Способ получения гемпептида цитохрома с
1768613 дов цитохрома С, включающем операции
05pB6QTKN трипсином исходно!-О продукта на основе цитохрома С с !юследующей его лиофилизацией, перед опер цией обработки трипсином исходного продукта на основе цитохрома С проводят осаждение цитохрома С из водного раствора с концентрацией
1,0 — 1,2 мг/мл водным раствором, содержащим 0,1 — 0,2 tVI соли трехваленгного железа и 0,3 — 0,6 M иодистого натрия. при этом используют соотношение раствора цитохрома
С и раствора указанных солей в интервале (10-1г).1
Уменьшение концентрации цитохрома
С в растворе приводит к уменьшению выхода целевого Г!родукта, а ее верхнее предельHое значение 1 2 м-/мл обусловлено технологие "1 г ри гото зле н ия исходного п роду!<Та — экстрактов из тканей.
Применение указанных выше пределов концентраций солей обусловлено тем, что меньшее; M сульфата железа (Ilf) и ".," !у! иодида натрия, Смесь выдер><ивают 20 мин IpYi -4 С. отделяют осадок центрифугированием промывают в0, сй для удаления îcTBTка солей. Осадок суспензируют с 25 мл 0 1 М расTIçopB Гидрокарбоната аммония, pri 8,45л добавля!от 6 мг трипсин:-, и проводят гидролиз осадка при;,емпературе 37" С в течение 4 ч. Полученный красно-бурый раствор отделяют центрифугированием. раз бавляют 20 мл дистиллированно!и водь, и наносят на колонку(3,0:20) с-", с Амберлитом iRC-50 в Н -форме, рН 5.6 — 6,0. Колонку промыва!оT дистиллирован: —::.;и водо;, емсоДержащий пептид смывают 1% раство ром гидроксида аммония, за; ем лиофилизуют, Выход гемпептида составляет 87 мг. Анализ гемпептида с помощью Т ;:Х в системе н-бутанол . вода: уксусная кислота (4:1:5), электрофорегическим методом !и "0 1 . \„ -1 0 путем аминокислотног0 анализа показал со ответствие полученного продукта гем-содержащему пептиду, выделенному из цитохрома С дрожжей известными способами и дал значение чистоты 89%, Пример 2, К 0,2 л экстракта цитохрома С из сердца крупного рогатого скота Г концентрацией 1,2 мг/мл добавляют 20 мл раствора, содержащего 0.1 М сульфата железа (III) и 0,4 M иодида натрия. выдерживают раствор при +4" С и отделяю:. осадок центрифугированием. Полученный осадок суспензируют в 10 мл 0.1 M раствора гидрокарбоната аммония. 1 рипсинолиз и очистку проводят, как в примере 1, После лиофилизации получено 22 мг гемнонапеп«ида 1422 с чисто!а!!92%, по своим свойствам соответствующегo гемнонапептиду цитохp0IRA С, полученном) i Io способу-прототипу. П р !и м е р 3. K 0.2 Г экс1акгра ц:!Гохрома С из сердца круп ного рога«ОГО скота: конценграцией, 2 мг/мл добавля!ог 20 мл I>Bcтвора. содер><ас,его 0,2 iv1 хлорида железа!, Ill! и 0.6 М иодида натрия. !врез 20 мин осадок отделя!От центрифугированием и проводят обработку, как в примеое 2. После очистки на колонке с Амберлитом IRC-50 гемнонапептид концентрируют лиофильным вь сушив,«нием и проводят дОпОлниГельнук> Очис к с 00мошьio Гел ь филь i IOB ii .1l1 HB !,е !! аде < е- <3 25 .; 1 j<,-ном pBc ieclpe! Идр :;!. !ва а ii«cíè>«. Вв<од составил 19 мг Нонапепти <а i-4 22 с ,истотои 96% I 1ðåäëñ ãñ3åì! 1и Гп Oi . i,, 1ег г1я е, пе !тидс>в ци ГО" рог ". !.. Iir -;вп:нет < . э;! Г . :.1" экс I pак1 ь! Tка ней, !1 ; !, скfi о" Bе! .,;i. лн .1.:,,i 1ие, продол>ки;е;I!=li! е и;l«),0 ;! .:!1(! е— pB!!IIè Гlo получению чис i,i I, i i < i i: 1а С гакже упрости«ь: ;:<нологи -вский I,,Qöe..— «Г!лу !ен!1я . e," пeii«èäoe ци Ох!10!.«а ! О О р м, л а :1 3 0 5 1; е т Г н 1 я . и о с 0 б п ол ч е 1- и я Ге !. и;-. г т и а а 1,:1:; . ;:.а С, включающий обоабо!ку цитохрома С трипсином, хрома I ографи IFсK)óIG Очист! у !е1!eн!1! 0 про л укта пОГле!!уюi«l, i1 . л> «11I1BBЦИЕИ 0 Т Л И Ч B !0 Щ И Й С 5i i i «0, С!!еГII IQ упрощения способа. Обрабо. кг Ipi:и" :ином подвергают цитохро! С. осажден ый ! -: «Дным раствором соде!«х<ащи. «0.1 0.2 М соли трехвалентнОГО х<е 1еза и 0.,! 0 0 и одистогî HàTðèÿ. из эKcтракта при!.ОДHO .-0 иГточника цитохрома С с концентрацией последнего 1,0--1 2 мг/м" экс! рак.e cx об FмнОм соотн 0 IieH YIYi iKÑ Г ракта и .Одно ГО раствора солей (10-12) 1.
