Способ получения n-[3-(n-циклопентакарбонил-d-аланилтио)-2- d-метилпропаноил]-l-пролина

 

Изобретение касается получения N-/3-(N-циклопентакарбонил-D-аланилтио)-2D-метилпропаноил]-L-пролина, обладающего противогипертоническим эффектом, что может быть использовано в медицине. Цель - создание нового активного и малотоксичного соединения указанного класса. Синтез ведут конденсацией N-циклопентакарбонил-D-аланина (полученного из производного циклопентакарбонила с D-аланином) с 3-меркапто-2-D-метилпропионовой кислотой в присутствии дициклогексилкарбодиимида и N-окиси сукцинимида с последующей обработкой полученного продукта трет. бутиловым эфиром L-пролина в присутствии дициклогексилкарбодиимида и далее раствором трифторуксусной кислоты в среде анизола (отщепление трет. бутилзащитной группы). Новое соединение по действию при дозе 40 мг длительнее, чем 100 мг каптоприла, менее токсично и более стойко к гидролизу при более длительном сроке хранения. 1 табл.

союз советских

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАР СТВЕ ННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫ ТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР!

Б ":ГИИИ

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К ПАТЕНТУ (21) 3263400/04 (22) 09.03.81 (31) 128953 (32) 10.03.80 (ЗЗ) US (46) 30.06.91. Бюл. М 24 (71) Дзе Юниверсити оф Майами (US) (72) Джеймс В. Райан и Альфред Чанг (US) (53) 547.964.407(088.8) (56) Шредер Э. и Любке К. Пептиды. M.: Мир, 1967, ч, 1, с. 116. (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ N- 3(й-ЦИКЛОПЕНТАКАРБОНИЛ-0-АЛАНИЛТИО)-2-0МЕТИЛПРОПАНОИЛ)-С-ПР ОЛИНА (57) Изобретени касается получения N-(3-(Nциклопентакарбонил-0-алан илтио)-2-D-метилпропаноил1-1:пролина, обладающего противогипертоническим эффектом, что моИзобретение относится к способам получения N- (3-(N-циклопентакарбонил-D-аланилтио)-2-0-метилпропаноил)-L-пролина нового биологически актиeнoгo соединения, которое может быть использовано в медицине.

Цель изобретения — получение нового производного в ряду пептидов, обладающего противогипертонической активностью, малотоксичного, более стойкого к гидролизу, имеющего более длительный срок хранения, не дающего нежелательных побочных явлений. а Стадия 1. Приготовление N-циклопентакарбонил-0-аланина, D-Аланин (4,5 r) растворяют в 230 мл родного 1 н. раствора карбоната натрия при. ц., 1660578 АЗ (я)5 С 07 D 207/16, С07 К5/06, А 61 К 37/02 жет быть использовано в медицине. Цель— создание нового активного и малотоксичного соединения указанного класса. Синтез ведут конденсацией N-циклопентакарбонил-0-аланина(полученного из производного циклопентакарбонила с D-аланином) с

3-меркапто-2-D-метилп ропионовой кислотой в присутствии дициклогексилкарбодии мида и N-окиси сукцинимида с последующей обработкой полученного продукта трет-бутиловым эфиром L-пролина в присутствии дициклогексилкарбодиимида и далее раствором трифторуксусной кислоты в среде анизола (отщепление трет-бутильной защитной группы). Новое соединение по действию при дозе 40 мг длительнее, чем

100 мг каптоприла, менее токсично и более стойко к гидролизу при более длительном сроке хранения. 1 табл. перемешивании. К раствору по каплям добавляют 100 мл тетрагидрофурана, содер- О» жащего 9 r циклопентакарбонилхлорида, 0» при 5 — 10 С и при этой температуре смесь перемешивают 30 мин, затем перемешива- (Я ют при комнатной температуре 1,5 ч. После этого к реакционной смеси добавляют 2 н, р соляную кислоту, чтобы значение рН было, между 1 и 2. Реакционную смесь экстрагируют этипацетатом, органический слой и ро- Ф " мывают насыщенным раствором хлорида (А3 натрия и сушат над сульфатом магния.

Фильтрат выпаривают под вакуумом для получения сырого продукта. При перекристаллиэации из смеси этилацетат — н-гексан получают 4,65 г N-циклопентакарбонил-Dапанина.

1660578

Стадия 2. Приготовление 3-(N-циклопентакарбонил-D-аланилтио)-2-0-метилпропановой кислоты.

N-Циклопентакарбонил-0-аланин (5,97 г) растворяют в осушенном тетрагидрофуране(100 мл), К раствору добавляют карбонилдиимидазол (5,84 г) при температуре между

-20 и -15 С, смесь перемешивают при этой ! температуре в течение 1 ч. После этого добавляют 3-меркапто-2-D-метилпропановую кислоту (3,60 г) и смесь перемешивают при температуре между -15 и -10 С в течение 1 ч, затем при комнатной температуре еще 1 ч, Смесь выпаривают под вакуумом для удаления растворителя. К остатку добавляют 40 мл воды и к смеси добавляют 2 н. соляную кислоту, подкисляя ее до рН между 1 и 2. Смесь экстрагируют. этилацетатом, органический слой промывают насыщенным раствором хлористого натрия (2 раза) и сушат над сульфатом магния, Фильтрат выпаривают под вакуумом для получения неочищенного соединения. При его перекристаллизации из смеси этилацетат—

/н-гексан получают бесцветные призматические кристаллы указанного соединения.

Стадия 3. Приготовление N-- 3-(N-циклопентакарбонил-0-аланилтио)-2D-метилпропаноил -$-пролина, 3-(N-Циклопентакарбонил-D-аланилтио)-2-D-метилпропановую кислоту (1,51 г) растворяют в осушенном тетрагидрофуране (40 мл). К этому раствору добавляют 0,61 г тризтиламина и 0,65 г этилхлорформиата при -5 С и перемешивании. Спустя 5 мин добавляют раствор, содержащий 0,58 г Lпролина и 0,61 r триэтиламина в 5 мл воды, и смесь перемешивают при О С в течение

1 ч, затем при комнатной температуре в течение 30 мин. Смесь выпаривают под вакуумом для удаления растворителя. После добавления к остатку воды к смеси добавляют 2 н. соляную кислоту, подкисляя ее до рН между 1 и 2. Реакционную смесь экстрагируют этилацетатом, органический слой промывают насыщенным раствором хлористого натрия (2 раза) и сушат над сульфатом магния. Фильтрат концентрируют под вакуумом, для удаления этилацетата, а остаток разделяют хроматографически на силикагеле, используя смесь хлороформа и метанола в соотношении 100:1 — 100:2 в качестве элюанта. Собирают фракции, содержащие конечное соединение, и выпаривают под вакуумом, получая смолистый образец указанного соединения (0,3 г, 49 ), Чистоту и однородность полученного продукта определяют хроматографией на силикагеле. йц=0,62 (хлороформ — метанол — уксусная кислота 2;1:0,003) R< =0,74 (н-бутанол— уксусная кислота — вода 4;1;1). (а) =-47,2 (С=-1, метанол).

Проведены биологические испытания полученного предлагаемым способом К-j3(N-циклопентакарбонил-0-ананилтио)-2-0

-метилпропаноила1-L-пролина на крысах.

Б таблице приведен средний процент ингибирования индуцированного повышенного давления, вызванного введением соединения, полученного предлагаемым способом, и каптоприла в количестве

0,4 ммоль/кг.

Из таблицы видно, что полученное предлагаемым способом соединение проявляет противогипертонический эффект, сопоставляемый с эффектом каптоприла при выбранном уровне дозировки. Однако укказанное соединение более стабильно, чем каптоприл, как в биологических средах, так и в других условиях. Проведенные испытания 1п

vitro показывают стабильность этого соединения в условйях разлагающих сред тканевых и плазменных гомогенатов.

Эксперименты показали, что каптоприл быстро разлагается до своего дисульфида и других метаболитов, которые неактивны как ингибиторы

По прошествии 60 мин. инкубирования с плазмой крыс, человека, обезьян и собак количество 35S каптоприла неизменно — О; 7, 10, 25 j соответственно; основным продуктом был дисульфид.

Надосадочная фракция 9000 хд гомогената печени, почек и кишечника крыс почти полностью переводит каптоприл в его дисульфид и другие продукты в течение

120 мин. Период полураспада каптоприла в водных растворах 30 мин, При этом N-13 — N-циклопентакарбонил-D-аланилтио)2-0-метилпропаноил) -L-пролин показывает неснижающуюся эффективность на протяжении 90 — 180 мин после орального введения.

Каптоприл достигает пиковой эффективности к 90 мин, затем она падает. По прошествии 180 мин N- 3- (N-циклопента, карбонил-0-аланилтио)-2-0-метиф =пролин — более эффективный ингибитор без каких-либо признаков ослабления его реакции.

Сравнительные исследования на здоровых людях показали, что действие 40 мг

55 (0,096 ммоль) N-(3-(N-циклогексилкарбонил0-ал а нилтио)2-D-метил и ропан оиол) -L-и ролина продолжается дольше, чем действие

100 мг (0,46 ммоль) каптоприла.

16б0578

Таким образом, полученный предлагаемым способом N-I 3 -(N-циклопентакэрбон ил-D-алан илтио)-2-D-метил и ро па но ил)L-пропин — соединение малотоксичное, более стойкое к гидролизу, чем каптоприл, 5 имеет более длительный срок хранения и более прост в обращени .

Формула изобретения

Способ получения N- 3-{N-циклопентакарбонил-0-аланилтио)-2-0-метилпропано- 10 ил -1.-пролина формулы

D с- н-cH-cO- S-cH cH- Co-

ll . 1

О СН3 3 СООН

I 15 отл и ч а ю щи йс я тем, что N-q nonexтакарбонил-0-аланин формулы карбодиимида и N-оксисукцинимида с 3меркапто-2-D-метилпропионовой кислотой и полученный продукт конденсации З Мциклопентакарбонил-0-аланилтио}-2-0-метилпропановой кислоты вводят во вразимодействие с трет-бутиловым зфиром 1=пролина в присуствии дициклогексилкарбодиимида и от полученного продукта N- (3-(N-циклопентакарбонил-0аланилтио)-2-D- em npona ow)-L-пролин л

Р-с щ — сн-со-s- сн — сн — со — я

1 I 3 соос.,н р<

С-.НН- СНС00Н

1! 3

Вр емя, мин

Х 1 1 I t 1

Соединение

0 20 30 60 90 120 180

N- 3-(циклопетакарбо, нил-D-аланилтио) -2-Dметилпропаноил) -L-пролин

Каптоприл

42

35 42

56 58

42

12

21

23, Составитель С.Волкова

Техред M. Моргентал Корректор Э.Лончакова

Редактор А.Огар

Заказ 1859 Тираж 250 Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35. Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбиют "Патент", r. Ужгород, ул. Гагарина, 101 путем обработки раствором трифторуксусполученный взаимодействием производно- ной кислоты в анизоле отщепляют трет-буго циклопентакарбонила с D-аланином, кон- тильную защитную группу. денсируют в присутствии дициклогексил 25