Способ определения бактерицидной резистентности лейкоцитов при лейкозе

 

Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии и инфекционной иммунологии . Целью является повышение точности способа. Цель достигается тем, что в лейкоцитах периферической крови определяют интегральную цитохимическую активность, для чего рассчитывают содержание катионных белков и активность оксидаз. И при интегральной цитохимической активности 4,5 ед. и ниже определяют слабую бактерицидную активность . Способ значительно повышает точность определения бактерицидной активности, что позволяет вовремя определить угрозу возникновения осложнения при лейкозе.

СО!ОЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

niIs G 01 N 1/28

ГОСУДАРСТВЕННЫЙ КОМИТЕТ

ПО ИЗОБРЕТЕНИЯМ И ОТКРЫТИЯМ

ПРИ ГКНТ СССР

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ,4 ь

К АВТОРСКОМУ СВИ4ЕТЕЛЬСТВУ (21) 4825964/14 (22) 22.05.90 (46) 07.11.92. Бюл. N 41 (71) Киевский государственный институт усовершенствования врачей (72) С.А,Гусева, В.П.Мощич и А,А,Федько (56) Авторское свидетельство СССР йг 1239541, кл. G 01 N 1/30, А 61 В 10/10, 1986, (54) СПОСОБ ОПРЕДЕЛЕНИЯ БАКТЕРИЦИДНОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ЛЕЙКОЦИТОВ ПРИ ЛЕЙКОЗЕ (57) Изобретение относится к медицине, а именно к гематологии и инфекционной имИзобретение относится к медицине, а именно к инфекционной иммунологии, Цель — повышение точности определения бактерицидной резистентности лейкоцитов при лейкозе, Способ осуществляют следующим образом, Определяют содержание катионных белков в мазках крови по методике М,Г.illyбича. Высушенные свежеприготовленные мазки фиксируют 60 с 5 /-ным раствором, сульфосалициловой кислоты, промывают . дистиллированной водой, высушивают, окрашивают 2 мин 0,1%-ным раствором бромфенолового синего в 0,05 М боратном буфере (рН 8,2), промывают в трех сменах этого же буфера по 2 мин в каждой смене.

Мазки тщательно промывают водой, высушивают и микроскопируют. Активность катионных белков выражают в условных единицах (у,е.) на основании вычисления среднего гистохимического коэффициента (СГК) по формуле Астальди, Верга:

Сп, 3А+2Б+1В+ОГ

100 Ы„„1774222 Al мунологии. Целью является повышение точности способа, Цель достигается тем, что в лейкоцитах периферической крови определяют интегральную цитохимическую активность, для чего рассчитывают содержание катионных белков и активность оксидаз. И при интегральной цитохи мической а кти вности 4,5 ед. и ниже определяют слабую бактерицидную активность. Способ значительно повышает точность определения бактерицидной активности, что позволяет вовремя определить угрозу возникновения осложнения при лейкозе. где цифры 3,2,1,0 — степень интенсивности окраски (А — гранулы занимают всю цитоплазму клетки, Б — гранулы занимают 3/4 части цитоплазмы,  — единичные гранулы в цитоплазме, 0 — отсутствие гранул).

Способность нейтрофилов .восстанавливать нитросиний тетразолий (НСТ) определяют по методике M.Ã.Øóáè÷à и

Б.Г.Медниковой. В силиконированные пробирки добавляют по 0,1 мл венозной гепаринизированной крови больных и по 0,1 мл

2%-ного раствора НСТ в 0,2 M фосфатном буфере, Пробирки помещают на 30 мин в термостат при 37 С. После 15-минутного охлаждения при комнатной температуре из верхней части делают мазки, высушивают их и фиксируют в абсолютном метаноле.

Мазки окрашивают по Романовскому и микроскопируют с масляной иммерсией, определяя число формазанположительных клеток на 100 нейтрофилов. Для оценки интенсивности НСТ-реакции рассчитывают средний гистохимический коэффициент.

1774222

Для расчета бактерицидной активности ььейтрофила (БАН) применили формулу:

Л Н (СГК + СГК ) 100,где Л -- количество лейкоцитов (10 ) л;

Н вЂ” количество нелтрофилов в лейкоцитарной формуле, %;

СГК вЂ” средний гистохимический коэффициент активности катионных белков;

СГК вЂ” средний гистохимический коэф2 фициент интенсивности НСТ-реакции, Пример i. Больной С ко, 1954 г, рождения, поступил в гематологическое отделение по поводу хронического млелолейкоза без кгьинических и лабораторных признаков инфекции.

Г1ри обследовании обнаружены следующие лабораторные и цитохимические показатели: количество лейкоцитов 37,0.10" (л) норма 7,4+0,01 10 (л), сегментоядерных

g нейтрофилав в формуле 11% (норма

64,9+0,2%), Интенсивность (СГК) НСТ реакции 0,06 (у здоровых лиц 0,218+0,01 усл,ед,), для катионных белков 0,84 (норма — 1,825ь+ 0,029 уел,ед,), Таким образом, у больного отмечены значительный лейкоцитоз, нейтропения и сни>кение ингенсивности цитохимических реакций. П рьч подсчете интегральной бактерицидной активности получены значения 3,66 у.е,, т.е. ниже гра- ницы нормальных значений (6,98 ч- 0,18, колебания 4,55 — 10,1 у,е,). Следовательно, у больного выявлена "-начительное (в среднем на 47,5%) снижение бактерициднасти нейтрофилов па сравнению с данными здоровых лиц, следствием чего явилось присоединение у больного бактериальной пневмонии, 40

П р л м е р ", Больная К-к, 1935 г, рожд., поступила в гематолоплческае отделенле по поводу истинной полицьчтемиьч, Палучеьььь следуьощие лабораторные и цитохимические значения: содержание лейкоцитов 10,0х "

Я х 10 /л, нейтрофилов 86%, интенсивность

НСТ-реакции 0,42/, катионных белков 1,3 усл.ед.

Таклм образом, у больной выявлены лейкацитоз, нейтро >илез, повышение ин- 50 тенсивности НСТ-реакции, тогда как интенсивность реакции на катианные белки оказалась ниже, чем у здоровых лиц, Используя метод-прототип, можно было сделать заключение о снижении 5 бактерицидности нейтрофилов, однако при подсчете интегральной бактерицидности по предложенному нами способу получены значения бактерицидности (14,79 уел,ед.), -значительно превышающие нормальные.

Пример 3. Больная Б-ва, 1958 г.рожд„ поступила в гематологическое отделение по поводу лекарственного агранулоцитоза, Получены следуьощие лабораторные и цитохимические данные: содер>кание лейкоцитов 13,5 10 /л, содер>кание нейтрофи9 лов — 36%, интенсивность HCT-реакции 0,61 усл,ед., интенсивность реакции на катионные белки 1,72, Таким образом, на фоне лейкоцитоза и нейтропении обнаружено снижение интенсивности НСТ-реакции при нормальных значениях СГК для катионных белков. На основании полученных данных можно было сделать следующие выводы о состоянии бактерицидности нейтрофилов: по данным НСТ-реакции — о значительном снижении ее, по данным реакции на катионные белки — сохранной бактерицидности.

При пересчете интегральной бактерицидной активности получены нормальные.значения (5,92 усл.ед,).

Способ позволяет более точно определить наличие снижения бактерицидной активности лейкоцитов. что позволяет предотвратить осложнение заболевания, Формула изобретения

Способ определения бактерицидной резистентности лейкоцитов при лейкозе, путем их исследования, о т л и ч а ю щ l1 йс я тем, что, с целью повышения точности способа, в лейкоцитах определяьот интегральную цитохимическую активность, для чего рассчитывают содержание катионных белков и активность оксидаз по формуле

ЦА=100 где ЦА — интегральная цитохимическая активность;

Л вЂ” общее содержание лейкоцитов, 10 /л;

Н вЂ” содержание нейтрофилов, %;

КБ — средний гистохимический козффициент содержания катионных белков;

A0 — средний гистохимический коэффициент активности оксидаз;

100 — количество просмотренных клеток, и при интегральной цитохимической активности 4,5 ед и ниже определяют слабую бактериальную резистентность.