Способ прогнозирования течения язвенной болезни

 

Изобретение относится к области медицины , в частности гастротерапии. Целью изобретения является повышение точности прогнозирования характера течения язвенной болезни. Это достигается дополнительным определением у больных язвенной болезнью с наличием Compylobacter Pylori цитохимически в лимфоцитах активности дегидрогеназ и постоянной реакции торможения миграции лейкоцитов с тканевыми антигенами. При снижении уровня активности сукцинатдегидрогеназы относительно нормы в 1,5 раз, повышении уровня активности альфа-глицерофосфатдегидрогеназы в 2,3 раза и величине индекса миграции лейкоцитов ниже 0.65 прогнозируют тяжелое течение язвенной болезни

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК ((9) ((1) (s()s G 01 N 33/68

/г

/ / с

ИЗОБРЕТЕНИЯ ." .." ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (21) 4854244/14 (22) 27.07,90 (46) 30.10.92. Бюл. N. 40 (71) Московская медицинская академия им.

И.М. Сеченова (72) М.В. Неверова, А.П. Погромов, Т.С. Фокина и И.Е. Максимова (56) Э,А, Емельянова. Особенности клинического течения язвенной болезни желудка и энэимологической активности периферической крови в условиях Севера. Авт, реф. канд. дис., М., 1987. (54) СПОСОБ ПРОГНОЗИРОВАНИЯ ТЕЧЕНИЯ ЯЗВЕННОЙ БОЛЕЗНИ

Изобретение относится к области медицины, в частности, к гастроэнтерологии, и может быть использован для определения дальнейшего характера течения язвенной болезни (Я Б).

ЯБ, относясь к наиболее часто распространенным заболеваниям желудочно-кишечного тракта. чаще всего поражает лиц молодого. наиболее трудоспособного возраста. Заболевание носит хронический рецидивирующий характер. Результатом этого является инвалидизация больных и большие социально-экономические потери. В последнее время наблюдается отчетливая тенденция к росту заболеваемости ЯБ, особенно среди лиц молодого возраста, В связи с этим разработка способа прогнозирования дальнейшего течения ЯБ представляет большую практическую значимость, поГОСУДАР CT BE ННЫ И КОМИТЕТ

ОПИСАНИЕ (57) Изобретение относится к области медицины, в частности гастротерапии. Целью изобретения является повышение точности прогнозирования характера течения язвенной болезни. Это достигается дополнительным определением у больных язвенной болезнью с наличием Сотру!оЬастег Pylori цитохимически в лимфоцитах активности дегидрогеназ и постоянной реакции торможения миграции лейкоцитов с тканевыми антигенами. При снижении уровня активности сукцинатдегидрогеназы относительно нормы в 1,5 раз, повышении уровня активности альфа-глицерофосфатдегидрогеназы в 2,3 раза и величине индекса миграции лейкоцитов ниже 0,65 прогнозируют тяжелое течение язвенной болезни. скольку позволяет подбирать адекватную терапию и выделять группы "риска".

Известен способ прогнозирования течения ЯБ, основанный на выделении из слизистой оболочки желудка и 12-перстной кишки.

Укаэанный способ не может быть использован для прогнозирования тяжести течения ЯБ, поскольку в группу больных, у которых выявляюгся СР, попадают лица лишь с симптомами желудочной диспепсии, но без язвенного дефекта, что существенно и снижает точность про-ноза, Известен также способ прогнозирования тяжести течения ЯБ, принятый нами за прототип, основанный на оценке метаболической активности лимфоцитов крови путем цитохимического определения активности сукцинатдегидрогеназы (СДГ) и альфа-гли1772762

10 ней рН 7,2-7,4

50 церофосфатдегидрогеназы (альфа-ГФД Г) митохондрий лимфоцитов, Недостатком данного способа является его невысокая точность.

Кроме того, дегидрогеназная активность лимфоцитов крови соответствует тяжести течения заболевания на момент обострения. но не указывает надальнейший прогноз ЯБ, Целью предполагаемого изобретения является повышение точности прогнозирования течения ЯБ.

Способ осуществляется следующим образом, 1 этап — выделение СР из биоптатов СО желудка и 12-перстной кишки.

До начала лечения и после рубцевания язвенного дефекта больным ЯБ утром натощак проводят ЭГДС с прицельной биопсией антрального отдела желудка и 12-перстной кишки (не менее 3 фрагментов из каждого участка). Полученные при биопсии фрагменты СО помещают в стерильные одноразовые пробирки с крышкой обьемом 1 мл, заполненные стерильным изотоническим раствором NaCI, и доставляют в лабораторию не позднее 1 ч с момента проведения биопсии. После этого с одним из фрагментов из каждо о участка проводят тест на уреазопозитивность: фрагмент помещают в пробирку с 10.0 мл индикаторной смеси, содержащей мочевину и вещество-индикатор, При наличии в биоптате СО CP рН среды меняется за счет разложения кампилобактериями мочевины на аммиак и

COz. и смесь окрашивается в красный цвет.

Результаты теста оцениваются через 30 мин, 4, 8, 12, 16 и 24 ч. Тест считается положительным при прохождении реакции не позже 4 ч.

Следующим этапом является микроскопия мазка биоптата (один фрагмент из каждого участка) с окрашиванием препарата по

Граму для выявления спиралевидных микроорганизмов.

Далее проводят высевание микроорганизмов в микроаэробных условиях при содержании кислорода 5 — 10%. температуре

35-37 С и оптимальном значении рН от 5,5 до 8.5. Средой является шоколадно-кровяной агар. После этого проводится повторная микроскопия выращенной культуры микрооганизмов (окраски препаратов по

Граму) для их окончательной идентификации.

11 этап — определение дегидрогеназной активности лимфоцитов.

Для исследования берется свежеприготовленный мазок крови (утром натощак до начала лечения и после рубцевания язвенного дефекта), который высушивается на воздухе и затем в течение ЗО с, фиксируется в фиксаторе (раствор 60% ацетона с трилоном Б), После этого мазок дважды промывается в дистиллированной воде и высушивается на воздухе).

Приготавливается инкубационная среда, состоящая из 10 мл 9,2 M р-ра фосфатного буфера с рН 7,2 — 7.4, 10 мл дистиллированной воды с растворенными в ней 13 мг пара-нитратетразолия фиолетового, 20 мл дистиллированной воды с добавлением к ней 15 мг трилона-Б, общий объем инкубационной среды равен 40 мл со средДля выявления активности ферментов к

40 мл инкубационной среды прибавляют

540 мг сукцината а (выявление активности альфа-ГФДГ), мазок опускается в один из растворов и выдерживается в нем в течение

2 ч при 37 С, после чего промывается водой о и высушивается на воздухе.

Для прокрашивания ядер мазок опускается на 10 — 15 мин в 2%-ный раствор метилового зеленого, промывается проточной водой и фиксируется в парах формалина в течение 30 мин.

После этого производят световую микроскопию мазка (х40)-с подсчетом числа гранул формазина в 50 клетках и делят их на подгруппы с числом гранул от 0 до 4, 5-9, 10 — 14 и т.д.

Для построения гистограмм распределения лимфоцитов с различной активностью

СДГ и альфа-ГФДГ проводят определение средней активности фермента в укаэанных подгруппах и среднего количества лимфоцитов с определенной активностью фермента (M+) с вычислением достоверности различия (Р).

Для определения активности СДГ и альфа-ГФДГ готовится не менее 2 мазков от каждого больного.

111 этап — постановка реакции торможения миграции лейкоцитов (РТМЛ), Предварительно заранее производили выделение антигенного материала слизистой оболочки 12-перстной кишки, для чего после тщательного отмывания из кишечника недоношенного эмбриона тщательно выделяли СО и гомогенизировали с физиологическим раствором в соотношении

1;1, смесь подвергали дробному центрифугированию в течение 1 ч при 105 000 об/мин.

Перевод антигена в растворимое состоянйе осуществляли путем добавления папаина из расчета 0,1 мг на 1 мл супернатанта. Смесь выдерживали в термостате при температуре

37 С в течение 1 ч, центрифугировали при

88 700 об/мин и разгоняли на колонке с

1772762 г г

Д1 — д1

Дг — дг

50

55 сефадексом С 200, после чего отбирались фракции с максимальным содержанием белка (определяли по методу Лоури). После диализной очистки и лиофилизации фракции использовались в концентрации 250 гам/мл, поскольку несцпецифическое торможение миграции при постановке РТМЛ у здоровых лиц наблюдалось при концентрации антигена 300 гам/мл.

Постановка РТМЛ осуществлялась двухкратно — до начала лечения и после рубцевания язвенного дефекта. Пластиковые одноразовые чашки Петри диаметром

100 мм заливали 37 . агаром "Дифко". приготовлен:- ом на физиологическом растворе (рН 7.3) с добавлением 100 ЕД/мл пенициллина и 10 мгк/мл стрептомицина. Толщина слоя агара составляла 2 мм, После застывания в слое агара пробойником выбивали лунки диаметром 2,5 мм, в которые вносили по 5 мкл лейковзвеси (1,5 млн клеток) и 5 мкл раствора антигена (опыт) или среды 199 (контроль), После инкубации чашек при

37 С в течение 24 часов агаровые блоки фиксировали 10%-р-ром формалина (4 часа), осторожно снимали, чашки промывали дистиллированной водой и высушивали. Результат учитывали путем отбрасывания изображения полей миграции клеток на бумагу. Индекс миграции (ИМ) определяли отношением средних величин площадей миграции в опыте и контроле по формуле; где Д1 — средний диаметр 4 зон миграции в опыте;

Дг — средний диаметр 4 зон миграции в контроле; д1 — средний диаметр 4 центральных лунок в опыте; дг — средний диаметр 4 центральных лунок в контроле.

Контрольные и опытные исследования проводили в четырех параллельных лунках.

Нормы определившихся показателей были отработаны на 20 здоровых добровольцах и составили: ИМ =0,81 — 1,21; СДГ =

20,00 + 10; альфа — ГФДГ = 6,90 + 0,06, Пример 1, Больной Г., 46 лет, инженер, и/б йг 28690, находился в гастроэнтерологическом отделении с 24,11.87 по

23.12.87 с диагнозом: язвенная болезнь желудка в стадии обострения, Из анамнеза известно, что язвенной болезнью желудка страдает в течение 15 лет с ежегодными (2 — 3) обострениями. Настоящее обострение длится 2 недели. Лекарст5

30 венное лечение не производилось, Объективно: состояние при поступлении удовлетворительное, кожные покровы и слизистые оболочки обычной окраски, периферические лимфоузлы и щитовидная железа не увеличены. Аускультативно дыхание везикулярное, ЧД вЂ” 16 в мин. Тоны сердца приглушены, ритм правильный. АД вЂ” 135/75 мм рт.ст. ЧСС вЂ” 72 в мин, Живот пальпатарно мягкий, болезненный в эпигастрии. Печень и селезенка не пальпируются, перкуторно не увеличены. Стул ежедневный, оформленный, обычной окраски. ЗГДС, язва угла желудка 0,7 см, умеренная гиперемия в указанной зоне. Луковица 12-перстной кишки без изменений. Результаты РТМЛ с кишечным антигеном: ИМ =0,41, CP выявлены всеми тремя методами,в биоптатах из антрального отдела желудка. Дегидрогеназная активность лимфоцитов: СДà — 12,8, альфа—

ГФДà — 16,9. После рубцевания язвенного дефекта СР в биоптатах антрального отдела сохранялись, ИМ в РТМЛ с кишечным антигеном составил 0,59. Активность СДà — 13,4, альфа — 15,8. Таким образом, у больного ЯБ с наличием в слизистой оболочке антрального отдела СР до начала лечения и после рубцевания язвенного дефекта наблюдалось снижение уровня активности СДГ с

1,56 и 1,49 раз соответственно и повышение уровня активности альфа-ГФДГ в 2,40 и

2,30 раза соответственно. Сохранялась сенсибилизация лимфоцитов к кишечному антигену, Прогноз в данном случае неблагоприятный.

Пример 2, Больной К., 45 лет, водитель и/б N 23774, находился s гастрознтерологическом отделении с 2,10.87 по 23,10.87 с диагнозом: язвенная болезнь 12-перстной кишки в стадии обострения.

Из анамнеза известно, что язва выявлена впервые в амбулаторных условиях при

ЭГДС 2 недели назад (язва задней стенки луковицы 12-перстной кишки 0,5 см с периульцеровным отеком). Объективно: состояние при поступлении удовлетворительное.

Телосложение нормостеническое, кожные покровы и слизистые обычной окраски, периферические лимфоузлы и щитовидная железа не увеличены. Над гелкими аускультативно дыхание везикулярное. ЧД вЂ” 16 в мин. Тоны сердца звучные, ритм правильный, АД вЂ” 130/70 мм рт.ст. ЧСС вЂ” 74 в мин. Живот правильной формы, пальпаторно-болезненный в эпигастрии. Печень у нижнего края реберной дуги, селезенка не увеличена, Наличие СР установлено в антральном отделе желудка (до начала лечения). Активность СДГ составила 18,7, альфа-ГФДà — 6.5. ИМ в РТМЛ с кишечным

1772762 антигеном 0,89. После рубцевания язвенного дефекта (лечение холинолитиками, витаминами, антацидами) СР в биоптатах обнаружено не было. РТМЛ с кишечным антигеном была по-прежнему отрицательной.

Активность СДГ-19,1 альфа-ГФДà — 7,0, Таким образом, у больного впервые выявленной язвой луковицы 12-перстной кишки и отсутствием в слизистой оболочке желудка и 12-перстной кивки СР активность СДГ при обострении снизилась в 1,06 раз, а альфа-ГДФ Г повысилась в 1,06 раз. После рубцевания язвы дагидрогеназная активность также оставалась практически нормальной.

Прогноз в данном случае благоприятный.

Пример 3. Больной Ф., 37 лет, служащий, и/б N 29574, находился в гастроэнтеролическом стационаре, с 3,12,87 по

13.1 .88 с диагнозом: язвенная болезнь 12перстной кишки в стадии обострения. Из анамнеза известно, что язвенной болезнью

12-перстной кишки страдает в течение 16 лет, с ежегодными осенне-весенними обострениями. Настоящее обострение длится 1 месяц. Рецидив заболевания верифицирован в амбулаторных условиях при ЭГДС (язва на передней стенке луковицы

12-перстной кишки 0,5 см и на верхне-задней 0,4 мм, отек: и гиперемия слизистой оболочки), При поступлении состояние удовлетворительное, питание понижено, кожные покровы и видимые слизистые бледные, язык обложен густым белым налетом, Живот при пальпации мягкий, выраженная болезненность при пальпации в эпигастрии справа. Печень и селезенка не пальпируются, CP до начала лечения и после его окончания не были выявлены ни в одном из отделов желудка и 12-перстной кишки, РТМЛ с кишечным антигеном составил до начала лечения ИМ= 0,56, после ИМОО, 81, Активность СДГ до начала лечения — 18,2, после окончания — 18,4, альфа — ГФДà — 7,8 и

7,5, соответственно, Таким образом, у больного с тяжелым течением ЯБ CP в слизистой оболочке обнаружены не были. Активность СДГ снизилась до начала лечения относительно нормы в

1,09 раэ, после лечения — в 1,8 раз, активность альфа — ГФДГ повысилась в 1,13 и

1,08 раз соответственно. Несмотря на длительный язвенный анамнез и частые обострения, функциональная активность лимфоцитов и их энергообмен у данного больного достаточно сохранны, СР не выявлено. Это делает прогноз в данном случае благоприятным, Формула изобретения

Способ прогнозирования течения язвенной болезни включающий определение сукцинат- и а -глицерофосфатдегидрогеназной активности лимфоцитов крови, о тл и ч а ю шийся тем, что, с целью повышения точности способа дополнительно исследуют и реакцию торможения миграции лейкоцитов и определяют наличие

Campylobacter Pylore в биоптате слизистой оболочки желудка и при снижении уровня активности сукцинатдегидрогенаэы в 1,5 раза, повышения уровня активности а -глицерофосфатдегидрогенаэы в 2,3 раза относительно нормы и величине индекса миграции лейкоцитов ниже 0,65 прогнозируют тяжелое течение заболевания.

Точность предложенного способа 77;(,.

Это означает, что из 40 обследованных больных ЯБ с тяжелым течением, проявлявшимся длительным язвенным анамнезом, 5 частыми рецидивами и короткими периодами ремиссии с наличием в слизистой оболочке желудка или 12-перстной кишки СР активность СДГ была снижена относительно нормы в 1,5 раэ и более, а активность

10 альфа-ГФДГ повышена относительно нормы в 2,3 раза и более у 31 больного (77,5;ь), что сопровождалось снижением ИМ в РТМЛ с кишечным антигеном ниже 9,65, после рубцевания язвенного дефекта CP сохрани15 лись у 30 больных (75 ), однако дегидрогеназная активность и функциональная активность лимфоцитов оставались измененными, Данным больным необходимо проведение индивидуально подобранной

20 терапии, направленной в первую очередь на элиминацию микроорганизмов и стимуляцию местных защитных механизмов, Терапия должна быть более длительной, чем у остальных больных, проводится сочетанием

25 препаратов различных патогенетических групп, сочетаться с длительной поддерживающей терапией после рубцевания язвенного дефекта, а в ряде случаев — с хирургическим лечением.

30 Таким образом, использование предлагаемого способа прогнозирования тяжести течения язвенной болезни позволяет до начала проведения терапии прогнозировать дальнейший характер течения заболевания, 35 целенаправленно индивидуально подбирать терапию и корректировать ее в дальнейшем после рубцевания язвенного дефекта.