Способ дифференциальной диагностики саркоидоза легких и фиброзирующих альвеолитов

 

Способ дифференциальной диагностики саркоидоза легких и фиброзирующих альвеолитов. Изобретение относится к медицине , а именно к пульмонологии, и может быть использовано при дифференциальной диагностике саркоидоза легких и фиброзирующих альвеолитов. Цель изобретения - повышение точности диагностики. Сущность способа заключается в определении одновременно в жидкости бронхоавельолярного лаважа (ЖДАЛ) и в сыворотке крови эстеразной активности эластазы и катепсина G, причем при увеличении активности этих ферментов в двух исследуемых материалах диагностируют фиброзирующий альвеолит, а при снижении активности ферментов в сыворотке и увеличении в ЖБАЛ диагностируют саркоидоз легких. 2 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (si)s G 01 N 33/68

ГОСУДАР СТВ Е ННЫ Й КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4846878/14 (22) 03.07.90 (46) 30,08.92. Бюл. М 32 (71) Медико-инженерный центр иАэрозольи

Всесоюзного научно-исследовательского института пульмонологии и Всесоюзный научно-исследовательский институт пульмонологии (72) Л.Н.Краева, Л.Н,Новикова, А.А.Усова и

М,M.Èëüêîâè÷ (54) СПОСОБ ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКИ САРКОИДОЗА ЛЕГКИХ И

ФИБРОЗИРУЮЩИХ АЛЬВЕОЛИТОВ (57) Способ дифференциальной диагностики саркоидоза легких и фиброзирующих альвеолитов. Изобретение относится к меИзобретение относится к анализу биоматериала и может быть использовано для дифференциальной диагностики саркоидоза легких и фиброзирующих альвеолитов по результатам биохимического анализа жидкости бронхоальвеолярного лаважа (ЖБАЛ) и сыворотки крови.

Известны способы дифференциальной диагностики фиброзирующих альвеолитов и саркоидоза легких на основании результатов клинического. иммунологического и цитологического исследования.

Широко распространенным и основным в клинической практике является метод диагностики саркоидоза легких и фиброзирующих аль веолитов по суммарным клиническим данным — это комплексный надежный метод, однако его возможности ог-. раничены в результате длительности,, Я2,, 1758558 À1 дицине, а именно к пульмонологии, и может быть использовано при дифференциальной диагностике саркоидоза легких и фиброзирующих альвеолитов. Цель изобретения— повышение точности диагностики. Сущность способа заключается в определении одновременно в жидкости бронхоавельолярного лаважа (ЖДАЛ) и в сыворотке крови эстеразной активности эластаэы и катепсина G, причем при увеличении активности этих ферментов в двух исследуемых материалах диагностируют фиброзирующий альвеолит, а при снижении активности ферментов в сыворотке и увеличении в

ЖБАЛ диагностируют саркоидоз легких, 2 табл. предварительного обследования больного и субъективности оценок врача, ставящего диагноз.

Наиболее точным и информативным ме- Ql тодом является открытая биопсия легких. QQ

Патоморфологическое исследование био- (Л птатов легочной ткани достаточно информа- (Л тивно, но ввиду большой трввивтичности Ср метода получения материала он применим лишь в редких, особых случаях.

Рентгенологические методы диагностики просты, доступны в любой клинике, однако недостаточно точны и информативны, так как требуют дополнительных исследований для уточнения диагноза.

Наиболее близким к предлагаемому является способ диагностики некоторых диссеминированных процессов в легких по

1758558 соотношению субпопуляций Т-клеток жидкости бронхоальвеалярнага лаважа.

Однако способу-прототипу присущи следующие недостатки: необходимость большого количества материала для анализа и в связи с этим большая травматичность; трудоемкость анализа; недостаточная точность — в некоторых случаях не получена достоверных различий.

Целью изобретения является повышение точности спасааа.

Способ осуществляют следующим образам.

Для обследования у пациента берут капиллярную кровь (на одно определение необходимо 5 мкл сыворотки) и при проведении субсегментарного бронхоэльвеолярного лаважа (ЖБАЛ) из супернатэнта после центрифугиравания для одного определения отбирают 500 мкл на анализ.

B качестве контрольных групп при исследовании эстеразнай активности в сыворотке крови использовали кровь здоровых доноров, прошедших предварительное обследование в Институте переливания крови

AMH СССР. Контрольную группу при анализе ЖБАЛ получали лаваж с лечебно-диагностическими целями.

Полученный материал сразу подвергали биохимическому анализу, однако материал мог храниться при температуре окала

О С с предварительной добавкой азида натрия в. течение 1 — 2 суток. Определение активности ферментов проводили с помощью спектрофлуариметра Perkln Solroer

3000 при температуре 20 1 С, длинах волн; возбуждения — 360 нм, испускания — 455 нм, канцентаации субстратов в реакционной смеси 1 — 3 10 M.

Использованы два синтетических флуорогенных субстрата: 4-метилумбеллифериловые эфиры N-бензилоксикарбонил-1фенилаланина (субстрат для катепсина Gj u трет,-бутилоксикарбонил-Е-аланина (субстрат для эластазы).

В качестве флуорогенной метки применяли 4-метилумбеллиферан А, B ходе определения показания прибора снимали через

3 с, 1 мин, 2 мин. Таким образом. одно определение занимала 3 — 4 мин.

Калибровочную кривую строили по 4метилумбеллиферону. Удельную активность ферментов выражали в мкмоль индикатора, отщепившегося от субстрата за 1 мин,и пересчитывали на 1 мл сыворотки или ЖБАЛ и нэ 1 мг белка.

Экспериментальные данные сведены в табл.1.

Представленные в табл.1 величины активности катепсина 6 и эластазы в сыворотке крови и в ЖБАЛ дают воэможность отличить по этим параметрам здоровых лю5 дей, страдающих саркоидозам легких и фиброзирующими альвеолитами, В табл,2 приведены данные по исследованию ЖБАЛ у больных диссеминированными процессами в легких другими методами.

10 Для сравнения точности предлагаемого способа дифференциальной диагностики и способа прототипа была обследована группа больных с гистолагически верифицированными диагноз.;-ми при оперативном

15 вмешательстве: саркоидоз легких и фиброэирующие альвеолиты. Дифференциальная диагностика согласно предлагаемому способу подтвердила 65 установленных диагнозов, а при использовании способа20 прототипа — 55 .

Пример 1. Больная Г., 49 лет. поступила в отделение дифференциальной диагностики ВНИИ пульмонологии МЗ СССР.

24.05.89 с жалобами на одышку, сухой ка25 шель, слабость, Заболела в январе 1989, лечилась с диагнозом: острый бронхит. острая пневмония, затяжная пневмония антибиотиками и симптоматическими средствами по месту жительства без эффек30 та, направлена по ВНИИП для обследования и уточнения диагноза. Проводилась дифференциальная диагностика между саркоидозом легких и идиопатическим фибрози рующим альвеолитом. Результат

35 биохимического исследования крови и жидкости бронхоальвеалярного лаважа: в сыворотке крови определялась повышенная активность эластазы 132 мкмоль/мин/мл (при норме 98 3) и катепсина G: 167

40 мкмоль/мин/мл (при норме 136 6}, в жидкости бронхоальвеолярнога лаважа активность ферментов оказалась также повышенной, при этом эластаза: 0,15 мкмоль/мин/мл (при норме О,ОО),.а катеп45 син G: 0.30 мкмоль/мин/мл (при норме

0,016 +0,07), Увеличение активности ферментов в сыворотке крови и жидкости бронхаальвеолярного лаважа (Ж БАЛ) свидетельствовало в пользу идиопатическо50 го фиброзирующего альвеолита, Диагноз в дальнейшем был подтвержден результатами морфологического исследования биопсийного материала (черезбронхиальная биопсия легочной ткани).

55 Пример 2, Больная 8„59 лет, поступила в отделение дифференциальной диагностики ВНИИП МЗ СССР 7.04.89 с целью уточнения диагноза по поводу диссеминировгнного процесса в легких. Больна c aary1758558 твержден морфологически при исследовании биопсийного материала, полученного при медиастинотомии.

Активность е мента М+, мкмоль/мин/мл

Состояние обследуемых

ЖБАЛ

Сыво отка к ови

Катепсин 6

Эластаза

Эластаза

Катепсин G

Норма(доноры) 98 3 и =43

Условная нор (вылеченны астматическ бронх т) 0,016 + 0,07 п=7 аркоидоз л ких

0,26 "- 0,06 и -- 7

0,18 + 0.05 и = --7

70 7,6

n=6

Фиброэиру щие альвеол

0,18 + 0,04 п =12

0,21 С.09 п= 12

134 + 24 п=б

Таблица 2

Содержание Т-лимфоцитов и их субпопуляций в ЖБАЛ у дольных лиссеминированными процессами в легких.

Составитель Л.Конюхова

Техред M.Моргентал Корректор Н.Слободяник

Редактор С.Лисина

Заказ 2996 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035. Москва, Ж-35. Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 101 ста 1987. Заболевание началось с кашля, затем присоединилась слабость. одышка, Терапия кортикостероидами оказала положительный клинический и рентгенологический эффект, однако диагноз оставался 5 неясным, в связи с чем большая была направлена во ВНИИП. При обследовании кроме изменений на рентгенограммах были выявлены отклонения от нормы уровня ферментов s сc ы воротке крови и ЖБАЛ, сеиде- 1О тельствующие в пользу саркоидоза легких, Активность эластаэы крови была ниже нормы: 58 мкмоль/мин/мл (при норме 98: 3), уровень катепсина в крови оказался сниженным: 120 мкмоль/мин/мл (при норме 15

136 +6). В ЖБАЛ содержание этих ферментов было значительно больше нормы: эластаза составила 0,36 мкмоль/мин/мл (при норме 0,0), а катепсин G 0,10 мкмоль/мин/мл (при норме 0,016М,07). В 20 дальнейшем диагноз саркоидоэа был подФормула изобретения

Способ дифференциальной диагностики саркоидоза легких и фиброзирующих ал ьвеолитов, включающий биохимический анализ жидкости бронхоальвеолярного .".аважа, отличающийся тем, что, с целью повышения точности диагностики. определяют эстераэную активность эластазы и катепсина 6 одновременно в жидкости бронхоальвеолярного лаважа и в сыворотке крови и при увеличении относительно нормы активности ферментов в исследуемых биоматериалах диагностируют фиброзирующий идиопатический альвеолит, а при снижении активности в сыворотке крови и одновременном увеличении в альвеолярной жидкости диагностируют саркоидоз легких.

Таблица 1