Способ замораживания эмбрионов или яйцеклеток

 

Использование: животноводство, а именно консервирование биологических объектов. Сущность изобретения: заполнение цилиндрического контейнера первым воздушным пузырьком осуществляют при условии соотношения диаметра воздушного пузырька к внутреннему диаметру контейнера 2:1. Замораживание эмбрионов или яйцеклеток проводят в вертикально расположенном контейнере. При замораживании температуру среды с криопротектором и эмбрионом или яйцеклеткой поддерживают выше температуры среды для выведения криопротекторанеменеечемна 15°С. 1 ил., 2 табл.

СОЮЗ СОВЕТСКИХ

СОЦИАЛИСТИЧЕСКИХ

РЕСПУБЛИК

„„ Ы„„1782568 А1 (51)5 А 61 0 19(04

ГОСУДАРСТВЕННОЕ ПАТЕНТНОЕ

ВЕДОМСТВО СССР (ГОСПАТЕНТ СССР) ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

2 (57) Использование: животноводство, а именно консервирование биологических обьектов. Сущность изобретения: заполнение цилиндрического койтейнера первым воздушным пузырьком осуществляют при условий соотношения диаметра воздушного пузырька к внутреннему диаметру контейнера 2:1. Замораживание эмбрионов или яйцеклеток проводят в вертикально распо-. ложенном контейнере. При замораживании температуру средйс криойротектором и эмбрйоном или яйцеклеткой поддерживают выше температуры средь для выведения криопротектора не менее чем йа 15 С, 1 ил., 2 табл. (21) 4855540/15 (22). 30.07.90 (46) 23.12.92. Бюл. М 47 (71),Научно-исследовательский институт животноводства Лесостепи и Полесья (72) Ф.И, Осташко, Н.Д. Безуглый и Е.Г. Вали гура (56) Безуглый Н.Д. Осмотическая реакция яйцеклеток и эмбрионов млекопитающих при криоконсервации: Дис. канд. биол. на. ук, 1984. (54) СПОСОБ ЗАМОРАЖИВАНИЯ ЭМБРИОН0В ИЛИ ЯЙЦЕКЛЕТОК

Изобретение относится к сельскому хо- кристаллы льда, контейнер укладывают на зяйству, в частности к технике консервиро- место и проводят посев льда в следующем. вания биологических обьектов, напрймвр К недостаткам дайного способа следует эмбрионов и яйцеклеток млекопита1ощйх; и отнести СЛОжнОСть ПроцЕсеа заМораживаможет быть применено в центрах и пунктах ния. возможное иэмененйе режима, что мотрансплантации и в биологических лабора- жет привести к гибели эмбрионов; ториях . - . . .... Цель йзобретения — повышение сохран. Известен сйособ заморажиаания эмб-- " ности зародышей после деконсервации, уприонов в соломинках, по которому заправ-. рощение технолотического режима ляют цилиндрический контейнер средой для замораживания и снижение затрат на криовыведения криопротектора, первым во3- консервацию эмбрионов и яйцеклеток. душным пузырьком, средой с криопрбтекто- - Поставленная цель достигается тем, что ром и эмбрионом или яйцеклеткой, вторым в способе замораживания эмбрионов или воздушным пузырьком. средой для выйеде- яйцеклеток, включающем заполнение циния криопротектора, замораживают до: линдрического контейнера средой для вы—. 30 C и переносят в жидкий азот. .. ведения криойротектора; первым

При достиженйй -7. С камера установки - воздушным пузырьком, средой с криопровскрывается, оттуда извлекается контейнер тектором и эмбрионом или яйцеклеткой, с эмбрионом или яйцеклеткой, и оператор вторым воздушным пузырьком, средой для переохлажденным в жидком азоте пинце- выведения криопротектора, замораживатом касается стенки контейнера. Убедив- ние до -30 С и перенос в жидкий азот, зашись, что в контейнере образуются первые . полнение цилиндрического контейнера

1782568

20

30

Таблица 1 первым воздушным пузырьком осуществляют при условии соотношения диаметра воздушного пузырька к внутреннему диаметру контейнера 2:1, а замораживание проводят в вертикально расположенном контейнере, причем при замораживании температуру среды с криопротектором и эмбрионом или яйцеклеткой поддерживают выше температуры среды для выведейия криопротектора не менее чем на 15 С.

Влияние размера первого воздушного пузырька йа протекание искусственной инициации кристаллизации показано в табл. 1.

Для прорастания кристаллов льда при температуре посева льда необходимо, чтобы они уже находились в нижней части. Это достигается тем, что температура там всегда ниже, чем в верхней части контейнера.

Вероятность образования кристаллов и их прорастания из нижней. насти койтейнера в верхнюю показана в табл. 2.

На чертеже изображен контейнер для замораживания эмбрионов riî предлагае- мому способу.

Пример. Цилиндрический контейнер для замораживания 1 с пробкой 2 заправляют в следуЮщей последовательности: средой для вйведения криопротекторэ 3 на 35 мм, воздушным:пузырьком 4 на 2-3 мм (оптимальность такого размера пузырька показайа в табл. 1), средой с криопротектором 7 нэ 30 мм и эмбрионом 6, возДушным пузырьком 8 на 5 — 10 мм, средой для выведения криопротектора 9; Воздушные пузырьки предназначены для разведения сред для-выведения крйопротекторэ 3, 9 и замораживания 7 в течение криокойсервации. Первйй воздушный пузырек 4 приобретает. новое свойство, так как он используется не только для разделения 40 сред 3 и 7., но и для прорастания кристаллов льда. Это достигается разделением сред 3 и

7 в месте касания йоверхностй воздуайого пузырька 4 размером 2-3 мм с внутренней стенкой контейнера1. Контактмеждудвумя 45 средами осуществляется тонкиМ слоем жид-кости 5, адсорбированным на внутренней поверхности контейнера 1.

Замораживание проводят в вертикально расположенном контейнере. При снижении температуры среды с криопротектором и эмбрионом, расположенной в центральной части контейнера, температуру среды для выведения криопротектора, находящейся в нижней части контейнера, поддерживают ниже температуры центральной части не меньшее чем на 15ОС.

Предложенный способ замораживания эмбрионов или яйцеклеток обладает рядом преимуществ. Улучшается технологичность режима замораживания, так как не требуется вмешательства оператора и доступа к обьекту, что исключает нарушение режима замораживания. повйшает сохранность эмбрионов после замораживания — оттаивания, при этом улучшаются условия труда технологов.

Формула изобретения

Способ замораживания эмбрионов или яйцеклеток, включающий заполнение цилиндрического контейнера средой для выведения криопротектора, первым воздушным: пузырьком, средой с криопротектором и эмбриойом или яйцеклеткой, вторым воздушным пузырьком, средой для выведения криопротектора, замораживание до -30ОС и перенос в жидкий азот. о т л и ч а ю щ и йс я тем, что, с целью, повышения сохранйости зародышей после деконсервации, упрощения технологического режима замораживания и снижения затрат, заполне- .. ние цилиндрического контейнера первым воздушным пузырьком осуществляют при условии соотношения диаметра воздушного пузырька" и внутреннего диаметра контейнера 2;1, а замораживание проводят в вертикально расположенном контейнере. причем при замораживании температуру среды с криопротектором и эмбриойом или яйцеклеткой йоддерживают выше температуры среды для выведения криопротектора . не менее, чем на 15ОC.

1782568

Таблица 2

Составитель А, Филиппова

Техред М.Моргентал Корректор С. Пекарь

Редактор

Заказ 4469 Тираж Подписное

ВНИИПИ Государственного комитета по изобретениям и открытиям при ГКНТ СССР

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., 4/5

Производственно-издательский комбинат "Патент", r. Ужгород, ул.Гагарина, 101