Способ получения макролидных антибиотиков

 

Использование: а медицине в качестве антибиотиков . Сущность изобретения: продукт: макролидные антибиотики ф-лы I. где R СН С Н или 3 25 изо- С Н , R2 , R3 r n группа; OR4-OH -OCOR6 л где R -С -С алкил, незамещенный или замещенный атомом галогена, или ОСО R а . где R a - С-С алкил или бензил Реагент 1: соединение флы I, где OH; H; OR4 - защищенная гидроксильная группа Реагент II: окислитель такой, как бихромат пиридиния или N. N -диметилсульфоксид. Условия реакции: в присутствии активирующего средства, такого как оксалилхлорид в среде органического растворителя при т-ре от 70°С до 22°С с последующим удалением в случае необходимости щелочным гидролизом защищаемой OR4 группы, и выделением соединения ф-лы I, где OR4-OH - ОН группа, или действием ацилирутощего агента переводят его в соединение ф-лы I, где OR4-OCOR6 группа или ОСО R6 группа Суточная доза соед составляет 1 - 2000 мг/кг веса тела Активность против сомнительных нематоспироидов у мышей в дозе 10 мг/кг (подкожно) составляет 50 - 82%. 2 табл.

ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИ

K ПАТЕНТУ а4 Ра

Комитет Российской Федерации по патентам и товарным знакам (21) 4027456/04 (22) 29.04.86 (31) 85 10942; 85 10943; 85 10944; 86 6103 (32) 30.04.85; 30.0485; 12.03.86; 12.03.86 (33) GB; GB; GB. GB (46) 15.1 2.93 Бюл. Ия 45-46 (71) Американ Цианамид Компани (US) (72) Джон Бэрри Bapp(GB}; Хейзел Мэри Нобл(68};

Нил Портер(6В}; Ричард Алан Флеттон(6В}; Дэвид

Нобл(6В}; Дерек Рональд Сатерлэнд(68}; Майкл

Винсент Джон Ремсей(6В) (73) Американ Цианамид Компани (US} (54) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МАКРОЛИДНЫИ

АНТИБИОТИКОВ (57) Использование: в медицине в качестве антибиотиков. Сущность изобретения: продукт: макролидные антибиотики ф-лы I, где R СН С Н ипи

3 2 6 изо- С Н, R", R группа; OR -0Н -OCOR

3 7 60

6 где R -С -С алкил, незамешенный или замещеч1 4 (1S) RU (11} 2ОО4545 С1 (51} 5 C07D493 22 А61К31 335 ный атомом галогена, или ОСО R, где и ва ва

С -С алкил или бензил. Реагентов: соединение ф1 4 лы I, где R =ОН =ОН; R =Н Н; OR — защищенная

2 3 . 4 гидроксильная группа Реагент 11: окислитель такой, как бихромат пиридиния или N, N -диметилсульфоксид. Условия реакции; в присутствии активирующего средства, такого как оксалилхлорид, в среде органического растворителя при т-ре от

70 С до 22 С с последующим удалением в случае необходимости щелочным гидролизом защищае4 мой OR группы, и выделением соединения ф-лы 1, 4 где OR -ОН вЂ” OH группа, или действием ацилирующего агента переводят его в соединение ф-лы

I, где OR -OCOR группа или ОСО R группа Су4 6 6 точная доза соед1 составляет 1 — 2000 мг/кг веса тела Активность против сомнительных нематоспироидов у мышей в дозе 10 мг/кг (подкожно) составляет 50-82%. 2 табл, 2004545

Изобретение относится к новым соединениям антибиотика и способам их получения, Известно получение антибиотиков $

541, которые можно выделить из продуктов ферментации вида Streptomyces, Антибиотики S 541 представляют собой группу родственных соединений, имеющих неполную формулу ф сн сн, 1% сн н

0 9

Была выявлена дополнительная группе соединений. обладающих антибиотической активностью, которые можно получить посредством химической модификации антибиотиков $541 или путем выделения их из культуры микроорганизмов рода

Streptomyces. Новые соединения предлагаемого способа обладают антибиотической активностью и/или применяются как промежуточные продукты при получении дру гих активных соединений и/или при выделении или очистке соединений антибиотиков $541.

Соединения предлагаемого способа представляют собой 2Э-кетон, 23-деокси. . 23-гидроксил или эамещенные гидроксильные аналоги антибиотиков S 541, которые имеют гидроксильную ипи замещенную гидроксильную rpynny в положении 5.

Таким образом предлагается способ получения соединений формулы Ф, сН3 оя4 где R — метил, атил или иэопропил;

R и R вместе с атомом углерода, к которому они присоединяются, представляют - С-О группу;

OR — гис роксильная группа или О COR6 группа, где Я вЂ” С1-С4-алкил, неэамещенный ипи замещенный атомом галогена, или О

CP2R группа. где R - — С1-С4 апкил ипи ба бенэил.

Как указывалось, соединения предлагаемого способа могут применяться в качестве антибиотиков и/или как промежуточные соединения дпя получения других активных соединений и/ипи при выделении и очистке соединений антибиотиков S 541. В том случае, когда предлагаемые соединения приходится использовать как полупродукты, R и/или -OR могут быть защищенными гидро4 ксипьными группами. Такая группа должна иметь минимальное количество дополнительных функциональных групп, чтобы избежать дополнительных реакционных

"0 цепей и должна быть такова, чтобы стало возможным избирательно восстанавливать иэ нее гидроксильную группу. Примеры защитных гидроксильных групп известны.

Примеры R и Ой защищенных гидро4

15 ксильных групп включают феноксиацетокси, силилоксиацетокси, например триметилсилилоксиацетокси и трет-бутилдиметилсилилоксиэцетокси, и силилокси, например триметилсипилокси и трет-бутил20 диметилсилилокси. Предлагаемые соединения, содержащие такие группы, будут главным образом использоваться в качестве промежуточных соединений. Другие группы, например ацетокси, могут выступать как

25 защищенные гидроксильные группы, но кроме того могут присутствовать в целевых активных соединениях.

Заявленные соединения обладают антибиотической активностью, например анM тигепьминтной активностью, например против немэтодов, и в частности антиэндопаразитарной и антиэктопаразитарной активностью.

Эктопарзэиты и эндопаразиты эаражаЗ5 ют людей и целый ряд животных и особенно имеют широкое распространение среди сельскохозяйственных животных таких кэк свиней, овец, крупного рогатого скота, коз и домашней птицы, лошадей и домашних жи40 вотных, например собак и кошек, Паразитатнэя инфекция домашнего скота, приводящая к анемии, недостаточности питания и потери веса, является основной причиной экономических потерь во всем мире, 45 К представителям эндопаразитов, заражающих укаэанных животных и/ипи людей относятся Ancylostoma, Ascarldla, Ascarls, Asplcularls, Вгофа, Bunostomum, Capillarla, Chabertla, Cooperla. Dlctyocauius, Plrofilarla, 50 Dracunculus, Entегоblus, Haemonchus, .. Heterakls, Loa, Necator, Nematodlrus.

Nematosplroides, Heilgomomldes, й!ррозсгопцуИз, Oesophagostomum, Onchocerca. Ostertagla, Oxyurls, Parascaris, Strongylis, Strongyloldes, Syphacla, Toxascares, Toxocara, Trichonema, Trlchostrongylis, Trichinella, Trichuris. Uncinaria

u Wucharerla.

Примерами эктопараэитов, заражающих животных и/или людей являются членистоногие эктопараэиты. например жалящие

2004545

55 насекомые, падальная муха. блохи, вши, клещи, сосущие насекомые, искодовые клещи и другие двукрылые насекомые — вредители.

К примерам такого рода эктопаразитов, заражающих животных и/или людей относятся Ambylomma, Boophllus, Chorloptes, Culllphore, Demodex, Demailenia, Dermatobica, Gastrophilus, Haematobla, Haematoplnus, Haenophysalis, Hyalomma, Hyperderma, Jxodes, Linognathus, Lucllia, Melophagus, Oestrus, Otobius, Otodectes, Psorergates, Psoroptes, Rhlpicephalas, Sarcoptes, Stomoxys, ТаЬапвз. Обнаружено, что предлагаемые соединения эффективно действуют как in vitro так и in vlvo против широкого ряда зндопаразитов и эктопаразитов, В частности обнаружено,. что предлагаемые соединения активно действуют против нематодов, таких как

Haemonchus contortus, Ostertagia, circu

mclncta, Jrlchostrongulls colublformls, Dlctyocauius vlviparis, Cooperia oncophera, Ostertagia ostertagi, Nematospiroides

dubius u Nippostrongylus brasillensis, и паразитарных клещей, как например

Sarcoptes sp. u Psoroptes sp. Таким образом предлагаемые соединения находят применение при лечении животных и людей с эндопаразитарной и/или эктопаразитарной инфекциями.

Виды паразитов меняются в соответствии с хозяином (животным) и доминирующим местонахождением инфекции. Следовательно, например, возбудители Haemonchus contortus, Ostertagla circumcincta u ТпсЬозтгопоу(из

colubiforrnes обычно поражают овец и преимущественно локализуются в желудке и тонкой кишке, в то время как Dictyocaulus

viviparis, Cooperla oncophora u Ostertagia

ostertagi обычно поражают крупный рогатый скот и локализованы, главным образом в легких, кишечнике или желудке, соответственно.

Антибиотическая активность предлагаемых соединений может быть продемонстрирована, например, своей активностью in

vitro против свободно живущих нематодов, например Caenorhabiditis elegans.

Кроме того заявленные соединения находят применение в качестве противогрибковых веществ, например против штаммов

Candlda. таких как Candida albicans u

Candlda gIabrata, и против дрожжей, таких как Saccharomyces carlsbergensis.

Предлагаемые соединения кроме того могут применяться в борьбе с вредителяминасекомыми, клещами и нематодами в сельском хозяйстве, садоводстве, лесоводстве, 5

1,5

ЗО

45 здравоохранении и хранении продуктов.

Ими можно успешно обрабатывать вредителей;ур, включая хлебные злаки, нап >имер пшеницу, ячмень, маис, рис, овощи, например сою, фрукты, например яблоки, виноград и цитрусовые, а также корнеплоды, например сахарную свеклу и картофель. Характернымй примерами таких вредителей являются фруктовые клеш и и тля, например Aphis

fabae, Aulacorthum clrcumflexum, Myzus

persicae, Nephotettix cincticeps, Nilparvata

Ьцепз, Panonychus ulmi, Phorodon humuli, Phyllocoptruta oleivora, Tetranychus urtlcae u представители рода Trialeuroides нематоды, например представители рода

Aphelencoides, Olobodera, Hetегоdera.

Meloldogyne u Panagrellus, чешуйчатые, например НеПой! з, Plutella u Spodoptera, долгоносик-каландрина, такие как Anthonomus

grandis u Sltophilus granarlus, хрущаки мучные, например Triboiium castaneum, мухи, например Musca domestica, муравьи Рихтера, моли-минеры (узкокрылые), Pear рзуПа трипсы табачные, таракановые, например

Blatella germanlca u Periplaneta americana, москитные, как например Aedes aegypti, В соответствии с предлагаемым способом предло>кены соединения формулы!, как указывачссь, которые могут быть использованы в качестве антибиотиков. В частности их можно использовать при лечении животных и людей, пораженных зндопаразитарной, эктопаразитарной и/или грибковой инфекциями и в качестве пестицидов для борьбы с вредителями-насекомыми, клещами и нематодами, в сельском хозяйстве, садоводстве или лесном хозяйстве. Их можно применять кроме того обычно s качестве пестицидов в других обстоятельствах, например в хранилищах, зданиях или других общественных местах или местах локализации сельскохозяйственных вредителей.

Предлагаемые соединения могут быть применены либо к хозяину (животному или человеку), либо к культурным растениям или другой растительности, либо к самим вредителям или месту их расположения.

Заявленные соединения могут быть сформулированы для приема в любой удобной форме при использовании в ветеринарии или практической медицине. Таким образом предлагаются фармацевтические композиции, содержащие предлагаемое соединение, пригодное для применения в ветеринарии или терапии. Такие композиции могут бь.ть представлены при использовании в традиционной форме с помощью одного или нескольких подходящих носителей или наполнителей.

2004545

Предлагаемые композиции содержат составы в форме, особенно пригодной для парентерального, в том числе введение внутрь молочной железы, орального, реактального, местного применения в виде имплантанта, для применения при глазных, ушных или заболеваниях мочеполовой системы, подходящими способами и агентами для приготовления состава предлагаемых соединений, пригодногодля использования в ветеринарии или терапии, являются известные способы.

Заявленные соединения можно применять в комбинации с другими фармацевтически активными ингредиентами.

Суммарная суточная доза предлагаемых соединений, применяемая как в ветеринарии, так и в терапии, будет соответственно в интервале 1-2000 мг/кг веса тела, предпочтительно 50-1000 мгlкг, причем укаэанные дозировки можно принимать в дробных дозах, например 1-4 раза в день.

Заявленные соединения можно составлять в любой удобной форме, пригодной для земледелия или садоводства. Таким образом предлагаются составы, содержащие соединение, предназначенное для при° менения в земледелии или садоводстве.

Такие рецептуры включают сухие или жидкие формы, например дусты, включая пылевидные субстраты или концентраты, порошки, в том числе растворимые или смачиваемые порошки, гранулы, включая микрогранулы и диспергируемые гранулы, таблетки, текучие вещества, эмульсии, например разбавленные эмульсии или эмульгируемые концентраты, пропиточные составы, например составы для пропитки корней и семян, протравливатели семян, семенные гранулы, масляные концентраты, масляные растворы, инъекции, например инъекции в ствол, растворы или опрыскивания, дымы и туманы.

Подходящие способы и агенты для составления рецептуры предлагаемых соединений для применения в садоводстве или земледелии включают известные соединения.

При составлении рецептуры концентрация активного вещества обычно составляет

0.01 — 99 мас. и более предпочтительно от

0.01 — 40 мас. .

Промышленные (товарные) продукты обычно приготовлены в виде концентрированных композиций. которые при использовании разбавляют до требуемой концентрации. например 0,001

0,0001 мас., При использовании в ветеринарии или в садоводстве и земледелии, и в случае. когн,с40

50.. активирующего средства. такого как оксалилхлорид, в среде органического растворителя при температуре от -70 до 22 С с последующим удалением в случае необхо55 димости щелочным гидролизом защищаемой OR -группы, и выделением соединения

4 формулы t. где OR -гидроксигруппа, или

4 действием ацилирующего агента переводят

его в соединение формулы I, где OR -OCOR6 группа или ОСОгй группа.

35 да предлагаемые соединения являются продуктами, образуемыми посредством ферментации, желательно использовать весь бродильный бульон в качестве источника активных соединений. Кроме того может быть пригодным использование обеэвоженного бульона, содержащего мицелий или мицелия, отделенного из бульона и пастериэованного, или более предпочтительно высушенного. При желании укаэанный бульон или мицелий может быть сформирован в композиции (как указывалось), включающие традиционные инертные носители, наполнители или раэбавители.

Антибиотические соединения предлагаемого изобретения могут вводиться и применяться в комбинации с другими активными ингредиентами.

8 частности предлагаемые соединения антибиотика могут использоваться вместе с соединениями антибиотиков 8 541 или с другими антибиотическими соединениями изобретения. Это может возникнуть, например. в случае, когда неочищенные продукты брожения взаимодействуют согласно предлагаемому способу без предшествующего или последующего отделения (укаэанное

Может быть предпочтительным, например, при использовании соединений в земледелии. где важно обеспечить (сохранить) низкую себестоимость продукции).

Заявленные соединения можно получить следующим образом, Соединение формулы И „ 3

OR где R — гидроксильная группа:

R -атом водорода; з»

0R — защищенная гидроксильная груп4 па. подвергают окислению действием окислителя, таким как бихромат пиридиния или

N,N -диметилсульфоксид, в присутствии

2004545

-70 С в атмосфере азота обработан по каплям раствором диметилсульфоксидом (3,19 мл) в сухом дихлорметане (15 мл) и затем по каплям раствором 5-ацетокси Фактора А (4,91 г) е сухом дихлорметане.(30 мл), 5

Полученный раствор тщательно перемешивают в течение 1,5 ч при температуре -70 С, прежде чем обработать по каплям раствором триэтиламина (12,6 мл) в сухом дихлорметане (40 мл). Реакционную смесь 10 перемешивают в течение 1,25 ч без охлаждения и выливают в смесь (1:1) холодной воды и простого эфира. Водный слой экстрагируют простым эфиром. Соединившиеся органические слои промывают водой, соля- 15 н ым раствором, высушивают и выпаривают.

Остаточную пену хроматографируют на двуокиси кремния, используя смесь дихлорметана с ацетоном (50:1) с получением названного соединения (3,4 г); (СОС1з) со- 20 держит 3,33 (м; 1Н), 3,49 (м; 1Н), 3,70 (д 10;

1Н) и 5,52 (д. 5; 1H), м/3 содержит 652, 634, 609, 591, 574, 482, 263, 235 и 151.

Пример 2. 23-кето — Фактор А.

Соединение примера 1 (276 мг) в 25 метаноле (5 мл) при температуре О С обрабатывают по капле раствором 2N-натрийгидроксида (0,42 мл) в метаноле (1,0 мл).

Перед тем как вылить раствор в холодную воду его выдерживают при температуре 5 С 30 в течение 5 ч. Смесь экстрагируют простым эфиром и этилацетатом. Соединившиеся органические слои промывают соляным раствором, высушивают и выпаривают с получением твердого вещества, которое 35 очищают препаратиеной тонкослойной хро. матографией, используя в качестве растворителя смесь дихлорметана с ацетоном (10:1) для получения названного соединения (140 мг). 40 (СОС1з) содержит 3,28 (м; 1H), 3,48 (М;

1Н), 3,70 (д 10, 1Н) и 4,28 (трг, 1Н), м/з включает 592. 549, 482. 370. 263, 235 и 151, Пример 3. Фактор А. 5-хлороацетат, 23-кетон. 45

Раствор Фактора А, 5-хлорацетата (276 мг) и дихромата пиридина (602 мг) в сухом N,N-диметилформамиде (10 мл) пере. мешивают при температуре 20 С в.течение

48 ч и затем вливают е смесь этилацетата 50 (50 мл) и 2N-хлористоводородной кислоты (25 мл). Органическую фазу промывают 2Nхлористоводородной кислотой и насыщенным бикарбонатом натрия, высушивают (сульфат магния) и выпаривают до сухости. 55

Остаток очищают хроматографией на колонке Klesdgel 60 (25 г). Элюирование колонки смесью петролейного эфира и этилацетата (4:1) дает названное соединение 85 мг) в качестве бесцветной пены, (а)о +120 (с

1,05, СНС1з), i4nsx(E OH) 245 нм (Е 26500), vmax (СНВгз), 3480 (OH), 1760 (хлорацетат) и

1715 см (сложный эфир и кетор, д(СОС!з) включает 5,5-5.7 (м, 2Н), 4,17 (с, 2Н), 3,72 (д, J 10 Гц, 1Н), 2,50 (с, 2Н) и 0,85(д, J 7 Гц, ЗН), м/э=686 (М, 35 С1), Пример 4. Фактор А, 5-метилкарбонат, 23-кетон (830 мг). (а)о +132 (с 0,82, СНСlз), knax (EtOH)

245 нм (Et 29800), vmsx (СНВгз) 3560 и 3500 (ОН), 1745 (карбонат) и 1710 см (сложный эфир), д (CFCb), включает 5,4д (с, 1Н), 4,80 и

4,70 (AB9, .1= t 4 Гц, 2 Н), 4,28 (м, 1 Н) и 0,79 (д, J=7 Гц, ЗН).

Пример 5: Фактор А. 5-бензилкарбонат, 23-кетон (57 мг). (а)о +99 (с 0,4, СНС!з). knsx (EtOH)

245,5 нм (Ес 29600) vmsx (СН Вгз) 3600 3550 и

3480 (ОН), 1740 (карбонат) и 1715 см (сложный эфир и кетон), д (СОС!з) включает 7,5-7,2 (м, 5Н), 5,57 (с, 1Н) 5,21 (с, 2Н), 3,70(д, J-10 Гц, 1Н), 2,49 (с, 2H} и 0,86 (д, J-6 Гц, ЗН), из фактора А, 23-кетона (92 мг) и бензилхлорформата (0,05 мл).

Пример 6. 5-Ацетокси, 23-кето-фактор

0 (152 мг), Температура плавления 228-230 (a)p +84 (с 0,6, СНС1з) Я<пах 244,5 нм (Emsx 31 100), Bmsx (СНВгз) 3500 (ОН), 1732 и

1714 см (сложный эфир и кетон), д(СОС1з)

0,86 (д, 6 Гц, 3 Н), 0,98 (д, 6 Гц, ЗН), 1,00 (т, 7 Гц, ЗН), 1,49 (с, 3 Н), 1,67 (с, ЗН), 1,74 (с, ЗН), 2,14 (с. ЗН), 3,33 (м, 1H), 4,03 (д, 6 ц, 1Н), и 5,5-5,6 (м, 2Н), м/э=638 (М+).

Из 5-ацетокси-Фактора О (336 мг) аналогичным образом для соединения примера 1..

Пример 7. 23-кето-Фактод D (59 мг). (a)o +84 (с, 0,4, СНС1з)Явах 144,5 нм (Евах 28000), vmsx (СН Вгз) 3550 и 3500 (ОН) и

1712 см (сложный эфир и кетон), д (СОС1з)

0,86 (д, б Гц, 3 Н), 0,98 (д, 7 Гц, ЗН), 1,00 (т, 7 Гц, ЗН), 1,50 (с, ЗН), 1,68 (с, ЗН), 1,86 (с, ЗН), 3,27 (м. 1Н), 3,73 (д, 10 Гц, 1H). 3,95 (д, 6 Гц, 1Н) и

4,27 (т, 6 Гц, 1Н), из 5-ацетокси-23-кето Фактора 0 (96 мг), аналогичным образом для соединения примера 2.

Пример 8. 233-Кето фактор В (160 мг).

Т.пл, 213-215 С (размягчение примерно при

209 СО /а/о +122 (с=0,36, СНС1з), knax (EtOH): 238.5 (26400), 244,5 (28700) и 282 нм (@пах 400), gmsx (СН В гз): 3450 (ОН) и 171 0 см (сложный эфир и кетон), д (СОС1з) включает:

5,47 (кв„б Гц, 1H). 4,02 (д, 6 Гц, 1Н), 3,95 (д., б Гц. 1Н), 3,73 (д, 10 Гц, 1 Н), 3,51 (с, 3 Н), 3,31 (м, 1Н), 1,81 (с. 3 Н), 1,69 (с, ЗН), 1,67 (д, 6 Гц.

3Н), 1,5 (с, 3H), 0,97 (д, 6 Гц, ЗН) и 0,82 (д, 7 Гц,, ЗН), m/z=59Q(M ), из фактора В в виде мик2004545

OH сн

CH3 "

Подходящий растворитель может быть выбран из группы кетона, например ацетона, простого эфира, например диэтилового эфира, диоксана или тетрагидрофурана, углеводорода, например, гексана, галогензамещенного углеводорода, например хлороформа или метиленхлорида, или сложного эфира, например этилацетата, или замещенного амида, например диметилформамида. В реакции можно также использовать комбинации указанных растворителей либо одних, либо с водой, Реакцию можно проводить при температуре от -80 С до +50 С, Очистку и/или отделение предлагаемых соединений можно осуществлять традиционными методами, например хроматографией, включая высокоэффективную жидкостную хроматографию на соответствующей подложке, такой как двуокись кремния, нефункциональная макросетчатая .адсорбционная смола, например поперечно-сшитые полистирольные смолы, такие как смолы Ambertlte XA0-2, XAD-4 или XAD1180 (Rohm Haus Ltd.) или смола $112 (Kusteel Ltd.), .или поперечно-сшитый декстран, смешивающийся с органическим растворителем, например Sephadex LH 20 (Pharmacia UK Ltd) или в случае высокоэффективность жидкостной хроматографии такой на подложках с обратной фазой, таких как углеводород, нанесенный на двуокись кремния, например С1в-сшитая двуокись кремния. Подложка может быть в виде слоя с насадкой, заполняющего колонну, В случае использования нефункциональных макросетчатых смол, например XAD-1180 или

S 112, для элюирования можно использовать смеси органических растворителей. например ацетонитрила с водой.

Раствор указанных соединений в соответствующем растворителе обычно загружают в хроматографическую колонку из двуокиси кремния или Sephadex при желании после первого уменьшения обьема растворителя, Колонку могут по выбору промыть, а затем вымыть растворителем подходящей полярности. В случае колонок из Sephadex и двуокиси кремния, в качестве растворителей можно использовать спирты, например метанол, углеводороды, например гексан, ацетонитрил, галогензамещенные углеводороды, например хлороформ или метиленхлорид, или сложные эфиры, например этилацетаты.

Элюирование и разделение очистку заявленных соединений можно регулировать общепринятыми способами, например тонкослойной хроматографией и высокоэффективной жидкостной хроматографией, или используя свойства соединений описываемых далее.

Предлагаемые соединения могут первоначально быть очищены хроматографией на

5 двуокиси кремния, предпочтительно используя элюат, такой как хлороформ: этилацетат, при желании с последующей высокоэффективной жидкостной хроматографией. Полученный таким образом очи10 щенный продукт может быть затем. подвергнут хроматографии на сефадексовых колонках. предпочтительно с использованием злюата. например ацетонитрила, а затем заявленные соединения могут быть

15 выделены жидкостной хроматографией с высокой характеристикой.

Используя подходящие комбинации указанных методик, соединения формулы I, как уточнено сейчас, выделены как твердые

20 вещества в почти чистом виде. Ясно, что последовательность, при которой осуществляют указанные стадии очистки, выбор тех, которые используют и степень достигаемой очистки могут очень отличаться. Указанные

25 соединения могут применяться, однако, как указывалось, при степени чистоты, соответствующей их предназначению. При использовании их в медицине, желательно иметь степень чистоты хотя бы 90 $, предпочти30 тельно более 957, Для ветеринарии и другого применения достаточна более низкая степень чистоты, например 50 g, или ниже.

Промежуточные соединения антибиотиков S 541 формулы 1И, могут быть получены

35 с использованием известных способов ферментации и выделения.

Предлагаемый способ далее представлен следующими препаратами и примерами, все температуры приведены при О С.

40 Соединения обозначены со ссылкой на источник "Факторы", которые представляют собой перечисленные далее соединения формулы

OR

55 Факторы А, В, С, О, Е, F можно получить известным способом.

Пример 1, 5-Ацетокси-23-кето Фактор А.

Раствор оксалилхлорида (1.96 мл) в сухом дихлорметане (25 мл) при температуре

2004545

45

2 мг/кг (орально) 10 мг/кг (подкожно)

Активный (2)

Активный (2)

Активный (2)

Активный (2) Активный (1)

Активный (1)

Активный (1)

Активный (1) АВ080 Пример 1+

Пример 2+

Пример 3+

Пример 4+

Пример 5+ рокристаллического вещества при перекристаллизации иэ эфира, Пример 9; Фактор А 5-(2,2,2-трихлорэтил)карбонат 23-кетон (65 мг).

/а/о +98 С(с=1,07, СНС!з),M»(EtOH):

245,5 нс (Е 28300), Ртах (СНВгз): 3300 3600 (ОН), 1755 (карбонат) и 1710 см (сложный эфир и кетон). д(СОС!з) включает; 5,61 (с, 1Н), 4,9 и 4,75 (АВкв, J-12 Гц, 2Н), 3,72 (д, J-10 Гц, 1 Н), 2,51 (с, 2 Н) и 0,87 (д, J =7 Гц, 3Н), m/z-784 (М, Cl) иэ фактора А, 5-(2,2,2трихлорэтил)карбоната (186 мг).

Пример 10. 23-Кето-Фактор А, 5-(4хлорбенэоат) (150 мг) кристаллизуется при промывании дииэопоопиловым эфиром, т.пл.230 — 232 С. /а/о +25 (с-0,48. СНС!з), àx (ЕВОН): 245 (50600) и 281,5 нм (Евах

1100), йпах (СНВгз): 3480(ОН) и 1718 см (сложные эфиры и кетон), д (СО С! з): 8 (д, 8 Гц, 2Н), 7,4 (@, 8 Гцз 2Н) и 2,5 (с, 2Н), m/z=748, 750 (M+, Cl и Cl) иэ фактора А, 5-(4-хлорбензоата) (420 мг), Оценка влияния модификации 23-заместителя Фактора А на инсектицидную активность.

Все приведенные здесь концентрации являются концентрациями активного ингредиента. Испытательные растворы приготавливаются путем растворения активного ингредиента в 35%-ном растворе ацетона и воды при концентрации 1000 частей/млн с последующим раэбавлением водой по мере необходимости.

Tetranychus urticae (стойкий штамм Р), Клещик паутинный двупятнистый.

Отбирали растения фасоль лимскую с формированием первых листьев до размеров 7-8 см и осуществляли их обрезку до одного растения на горшок. От листа, взятого из основной колонии, отрезали небольшой кусочек и помещали на каждый лист испытываемых растений. Это осуществлялось примерно за 2 ч.до обработки с тем, чтобы позволить клещикам перемещаться по испытываемым растениям и откладывать яйца. Размер отрезанного кусочка варьировался так, чтобы получалось примерно 100 клещиков на лист. Во время обработки использованный для переноса клещиков кусочек листа удалялся и выбрасывался.

Зараженные клещиками растения погружались в испытательный раствор на 3 с с одновременным перемешиванием и помещались под вытяжной колпак для сушки.

Растения выдерживались в течение двух дней, после чего определяли число умерщвленных взрослых особей с использованием

5 первого листа. Второй лист находился на растении в течение еще пяти дней, после

/ чего определяли число умерщвленных яиц и/или вновь появившихся личинок, Empoasca abrupta, взрослые особи, ци10 кадка картофельная.

Лист фасоли лимской длиной примерно

5 см погружали в испытательный раствор на

3 с перемешиванием и помещали под вытяжной колпак для сушки. Данный лист по15 мещали в чашку Петри размером 100х10 мм, содержащую на дне влажную фильтровальную бумагу. B каждую чашку вводили примерно по lO взрослых особей цикадки картофельной и обработка их осуществля20 лась в течение 3 дн, после чего определяли число умерщвленных насекомых.

HelIothls vlresens, табачная листовертка-почкоед третьей возрастной стадии.

Семядоли хлопка погружали в испыта25 тельный раствор и высушивали под вытяжным колпаком. После сушки каждое растение разрезали на четыре части и десять секций помещали по отдельности в

30-милл ил итровые пластмассовые меди30 цинские чашки. содержащие кусочек медицинского зубного тампона длиной 5-7 см. В каждую чашку вводили гусеницу 3-й возрастной стадии и на чашку помещали картонную крышку. Обработка продолжалась три

35 дня, после чего подсчитывали число умерщвленных насекомых и определяли снижение повреждения.

Шкала оценки.

0 — отсутствие какого-либо эффекта.

1 — 10-25 умерщвления..

2 — 26-35 умерщвления.

3 — 26-45 умерщвления.

4 — 46-55 умерщвления.

5 — 56-65- умерщвления.

6 — 66-75 умерщвления.

7 — 76-85 умерщвления, 8 — 86-99 умерщвления.

9 — 100 умерщвления.

Сравнение 23-кето-соединений, Активность против сомнительных нематоспироидов у мышей.

2004545

Активный (2) Пример 6+

Авермектин В1а агликон Неактивный

Милбемицин а г Неактивный

1 — более 50 снижения нагрузки глистов.

2 — 13-82 снижения нагрузки глистов.

Неактивный

Неактивный

Таблица 2

Влияние 23-заместителя Фактора А на его инсектицидную активность я,с я я

10 оа

4 где R> - метил, этил или изопропил; й2 ийз вместе с атомом углерода, к кото- 15 рому они присоединяются, представляют

20 где й2 - гидроксильнэя rpynna; йз - водород:

Ой4 - защищенная гидроксильная группа, Р. (56) Патент США N. 4423209. кл. 260-343, 2R.

1983, Формула изобретения

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ МАКРОЛИДНЫХ АНТИБИОТИКОВ общей формулы!

2 ф Э

- группу:

OR4 гидроксильная группа или ОСОйе

Патент США N. 3950360. кл. 536-7,1.

1976

Таблица 1 группа. где йз - Ci - С4-алкил, незаме-. щенный или замещенный атомом галогена. или ОСОз йъ-группа. где йеа

- С - С4-алкил или бензил, отличающийся тем, что соединение общей формулы II

2004545

Приоритет по признакам:

Составитель

Редактор Г.Мельникова Техред М.Моргентал корректор С.Лисина

Тираж Подписное

Hf1O "Поиск" Роспатента

113035, Москва. Ж-35. Раушская наб., 4/5

Заказ 3377

Производственно-издательский комбинат Патент". г. Ужгород. ул.гагарина. 101 подвергают окислению действием окислителя, таким, как бихромат пиридиния или

N, М-диметилсульфоксид, в присутствии активирующего средства, такого, как оксалилхлорид, в среде органического раство- 5 рителя при температуре от -70 до 22 С с последующим удалением, в случае необхо,димости, щелочным гидролизом защищаемой OR4 - группы, и выделением соединения общей формулы I, где OR4 - 10 гидроксигруппа, или действием ацилирую- щего агента переводят его в соединение общей формулы 1, где OR4 - ОСОйв-группа или ОСО2йь-группа, 15

30.04,85 при R>-ìåòèë, этил или изопропил, и и й1 вместе с атомом углерода, к которому они присоединяются, представляют группу и OR4 - гидроксильная группа или

OCOR в-группа. где йв - С1- С4-алкил. незамещенный или замещенный атомом галог гена:

12.03.86 при Ой4 - ОСО2йв -группа. где йв у

- C> - С4-алкил или бензил.