Способ получения полиаминов или их фармацевтически приемлемых солей

 

Использование: в качестве антагонистов возбудительных аминокислот нейтротрансмиттеров. Сущность изобретения: полиамины, присутствующие в яде паука Agilenopsis aperta, разделяют путем элюирования из колонки С - 18 (22 мм 250 мм, размер пор , размер частиц 10 мкм) с использованием скорости перемещения фронта растворителя 15 мл/мин системы растворителей ацетонитрил и 0,1%-ной водной трифторуксусной кислоты.

Изобретение относится к определенным полиаминам, которые присутствуют в яде паука Agelenopsis aperta. Полиамины и их фармацевтически приемлемые соли являются антагонистами возбудительных аминокислотных нейротрансмиттеров, которые воздействуют на клетки, включая нейронные клетки, целого ряда организмов включая беспозвоночных и позвоночных. Данное изобретение также относится в использованию таких полиаминов и их солей в проявлении антагонизма относительно возбуди- тельных аминокислотных нейротрансмиттеров, которые оказывают воздействие на клетки, например, клетки в нервной системе организма, при лечении заболеваний и состояний млекопитающих, обусловленных возбудительными аминокислотными нейротрансмиттерами, и при уничтожении беспозвоночных вредителей, а также относится к композициям, содержащим указанные полиамины и их соли.

Сообщается, что яд паука Agelenopsis aperta содержит по меньшей мере два токсина, которые оказывают воздействие на кальциевые потоки. Jackson H. , et al. , Soc. Neu. Sci.Adstr, 12:1078 (1987). Данные авторы раскрывают токсин, упоминаемый как AG2, который имеет молекулярную массу менее, чем 1000 дальтон, и, по-видимому, подавляет кальциевые потоки в широком круге тканей. Кроме того, Vackson.H., et al., Soc.Neu.Sci.Abstr. 12:730 (1986), указывают на другой токсин из Agelenopsis aperta, содержащий компонент с мол. м. около 6000. Указывается, что данный токсин воздействует на пресинаптическую блокаду трансмиссии и предполагается, что токсин блокирует кальциевые каналы, ассоциированные с высвобождением нейротрансмиттера.

Некоторые полиамины, присутствующие в яде паука Agelenopsis aperta, раскрываются в заявке на патент США N 07/-346181, 28.IV.89. Эти полиамины и их фармацевтически приемлемые соли раскрываются в данной заявке в качестве блокирующих агентов возбудительных аминокислотных рецепторов в клетках, и один такой полиамин В₁ также раскрывается в качестве блокирующего агента кальциевых каналов в клетках. Описываемые в данной заявке полиамины представляют собой: AGEL 452: AGEL 468: AGEL 448: AGEL 505: ^NH2 AGEL 489:
^NH2 ;
и AGEL 504: соединение, имеющее следующие отличительные характеристики: (а) присутствует во фракции из неочищенного яда паука Agelenopsis aperta, которую элюируют колонкой С-13 Vydaс Vydac®, 22 мм х 250 мм, размер пор 300 , размер частиц 10 мкм, с использованием скорости перемещения фронта растворителя, равной 15 мл/мин, и системы растворителей, применяя программу линейного градиента 5% ->>20% В, 95%->> 80% А/0 ->>30 мин/, затем 20% - >>70% В, 80% ->>30% А/30 ->>55 мин/, где А обозначает 0,1% водный ТФА и В обозначает ацетонитрил, около 22,75 мин; (b) присутствует во фракции, которая описана в (а) выше, которую элюируют колонкой С-18 Vydaс Vudac®, 22 мм х 250 мм, размер пор 300 , размер частиц 10 мкм, с использованием скорости перемещения фронта растворителя, равной 15 мл/мин, и системы растворителей, применяя программу нелинейного градиента 0% ->>0% В, 100%->> ->>100% В/0 ->>5 мин/, затем 0% ->>10% В, 100% ->>90% А/5 ->>20 мин/ (кривая Waters 1), затем 10% ->>20% В ->>90% ->>80% А/20->> 30 мин/ (кривая Waters 6), затем 20% ->>50% В, 80% ->>50% А/30 ->>40 мин/ (кривая 11), где А обозначает 0,1% водный ТФА и В обозначает ацетонитрил, около 21,5 мин; и (с) масс-спектр: высокая разрешающая способность: 505, 3861 в пересчете на С₂₇Н₄₈N₆O₃.

Соединения, являющиеся антагонистами возбудительных аминокислотных нейротрансмиттеров, имеют множество применений. Антагонисты возбудительных аминокислотных нейротрансмиттеров могут найти клиническое применение при лечении таких состояний, как удар, церебральная ишемия, нейронные дегенеративные нарушения, как например, болезнь Альцгеймера и эпилепсия, а также в качестве психотерапевтических средств. (См. Возбудительные Аминокислоты в Здравоохранении, Д. Лодж, Ред. , Джон Уили энд Санз Лтд., Нью-Йорк, штат Нью-Йорк). Кроме того, предлагаемые соединения пригодны в изучении физиологии клеток, таких как нейронные клетки, и в борьбе с беспозвоночными вредителями.

Изобетение касается определенных полиаминов, которые присутствуют в яде паука Agelenopsis aperta. Полиаминами настоящего изобретения являются следующие: AGEL 416:
^NH2 AGEL 464:
NH₂ AGEL 521:
NH₂
Полиамины настоящего изобретения и их фармацевтически приемлемые соли являются антагонистами возбудительных аминокислотных нейротрансмиттеров, которые оказывают воздействие на клетки. Таким образом, указанные полиамины пригодны в проявлении антагонистического действия против таких возбудителей аминокислотных нейротрансмиттеров. Полиамины настоящего изобретения также пригодны в борьбе с беспозвоночными вредителями и в лечении заболеваний и состояний у млекопитающих, которые обусловлены возбудительными аминокислотными нейротранс- миттерами. Такие полиамины также пригодны в качестве психотерапевтических средств в отношении млекопитающих.

Настоящее изобретение также касается фармацевтических композиций, включающих указанные полиамины, и способов введения указанных полиаминов.

Яд получают из паука Agelenopsis aperta при помощи способа доения путем электрической стимуляции в соответствии со стандартными методами, хорошо известными специалистам в данной области техники. Предпочтительно, чтобы используемый метод предохранял от загрязнения яда абдоминальной отрыжкой или гемолимфой. Такие методы хорошо известны специалистам. Полученный таким образом яд хранят в замороженном состоянии при температуре около -78^оС до его использования для очистки как описано ниже.

Очистку компонентов из целого яда осуществляют жидкостной хроматографией высокого разрешения с обращенной фазой (ЖХВР) на различных препаративных или полупрепаративных колонках, таких как колонки С-4 и С-18 Vydaс Vudac®. (Раинин Инструмент Ко., Инк., Мак Роуд, Уобурн, Массачусетс, 01801), колонки С-10 Baker (Дж. Т.Бэйкер Инк., 22 Рэд Скул Лэйн, Филирсбург, Нью Джерси 08865) и колонки Dynamax Phenyl (Раинин Инструмент Ко., Инк., Мак Роуд, Уобурн, Массачусетс, 01801). Обнаружение пиков осуществляют монохроматически при 220-230 нм. Дополнительный анализ фракций можно осуществить, например, с использованием полихромных УФ-данных, собранных детектором на диодной матрице Waters 990 (Миллипор Корпорейшн, Уотерс Хроматогрфии Дивижн, 34 Мэйпл Стрит, Милфорд, Массачусетс 01757). Фракции из колонок собирают известными методами, такими как использование коллектора фракций ISCO/"FOXY" и пикового детектора ISCO 2159(ISOGO, 4700 Супериор, Линкольн, Небраска 68504). Фракции собирают в сосудах соответствующих размеров, таких как стерильная полиэтиленовая лаборатория посуда. Концентрирование фракций затем осуществляют лиофилизацией из элюанта с последующей лиофилизацией из воды. Чистоту полученных фракций затем можно определить хроматографическим анализом с использованием аналитической колонки с градиентной системой, которая является более изократической, нежели система, используемая в конечной очистке фракций.

Структуры, составленные соответствующими фракциями, определяют в соответствии с аналитическими методами, такими, как масс-спектрометрия и ядерный магнитный резонанс.

При осуществлении настоящего изобретения и использовании основных методик, приведенных выше, обнаружено, что пригодной колонкой для начального фракционирования яда является колонка С-18 Vydaс Vudac® размером 22 мм х 250 мм, размер пор 300 , размер частиц 10 мкм. Данную колонку элюируют со скоростью перемещения фронта растворителя, равной 15 мл/мин, с использованием программы линейного градиента 100% ->>80% А, 0% ->>20% В/0->> 30 мин/, где А обозначается 0,1% водную трифторуксусную кислоту (ТФА) и В обозначает ацетонитрил. Фракции собирают так, как описано выше. Полученные таким образом шесть фракций, обозначенные 1, 2, 3, 4, 5 и 6, отбирают для дальнейшего анализа и/или очистки. Другой метод фракционирования целого яда заключается в использовании колонки С-18 Baker (4,6х250 мм, размер пор 100 , размер частиц 5 мкм), которую элюируют с использованием скорости перемещения фронта растворителя, равной 1 мл/мин, и изократических условий 8% В, 92% А, где А и В имеют вышеприведенные значения. Однако для целей настоящего изобретения использование колонки С-13 Vydaс Vudac® и методики, описанной выше, предпочитают для начального фракционирования целого яда.

Фракции 1,2 и 3 содержат полиамины (США N 07/346181), составляют часть настоящего изобретения. Фракции 4, 5 и 6 подвергают дальнейшей очистке с использованием различных колонок и условий очистки. Специфика каждого субфрак- ционирования и их результаты приведены в примерах 2, 3 и 4 ниже.

Как показано в следующих примерах соединениями полиаминов, которые содержатся во фракциях AGEL 416, AGEL 464 и AGEL 521, являются следующие:
AGEL 464:
AGEL 521:
^NH2
Теперь можно получить указанные соединения методами иными, нежели с использованием выделения/очистки из цельного яда пауков Agelenopsis aperta. Все методы находятся в пределах объема настоящего изобретения. Например, полиамин-соединения могут быть получены непосредственно синтетическими способами.

Синтетическая схема получения полиамина настоящего изобретения формулы
приведены в реакционнных схемах А - С ниже.

Полиамиды настоящего изобретения обратимо антагонизируют возбудительные аминокислотные нейротрансмиттеры/ которые оказывают воздействие на клетки/ такие как клетки в нервной системе целого ряда организмов/ включая безпозвоночные и позвоночные. Используемый здесь термин "позвоночные" предполагает млекопитающих. Термин "безпозвоночные" обозначает/ например/ насекомых/ экопаразитов и эндопаразитов.

Способность полиаминов настоящего изобретения вызывать антагонизм относительно возбудительных аминокислотных нейротрансмиттеров продемонстрирована их способностью блокировать повышение уровней циклического гуанозин-3' , 5' -монофосфата (сGMP), индуцированное N-метил-D-аспарагиновой кислоты (NMDA), в мозжечках неонатальных крыс в соответствии со следующей методикой. Мозжечки от десяти крыс Wistar в возрасте 8-14 дней быстро извлекают и помещают при температуре 4^оС в смеси раствор Кребса/бикарбонатный буфер, рН 7,4, и затем разрезают на участки размером 0,5х0,5 мм с использованием тканевого ножа Mclwain (Дзе Никл Лаборатори Инжиниринг Ко., Гомшелл, Суррей, Англия). Полученные кусочки мозжечка переносят в 100 мл смеси раствор Кребса/бикарбонатный буфер при температуре 37^оС, которые постоянно уравновешивают смесью 95: 5 O₂/CO₂. Кусочки мозжечка инкубируют таким образом в течение 90 мин при трех заменах буферного раствора. Затем буферный раствор декантируют, ткань центрифугируют (1 мин, 3200 об/мин) и ткань ресуспендируют в 20 мл раствора Кребса/бикарбонатного буфера. Затем извлекают 250 мкл аликвоты (приблизительно 2 мг) и помещают в 1,5 мо микроцентрифужную пробирку. В пробирки прибавляют 10 мкл соединения из основного раствора с последующим прибавлением 10 мкл 2,5 мм раствора NMDA с тем, чтобы начать реакцию. Конечная концентрация NМDA составляет 100 мкМ. Контрольные пробирки не имеют NMDA. Пробирки инкубируют в течение 1 мин при 37^оС во встряхиваемой водяной бане, после чего прибавляют 750 мкл 50 мМ Трис-НСl, 5 мМ ЭДТК для того, чтобы остановить реакцию. Пробирки помещают немедленно в ванну с кипящей водой на 5 мин. Содержимое каждой пробирки затем обрабатывают ультразвуком в течение 15 сек с использованием зондовой ультразвуковой установки, установленном на уровне мощности, равной трем. 10 мкл извлекают и белок определяют методом Lowry, Anal.Bio- chem. 100:201 (1979). Затем пробирки центрифугируют (5 мин, 10000 х г), извлекают 100 мкл надосадочной жидкости и уровень циклического GMP (сGMP) анализируют с использованием радиоиммунного анализа сGMP Нью Инглэнд. Ньюклиа (Бостон, Массачусетс) в соответствии с методом поставщика. Данные приведены в виде ммоль сGMP, выработанного на мг белка.

Кроме того, способность полиаминов настоящего изобретения вызывать антагонизм относительно возбудительных аминокислотных нейротрансмиттеров демонстрируется их способностью блокировать NMDA/глицин-индуцированные повышения уровней цитозольный свободных (Са⁺²) в диссоциированных клетках мозжечковых гранул в соответствии со следующей методикой. Клетки мозжечковых гранул получают из мозжечка 8-дневных крыс (Wilkin, G.P. et al., Brain Res. 115, 181-199, 1976). Квадраты (1 см²) Aclar (Протопластикс Инк., 5033 Индастриал Авенью, Уолл, Нью-Йорк 07719) покрывают поли-L-лизином и помещают в 12-ячейковые чашки, которые содержат 1 мл основной питательной среды Игла. Клетки диссоциируют и аликвоты, содержащие 6,25х10⁶ клеток, прибавляют в каждую ячейку, содержащую квадраты Aclar. После пассирования культуры клеток на чашках (через 24 ч) прибавляют цитозинбета-D-арабинофуранозид (конечная концентрация 10 мкМ). Клетки используют для фура2-анализа на 6, 7 и 8-е дни культивирования. Клетки (присоединенные к квадратам Aclar) переносят к 12-ячейковым чашкам, содержащим 1 мл 1 мкМ фура2/АМ (Молекьюлар Проубс Инк., Юджин, Орегон) в буферном растворе НЕРЕS (содержащем 0,1% бычий сывороточный альбумин, 0,1% дестрозу, рН 7,4, свободный от магния). Клетки инкубируют в течение 40 мин при 37^оС фура2/АМ-содержащий буферный раствор удаляют в замещают 1 мл того же буферного раствора без фура2/АМ. В кварцевую кювету прибавляют 2,0 мл предварительно нагретого (37^оС) буферного раствора. Клетки на Aclar помещают в кювету, которую вставляют в термостатируемый (37^оС) держатель, снабженный магнитной мешалкой, и флуоресценцию измеряют флуоресцентным спектрофотометром (Биомедикал Инструмент Групп, Университет штата Пенсильвания). Флуоресцентный сигнал стабилизируют в течение приблизительно 2 мин.

Повышение уровня цитозольного свободного кальция, представленное возрастанием флуоресценции, продуцируют путем прибавления 50 мкл NMDA и 1 мкМ глицина. Затем в кювету прибавляют 5-20 мкл основного раствора соединения в фосфатно-буферном солевом растворе (ФБС, рН 7,4) при соответствующих концентрациях. Калибровку флуоресцентных сигналов и коррекцию утечки фура2/АМ осуществляют с использованием установленных методик Grynkiewicz, G. et al., J. Biol. Chem. 260:3440 (1985). После завершения каждого испытания значение максимальной флуоресценции (F_max) определяют путем прибавления йономицина (35 мкМ), а значение минимальной флуоресценции (F_min) определяют последующим прибавлением ЕGТA (12 мМ) к хелатному кальцию. Используя вышеприведенную методику, можно показать способность искомого соединения антагонизи- ровать возбудительные аминокислотные нейротрансмиттеры вследствие понижения флуоресценции после прибавления искомого соединения.

Полиамины настоящего изобретения пригодны в оказании антагонистического действия против возбудительных аминокислотных нейротрансмиттеров. Как таковые, полиамины также пригодны в борьбе с беспозвоночными вредителями и в лечении заболеваний и состояний, опосредованных возбудительными аминокислотными нейротрансмиттерами, у млекопитающих, причем такими заболеваниями являются удар, церебральная ишемия, нейронные дегенеративные растройства, такие как болезнь Алцгеймера и эпилепсия. Указанные полиамины также пригодны в качестве психотерапевтических средств у млекопитающих. Кроме того, полиамины пригодны при исследовании физиологии клеток, включая, но не ограничиваясь, клетки нервной системы.

В пределах объема настоящего изобретения находятся и фармацевтически приемлемые соли полиаминов настоящего изобретения. Такие соли образованы хорошо известными способами. Например, кислые аддитивные соли полиаминов могут быть получены в соответствии с традиционными методами. Кислые аддитивные соли полиаминов, такие как хлористоводородные и трифторуксусные кислые аддитивные соли являются предпочтительными. Особенно предпочтительны хлористоводородные кислые аддитивные соли полиаминов.

Полиамин или его фармацевтически приемлемую соль можно ввести млекопитающему или в сочетании с фармацевтически приемлемыми носителями или разбавителями в фармацевтической композиции в соответствии со стандартной фармацевтической практикой. Полиамины или их фармацевтически приемлемые соли могут быть введены перрорально или парентерально. Парентеральное введение включает внутривенное, внутримышечное, внутрибрюшинное, подкожное и локальное введение.

Для перорального использования полиамина или его фармацевтически приемлемой соли настоящего изобретения соединение можно вводить, например, в форме таблеток или капсул, или же в виде водного раствора или суспензии. В случае использования перорально вводимых таблеток обычно используемыми носителями являются лактоза и кукурузный крахмал, а также смазочные агенты, такие как стеорат магния. Для перорального введения в форме капсулы пригодными разбавителями являются лактоза и сушеный кукурузный крахмал. Когда для перорального использования назначают водные суспензии, активный компонент комбинируют с эмульгатором или суспендирующим агентом. При желании могут быть добавлены определенные подслаивающие и/или вкусовые вещества.

Для внутримышечного, внутрибрюшинного, подкожного и внутривенного использования обычно получают стерильные растворы активного компонента, рН растворов должен быть надлежащим образом отрегулирован и отбуферован. Для внутривенного использования общая концентрация растворов должна регулироваться с тем, чтобы препарат стал изотоническим.

При использовании полиамина или его соли в соответствии с изобретением для человека суточная доза обычно определяется врачом. Однако пригодные дозировки полиаминов настоящего изобретения составляют около 3-30 мг/кг/день. Кроме того, дозировка будет варьироваться в зависимости от возраста, веса и реакции отдельного пациента, а также от тяжести симптомов пациента и потенции вводимого соединения. Следовательно, возможны дозировки за пределами указанного диапазона и они находятся в пределах объема настоящего изобретения.

При использовании полиамина или его соли в борьбе с беспозвоночными вредителями данное соединение вводят беспозвоночному непосредственно или в окружающую данное беспозвоночное среду. Например, соединение настоящего изобретения можно распылять в качестве раствора на указанное беспозвоночное. Количество соединения, необходимое для уничтожения данного вредителя, варьируется в зависимости от вида беспозвоночного и окружающих условий и определяется тем лицом, которое осуществляет применение соединения.

При использовании полиамина или его фармацевтически приемлемой соли для физиологического исследования клеток указанное соединение вводят в клетки в соответствии с известными методами в данной области техники. Например, указанное соединение можно вводить в клетки в подходящем физиологическом буферном растворе. Подходящая концентрация соединений настоящего изобретения для использования при таких исследованиях составляет 100 мкМ. Однако концентрация указанных соединений в таких исследованиях может быть выше или намного ниже, чем 100 мкМ. Количество вводимого соединения определяет специалист в соответствии с хорошо известными методами.

П р и м е р 1. Начальное фракционирование яда Agelenopsis aperta
Цельный яд паука Agelenopsis aperta, полученный из Нэйчурал Продукт Сайенсез, Инк. , Солт Лэйк Сити, Юта 84108, и хранимый в замороженном состоянии при температуре -78^оС, оттаивают, и 10-60 мкл его разбавляют до 200 мкл и нагружают на колонку С-18 Vydaс Vudac® (22х150 мм, размер пор 300 , размер частиц 10 мкм) и элюируют с применением скорости перемещения фронта растворителя, равной 15 мл/мин, и системы растворителей, используя программу линейного градиента 0% ->>20% В, 100% ->>80% А/0 - 30 мин/, где А и В обозначают соответственно 0,1% водную трифторуксусную кислоту (ТФА) и ацетонитрил. Пиковое обнаружение осуществляют монохроматически при 220 км и фракции собирают фракционным коллектором ISCO/"FOXY" и пиковым детектором ISCO 2159. Фракции собирают в течение 0-30 мин. На основе пикового обнаружения собирают, кроме других, следующие фракции: Фракция Время
элюирова-
ния, мин 1 около 13,8 2 около 19,25 3 около 21,0 4 около 22,3 5 около 23,1 6 около 26,0 Фракцию 1 субфракционируют с использованием той же самой колонки и условий, описанных выше, однако с применением детектора на диодной матрице Waters 990, и обнаружено, что фракция 1 содержит полиамин AGEL 452. Данный полиамин описан в находящейся на рассмотрении заявке на патент США N 07/346181 и не составляет часть настоящего изобретения. Фракция 2 аналогична описанной для субфракционирования фракции 1, и обнаружено, что фракция 2 содержит полиамин AGEL 448 и полиамин AGEL 468, которые описаны в указанной заявке на патент США N 07/346181. Ни один из этих полиаминов не составляет часть настоящего изобретения. Кроме того, фракцию 3 субфракционируют с использованием колонки С-4 Vydaс Vudac® (22х250 мм, размер пор 300 , размер частиц 10 мкм), используя линейный градиент 5% ->>10% В, 95% ->>90% А/0 - 30 мин/, где А и В имеют вышеприведенные значения, а также детектор на диодной матрице Waters 990. Обнаружено, что фракция 3 содержит полиамины 504 и 505, которые также описаны в заявке на патент США N 07/346181 и которые не составляют часть настоящего изобретения.

П р и м е р 2. Субфракционирование фракции 4 и определение структуры.

Фракцию 4, полученную как описано в примере 1, загружают в колонку С-18 Baker (4,6х250 мм, размер пор 300 , размер частиц 5 мкм) и элюируют с использованием скорости растекания 1 мл/мин и изократических условий 8% В, 92% А, где А и В имеют определенные в примере 1 значения. Пиковое определение осуществляют с использованием детектора на диодной матрице Waters 990 (λ= 220 нм) и сбор фракций осуществляют в соответствии с описанием примера 1. Субфракцию, отмеченную в форме AGEL 521, элюируют из колонки в течение приблизительно 19,50 мин. Фракцию AGEL 521 получают для спектрального анализа лиофилизацией из элюента с последующей лиофилизацией из воды в соответствии со стандартными методами. Лиофилизированное соединение фракции AGEL 521 сохраняют при температуре около -80^оС в атмосфере аргона до использования.

Затем с помощью масс-спектроскопии определяют структуру соединения, которое содержится во Фракции AGEL 521. Полученные таким образом данные и выведенная структура представляют собой следующее
AGEL 521:
Масс-спектроскопия: (высокое разрешение) наблюдаемое (М + Н)М/Z = = 522,3774 в пересчете на С₂₆Н₄₈N₇O₄ (Требуется 522, 3768).

Структура: 1Н-индол-3-ацетамид-N-(20-амино-4,8-дигидрокси-4,8,12,17-тетраазеикоз-1-ил).

^NH2
П р и м е р 3. Субфракционирование фракции 5 и определение структуры.

Фракцию 5, полученную как описано в примере 1, загружают в колонку Dynamax Phenyl (4,6х250 мм, размер пор 60 , размер частиц 8 мкм) и элюируют с использованием скорости перемещения фронта 1 мл/мин и изократических условий 10% В, 90% А, где А и В имеют приведенные в примере 1 значения. Пиковое определение и сбор фракций осуществляют как описано в примере 2. Фракции, помеченные AGEL 416 и AGEL 464, получают следующим образом: Фракция Время элюирования, мин AGEK 416 около 26,47 AGEL 464 около 37,76
Фракции AGEL 416 и AGEL 464 получают для спектрального анализа и хранят в соответствии с методами, приведенными в примере 2.

Структуру соединения, соединяющего во фракции AGEL 416, определяют с использованием масс-спектроскопии, и результаты приведены ниже:
Масс-спектр: (высокая разрешающая способность) наблюдаемое (М + Н)М/Z = = 417,3336 (в пересчете на С₂₃Н₄₁N₆O₄ (Требуется 417, 3342). Структура: 1Н-индол-3-ацетамид-N-(16-амино-4,8,13-триазагекса- дец -1-ил)
NH₂ Структура соединения, соединяющего во фракции AGEL 464, определяется масс-спектроскопией и приводится ниже:
Масс-спектроскопия: (высокая разрешающая способность) обнаруживаемое (М + Н)М/Z = 465:3173 в пересчете на С₂₃Н₄₁N₆O₄ (требуется 465,3189).

Структура: 1Н-индол-3-ацетамид-N-(16-амино-4,8-дигидрокси-4,8,13-триазагекса- дец -1-ил)-4-гидрокси
NH₂

Формула изобретения

Способ получения полиаминов, выбранных из группы, состоящей из
;;
,,
где R - водород или окси,
или их фармацевтически приемлемых солей, отличающийся тем, что цельный яд паука Agelenopsis aperta элюируют на первой стадии из колонки С-18 Vydac^R (22 · 250 мм, размер пор 300 , размер частиц 10 мкм) с использованием скорости перемещения фронта растворителя 15 мл/мин системы растворителей с применением программы линейного градиента 0% → 20% ацетонитрила 100% → 80% 0,1% -ной водной трифторуксусной кислоты, а также монохроматического определения пиков при 220 нм, при этом элюируют фракции со временем выхода приблизительно 22,3 и 23,1 мин, собирают и элюируют первую фракцию из колонки С-18 Baker (4,6 · 250 мм, размер пор 300 , размер частиц 5 мм) с применением скорости перемещения фронта растворителя 1 мл/мин, изократических условий 8% ацетонитрила и 92% 0,1%-ной водной трифторуксусной кислоты и пикового определения при 220 нм с элюированием в течение 19,5 мин, собирают и необязательно лиофилизируют, ресуспендируют в воде и лиофилизируют из воды с получением соединения формулы
NH₂
элюированную на первой стадии фракцию со временем выхода 23,1 мин элюируют из колонки Dynamax Phenye (4,6 · 250 мм, размер пор 60 , размер частиц 8 мкм) с применением скорости перемещения фронта растворителя 1 мл/мин, изократических условий 10% ацетонитрила и 90% 0,1%-ной водной трифторуксусной кислоты и пикового определения при 220 нм, при этом фракции, которые элюируют приблизительно при времени выхода 26,47 и 37,76 мин, собирают и необязательно лиофилизируют, ресуспендируют в воде и лиофилизируют из воды с получением соответственно соединений формулы
NH₂;;
..