Способ приготовления диагностикума для определения антигенов в реакции коагглютинации

 

Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике инфекционных заболеваний . Целью изобретения является повышение чувствительности диагностикума. Суспензию клеток золотистого стафилококка штамма COWAN 1 после фиксации формалином подвергают обработке ультразвуком мощностью 100 Вт/см2 не более 1 мин, отмывают их барбитурэтным буферным раствором рН 8.6 и в нем не проводят сенсибилизацию антителами. Интенсивность реакции коагглютинации оценивают общепринятым методом (ча четырехкрестной системе) при отсутствии реакции с контрольным реагентом. Изобретение позволяет повысить чувствительность диагностикума в 16 раз.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК (я)5 6 01 N 33/531

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

2 (21) 4748413/14 (22) 11.10.89 (46) 15.09.92, Бюл. ¹ 34 (71) Научно-исследовательский институт вакцин и сывороток им. И,И.Мечникова

Центра микробиологии и иммунобиотехнологии АМН СССР (72) Л.Н.Падюков, В.А.Таранов, В.Г.Асеева, А.П.Батуро, Н.В.Цветкова, К.Г.Каверина и О,B,Êoëìoroðàâà (56) Experimentla, 1985, ч,41, р.1063 — 1064, (54) СПОСОБ ПРИГОТОВЛЕНИЯ ДИАГНОСТИКУМА ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИГЕНОВ В РЕА:<ЦИИ КОАГГЛЮТИНАЦИИ (57) Изобретение относится к медицине, а именно к диагностике инфекционных забоИзобретение относится к области медицинской микробиологии и может быть использовано при изготовлении диагностикумов для реакции коагглютинации.

Целью изобретения является повышение чувствительности способа.

Цель достигается тем, что перед сенсибилизацией фиксированные клетки стафилококка обрабатывают ультразвуком мощностью 100 BT/ñì не более 1 мин, трижды отмывают в барбитуратном буферном растворе рН 8,6 и в таком же растворе проводят сенсибилизацию антителами.

Пример 1, Для приготовления диагностикума 10% фиксированную суспензию стафилококка штамм COWAN 1 подвергают ультразвуковой обработке в течение 1 мин при 22 кГц и мощности 100 Вт/см при помощи ультразвукового дезинтегратора

УЗДН-1, Микробные клетки трижды отмываБАХ 1762242 А1 леваний. Целью изобретения является повышениее чувствительности диагностикума.

Суспензию клеток золотистого стафилококка штамма COWAN 1 после фиксации фор. малином подвергают обработке ультразвуком мощностью 100 Вт/см не более 1 мин, отмывают их барбитурэтным буферным раствором рН 8.6 и в нем не проводят сенсибилизацию антителами. Интенсивность реакции коагглютинации оцениваютобщеприня ым методом(на четырехкрестной системе) при отсутствии реакции с контрольным реагентом. Изобретение позволяет повысить чувствительность диагностикума в 16 раз. ют барбитуратным буферным раствором рН

8,6 и ресуспендируют до 10% концентрации в том же растворе, Сенсибилизацию проводят добавляя 0,1 мл омнисыворотки (содержит антитела к капсульным полисахаридам 0, пневмококка) к t мл 10% суспензии клеток, в барбитуратном буферном растворе рН 8,6.

Смесь инкубируют 1 час при 37"С при периодическом встряхивании. Затем микробные клетки отделяют центрифугированием и ресуспендируют в 1 мл барбитуратного буферного раствора. Контрольный диагностикум изготовлен тем же способом, ис- д пользуя для сенсибилизации нормальную кроличью сыворотку.

На предметное стекло помещают две капли стерильного физраствора, в котором суспендируют бактериальный материал. Затем к исследуемому материалу добавляют равное количество заранее приготовленного коагглютинационного диагностикума; к

1762242

Формула изобретения

Составитель П.Бонарцев

Техред М.Моргентал Корректор M Ìàêcèìèujèíåö

Редактор

Заказ 3257 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035. Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент". г. Ужгород, ул.Гагарина, 101 первой капле — диагностикум на основе омнисыворотки, ко второй — контрольный див гности кум на основе неиммунной сыворотки кролика.

Активность реакции оценивали определением минимальной концентрации капсульного полисахарида пневмококка вызвавшей выраженную агглютинацию с образованием видимых невооруженным глазом хлопьев и просветлением реакцион. ной смеси при отсутствии реакции с контрольным диагностикумом.

Установлено, что диагностикум реагирует с капсульным полисахаридом пневмококка в концентрации 0,03 мкг/мл.

Диагностикум, приготовленный по способупрототипу, реагирует с тем же антигеном в концентрации 0,48 мкгlмл.

Пример 2. Коагглютинационный реагент для выявления микроорганизмов

HAEMOPHILOS INFLUENZAE. . Приготовление реагентов проводят по предложенному методу (пример 1) с использованием сыворотки К.M.INFLUENZAE.

В качестве тест-антигена был использован препарат микробных клеток гемофильной палочки с известным содержанием поли рибоэилрибитолфосфэта.

Диагностикум, приготовленный по описанной нами методике, реагирует с тест-антигеном в концентрации 0,12 мкг/мл.

Пример 3. Коагглютинационный реагент для выявления микроорганизмов

В. Р E RTU SS IS.

Реагент готовят по предложенному методу (пример 1) с использованием агглютинирующей коклюшной сыворотки.

Определение чувствительности диагно5 стикума проводят описанным ранее методом. используя в качестве тест-антигена препарат микробных клеток В.PERTUSSIS c известным содержанием липополисахарида, Липополисахарид В.PERTUSSIS onpe10 деляется в концентрации 39 мкг/мл.

Положительный эффект способа заключается в том, что чувствительность повышается в 16 раз, Данный способ может быть использо15 ван для изготовления коагглютинационных диагностикумов для выявления и других видов микроорганизмов.

Способ приготовления диагностикума для определения антигенов в реакции коагглютинации, включающий синсибилизацию фиксированных клеток золотистого стафи25 лококка штамма Cow3fl 1 препаратом антител,отл и ча ю щи и с я тем, что, с целью повышения чувствительности диагностикума, перед сенсибилиэацией фиксированные клетки стафилококка обрабатывают ультра30 звуком мощностью 100 Вт/см не более 1 мин, трижды отмывают в барбитуратном буферном растворе рН 8,6 и в таком же растворе проводят сенсибилизацию антителами.