Способ диагностики мастита

 

Использование: в области медицины и ветеринарии и может найти применение в молочной промышленности при ветсанэкспертизе молока, Сущность изобретения: пробу молока объемом 1 капли разбавляют раствором бромфенолового синего, охлаждают до , затем измеряют интенсивность флуоресценции раствора и по разности ее величины в зеленой области спектра (540 нм) по сравнению с синей (470 им) на 20-30% диагностируют субклинический мастит, при разности в интенсивности более 30% диагностируют мастит. Применение изобретения позволяет осуществлять экспресс-диагностику мастита при массовых обследованиях, а также определять качество молока. Точность диагностики при этом до 100%. 2 табл.

. СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР В,. Lip

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ---""-"-,,;,"- : :-:.-

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4844723/14 (22) 02.07.90 (46) 30.10.92. Бюл. Ф 40 (71) Ростовский научно-исследовательский институт акушерства и педиатрии (72) B.Ï. Шабаев и А.А. Кожин (56) Ю.Н. Полянцев. Диагностика и терапия мастита у коров в сухостойный период. Ветеринария, 1982. hb 11, с. 14-16. (54) СПОСОБ ДИАГНОСТИКИ МАСТИТА (57) Использование: в области медицины и ветеринарии и может найти применение в молочной промышленности при ветсанэкспертиэе молока, Сущность изобретения:

Изобретение относится к области медицины и ветеринарии. а также может найти применение в молочной промышленности при ветсанэкспертиэе молока.

Прототипом заявляемого способа выбран способ диагностики сублинических маститое путем люминесцентно-микроскопических исследований. Его сущность заключается в следующем: каплю молока наносят на предметное стекло. добавляют равное количество индикатора — акридинаоранжевого в концентрации 10, осторожно перемешивают и через 10 — 15 мин накрывают покровным стеклом и исследуют в сине-фиолетовых лучах под иммерсией— ваэелиновым маслом, Далее определяют в молоке лейкоциты, которые имеют интенсивное свечение, при этом ядра светятся ярко зеленым цветом, цитоплазма тускло зеленым, часто с ярко красными включениями. Количество лейкоцитов подсчитывают в 10 полях зрения с последующим опреде Ж 1772761 А1 (и)э G 01 и ЗЗ/68 пробу молока обьемом 1 капли разбавляют раствором бромфенолового синего, охлаждают до 5-15 С, затем измеряют интенсивность флуоресценции раствора и по разности ее величины в зеленой области спектра (540 нм) по сравнению с синей (470 нм) на 20-30ф, диагностируют субклинический мастит, при разности в интенсивности более 307ь диагностируют мастит. Применение изобретения позволяет осуществлять экспресс-диагностику мастита при массовых обследованиях, а также определять качество молока, Точность .диагностики при этом до 1007ь. 2 табл, лением их среднего количества. Молоко от здоровых коров содержит в среднем 0,2 лейкоцита на одно поле зрения, от коров с субклиническим маститом — 8,4 лейкоцитов в поле зрения микроскопа. Отдельно учитывают лейкоциты, окрашенные в зеленый и оранжевый цвета. В последнем случае клетки мертвые, которые имеют место в молоке и ри и д тол огии.

Недостатком прототипа являются низкая точность способа и сложность и длител ьность его осуществления.

Цель изобретения — ранняя диагностики и повышение точности диагностики мастита.

Новизна и существенные отличия от прототипа заявляемого способа состоят в том, что смесь исследуемой пробы молока с раствором индикатора — бромфенолового синего (БФС) предварительно охлаждают до 5-15ОС, а затем измеряют интенсивность флуоресценции на длине волны 470 и 540

1772761

55 нм, При увеличении интенсивности в зеленой области спектра (540 нм) по сравнению с синей (470 нм) на 20-30% ставят диагноз субклинического мастита, а при разности свыше 30% — диагностируют мастит.

Подробное описание способа и примеры его конкретного выполнения.

Пробу молока (от женщины или млекопитающего животного — коровы) объемом

1-2 капли добавляют к 1 мл 0,001 — 0,01- раствора БФС в пробирку, затем полученную смесь охлаждают до 5-15 С, охлажденную смесь переливают в кварцевую кювету и с помощью флуориметра измеряют интенсивность флуоресценции при длине волны 470 и 540 нм.

Флуоресцентный анализ проводят на лабораторном флуореметре ФЭ вЂ” 3M, в котором показания микроамперметра пропорциональны интенсивности флуоресценции.

Опытным путем было установлено, что предел концентрации БФС от 0,001 до

0,01% является оптимальным для исследования флуоресценции молока (табл. 1), Данным способом было установлено, что чистый раствор индикатора (без следов молока) не флуоресцирует, а с молоком дает три максимума флуоресценции: при 660, 540 и 470 нм. При этом в температурном интервале 16...30 С разность в интенсивности флуоресценции при длине волн 540 нм и 470 нм незначительная по величине и недостоверна, а также не изменяется от качества молока (т.е. полученного от здорового млекопитающего или больного маститом).

При охлаждении молока, а именно — в температурном интервале 5 — 15 С, оно дает с индикатором существенное различие в интенсивности флуоресценции при 540 и 470 нм в случае получения проб молока от больного животного или женщины с маститом, Причем при субклиническом мастите эта разность составляет 20 — 30%, при клиническом течении болезни — свыше 30%. 8 нор-. ме укаэанные различия недостоверны.

Данные исследования 45 проб молока от кормящих женщин сведены в табл, 2, Пример 1. К 1 мл раствора БФС (0,001%) добавили 1 каплю молока от кормящей женщины. Полученную смесь перемешивали, путем встряхивания пробирки, и охладили в холодильнике до 10 С. Затем пробирку перенести в гнездо флуориметра и измерили интенсивность флуоресценции при длине волны 540 нм и 470 нм. Ее величина составила 60 и 49 отд. ед. соответственно. Разность в интенсивности флуоресценции равна 19%. Женщина практически здорова. что подтверждено последующими анализами.

Пример 2. К 1 мл 0,001%-ного раствора БФС добвили 1 каплю молока от другой женщины, кормящей грудью, После охлаждения смеси молока и индикатора до 10—

15 С измерили интенсивность флуоресценции в сине-зеленой области спектра (470, 540 нм), которая составила, соответственно, 44 и 55 отн, ед. Разность их равна 20%. Через 3 дня женщина почувствовала боли в области правой молочной железы. При обследовании обнаружено незначительное повышение температуры в этой части тела. Интенсивность флуоресценции пробы молока и индикатора на длине волны 540 нм увеличилась до 65 отн. ед. и по сравнению с ее величиной при 470 нм (45 отн. ед.) разность составила 33, При люминесцентной микроскопии пробы молока с акридиноранжевым в этот период наблюдений выявлены лейкоциты до трех клеток на поле зрения, что имеет место при клиническом мастите.

Таким образом, первоначальные значения величины флуоресценции и разность в интенсивности флуоресценции при 540 и

470 нм — 20%, характеризовали субклинический мастит, а последующее увеличение этого показателя до 33% — клиническую стадию болезни.

Пример 3. Проводили флуоресцентный анализ пробы молока от кормящей женщины без каких-либо признаков заболевания (мастита). Разбавили 1 каплю молока 1 мл, 0,001%-ного раствора БФС, полученную смесь молока и индикатора охладили до 10 С. При измерении интенсивности флуоресценции на длинах волн 540 и

470 нм установили, что разность между их значениями (соответственно, 50 и 35 отн. ед.) равна 30%, Следовало предполагать, что ее величина соответствует субклиническому маститу. Действительно, через 2 дня женщина почувствовала недомогание и бо- ли в области молочных желез. Отмечена незначительная гиперемия груди. Диагноэ— мастит.

Повторный флуоресцентный анализ молока в растворе индикатора БФС позволил зарегистрировать увеличение сигнала флуоресценции в зеленой части спектра (при 540 нм) на 1 — 2 отн. ед. Разность в интенсивности флуоресценции при 540 и 470 нм составила 31-32%, На основании анализа данных уже этих трех примеров видно, что предлагаемый способ позволяет за 2 — 3 дня диагностировать скрытую, т.е, субклиническую форму мастита. На этой стадии мастита величина

1772761

Таблица 1

Интенсивность флуоресценции молока и водного раствора бромфенолового синего в зависимости от концентрации индикатора при комнатной температуре 20 С (отн. ед, ) разности в интенсивности флуоресценции на длине волны 540 нм и и 470 нм соответствует 20 — 30 („при ее значениях — 31-32 и более имеет место клинический мастит, а ниже 19 — норма, .

Пример 4, К 1 мл 0,001 $-ного раствора БФС добавили 1 каплю молока от коровы, которое не дает реакции с бромтимоловым синим и другими известными индикаторами на мастит. Полученную смесь молока и БФС в течение 5 мин выдерживали в холодильнике в морозильной камере до температуры 10 — 15 С, затем провели измерение интенсивности флуоресценции при длине волны 470 и 540 нм.

8еличина ее равна 60 и 80 отн.сд., соответственно, Разность между их значениями составила 25, что характеризует субклинический мастит. Через 3 — 4 дня было отмечено снижение надоев молока и болезненность отдельных долей вымени у коровы, Диагноз — мастит, fl р и м е р 5, К 1 мл 0,001;ь-ного раствора БФС добавили 1 капле молока от коровы практически здоровой. После охлаждения смеси до 10 С исследовали интенсивность флуоресценции при длине волны 540 нм и

470 нм, которая была равна, соответственно, 70 и 60 отн,ед., Разность между ними составляет 14 . Диагноз — норма.

Таким образом, преимущества заявляемого способа диагностики мастита сводятся к следующему:

Способ позволяет с высокой точностью

5 (до 100$) диагностировать мастит на субклинической (скрытой) стадии развития его, Способ прост в выполнении, осуществляется за 10 — 12 мин, что представляется важным для экспресс-диагностики мастита

10 при массовых обследованиях, а также при определении качества молока на предприятиях молочной промышленности и приемных пунктах молока в хозяйствах.

Способ может широко использоваться в

15 медицинской и ветеринарной клинике и проводить дифференциальную диагностику мастита.

Формула изобретения

Способ диагностики мастита путем сме20 шивания исследуемой пробы молока с индикатором с последующим его люминесцентным исследованием, о т л и ч э ю шийся тем, что, с целью ранней диагностики и повышения точности способа, пробу молока смешивают

25 с 0,001 — 0,01 -ным водным раствором бромфенолового синего, охлаждают полученную смесь до 5 — 15 С и измеряют интенсивность флуоресценции в области спектров 540 нм и

470 нм, и при увеличении первого показателя

30 относительно второго на 20ф, и более диагностируют мастит.

1772Т61

Таблица 2

Интенсивность флуоресценции молока и 0.001 $ раствора

БФС (соотношение 1:20) в сине-зеленой области спектра при различной температуре среды и формах мастита (и-15 ) Составитель А.Кожин

Техред ММоргентал

Корректор М.Керецман

Редактор B.Îðëîâà

Производственно-издательский комбинат Патент", г. Ужгород. ул.Гагарина. 101

Заказ 3844 Тираж Подписное

8НИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раущская наб., 4/5