Способ регуляции воспроизводительной функции у самок

 

Использование: ветеринария. Сущность изобретения: для восстановления эстрального цикла у нециклирующих самок (с высокой степенью синхронизации эструса), имеющих функциональные расстройства яичников, самкам вводят внутримышечно ганглиоблокатор бензогексоний в дозе 2 мг/кг массы с интервалом 6 ч до наступления эстрального цикла. 4 табл.

Изобретение относится к ветеринарии, в частности к акушерству и гинекологии.

Известны способы восстановления воспроизводительной функции у бесплодных животных, имеющих функциональные расстройства яичников путем введения стимулирующих лекарственных препаратов, преимущественно гормонов (С.А.Сысоев, Физиология размножения с.-х. животных, М. "Колос", 1978, с. 142; А.П.Студенцов и др. "Ветеринарное акушерство и гинекология", М. "Колос", 1980, с. 374-384; И. Е.Мозгов и др. "Гормоны в животноводстве", М. "Колос", 1977, с. 34, 112, 125, 146; Н.И.Полянцев, А.Н.Синявин "Акушерско-гинекологическая диспансеризация на молочных фермах", М. Росагропромиздат, 1989, с. 116-125; А. И.Сергиенко "Профилактика бесплодия крупного рогатого скота", М. "Колос", 1984, с. 136-160; Н.И.Полянцев "Практические советы по борьбе с яловостью коров", М. Россельхозиздат, 1986, с. 158; А.с. 709063, А 61 В 17/00; В.Г. Вогралик "Основы китайского лечебного метода чженьцзю", Горький, 1961 и др. (А.с. 1216844, А 01 К 67/02, 1992, Бюл. N 40).

Недостатками этих способов являются их факультативность, наличие побочных явлений, трудоемкость, связанная с повторностью манипуляций, и т.д.). (Tripathi S.S. Brattacharya A.K. Luhture S.N. Influence of administration of massivedoses of oestrogens and progesterone on reproduction in heifers and conss. "Indian Vet"), 1979, 56, N 1, 41-44).

Поскольку регуляция половой цикличности осуществляется согласно воздействию нейроэндокринной системы, то известно также средство, способствующее улучшению проводимости нервных волокон прозерин (И.Е.Мозгов, Фармакология, М. "Колос", 1969, с. 130), которое применяют для устранения дисфункций яичников у самок животных.

Препарат рекомендуется применять в комплексе с другими биологически активными (в основном гормональными) веществами (Н.И.Полянцев "Практические советы по борьбе с яловостью коров", М. Россельхозиздат, 1986, с. 158 и др. ).

К недостаткам этого способа относится низкая эффективность при самостоятельном использовании и отсутствие синхронизирующего эффекта.

Целью изобретения является восстановление эстрального цикла у нециклирующих самок (с высокой степенью синхронизации эструса), имеющих функциональные расстройства яичников.

Поставленная цель достигается тем, что самкам вводят внутримышечно ганглиоблокатор бензогексоний в дозе 2 мг/кг массы с интервалом 6 ч до наступления эстрального цикла. Под влиянием бензогексония тормозится передача возбуждения с преганглионарных на постганглионарные волокна, вследствие чего снимается чрезмерная функциональная нагрузка с яичников со стороны вегетативной нервной системы, что дает толчок к выделению экстрогенов, фолликулогенезу и восстановлению работы обратных связей в системе гипоталамус-гипофиз-яичники.

Это не имеет существенного значения в норме, но очень важно при функциональном расстройстве органов (И.Е.Мозгов, Фармакология, М. "Колос", 1969, с. 152).

Сопоставительный анализ заявляемого решения с прототипом показывает, что предлагаемый способ отличается от известного тем, что позволяет повысить эффективность восстановления половой цикличности с высокой степенью синхронизации эструса.

Это достигается за счет того, что на уровне ЦНС прерывается контроль за ответной реакцией гуморальной системы на появление дисфункции какого-либо органа. Таким образом может меняться активность альфа- и бета-адренорецепторов, например, во время прекращения циклирования, соответственно меняется восприятие эстрогенов и прогестерона маткой. А снижение выработки адреналина вследствие ганглиоблокирования приведет к уменьшению биосинтеза гормонов в корковом веществе надпочечников (Т.Д.Травянко, Я.П.Сольский. Справочник по акушерство-гинекологической эндокринологии, Киев, 1989 г. с. 8, 9) и соответственно уменьшению выделения АКТГ передней долей гипофиза, что будет способствовать индукции половой охоты у самок (D.T.Stoebel, ey. P. Moberg. Effect adrenocorticotropin and cortisol on luteinizing hormone surge and oestrous behovior of cows, "J. Dairy. Sci", 1981, 65, N 6, p. 1016-1024).

Основные исследования проведены на самках крыс в трех опытах.

В первых двух опытах определялось влияние бензогексония (2 мг/кг через 6 ч) на эстральный цикл крыс с регулярным циклированием и влияние бензогексония на эстральный цикл крыс с отсутствием цикличности. При этом проводили взятие крови на определение гормонального статуса у интактных крыс и крыс, подвергнутых обработке бензогесонием.

Наблюдения за эстральным циклом интактных животных, подобранных в опытные группы, показали, что продолжительность эстрального цикла колебалась от 4 до 5 сут, т.е. попадались крысы, как с укороченным, так и удлиненным половым циклом.

Течковый период (проэструс и эструс ПЭ) этих самок был 1,63±0,08 сут или 40,3% от всего цикла. Он был короче межтечковой фазы (p<0,001), состоящей из метэструса и диэструса (МД) с длительностью 2,28±0,09 сут, что составило 57,1% Продолжительность эструса у самок с укороченным и удлиненным циклами не различалась, а вот длительность межтечкового периода у крыс с удлиненным циклом превышала таковую у самок с укороченным циклом (p<0,01). Таким образом, продолжительность эстрального цикла (ЭЦ) крыс в основном зависит от длительности межтечкового периода, что подтверждается и другими исследователями.

В первом опыте, где изучали влияние бензогексония на эстральный цикл крыс с регулярным циклированием были получены следующие результаты (табл.1).

У крыс за 15 сут до введения бензогексония частота встречаемости течки составила в среднем 3,33, продолжительность эстрального цикла составила в среднем 4,96 сут, период проэструса и эструса составил 1,87 сут, а продолжительность метаэструса в совокупности с диэструсом была равна 3,03 сут.

После начала обработки бензогексонием в течение 15 сут частота встречаемости течки снизилась на 40,0% и составила в среднем 2,0±0,35 (p<0,01). При этом продолжительность эстрального цикла у обрабатываемых животных составила 5,3±0,75 сут, что на 6,8% больше продолжительности эстрального цикла в период до обработки. Период ПЭ охватывал в среднем 1,58 сут, что на 15,6% меньше периода до обработки. Время МД охватывало 4,0 сут, что превышает это значение до обработки на 32,0% Продолжительность первого эстрального цикла в среднем составила 8,0 сут (p<0,001). Период протекания ПЭ был равен 1,5 сут (p>0,1), а МД 5,83 сут (p<0,001). День наступления первой течки 6,3 сут.

Таким образом, применение ганглиоблокатора крысам, имеющим регулярное циклирование, вызывает нарушение цикличности, что выражается в снижении частоты встречаемости течки, количество половых циклов снижается до одного (83,4% самок) за исследуемый период; удлинении 1-го цикла после начала введений; увеличении продолжительности межтечковой фазы 1-го цикла; отсутствии полового цикла у 16,7% крыс (N 5) за исследуемый период; нарушении синхронности проявления эструса (>±1,0 сут) во втором половом цикле у 50,0% самок крыс.

Во втором опыте, где изучали влияние бензогексония на индукцию эстрального цикла у крыс со спонтанным нарушением цикличности (анафродизия), были получены следующие результаты, (табл.2).

После начала обработки крыс бензогексонием средняя частота встречаемости течки 2,67±0,18(p<0,001), день наступления первого эструса равен 3,0 сут, что высокодостоверно по сравнению с результатами обработки в первом опыте. Синхронность при этом ±0,0 cут. Продолжительность эстрального цикла в среднем 5,83±1,15 сут, что превышало этот показатель по первому опыту (после обработки бензогексонием) всего на 10,0% Длительность периода ПЭ в среднем составила 1,58±0,27 сут, МД 4,0±0,79 сут. Оба показателя были равны этим значениям первого опыта.

Применение бензогексония крысам с анафродизией вызывает появление цикличности со следующими характеристиками: у нециклирующих крыс применение ганглиоблокатора индуцирует появление эстральных циклов; продолжительность и фазовая структура ЭЦ крыс 1 и 2-й групп после применения блокатора не имеют достоверных различий;
появление эструса проявляется на 3,0±0,0 cут после начала обработки бензогексонием у 100% самок крыс;
синхронность появления эструса после начала обработки бензогексонием составила ±0,0 cут;
введение блокатора приводит к укорочению периода от момента начала введения до дня с регистрируемым эструсом у крыс нециклирующих (2 гр.) по сравнению с данными у циклирующих крыс (1 гр.);
отсутствие синхронности (>±1,0 сут) второго эструса у 33,4% самок крыс;
количество половых циклов возрастает до двух.

В третьем опыте изучали действие прозерина (0,2 мл/гол 0,05% ра-ра в сутки трехкратно), на индукцию эстрального цикла у крыс с отсутствием цикличности (табл.3).

После начала обработки прозерином средняя частота встречаемости течки 1,33±0,22 (p<0,001), что на 49,8% меньше этого значения во втором опыте. День наступления первого эструса 3,25±0,74 сут, что на 8,3% больше, чем во втором опыте. Синхронность наступления эструса после начала обработки прозерином колебалась 2 -9 сут. Продолжительность ЭЦ в среднем 8,0±0,57 сут, что на 37,2% превышало этот показатель в предыдущем опыте. Время протекания ПЭ и МД составило соответственно 1,75±0,14 и 5,75±0,94 сут. В обоих случаях было увеличение на 10,7 и 43,7% соответственно.

В результате установлено, что применение прозерина нециклирующим крысам вызывает индукцию эстрального цикла, характеризующегося
появлением эструса на 3,25±0,74 сут;
у 33,3% обработанных крыс отсутствовала половая цикличность;
у 100% обработанных крыс межтечковая фаза цикла превышает физиологическую в 1,4 раза;
отсутствие синхронности (>±1,0 сут) в первом и втором эструсе у 50,0% от числа циклирующих крыс после обработки;
наличием одного полового цикла за исследуемый период (15 сут).

Проведенные исследования влияния бензогексония на гормональный фон нециклирующих крыс показали следующие результаты (табл.4).

У интактных регулярно циклирующих крыс в предтечковый период (проэструс) наблюдаются максимальные уровни тестостерона (Т) и эстрадиола (Е₂) и минимальные концентрации прогестерона (Δ⁴p) в крови. В период эструса, когда в яичниках уже произошла овуляция, содержание Е₂ и Т достоверно снижалось (гр. 2). В диэструсе, который характеризуется наличием в гонадах функционально активных ЖТ (гр.3), значительно возрастает концентрация Δ⁴p. Cодержание Т и Е₂ увеличивается по сравнению с эструсом (гр.2) за счет развития в этот период малых антральных фолликулов, но еще не достигает преовуляторных значений, наблюдаемых в проэструсе.

Отношение E₂Δ⁴p от проэструса (гр.1) к диэструсу (гр. 3) существенно варьирует. Наибольшее значение оно имеет в проэструсе, когда в крови регистрируются высокие уровни эстрогена и становится низким в диэструсе при наибольшем содержании Δ⁴p. Это свидетельствует о разнонаправленном характере изменений этих стероидов в ходе ЭЦ и определяется сменой функционально активных генеративных элементов гонад.

Отношение Е₂/T у циклирующих крыс практически не меняется. Синхронное изменение этих гормонов свидетельствует об общем их источнике в яичниках, т. е. развивающихся фолликулах.

У интактных крыс со спонтанным нарушением ЭЦ (в мазках в течение продолжительного времени был диэструс) уровень всех определяемых гормонов характеризуется высоким содержанием Δ⁴p и низким уровнем андрогена и эстрогена (гр. 4) и не отличается от таковых у циклирующих животных в диэструсе (гр. 3).

Таким образом, нарушение цикличности у крыс вероятно связано с задержкой инволюции ЖТ и созревания фолликулов.

Введение г-блокатора восстанавливает ЭЦ у нециклирующих (НЦ) крыс. У самок, декапитированных в первом индуцированном проэструсе (гр. 5), уровень Δ⁴p уменьшался в 4 раза по сравнению с данными у НЦ самок до введения (гр.4) и был даже ниже, чем у циклирующих крыс в проэструсе (гр.1). Отмечено также и достоверное снижение концентрации Т у подопытных животных (гр. 5) по сравнению с таковыми у самок 4 и 1 групп. Напротив содержание Е₂ повышалось до значений, имевших место у интактных крыс в проэструсе (гр.1), а отношение E₂/Δ⁴p превышало таковое у самок 1 группы. Увеличение уровня Е₂ в условиях введения г-блокатора скорее всего связано с активацией ферментативных систем, участвующих в биосинтезе эстрогенов. В подтверждение этому нами установлено снижение содержания Т и Δ⁴p, являющихся предшественниками эстрогенов. Вместе с тем не следует исключать тот факт, что г-блокатор может одновременно ингибировать превращение прегненолона в Δ⁴p, что вызывает такое уменьшение его уровня в крови после воздействия. Однако данный вариант рассуждений неприемлем, поскольку предположение о том, что г-блокатор тормозит биосинтез прогестинов, а следовательно, андрогенов и эстрогенов, что могло бы привести в последующем к нарушению репродуктивных процессов. Тем не менее нами было ранее показано, что восстановившийся регулярный ЭЦ у НЦ крыс наблюдался в течение 2-х недель после введения г-блокатора. Следовательно, усиление биосинтеза эстрогенов в условиях блокады нервной проводимости сопряжено с ускорением созревания фолликулов, а гормональный фон у подопытных крыс в индуцированном проэструсе соответствует преовуляторному состоянию.

Основным преимуществом предлагаемого способа по сравнению с базовым объектом (прототип) является индуцирование эструса у 100% нециклирующих самок, подвергнутых обработке бензогексонием с высокой степенью (±0,0 сут) синхронизации в первом эструсе.

Эффективность от использования предлагаемого способа, включенного в различные схемы по профилактике и лечению гинекологически больных самок животных, исчисляется повышением их уровня и снижением затрат на лечебные мероприятия.

Формула изобретения

Способ регуляции воспроизводительной функции у самок посредством введения медикаментозных средств, отличающийся тем, что в качестве медикаментозного средства для индукции экстральных циклов у нециклирующих самок, имеющих функциональные расстройства репродуктивных органов, вводят ганглиоблокатор бензогексоний в дозе 2 мг/кг внутримышечно с интервалом 6 ч до появления признаков течки.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4