масле

rIpoMblBBloT трижды безводным гексаном, чтобы высушить ее, а затем смешивают с

100 мл диметипформамида. К этой суспензии добавляют 7,21 г (24 ммоль) диэтип(1нафтилметил)малоната при охлаждении льдом, После того, как выделение водорода прекращается, реакционную смесь перемешивают в течение 30 мин, а загем добавляют 4,10 r (24 ммопь) бензилбромида и полученную смесь перемешивают в течение

pLLå 2 ч при комнатнои температуре. В конце этого промежутка времени реакционную смесь концентрируют, выпаривая при пониженном давлении. Остаток смешивают с водой и зкстрагируют этилацетатом, Этилацетатнь1й слой промывают насыщенным водным раствором натрийхпорида, сушат над безводным сульфатом натрия и концентрируют, выпаривая при пониженном давлении. Остаток очищают на хроматографической колонке с силикагалем (элюируя смесью 15:1 по объему гексана и этилацетата) до получения 7,3 г указанного соединения в виде бесцветного маслянистого вещества.

Масс-спектр, m/å. 390 (fJl ).

Пример 5. Дизтип (2-(2-метоксиэтокси)этил)(1-нафтил метил)малонат, Повторяют реакцию, описанную в примере 4. HG используют 2,12 г (10 ммоль)

2-(2-метоксиэтокси)этипиодида и 2,0 г (6,7 ммоль) диэтип-(1-нафтилметип)малоната до получения 1,93 r указанного соединения в виде бесцветного маслянистого вещества после очистки на хроматографической колонке с силлкагелем (злюируя смес ..ю 10:1 по Объему гехсгна и зтилацетата).

Масс-спектр, и;/е: 402 M ).

П р и м " р 6. Диэтил(2-(2-бензилоксиэтокси)зтил,1 нафтилметил)мдлонат.

Повторяют реакцию, описанную в примере 4, но используют 3,98 г (10 ммоль)

2-(2-бензилоксиз-окси)этилиодидд и 3,0 Г (10 ммопь) дизтил(1-нафтилмети l)MBJIOHGTB до получения 3,62 - "указанного соединения в виде бесцветного маслянистого вещества после очистки на хроматографической колонкс с силикагепем (элюируют смесью 8:1 по объему сексa!Ia и этилацетата), 1676454

Масс-спектр, m/е: 478 (М ).

Пример 7. 1-Бензил-3-нафтилпропионовая кислота.

Смесь 7,3 r (18 ммоль) диэтилбенэил(1нафтилметил)малоната. 70 мл бутанола, 70 5 мл воды и 7 г гидроокиси калия нагревают на масляной бане (150 С) при кипении с обратным холодильником в течение 10 ч, Реакционную смесь охлаждают. а затем концентрируют, выпаривая при понижен- 1О ном давлении, после чего ее подкисляют концентрированной соляной кислотой и экстрагируют этилацетатом. Этилацетатный слой промывают насыщенным водным раствором натрийхлорида, сушат над без- 15 водным сульфатом натрия и концентрируют, выпаривая при пониженном давлении.

Остаток очищают на хроматографической колонке с силикагелем (элюируя смесью 1:1 по объему гексана и этилацетата) и получен- 20 ный твердый продукт перекристаллизовывают иэ смеси гексана и этилацетата до получения 3,29 г указанного соединения в виде бесцветных кристаллов с т.пл. 119120 С. 25

Масс-спектр, m/е: 290 (М ).

Пример 8. 2-(2-(2-Метоксиэтокси)этил)-3-(1-нафтил)пропионовая кислота.

Повторяют реакцию, описанную в примере 7, но используют 1,87 г (4,6 ммоль) 30 диэтил(2-(2-метоксиэтокси)этил)(1-нафтил— метил)малоната до получения 1,12 г указанного соединения в виде бесцветного маслянистого вещества после очистки на хроматографической колонке с силикагелем 35 (элюируют этилацетатом).

Масс-спектр, m/е: 302 (M ).

Пример 9. 2-(2-(2-Бензилоксиэтокси)этил)-3-(1-нафтил)п ропионовая кислота.

Повторяют реакцию, описанную в при- 40 мере 7, но используют 2,50 r (5,2 ммоль) диэтил(2-(2-бензилоксиэтокси)этил)(1-нафтилметил)малоната до получения 1,76 г указанного соединения в виде бесцветного маслянистого вещества после очистки на 45 хроматографической колонке с силикагелем (элюируют этилацетатом), Масс-спектр, m/е: 378 (М ).

Пример 10. 4(S)-(N-(Бис(1-наФтилметил)ацетил)-L-гистидил-амина)-3(S) окси-6- 50 метил-N-(2(S)-(-)-метил-бутил)гепатан мид (соединение 1).

Первая стадия. 4(S)-(N-Бензилоксикарбонил-L-гистидиламино) 3(S)-окси-6-метилЩ2(Я)-(+метил бутил)гепта н амид. 55

10 мл 6 н. раствора соляной кислоты в диоксане добавляют к 0,9 г (2,6 ммоль) (3S, 4S)-4-трет-бутоксикарбонила-мино-3-окси6-метил-N-(2($)- (-)-метилбутил)гептанамида. Затем реакционную смесь перемешивают в течение 20 мин при комнатной температуре в атмосфере азота. после чего ее выпаривают досуха при пониженном давлении. Остаток растворяют в 10 мл диметилформамида, а затем добавляют 0,26 г (2,6 ммоль) N-метилморфолина при охлаждении льдом до получения раствора (3S, 4Я)-4-амино-3-окси-6-метил-N-(2(5)- (+метилбутил)гептанамида. Этот раствор добавляют к 10 мл холодного раствора в диметилформамиде N-бензилоксикарбонил-L-гистидиназида, полученного из 0,91 г (3 ммоль) N-бензилоксикарбонил-L-гистидингидразида путем обработки иэопентилнитритом, и полученную смесь перемешивают в течение 5 дней при

4 С. Растворитель отгоняют при пониженном давлении, а затем к остатку добавляют насыщенный водный раствор карбоната калия и полученную смесь экстрагируют этилацетатом. Этилацетатный экстракт промывают насыщенным водным раствором натрийхлорида, сушат над безводным сульфатом натрия и концентрируют, выпаривая при пониженном давлении. Полученный остаток очищают хроматографически на колонке с силикагелем, элюируя смесью

20:1 по обьему хлороформа и метанола.

Нужные фракции концентрируют, выпаривая при пониженном давлении до получения сиропообразного остатка. Сироп отверждают, добавляя диэтиловый эфир, остаток собирают фильтрованием, в результате чего получают 0,96 г указанного соединения в виде белого порошка, т.пл.

158-168 С

Вычислено, : С 62.89; Н 8,01; N 13.58.

СзтНюМ О

Найдено, : С 62.73; Н 7,94; N 13,67.

Вторая стадия 4(S)-(N-(Бис(1-нафтилметил)ацетил)-l -гистидиламино}-3(S)-окси- 6метил-N-(2(S)-(+метилбутил)гептанамид, Бензилоксикарбонильную группу удаляют из соединения, полученного на первой стадии. обрабатывая его водородом при комнатной температуре в присутствии 5 мас. /мас, до палладия на активированном угле. 91 мг (0,2 ммоль) полученного соединения, 66,5 мг(0,2 ммоль) бис(1-нафтилметил)уксусной кислоты и 39,4 мг (0,22 ммоль)

N-окси-5-норборнен-2,3-дикарбоксиимида растворяют в смешанном растворителе, состоящем из 1 мл диметилформамида и 6 мл метиленхлорида, и полученный раствор охлаждают на льду. К полученному раствору добавляют 44 мг (0,4 ммоль) N-метилморфолина и 45,4 мг (0,22 ммоль) дициклогексилкарбодиимида в указанном порядке и полученную смесь перемешивают в течение

1 ч при охлаждении льдом, а затем в течение

10 дней при комнатной температуре Выде1676454 лившуюся дициклогексилмочевину отфильтровывают, а полученный фильтрат конденсируют, выпаривая при пониженном давлении, К полученному остатку добавляют 5 мас. объем водного раствора бикарбоната натрия, Выделившееся маслянистое вещество экстрагируют этилацетатом. Gpганический экстракт промывают насыщенным водным раствором натрийхлорида, сушат над безводным сульфатом натрия и концентрируют, выпаривая при пониженном давлении, Полученный остаток очищают на хроматографической колонке с силикагелем, используя в качестве элюента смесь 10:1 по объему хлороформа и метанола. Нужные фракции собирают и концентрируют, выпаривая при пониженном давлении. Остаток отверждают, добавляя диэтиловый эфир, и полученный твердый продукт собирают фильтрованием до получения 35 мг целевого соединения в виде бледно-желтого порошка, т.пл. 130-15 С. (a) = -66 (С = 0,1, йеганол).

Вычислено, %: С 71,54: Н 7,68 N 9,70, С43Н5зй504 Н20

Найдено, : С 71,78; Р 7,61; N 10,00.

Получение соли, 722 мг (ммоль). 4(5)-(N-(бис(1-нафтилметил)ацетил)-L-гистидиламино)- 3(S)-окси-6метил-N-(2(S)-метил бутил1гаптан амид моногидрата растворяют в 30 мл метанола.

10 мл холодной 4 н, соляной кислоты в диоксане добавляют в метанольный раствор.

Раствор вакуумируют, чтобы высушить, при пониженном давлении с получением 757 мг указанного соединения в виде белого порошкаа.

Пример 11. 4(S)-{М-(Бис(1-нафтилметил)ацетил) L-лейциламино)-3(5)-окси- 6-метил-N-этилгекптанамид (соединение 2).

Первая стадия, Этил-4(S)-(N-трет-бутоксикарбонил-L-лейциламино)-3(5)-окси- 6метил гептаноат, Трет-бутоксикарбонильную группу удаляют из 3,06 (10,1 ммоль) атил-(3S, 4S)-4трет-бутоксикарбониламино-3-окси-б-метилгептаноата обычными способами (так же, как и на первой стадии примера 10). Полученный продукт растворяют в метиленхлориде и нейтрализуют триэтиламином при охлаждении льдом. К полученному раствору добавляют 3,48 r (10,6 ммоль) N-трет-бутоксикарбонил-L-лейцин-N-owcucyaqv vvvga и полученную смесь перемешивают в течение 3 ч при комнатной температуре, Затем добавляют 1,1 мл 3$N,N-диметиламино)пропиламина и полученную смесь перемешивают еще в течение 1 ч. Реакционный раствор концентрируют, выпаривая при понижен5

55 ном давлении. Добавляют этилацетат для растворения остатка и этилацетатный раствор промывают 5 мас.%/объем водным раствором бикарбоната натрия, 10 мас, 7, обьем водным раствором лимонной кислоты и насыщенным водным раствором натрйихлорида в указанном порядке. Затем сушат над безводным сульфатом натрия, Растворитель отгоняют при понижен ioM давлении и полученный остаток перекри-, сталлизовывают из смеси диэтилового эфира и гексана до получения 3,02 r указанного соединения в виде бледно-красного порошка, т.пл. 113 — 114 С, Вычислено, : С 60,55; Н 9,68; N 6,73.

Cr Н4ОМ 05

Найдено, : С 60,36; Н 9,70; N 6,66, Вторая стадия, 4(5)-(N-трет-Бутоксикарбонил-1-лейциламино)-3(S)-окси- бметилгептановой кислоты гидразид.

2,65 r (6,36 ммоль) соединения, синтезированного на первой стадии и 3,19 r (63,7 ммоль) моногидрата гидразина растворяют в 80 мл диметилформамида и полученную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 19 ч, а затем еще 12,5 ч при

50 С. Реакционный раствор концентрируют, выпаривая при пониженном давлении, К остатку добавляют воду и этилацетат. Выделившийся нерастворимый продукт отфильтровывают, Полученныи фильтрат промывают водой, а затем сушат над безводным сульфатом магния. Растворитель отгоняют при пониженном давлении. Остаток и нерастворимый продукт, который был выделен при фильтровании, обьединяют и суспендируют в кипящем диэтиловом эфире.

Выделившееся соединение собирают фильтрованием и сушат до получения 1,73 г указанного соединения в виде бесцветных призм, т.пл. 140-147 С.

Третья стадия. 4(S)-(N-трет-Бутоксикарбонил-L-лейциламино)-3(S)-окси- 6-метил-Nэтилгептанамид.

402 мг (1,00 ммоль) соединения, синтезированного на второй стадии, растворяют в 8 мл диметилформамида, а полученный раствор охлаждают до -60 С. К охлажденному раствору добавляют 0,62 мл 6 н.раствора соляной кислоты в диоксане и 0,18 мл (1,35 ммоль) изопентилнитрита и полученный раствор перемешивают в течение 10 мин при

-2С С, " затем снова охлаждают до -60 С.

Затем раствор нейтрализуют, добавляя 0,61 г N-метилморфолина, после чего добавляют

108 мг (1,32 ммоль) этиламингидрохлорида и реакционную смесь перемешивают при

5ОС в течение 20,5 ч. Затем реакционную смесь выливают в воду и полученную смесь экстрагируют этилацетатом. Этилацетат1676454

10 ную фазу промывают 5 мас.% объем водным раствором бикарбоната натрия, 10 мас. (,/объем водным раствором лимонной кислоты и насыщенным водным раствором натрийхлорида в указанном порядке, а затем сушат над безводным сульфатом магния. Растворитель отгоняют при пониженном давлении. Остаток промывают гексаном. собирают фильтрованием и сушат до получения 345 мг указанного соединения в виде белого порошка, т.пл. 193-197 С, Вычислено, %: С 60,69; Н 9,94; N 10,11.

С21Н411чЗО5

Найдено, о : С 60.46; Н 10,04; N 10,13.

Четвертая стадия, 4(S)-{N-(Бис(1-нафтилметил)ацетил)-L-лейциламино)-3(S)- окси-6-метил-N-этилгептанамид. трет-Бутоксикарбонил ьную группу удаляют из 99 мг (0,24 ммоль) соединения, полученного на третьей стадии. Полученный продукт растворяют в диметилформамиде.

К полученному раствору добавляют 91 мг (0,24 ммоль) бис(1-нафтилметил)уксусной кислоты. 50 мг (0,28 ммоль) 90%-ного диэтилфосфороцианидата и 64 мг (0,63 ммоль) триэтиламина при охлаждении льдом и полученную смесь перемешивают в течение

14,5 ч при комнатной температуре. Реакционный раствор последовательно обрабатывают, как описано в примере 10 (вторая стадия), и полученный продукт перекристаллизовывают из смешанного растворителя, состоящего из метиленхлорида и гексана, до получения 59 мг указанного соединения в виде бесцветных иголок, т.пл, 93-96 С. (а) = -157 С (С = 0,1, метанол).

Вычислено, %: С 75,32; Н 8,06; N 6,59.

С40Н51М304 1/2Н20

Найдено. : С 75,06; Н 8,08; N 6,60.

Пример 12. 4(S)-{N-(Бис(1-нафтилметил)ацетил)-1 -лейциламино)-3(S) -окси-6-метил-N-(2-метилбутил)гептанамид (соединение 3).

Первая стадия, 4(S)-(N-трет-Бутоксикарбонил)-1 -лейциламино)-3(S)-окси -6-метил-N-(2 )(-метилбутил)гептанамид.

344 мг (1,23 ммоль) (3$, 4S)-4-амино-3о кс и-6-метил-N-(2-метил бутил) ге пт;- н а м и д моногидрохлорида растворяют в метипенхлориде, Этот раствор нейтрализуют триэтиламином при охлаждении льдом, а затем к нему добавляют 420 мг (1,28 ммоль) N-третбутоксикарбонил-L ëåéöèí-N îêñèñóêцини— мида. Полученную смесь перемешивают в течение 22,5 ч при комнатной температуре, а затем добавляют 0,2 мл 3 (N,N-диметиламино)пропиламина и полученную смесь перемешивают еще 1 ч. Затем реакционный раствор концентрируют выпариванием при пониженном давлении. Добавляют к остатку метиленхлорид и полученный раствор промывают 5 мас.$/oáüåì водным раство5 ром бикарбоната натрия, 10 мас. /îáüeì водным раствором лимонной кислоты и насыщенным водным раствором бикарбоната натрия в указанном порядке, а затем сушат над безводным сульфатом магния. Раство10 ритель отгоняют при пониженном давлении. Полученный остаток промывают этилацетатом, отфильтровывают и сушат до получения 328 мг указанного соединения в виде белого порошка, т.пл, 166 — 168 С.

15 Вычислено, %,: С 62,99; Н 10,35; N 9,18.

С24Н47И305

Найдено, %: С 62,92. Н 10,16; N 9,14.

Вторая стадия. 4(S)-{N-(Бис(1-нафтилметил)ацетил)-L-лейциламино)-3(S)- окси-6-ме20 тил-N-(2-метилбутил)гептанамид. трет-Бутоксикарбонильную группу удаляют иэ 100 мг (0,22 ммоль) 4(5)-(N-трет-бутоксикарбонил-L-лециламино)-3-(S)-окси6-метил-N-(2-метилбутил)гептанамида, пол-, 25 ученного на первой стадии, и полученный продукт растворяют в диметилформамиде.

К этому раствору добавляют 77 мг (0,23 ммоль) бис(1-нафтилметил)уксусной кислоты, 42 мг(0,23 ммоль) 90%-ного ди этил фосфороцианидата и 52 мг (0.54 ммоль) триэтиламина при охлаждении льдом и полученную смесь перемешивают а течение 4 ч при комнатной температуре. Затем реакционный раствор концентрируют выпаривани35 ем при пониженном давлении. К остатку добавляют этилацетат и полученный раствор промывают 5 мас.%/îáüåì водным раствором бикарбоната натрия, 1 н. соляной кислотой и насыщенным водным раствором

40 натрийхлорида в указанном порядке, после чего его сушат над безводным сульфатом магния. Растворитель отгоняют при пониженном давлении, а полученный остаток перекристаллизовывают из смешанного растворителя, со45 стоящего из метиленхорида и гексанз,qo получения 40 мг указанного соединения в виде белого порошка, т.пл. 98-100 С. (гк) = -143 (С = 0,1, метанол).

Вычислено, %: С 74,96; Н 8,49; N 6,10.

C43H57N3O4 1/2 Н20

Найдено, %: С 75,10; Н 8,56; N 6,10.

Пример 13. 4(S)-(N-бис(1-нафтилметил)ацетил)-L-лейциламино}3(Я)- окси-6-ме5 тил-М-(2-этоксиэтил)гептанамид (соединение 4).

Первая стадия. 4(S)-(N-трет-бутоксикарбонил- .-лейциламино)-3(S) îêñè-6- метил-N (2-этоксиметил) гептанамид, 1676454

L трет-Бутоксикарбонильную группу удаляют из 539 мг (1,56 ммоль) (3S, 45)-4-третбутоксикарбониламино-3-окси-сметил-N-(2-этоксиэтил)гептанамида обычным способом, а затем полученный продукт растворяют в метиленхлсриде при охлаждении льдом, и нейтрализуют триэтиламином.

К этому раствору добавля;от 534 мг (1,63 ммоль) N-трет -бутохсикарбонил-L-лейцинN-оксисукцинимида и реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 22 ч, Затем добавляют 0,2 мл 3(N,N-диметиламино)пропиламина и полученную смесь перемешивают еще в течение 1 ч, Реакционный раствор концентрируют выпариванием при пониженном давлении.

К остатку добавляют метиленхлорид и полученный раствор промывают 5 мас, /обьем водным раствором бикарбоната натрия, 10 мас. /объем водным раствором лимонной кислоты и насыщенным водным раствором натрийхлорида в указанном порядке, а затем сушат над безводным сульфатом магния. Растворитель отгоняют при пониженном давлении. Полученный остаток перекристаллизовывают из смешанногс растворителя, состояще o иэ метиленхлорида и этилацетата до получения 294 мг указанного соединения в виде бесцветных иголок. т,пл. 172-173 С, Вычислено,,,: С 60,10; Н 9,87; N 9,14.

С23Н 45 3О6

Найдено, ; С 59,99; H 9,96; М 9,09.

Вторая стадия. 4(Я)-;й-(Бис(1-нафтилметил)ацетил)-L-лейциламино)-3(5)-окси- 6-метил-N-(2-этоксиэтил)гептгнамид, трет-Бутоксикарбонильную группу > даляют из 105 мг (0,23 ммоль) 4(S)-(N-трет-бутоксикарбонил-L-лейциламино)-3(S)-окси6-метил-N-(2-этоксиэтил)гептанамида обычным способом, а затем полученный продукт растворяют в диметилформамиде. К этому раствору добавляют 78 мг (0,23 ммоль) бис(1-нафтилметил)уксусной кислоты, 43 мг

,0,24 ммоль) 90 -ного диэтилфосфороцианидата и 50 мг (0,49 ммоль) триэтиламина при охлаждении льдом и полученную смесь перемешивают в течение 5,5 ч при комнатной температуре. Реакционный раствор обрабатывают, как на второй стадии примера 12, а полученный продукт перекристаллизовывают из смешанного растворителя, состоящего из метиленхлорида и диэтилового эфира, до получения 58 мг указанног" cîåäèíåíèé в виде бесцветных иголок, т.пл, 168-169 С. (a)23 = -168 (С = 0,1, метанол).

Вычислено, ; С 73,98; Н 8,13 N 6, i6.

С42Н55М305

Найдено, : С 73,85; Н 8,24: N 6,14.

Пример 14. 4(S)-(N-(Бис(1-нафтилметил)ацетил)-1 -лейциламино)-3(S)-окси- 6-мегил-N-(3,4-диметоксифенэтил)гептанамид (соединение 5).

Первая стадия. 4(S)-(N-трет-Бутоксикарбонил-(-лейциламинo)-3(5)-окси-б-метил- N(3,4-диметоксифенэтил)гептанамид.

0,74 r (1,7 ммоль) (3S, 4S)-4-трет-бутоксикарбонил-амина-3-окси-б-метил-N-(3,4-д, имеiîêñèôåíýòèë)ãåïòàíàìèäç растворяют в 8 мл 6 н. раствора соляной кислоты в диоксане и полученную реакционную смесь после перемешивания в течение 20 мин при комнатной температуре выпаривают досуха при пониженном давлении. Остаток растворяюг в 20 мл метиленхлорида и при охлаждени и льдом полученный раствор нсйтрализуют, добавляя 0,24 мл триэтиламина. Затем добавляют 0,58 г (1,8 ммоль)

N-трет-бутоксикарбо |ил-L-лейцин-N-окси сукцинимида, растворенного в 5 лл метиленхлорида. Реакционную смесь перемешивают в течение 20 ч при комнатной температуре, после чего к смеси добавляют

0,2 мл 3-(N,N-диметиламино)пропиламина и реакционную смесь перемешивают еще в течение 1 ч. Реакционный раствор концентрируют выпариванием при пониженном давлении, а затем к полученному остатку добавляют воду и этилацетат. Выделившийся остаток отфильтровывают и собирают органический слой, Этот органический слой промывают 10 мас.%/обьем водным растворогл лимонной кислоты. 5 мас. / /обьем водным раствором бикарбоната натрия и насыщенным воднь,м раствором натрийхлорида в указанном порядке, а затем сушат над безводным сульфатом магния. Растворитель отгoHslloT при пониженном давлении, Остаток и осадок отфильтровывают, как описано, обьединягот и кристаллизуют из смешанного растворителя, состоящего из метиленхлорида и этилацетата, до получения 0,69 г указанного соединения в виде бесцветных иголок, т,пл. 192 †1"С.

Вычислено, : С 63,13; Н 8,95; N 7,62.

С29Н49М307

Найдено. : С 63,06; Н 8,83; N 7,56, Вторая стадия. 4(5)-(N-(Áèñ(1-нафтилметил)ацетил)- -лейциламино)-3(S)-окси- 6-метил-N-(3,4-диметоксифенэтил) гептанамид.

153 мг (0,28 ммоль) 4(S) (N-трет-бутоксикарбонил-L-лейциламино)-3(S)-окси-6- метил-N-(3,4-диметоксифенэтил)гептанамида растворяют в 1,4 мл 6 н. раствора соляной кислоты в дисксане и реакционный раствор перемешивают в течение 20 мин при комнатной температуре, а затем выпаривают досуха при пониженном давлении. Остаток

1 676454

5

55 растворяют в 3 мл диметилформамида и перемешивают при охлаждении льдом. К этому раствору добавляют 93 мг (0,27 ммоль) бис(1-нафтилметил)уксусной кислоты, 49 мг (0,27 ммоль) 907;-ного диэтилфосфороцианидата и 59 мг (0,58 ммоль) триэтиламина и реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при охлаждении льдом. а затем перемешивают еще 3 ч при комнатной температуре. Затем реакционный раствор концентрируют, выпаривая при пониженном давлении, К остатку добавляют этилацетат, полученный раствор промывают 5 мас. /объем водным раствором бикарбоната натрия. 1 н.соляной кислотой и насыщенным водным раствором натрийхлорида в указанном порядке и сушат на„безводным сульфатом магния, Растворитель отгоняют при пониженном давлении. Остаток промывают гексаном, а затем кристаллизуют из смешанного растворителя, состоящего из метиленхлорида и диэтилового эфира до получения 128 мг указанного соединения в виде белого порошка, т.пл. 164 — 166"C. (cl) = -104 (С = 0,1, метанол).

Вычислено, : С 74,49; Н 7,68; N 5,43.

С4ЯН5Л305

Найдено, : С 74,32; H 7,63; N 5,44, Пример 15. И (4(S)-(N-(Бис(1-нафтилмегил)ацетил)-L-норлейциламино)-3(S)- окси- б-метил гептаноилЦ-L-изолеицинол (соединение 6).

Первая стадия. N (4(S)-N òðåò-Бутоксикарбонил-!.-норлейциламино-3()-окси- 6метилгептаноил)-L-изолейцинол.

375 мг (1 ммоль) N-(4(S)-(N-трет-бутоксикарбониламино-3(5)-окси-6-метилгептанои л)- L изолейцинолэ обрабатывают б н, раствором соляной кислоты в диоксане до удаления трет-бутоксикарбонильной группы и получают (35, 4S)-4-ами но-3-окси-6-метилгептаноил-L-изолейцинолгидрохлорида.

231 мг (1 ммоль) N-трет-бутоксикарбонил-Lнорлейцина и 135 мг(1 ммоль) 1-оксибензотриазола добавляют к этому соединению и полученную смесь растворяют в 5 мл диметилформамида. Добавляют 101 мл (1 ммоль) триэтиламина при охлаждении льда 1 и 206 мг (1 ммоль) дициклогексилкарбодиимида и реакционную смесь перемешивают в течение 1 ч при 0"C, а затем в течение ночи при комнатной температуре. Добавляют воду, реакционную смесь экстрагируют диэтиловым эфиром и нерастворимый GGTBTQK отфильтровывают, Органический экстракт промывают 10 мас. /îáüåì водным раствором лимонной кислоты, 5 мас.%/объем водным раствором бикарбоната натрия и насыщенным волным раствором натрийхлорида в укаэанном порядке, а затем сушат над безводным сульфатом натрия. Этот раствор концентрируют, выпаривая при пониженном давлении. а затем переосаждают, добавляя смесь диэтилового эфира и гексана до получения 330 мг указанного соединения в виде белого порошка, т,пл. 139 — 144 С.

Вторая стадия. N-(4(S)-(N-(Бис(1-нафтилметил)ацетил)-(-норлейциамино)-3(S)окси-б-метилгептаноил))-L-иэолейцинол.

163 мг (0,33 ммоля) Щ4(Я)(й-трет-бутоксикарбонил-L-нойролейциламино)-3(S)окси-6-метил гепта ноил)-L-изолейцинола обрабатывают так же, как на второй стадии примера 12, до получения 110 мг указанного соединения в виде белого порошка, т,пл.

135 †1 С. (a) = -124 (С = 0,1, метанол).

Вычислено, : С 73,81; Н 8,40; N 5,87.

С44Н5вМ305 1/3 Н20

Найдено, %: С 73,92; Н 8,36; N 5,94, Пример 16. N-(4(S)-(N-(Бис(1-нафтилметил)ацетил)-L-гистидиламино)- 3(S)-окси6-метилгептаноил)-L-изолейцинол (с оеди не н ие 7).

749 мг (2 ммоль) (4(5)-М-трет-бутоксикарбон илам и но)-3(S)-окси-6-метил гептаноил)-(-изолеицинола обрабатывают б н. раствором соляной кислоты в диоксане для удаления трет-бутоксикарбонильной группы и получения N-(3(S,4S)-4-амино-З-окси-бметилгептаноил)-L-изолейцинолгидрохлори да. К этому соединению добавляют 819 мг(2 ммоль) N-трет-бутоксикарбонил-Nim-тозил1.-гистидина и 359 мг (2,2 ммоль) диэтилфосфороцианидата, всю смесь растворяют в 10 мл диметилформамида. При охлаждении льдом к реакционной смеси по каплям добавляют 425 мл (4,2 ммоль) триэтиламина, а затем все перемешивают в течение 1 ч при

0 С, а затем в течение ночи при комнатной температуре. Эту реакционную смесь концентрируют, выпаривая при пониженном давлении, а остаток смешивают с этилацетатом. Этилацетатный раствор промывают

10 мас. /oáúåì водным раствором лимонной кислоты, 5 мас. /объем водным ðàñтвором бикарбоната натрия и насыщеннь;м водным раствором натрийхлорида в указанном порядке, сушат над безводным сульфатом натрия и концентрируют, выпаривая при пониженном давлении. M"ñëÿíèñòûé остаток обрабатывают трифторуксусной кислотой в присутствии анизола для удаления трет-бутоксикарбонильной группы и получения 4(S)-(Nim-тозил-1 -гистидиламин)3(S)-окси-б-метилгепаноил-L-изолейцинолт— рифторацетата.

1676454

120 мг (0,35 ммоль) бис(1-нафтилметил)уксусной кислоты и 60 мг (0,35 ммсль) диэтилфосфороцианидата добавляют к этому соединению и всю смесь растворяют в

2,5 мл диметилформамида, 70 мг (0,67 ммоль) триэтиламин" добавляют по каплям при охлаждении льдом к реакционной смеси, которую перемешивают втечение 1 ч при

0 С. Затем реакционную смесь концентрируют, выпаривая при пониженном давлении, а остаток смешивают с этилацетатом, Раствор этилацетата промывают 10 мас, /обьем раствором лимонной кислоты, 5 мас. /объем водным раствором бикарбоната натрия и насыщенным водным раствором натрийхлорида в указанном порядке, высушивают над безводным сульфатом натрия и концентрируют, выпаривая при пониженном давлении. К остатку добавляют 170 мг (1,28 ммоль) 1-оксибензотриазола, полученную смесь оастворяют в 5 мл тетрагидрофурана. Затем эту реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи, после чего ее концентрируют, выпаривая при пониженном давлении. Остаток смешивают с этилацетатом. Этилацетатный раствор промывают

5 мас. /объем водным раствором бикарбоната натрия и насыщенным водным раствором натрийхлорида в указанном порядке, сушат над безводным сульфатом натрия и концентрируют, выпаривая при пониженном давлении. Остаток очишают с помощью тонкослойной хроматографии на силикагеле (используя смесь 8:1 по обьему хлороформа и метанола s качестве проявляющего растворителя) до получения 38,8 мг указанного соединения в виде белых кристаллов, т,пл. 175-179 С (а) = -70 (С= 0,1, метанол).

Вычислено, : С 69,45; Н 7.68; N 9,20.

С44НЮМО5 1,5 НгО

Найдено, : С 69,34; Н 7 38: N 8,78.

Пример 17. Щ4(Я)-(N-(Бис(1-нафтилметил)ацетил)- а-метиониламино}-3(S)-окси6-метил гептаноил)-L-изолейцинол (соединение Ц).

Первая стадия. Щ4(5)-(N-трет-Бутоксикарбонил-L-метиониламино)-3(S)-окси-6метилгептаноил)-L-изолейцинол.

2 мл 6 н. раствора соляной кислоты в диоксане добавляют к 749 мг (2 ммоль) N(4(S)-(N -трет-бутоксикарбониламино)-3(S)окси-6-метилгептаноил)-» -изолейцинола, Затем реакционный раствор перемешивают в течение 2 ч при комнатной температуре. а затем концентрируют, выпаривая при пониженном давлении. Затем к остатку добавляют 500 мг (2 ммоль) трет-бутоксикарбо5

55 нил-метионина и 270 мг (2 ммоль) 1-оксибезотриазола, Полученную реакционную смесь растворяют в 30 мл диметилформамида, а затем добавляют 412 мг (2 ммоль) дициклогексилкарбодиимида и полученную смесь перемешивают в течение 3 ч при

40 С, В конце этого промежутка времени реакционную смесь выливают в ледяную воду и экстрагируют этилацетатом. Нерастворимый остаток отфильтровывают.

Этилацетатный экстракт промывают 10 мас. /объем водным раствором лимонной кислоты, 10 мас. /объем водн ы м раствором бикарбоната натрия и насыщенным водным раствором натрийхлорида в указанном порядке, а затем сушат над безводным сульфатом натрия. Этот раствор концентрируют, выпаривая при пониженном давлении, а затем остаток осаждают, добавляя смесь хлороформа и гексана, в результате чего получают 600 мг указанного соединения в виде белого порошка.

Вторая стадия. N-(4(S)-(М(Бис(1-нафтилметил)а цетил)-L-метион ил а минo j-3(S)- о кси6-метилгептаноил)-L-изолейцинол.

2 мл 6 н. раствора соляной кислоты в диоксане добавляют к 600 мг (1,19 ммоль) изолейцинола, полученного на первой стадии. Смесь перемешивают в течение 2 ч при комнатной температуре, а затем полученный раствор концентрируют, выпаривая при пониженном давлении. К остатку добавляют 403 мг (1,19 ммоль) бис(1-нафтилметил)уксусной кислоты и полученную смесь растворяют в 20 мл диметилформамида. Добавляют при охлаждении льдом 300 мг (1,84 ммоль) диэтилфосфороцианидата и

2 мл тризтиламина при перемешивании.

Полученную смесь оставляют реагировать в те ение 1 ч при 400С, а затем выливают в ледяную воду и экстрагируют зтилацетатом.

Этилацетатный раствор промывают 10 мас. /объем водным раствором лимонной кислоты, 10 мас. /объем водным раствором бикарбоната натрия и насыщенным водным раствором натрийхлорида в указанном порядке, Затем экстракт очищают с помощью препаративной тонкослойной хроматографии (используя в качестве проявляющего растворителя смесь хлороформа и метанола) и осаждают активную фракцию, добавляя смесь хлороформа и гексана, в.результата чего получают 520 мг указанного соединения в виде белого порошка т.пл. 76-„

80 C. (а)гз = -133 (С = 0,1, метанол).

Пример 18, й-(4(ЯНМ-(Бис(1-нафтилметил)ацетил)-3-(4-тиазолил)-Э - аленила17

1676454 мино)-3®-окси-6-метилгептаноил)-(-изол— ейцинол (соединение 9).

Первая стадия. Мет>1, овь>й сложныи эфир N-(бис(1-нафтилметил)ацетил)-3-(4-тиазr лил)-О(-аланин, 51 . м; (1,50 ммоль) бис(1-нафтилметил)уксусной кислоты >п 389 мг (1,50 ммоль) ме илового слож>1ого эфира 3-(4-тиазог>ил)О -аланиндигидрохлорида суспендируют в

20 мл безводного тетрагидрофурана, 0,25 мл (1,65 ммоль) диэтилфосфороцианидата и

0,69 мл (4,95 ммоль) триэтиляминз при охлаж внии льдом добавляют затем к этой суспензии и полученную смесь перемешивают р. течение ночи при ко>лнятной т> 1ПЕрятурЕ В атМОСфЕрЕ аЗОта. В >.0>röÅ это о про;лежутvà времени рас T > ори гель отгоняют при пониженном давлении, а полученный остаток о >и>цзют на хромзтогряфической колонке с силикагалем (эл>оируя смесью 2:1 по обьему зтилацетята и гексана) до получения 630 мг указанно о соединения, т,пл. 110-112оС.

Вторая стадия. N-(Е ис(1-нафтилметил)а цетил)-3-(4-тиазолил)-DL-зла нина гидра ид.

620 мг (1,22 м non») метилового сложно>и эфира N-(бис(1-нафтилметил) цетил)-3-(4т;язолил)-D(-а-.>ни >а растворяют в 8 мл безводного диметилформамида. Этот ряст lop смешивают с 310 мг (6,19 ммоль) гидрази>1гидратя, пере>лешивают в течение 5 ч при 40 С. Растворитель отгоняют при понио женном давлении, к остатку добавляют воду. Выпавшие кристаллы собирают фильтрованием, промывают смешанным растворителем, состоящим из гексаня и диэтилового эфира, и сушат до получения 408 мг указанного соединения, т.пл. 118--121 С. о

Третья стадия. N-(4(S)-(N-(Бис(1-нафтилметил)ацетил)-3-(4-тиазолил)-DL- алзнилямино)-3(S)-окси-6-метил-гептаноил)-(-изолейцинол, 393 мг (0,77 ммоль) N-(бис(1-нафтилметил)яцетил)-3-(4-тиазолил)-DL-алэн ин гид разида суспендируют в 10 мл безводного диметилформамида. К этой суспензии при -60 С о добавляют 0,66 мл 4 н.раствора соля ои кислоты в диоксане, а затем темпсратуру оеякционной смеси повышаюг до -20 С. Эту .о суспензи>о с>легвивают с 0,13 мл (О 97 ммоль) изопе>.тил>ч»1,> та и перемешивают в течение 10 мин. ";lucn> того, как подтверждено исчезновение гидразида, те>лперагуру реакции с >о»а снижа>о> до -60оС. Для нейтрализации добавляют 0,33 мл (3.00 ммоль)

N-метилморфолиня. а затем 328 мг (1,02 ммолb) N- (35, 4S)-4-ами о-3-окси-6-метилгепта> оил)-L-изолейцинолгидрохлорида и

0,12 мг (0,09 ммоль) N-метилморфолина и реакционную смесь перемешивают в течение ночи при 4 С. Растворитель отгоняют при пониженном давлении, а остаток очищают с помощью тонкослойной хроматографии на силикагеле (используя смесь 10:1 по обьему хлороформа и метанола в качестве проявляющего растворителя) до получения

310 мг указанного соединения в виде белых кристаллов, т.пл. 94-98 С.

Пример 19. N-(4(S)-(2(RS)-(Бис(1-наф- . тилмет ил)ацетил)аминононаноил)-амино-3 (Я)-окси-б-метилгептаноил)-L-изолейцинол (соединение 10).

3 мл 6 н. раствора соляной кислоты в диоксане добавляют к 58,6 мг (0.156 ммоль)

И-(4(S)-трет-бутокси;арбониламино-3(S)-окси-6-метилгептаноил)- L- изолейцинола. Реакционный раствор перемешивают в течение 30 мин при комнатной температуре, а затем выпаривают досуха при пони>конном давлении, Остаток растворяют в 2 мл диметилформамида, а затем при охлаждении льдом добавляют 77,5 мг (0,156 ммоль) 2(RS)-(бис(1-нафтилметил)ацетил)аминонановой кислоты и 27,9 мг (0,17 ммоль) диэтилфосфорцизнидзта. К реакционной смеси по каплям добавляют 33 мл (0,327 ммоль) триэтилямина и полученную смесь перемешивают в течение 3,5 ч при комнатной температуре, а затем концентрируют, выпаривяя при пониженном давлении. Остаток смешивают с 2 мл воды и экстрагируют зтилаце>ятом. Органический слой сушат нзд безводным сульфатом магния и концентрируют при пониженном давлении. Остаток очищают с по>лощь>о препарятивной тонкослойной хроматографии ня c>nnrn> a;r>ne (про-. являющий агент — 10:1 по обь»му c>necL хлороформа и метанола) до получе> ..1» 21,0 мг указанного соединения в виде бесцветного порошка, т.пл. 75-78 С.

Пример 20. N-(4(S)-(N-(Бис(1-няфтилмет ил)а цетил)-D L-пропа ргил глицил ям>1но 3,S)-окси-б-метилгептяноил)-L-иэолейцинол (соединение 11).

10 мл 6 н. раствора соляной кислоты в диоксяне добавляют к 749 мг (2 ммоль) М(4(S)-трет-бутоксикарбониламино-3(S)-окси

-6-метилгептаноил)- L-изолейцинолз. Раствор перемешивают в течение 30 мин при комнатной температуре, а затем выпариваютдосуха при пониженномдавлении. Остаток растворя>от в 20 мл диметилформамида, а затем добавляют 426 мг (2 ммоль) N-третбутоксикарбонил-О! =пропгргилглицина и

270 мг (2 ммоль) 1-оксибензотриазола, К этому раствору добавляют 412 мг (2 ммоль) дициклогексилкарбодиимида и 1 мл триэт.,— ламина при охлаждении льдом. Полу:,-.>;1676454

19

20 ную смесь перемешивают в течение 2 ч при

40-50 С, после чего выделившуюся дициклогексилмочевину отфильтровывают.

Полученный фильтрат смешивают с этилацетатом, промывают водой, 10 мас. /îábем раствора бикарбо ната натрия и насыщенным водным раствором натрийхлорида в укаЗанном порядке, а затем органический слой сушат над безводным сульфатом магния. Затем растворитель отгоняют при пониженном давлении. Остаток смешивают с диэтиловым эфиром, а выпавший осадок отфильтровывают. Полученный фильтрат выпаривают досуха при пониженном давлении, К остатку добавляют 10 мл 6 н. раствора соляной кислоты в диоксане и после перемешивания в течение 30 мин при комнатной температуре раствор упаривают досуха при пониженном давлении, Остаток растворяют в 20 мл диметилформамида, к которому добавляют 680 мг (2 ммоль) бис(1нафтилметил)уксусной кислоты и 543 мг (3 ммоль) диэтилфосфороцианидата. К этому раствору добавляют 1 мл триэтилэмина при перемешивании, Полученный раствор перемешивают в течение 2 ч при 40 — 50 С, вылио вают в ледяную воду и эстрагируют этилацетатом. Этилацетатный слой промывают 10 мас, /объем водным раствором лимонной кислоты, 5 мас, /объем водным раствором натрийхлоридом в указанном порядке, а затем органический слой сушат над безводным сульфатом натрия. Растворитель отгоняют при пониженном давлении, затем чистят с помощью препаративной тонкослойной хроматографии (проявляющий растворитель — этилацетат), в результате чего получают два изомера указанного соединения, за счет асимметричного атома углерода в пропаргилглициловом фрагмен. те, т.пл, 182-188 и 92-94 С соответственно, Пример 21. 4-(4(S)-(N-(Бис(1-нафтилметил)ацетил)-L-лейциламино)-3(S)- окси-6метил гептаноил)амино-1-бенэилпиперидин (соединение 12), Первая стадия. 4((35, 45)-4-трет-Бутоксикарбониламино-3-окси-6-метилгептэноил)аФ мино- 1-бензилпиперидин.

348 мг (1,83 ммоль) 4-амино-1-бензилпиперидина, 510 мг (1.85 ммоль) (3S, 4S)-4трет-бутоксикарбониламино-3-окси-6-метилгептановой кислоты и 358 мг (2,2 ммоль) диэтилфосфороцианидата растворяют в 2 мл диметилформамида. К этому раствору по каплям добавляют 223 мг (2,2 ммоль) триэтиламина при охлаждении льдом и полученную смесь перемешивают в течение 30 мин при 0 С, а затем в течение ночи при комнатной температуре. К реакционному раствору

55 добавляют этилацетат, затем промывают 10 мас, /объем водной соляной кислоты, насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и насыщенным водным раствором натрийхлорида в указанном порядке, сушат над безводным сульфатом натрия и конденсируют, выпаривая при пониженном давлении. Полученный остаток очищают на хроматографической колонке с силикагелем (элюируя смесью 20:1 хлороформ и метанол) до получения 663 мг указанного соединения в виде слегка желтоватого стеклообразного вещества.

Вторая стадия, 4(4(5)-(N-трет-Бутоксикарбонил-1-лейциламино)- 3(S)-окси-6-метилгептаноил)амино-1-бензилпиперидин.

370 мг (1,60 ммоль) N-трет-бутоксикарбонил-L-лейцина, 620 мг (1,47 ммоль) 4((35, 4S)-4-амино-3-окси-6-метилгептаноил)амино1-бензилпиперидиндигидрохлорида, полученного при удалении трет-бутоксикарбонильной группы из соединения, полученного на первой стадии примера 16, и 313 мг (1,92 ммоль) диэтилфосфороцианидата растворяют в 2 мл диметилформамида. К этому раствору добавляют по каплям

388 мл (3,83 ммоль) триэтиламина при охлаждении льдом и полученную смесь перемешивают в течение 30 мин при 0 С, а затем в течение ночи при комнатной температуре.

К реакционному раствору добавляют этилацетат, затем промывают 10 мас. /объем водной соляной кислотой, насыщенным водным раствором бикарбоната натрия и насыщенным водным раствором натрийхлорида в укаэанном порядке, сушат над безводным сульфатом натрия и конденсируют, выпаривая при пониженном давлении, Полученный остаток смешивают с растворителем )1:1 по объему смесь этилацетата и диэтилового эфира) и распыляют до получения 68 мг укаэанного соединения в виде бесцветных кристаллов, т.пл. 186-187 С.

Вычислено, ; С 66,40; Н 9,35; N 9,99.

С31Н52Й405

Найдено, : С 66,33; Н 9,38; N 10,04.

Третья стадия, 4(4(Я)-(М-(Бис(1-нафтилметил)ацетил)-L-лейциламино)-3(Я)- окси.-6метилгептаноил)эмино-1-бензилпиперидин.

213 мг (0,4 ммоль) 4-(4($)- -лейциламино-3($)-окси-6-метил гептаноил)амино-1бензилпиперидиндигидрохлорида, полученного при удалении трет-бутокси группы из соединения, полученного на второй стадии примера 16, 136 мг (0,4 ммоль) бис(1нафтилметил)уксусной кислоты и 78 мг (0,48 ммоль) диэтилфосфороцианидата растворяют в 2 мл диметилформамида. К этому раствору по каплям добавляют 146 мл (1,44

1676454

22 ммоль) триэтиламина при охлаждении льдом и полученную смесь перемешивают при 0 С B течение 30 мин, а затем в течение о ночи при комнатной температуре. Реакционный раствор смешивают этилацетатом, ппомывают 10 мас.,ь/сбье2л водной соляной кислотпй и васы ценным водным раствором натрийхлорида ь указанном порядке, сушат над безводным сульфатом натрия и конденсируют, выпаривая при пониженном давлении. Полученный остаток смешивают с этилацетатом и распыляют до получения

288 мг указанного соединения в виде бесцветных f.ристаллов, т.пл. 183-184 С. (а).-, = -105О(С = О,), Me0H).

Ингибирование реннинсвой активности.

Проведены биологически испы1ания, в которых способнссть полученных соединений ингибировать активность реннина была определена способо л, основанным на тлетодике Кокубу, Каждое испытуемое соединение растворяют в 60 мас";ь/обьем этанола. Активность человеческого реннина в присутствии каждого соединения измеряют с использованием овечьего;.H,èîòåffçèíîãàíà. В 1 мл сбьема испытуемой смеси содержалось 0,1 моль/и фосфатн то буфера (;.Н 7,3), человеческий реннин (эквивалент 0,5 нг ангиотензина на 1 мл в минуту), овечий ангиотенэиноген эквиаавент 200 нг ангиотензина 1I), 1х10 М испытуемого соединения, 6 мас.,ь/обьем этанола и ингибиторы ангистенэиназы (10 ммоль/л этилендиаминтетраацетата натрия и 3,4 ммоль/л 8-гидроксихинолина). Смеси дают реагировать в течение 10 мин при 37 С и затем реакцию останавливают, помещают реакционную трубку на 5 мин в баню с кипящей водой, Затем смесь центрифугируют и всплывающий слой (0,05 — 0,1 мл) использу от для анализа оставшегося ангиотензина 1.

Аналогичным образом проводят контрольный эксперимент, не используя испытуемого соединения. Из полученных значений рассчитывают процент ингибирования ренниновой активности, дости аемый под действи".м каждого испы уемого соединения. Полученные результаты прт.доставлены в таблиц —.. где приведены средние значения 3 или 4 экспери лентов.

Как показали проведенные испытания, описываемые соединения обладают более высокой peHHvH-интибирующей активностью, чем аналог, при этом они проявляют низкую токсичность, Формула изобретения

Способ пол; ч».ния пептидов общей формулы в„

Н О К О СИОН О

II I П II

Я вЂ” СН вЂ” С вЂ” NH-CH-С-NH — CH- СН вЂ” 0Н вЂ” С вЂ” 35

5 где R и йг одинаковые и каждая группа формулы (A)I2-RI2, где р = 1- А — C>-C4-алкиленовая группа, йв — нафтильная группа;

1р йз — CI-С7-алкил, -имидаэолилметил, 4-тиазолилметил или 2-(метилсульфинил)этил;

R4 иэопропиловэя группа;

Rg — группа формулы ййвй9, где йв— водород, Rg — Ci — С4-алкиловая группа, ;бензил-4-пиперидиниловая группа или

Ci — С4-алкиловая группа, имеющая заместитель, выбранный из С -С4-алкoкcи, окси-, диметоксифенил и ди(С1 — С4-ал кил)аминог20 или фармацевтически их приемлемых солей, отличающийся тем, что проводят взаимодействие соединения формулы

RI — СН (Rg ) — СΠ— (Y )r — ОН где Ri и R2 имеют указанные значения;

Y — группа формулы -NH-СН(йз)СО-, где йз имеет указанные значения; г=- С или 1, или реакционно-способное производное

3р его с соединением формулы

Н(У)ЛН СН(СН2й 4) СН(ОН) CH 0COR5 где Y имеет указанное значение:

s= 0,1;

R4 и Rs имеют указанные значения;

35 s+f =1, и в случае необходимости превращают любую включенную группу внутри упомянутых определений в любую другую такую группу и целевой продукт выделяют в свободном

4р виде или в виде соли.

Приоритет по признакам:

30.11.84 при R> и R2 одинаковы или различны и каждый является группой формулы

-(А)р-RI, где р = 1,3-С>-С4-алкилен; RG — наф45 тил; йз — C> С4-алкил, имидазолилметил; R4 — иэопропил; Rs — NHRg, где Rg — Сэ-С4-алкил, не замещенный или замещенный окси, алк(С1-С4)окси группой.

19.12.84 при й1 и Rz одинаковы или раз50 личны и каждый является группой формулы

-(А)-RI., где р = 1, А — С1-С4-алкилен; RI2— нафтил; йз С1 С4 алкил, R4 иэопропил, Rg — NHRg, где Rg — C)-С4-алкил, не замещенный или замещенный окси, алк(С1С4)окси группой, диметоксифенил. ди(С1-C4)anкилaминoгpyппa.

29.01.85 при й1 и R0 одинаковы или различны и каждый является группой формулы

-(А)р RII, где р = 1; А — Ci — С4алкилеH: йв

1676454

Соединение Ингибирование (реннин человека), 7

98,2

95,6

90,3

99,0

98,6

99,0 .

99,0

93,5

95,0

99,0

99,0

99,0

99,0

65,0

Редактор О.Юрковецкая Техред М.Моргентал Корректор М. Шароши

Заказ 3017 Тираж 228 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва. Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 нафтил; R3 5-имидазолилметил, 4-(1,3-тиазолил)метил; R4 изопропил; R5- NHR9, где

R9- С1-С4-алкил, не замещенный или замеZ-phe-Hisлейцинол щенный оксигруппой или низшей алк(С1С4о кси г руп пой.