Антибактериальное средство для лечения заболеваний сельскохозяйственных животных и птиц, способ профилактики и лечения цыплят при заболеваниях бактериальной этиологии, способ лечения респираторной болезни телят бактериальной этиологии, способ профилактики туберкулеза у крупного рогатого скота

 

Группа изобретений относится к ветеринарии. Антибактериальное средство для лечения заболеваний бактериальной этиологии сельскохозяйственных животных и птиц представляет собой эмульсию липосом, мембрана которых содержит липиды, экстрагированные из органов и тканей крупного рогатого скота, с включенным в них антибиотиком класса аминогликозидов в эффективном количестве для парентерального и перорального применения. Способ профилактики и лечения цыплят при заболеваниях бактериальной этиологии включает смешивание заявляемого липосомального стрептомицина с кормом и скармливание в первые 7 дней и на 28-32 дни жизни птицы из расчета 14,3-20,0 мг антибиотика на 1 кг живой массы. Способ лечения респираторной болезни телят бактериальной этиологии включает внутримышечное введение заявляемого липосомального стрептомицина один раз в трое суток в дозе 6,20-6,25 мг антибиотика на 1 кг живой массы в течение 9-12 дней. Способ профилактики туберкулеза у крупного рогатого скота включает внутримышечное введение животным с положительной туберкулиновой пробой заявленного липосомального стрептомицина в дозе 20,0-21,0 мг антибиотика на 1 кг живой массы один раз в трое суток в течение двух месяцев с одновременным пероральным использованием тубазида с кормом. Изобретение обеспечивает пролонгированное действие препарата, снижение его токсического воздействия, повышение эффективности антибиотикотерапии, в том числе внутриклеточной инфекции. 4 с.п. ф-лы, 3 табл.

Группа изобретений относится к лекарственным средствам в липосомальной форме с включенным в них антибиотиком и может быть использована для лечения сельскохозяйственных животных и птиц бактериальной этиологии.

В условиях массового производства сельскохозяйственных животных и птиц очень высока вероятность инфицирования их рядом патогенных бактерий (Salmonella enterotidis, Е. Coli, Stapfilococcus aureus, Mycobacterium tuberculosis и др.).

Эти бактерии in vitro наиболее чувствительны к аминогликозидным антибиотикам, например стрептомицина сульфату.

Однако использование этого препарата проблематично и в клинической практике известно его применение в сочетании с другими антибиотиками, например пенициллином при лечении туберкулеза (С.М. Навашин, И.П. Фомина. Справочник по антибиотикам, М., "Медицина", 1974, с. 202-212).

Это связано с тем, что, являясь антибиотиком с бактерицидным типом антимикробного действия, стрептомицин подавляет размножение лишь внеклеточно расположенных возбудителей и малоактивен в отношении находящихся внутри клеток.

Кроме того, в стрептомицинотерапии наблюдается быстрое появление устойчивых к антибиотику штаммов бактерий. Нарушение метаболизма, происходящее в результате контакта микробной клетки со стрептомицином, сопровождается нарушением белкового синтеза и диффузией в окружающую среду аминокислот, нуклеотидов и ионов калия, то есть все факторы, препятствующие размножению клеток или синтезу белка в неразмножающихся клетках, уменьшают поглощение стрептомицина и ослабляют его микробную активность.

При накоплении в организме даже небольших доз антибиотика могут возникнуть тяжелые нейротоксические реакции.

Лекарственные препараты стрептомицина вводят в организм парентерально. При пероральном применении антибиотик всасывается плохо, а в виде аэрозолей и per rectum не всасывается, оказывая лишь местное действие.

В последнее время активно развивается применение лечебных препаратов в липосомальной форме. Это обусловлено тем, что лекарственный препарат, включенный в липосомальную мембрану обладает пролонгированностью действия и не вызывает токсических последствий.

Самым существенным фактором, определяющим преимущества липосомальных носителей перед другими, является функциональная активность липидов, формирующих мембрану липосом.

В ряде исследований выявлена роль различных липидов при их воздействии на макроорганизм.

При ингаляторном лечении дыхательных путей липосомами, состоящими из фосфатидилхолина и холестерина, нормализуется уровень лактана в крови, предотвращается развитие ацидоза, ингибируются процессы перекисного окисления.

Подавляющей активностью к микробицидной среде против бактерий обладают фосфатидилсерин или лизофосфатидилсерин.

Важную роль играют гликолипиды (ганглиозиды), участвующие в межклеточных взаимодействиях и являющихся специфическими рецепторами биологически активных веществ (А. с. СССР N 1699343, A 61 K 9/127, 15.12.91, Бюл. N 46; В.И. Швец, Ю. М. Краснопольский, Вестн. Акад. мед. наук СССР, N 6, 1990, с. 19-28).

Рецепторные свойства ганглиозидов использованы в способе получения липосом с включенными в них лечебными препаратами для избирательной их доставки в определенные органы (А.с. СССР N 1022357, A 61 K 9/10, A 61 K 35/12, 30.12.83, Бюл. N 48).

Органотропность препаратов достигается смешиванием фосфолипидов и холестерина, выделенных из определенного количества живой ткани, и последующим после введения в липосомы действующих веществ введением ганглиозидов, выделенных из того же количества одноименной ткани.

Результаты исследований влияния кратности введения липосом, содержащих антимикробные препараты, например тетрациклин, показали удлинение срока пребывания липосомальной формы препарата в печени (до 96 часов) и насыщения им паренхиматозного органа по сравнению со свободным тетрациклином, который практически через 8-12 часов после инъекции выводился из печени. Изучение распределения липосом, состоящих из липидов паренхиматозных органов, в макроорганизме свидетельствует о более активном захвате тканями везикул, содержащих фосфолипиды гомологичных органов (Ротов К.А. и др. Генетика и биохимия вирулентности возбудителей особо опасных инфекций (Материалы Российской научной конференции, Волгоград, 1992, с. 204-205).

В настоящее время известны составы и способы получения липосомальных препаратов. При этом мембранный состав липосом содержит полный набор синтетических фосфолипидов и гликолипидов, в липосомы инкапсулируются любые биологически активные вещества, в том числе антибиотики, вакцины (Заявка РФ N 96113086/14, A 61 K 9/127, 27.10.98, Бюл. N 30; Пат. РФ N 2120795, A 61 K 9/127, 27.10.98, Бюл. N 30).

Избирательную доставку препаратов осуществляют присоединением к композиции лигандов или фрагментов из группы, состоящей из сахара, гликолипида и белка.

Практическое использование таких композиций требует в каждом случае тщательного балансирования липидного состава мембран и присоединяемых к ним фрагментов.

Известно противовирусное лекарственное средство для перорального применения на основе интерферона, витамина C и сахарозы, включенных в липосомы, сконструированные из фосфатилилхолина и холестерина (Заявка РФ N 96108008/14, A 61 K 9/127, 38/21, 20.07.98, Бюл. N 19).

Механизм доставки при пероральном применении липосомального препарата включает герметизацию фармацевтического вещества в желудке и увеличение его "сродства" и "абсорбции" к виллам, то есть к концевым отверстиям лимфатических сосудов у кишечных мембран, так что вещество абсорбирует в лимфатическую систему.

Это средство недостаточно эффективно при лечении заболеваний бактериальной этиологии.

Наиболее близким к заявленному антибактериальному средству является стрептомицин, включенный в липосомы, мембрана которых сформирована на основе лецитина. (Владимирский Н.А., Ладыгина Г.А., Тенцова А.И. "Антибиотики", N 1, 1983, с. 23-26).

Антибактериальная эффективность липосомального стрептомицина исследовалась в экспериментальном туберкулезе у мышей линии BALB/c и CBB6F₁, инфицированных 3-недельной культурой вирулентного штамма микобактерий туберкулеза. При этом исследовали число колоний микобактерий в легких и селезенке, потери массы тела, чувствительность к токсическому эффекту при внутривенном введении липосомального раствора стрептомицина.

Повышение антибактериальной активности стрептомицина, включенного в липосомы, по сравнению с раствором стрептомицина наблюдалось лишь в отношении микобактерий, локализованных в ткани селезенки, что свидетельствует, во-первых, о преобладании в ткани селезенки внутриклеточных популяций микобактерий, в отношении которых раствор стрептомицина малоактивен, во-вторых, о захвате липосом главным образом органами моноцитарно-фагоцитирующей системы.

Выявлено замедление потери веса у мышей с липосомальной антибиотикотерапией.

При одинаковых дозах липосомального и раствора стрептомицина 1000 мкг на мышь, липосомальный препарат не приводил к гибели животных, применение раствора стрептомицина вызывало потерю веса и гибель животных. Это объясняется тем, что стрептомицин, ограниченный липидной мембраной, не контактирует с чувствительными к нему клетками нервной системы, а при высвобождении антибиотика вследствие разрушения липидной оболочки ферментными системами организма его концентрации в нервной системе не достигают токсических уровней.

Результаты проведенных исследований предопределяют перспективность создания липосомальных форм антибактериальных препаратов.

К настоящему времени основные технологические приемы получения липосом методом обращения фаз из различных синтетических липидов или их смесей, введения в липосомы заданного количества препаратов, методы контроля готовых липосомальных препаратов известны (В.И. Закревский, В.И. Ефременко, В.А. Мельников и др. Приготовление липосом, содержащих биологически активные вещества (Методические рекомендации), Волгоград, 1982; Липосомы (получение, свойства, аспекты применения в биологии и медицине), М., ВИНИТИ, N деп. рук. 3733-В98 от 18.12.98, 263 с.).

Использование антибактериальных препаратов при заболеваниях бактериальной этиологии сельскохозяйственной птицы весьма проблематично, так как практически применимо введение препарата перорально или ингаляторно.

В условиях птицефабрик наблюдается высокий падеж птицы, особенно в первые 10 дней, а также на 28-32 день жизни цыплят, несмотря на традиционные методы лечения тетрациклином.

Наиболее часто встречающимися патогенными бактериями для цыплят являются Salmonella enterotidis, Е. coli, Stapfilococcus aureus.

Известен способ профилактики и лечения инфекционных заболеваний птиц, заключающийся в аэрозольном применении препарата, содержащего в качестве противоинфекционных биологически активных веществ антибиотики и продукты инкубирования сыворотки крови птиц, а в качестве эксплуатационных добавок, обеспечивающих гомогенность и устойчивость распыляемого препарата, - варианты смеси глицерина с диметилсульфоксидом или с формалином (Пат. РФ N 2035909, A 61 K 35/16, 27.05.95, Бюл. N 15). Препарат готовят непосредственно перед распылением. Аэрозольную ингаляцию для профилактики проводят цыплятам в возрасте от 1 суток до 2 месяцев. При заболеваниях цыплят обрабатывают через каждые 10 дней не менее 4 раз, независимо от дней вакцинации. В качестве антибиотиков испытаны почти все классы, но наиболее эффективным оказался гентамицин из класса аминогликозидов.

При опытных испытаниях на птицефабрике синергическое действие биологически активных компонентов обеспечило в профилактических мероприятиях снижение падежа на 5-6% и привес на 12.5%, при лечении инфекционных заболеваний (сальмонеллезы, колибактериоз) - на 9-12% и 11.4% соответственно.

Недостатками способа является сложность приготовления дорогостоящего препарата, большой расход препаратов, необходимость обеспечения птицефабрик ингаляционными камерами. Не исключается при массовых процедурах возможность неточной дозировки и токсичности.

Высокая профилактическая терапевтическая эффективность достигнута при ингаляции цыплят с экспериментальным колибактериозом при использовании лечебного препарата, в котором в качестве активного компонента используется антибиотик класса аминогликозидов (гентамицина сульфат), в качестве активирующей добавки - неионогенное ПАВ типа этоксилатов высших спиртов (А.с. СССР N 1818094, A 61 K 31/00, 30.05.93, Бюл. N 20). Повышение антимикробной активности антибиотиков аминогликозидной и микролидной групп по отношению к стандартным тест культурам и штаммам кишечной палочки, патогенным для птиц, достигается за счет использования активной добавки. При этом антибиотик легко всасывается в организм и длительно циркулирует в нем.

Недостатками способа являются высокий расход антибиотика, необходимость в ингаляционных камерах, возможности неточной дозировки и токсичности.

Известны пероральные способы введения лечебных препаратов птицам. В качестве лечебных препаратов используются смеси биологически активных компонентов, например продукты культивирования лимфоидных клеток кур (Пат. РФ N 2034565, A 61 K 38/21, 35/14, 10.05.95, Бюл. N 13). Использование этого препарата (галливирексвак, ТУ 107077191-91) в комплексе с антибиотиками при средней их активности неэффективно, а увеличение активности препарата экономически нецелесообразно.

Наиболее близким по назначению является способ лечения заболеваний инфекционного происхождения (сальмонеллез, ларинготрахеит, колибактериоз и др. ). (Ветеринарные препараты. Справочник - М., 1998, с. 295).

Способ предусматривает пероральное введение лечебного препарата. Препарат содержит 4.5 г фосфата тиозина, 10 г фурзолидона, 10 г тетрациклина гидрохлорида, 0.02 г селенита натрия, 8 г лимонной кислоты, 2 г витамина PP на 1 кг муки.

Недостатком способа является большой расход дорогостоящих препаратов и низкая эффективность лечения, обусловленная тем, что антибиотики при пероральном применении плохо всасываются организмом и быстро выводятся из него. Тетрациклины по механизму действия являются бактериостатическими, подавляют размножение лишь внеклеточно расположенных возбудителей. Не исключена неточная дозировка и токсичность.

В условия массового производства крупного рогатого скота (КРС) наибольший экономический ущерб наносит заболевание туберкулезом. Сложность борьбы с туберкулезом заключается в продолжительности инкубационного периода заболевания, замедленности размножения и устойчивости возбудителя во внешней среде. Основным диагностическим тестом в массовых обследованиях животных в настоящее время служит аллергическая проба на туберкулин. Однако на туберкулин реагируют не только инфицированные патогенными микобактериями туберкулеза животные, но и сенсибилизированные кислотоустойчивыми сапрофитами и атипичными микобактериями. Все вредоносные факторы внешней среды ведут к нарушению гомеостаза, имуннодефициту, стимулированию роста возбудителей туберкулеза и атипичных микобактерий у КРС и молодняка. Все эти факторы обуславливают актуальность профилактики и лечения заболеваний бактериальной этиологии у КРС и телят.

Известен препарат для лечения бронхопневмонии телят, применяемый перорально в форме брикетов и содержащий эритромицин, крахмал, кальция стеарат, диоксилин, лактозу (Пат. РФ N 1424170, A 61 K 31/71, 20.12.95, Бюл. N 35).

Испытания препарата при экспериментальной легочной инфекции, вызванной кишечной палочкой и стрептококком, на белых мышах, показали эффективность лечения 60-100%.

Практическое применение препарата ограничивается его дороговизной, сложностью приготовления. Кроме того, антибактериальная эффективность препарата недостаточна для внутриклеточной инфекции.

Известен препарат для лечения животных (телята, поросята), больных лептоспирозом, пневмониями, бронхопневмониями (Пат. РФ N 2053772, A 61 K 31/65, 10.02.96, Бюл. N 4).

Препарат приготовлен на основе тетрациклина с введенным в его состав для пролонгации действия и стимуляции иммунной активности организма поливинилпирралидоном, 1,2-пропандиолом и диметилсульфоксидом.

Сравнительные испытания использования тетрациклина пролонгированного и непролонгированного действия при лечении телят с клиническими признаками бронхопневмонии показали, что при одинаковых дозах на 1 инъекцию 10 тыс. ЕД антибиотика на 1 кг массы животного излечение наступает в первом случае после 2-3 инъекций с интервалом 72 ч, а во втором - после 14 инъекций с интервалом 12 ч.

Несмотря на явные технико-экономические преимущества, способ недостаточно эффективен по отношению к внутриклеточно расположенным патогенным бактериям.

Наиболее близким по назначению к заявленному способу лечения распираторной болезни телят бактериальной этиологии является способ лечения бронхопневмонии телят, инфицированной пневмококками (Ротов К.А., Ситников Н.М., Тихонов Н. Г. и др. Диагностика, лечение и профилактика опасных инфекционных заболеваний, биотехнология, ветеринария. Материалы юбилейной научной конференции, посвященной 70-летию НИИ микробиологии МО РФ. Киров, 1998, С. 418).

В исследованиях использовали 53 головы телят до 6 месяцев с бактериологическими показателями бронхопневмонии. Показатель количества лейкоцитов у всех больных животных превышал 13.4·10⁹/л (при норме 8-9·10⁹/л).

В опытной группе проводили лечение суспензией липосом на основе лецитина с введенным в везикулы стрептомицином сульфата, препарат вводили внутримышечно в дозе 0.002 г стрептомицина на кг живой массы 1 раз в сутки в течение 5 суток.

После первого курса лечения у 60% животных нормализовался уровень лейкоцитов в крови.

После повторного курса лечения через 2 месяца уровень лейкоцитов нормализовался у 79.2%, после третьего курса через 2 месяца уровень лейкоцитов нормализовался у 85.6%, у всех телят группы нормализовались клинические показатели, при бактериологических исследованиях возбудитель не обнаружен.

В контрольной группе часть животных лечили внутримышечным введением раствора стрептомицина в дозе 0.01 г/кг живой массы 2 раза в сутки в течение 7 суток, и часть животных не получала препарата. Через 6 месяцев в обеих контрольных подгруппах погибло свыше 80% телят от бронхопневмонии.

Результаты проведенных экспериментальных исследований свидетельствуют с одной стороны об эффективности использования липосомальных форм антибиотика, с другой - обуславливают необходимость изменения режима лечения с целенаправленным увеличением доли поглощения и сохранения концентрации препарата в макрофагах мононуклеарной системы.

Для профилактики туберкулеза КРС в общем комплексе ветеринарно-санитарных мер в 1980-1985 гг. практически во всех основных регионах России проводили производственные испытания различных методик по применению изониазида (тубазида) и вакцины БЦЖ.

Изониазид обладает высокими бактериостатическими свойствами к микобактериям туберкулеза. Препарат вводили перорально, подмешивая в сухой корм или в воду, обрат, или путем подкожных инъекций тубазидных суспензий, которые представляют собой комплексный препарат, содержащий тубазид и витамин A, тубазид и стрептомицин, суспендированные в рыбьем или кашалотовом жирах или растительных маслах.

Химиопрофилактика не нашла широкого применения из-за трудоемкости, недостаточной эффективности, высокой стоимости препаратов. Многократное их введение во многих случаях вызывало десенсибилизацию организма и после прекращения их использования резко увеличивало количество реагирующих на туберкулин животных, а также приводило к появлению штаммов возбудителя туберкулеза, устойчивых к лекарственным средствам.

Туберкулостатические препараты на основе изониазида вызывают L-трансформацию микобактерий, которые после прекращения этих средств возвращаются в исходную бактериальную форму, вызывая рецидив болезни.

Вакцина БЦЖ также недостаточно эффективна при массовой иммунизации скота из-за ряда недостатков, в том числе длительного сохранения поствакцинальных аллергических реакций и отсутствия методов их дифференциации от туберкулеза (Наставления по применению тубазидной и тубазидно-стрептомициновой суспензии для химиопрофилактики туберкулеза у КРС, утв. ГУВМСХ СССР 08. 04. 81; B.A. Соловьев, Н.П. Овдиенко, Ветеринария, N 12, 1991, С. 3-6; В.М. Авилов, В.Ф. Пылинин, Ветеринария, N 1, 1992, С. 3-9).

Применение тубазидной и тубазидно-стрептомициновой суспензии имеет ряд ограничений. Суспензии с целью химиопрофилактики применяют в хозяйствах, неблагополучных по туберкулезу КРС, вызванному возбудителями бычьего вида и при условии, если выделенные культуры микобактерий чувствительны к тубазиду. Обработкам суспензиями подвергают только животных, не реагирующих на туберкулез и не имеющих клинических признаков болезни. Суспензию вводят животным подкожно с 3-4 дневного возраста 1 раз в 30-35 дней до постановки стада на контрольное исследование в дозе 0.05 мл на 1 кг живой массы. Перед применением флаконы с суспензией подогревают в водяной бане при 34-50^oC и тщательно встряхивают.

Одновременное применение вакцины БЦЖ и суспензии тубазида недопустимо, так как действие одного препарата может ослабить эффективность другого (Н.З. Хазипов, М.А. Сафин, Г.З. Гудризов, Туберкулез КРС, М., Агропромиздат, 1985, С. 117-119).

Известен способ профилактики туберкулеза телят путем подкожного введения изониазида на основе эктерицида в дозе 10 мг/кг живой массы по содержанию изониазида с интервалом 8-12 дней в течение 3-х месяцев. Эктерицид представляет собой производное от окисления водорастворимых бактерицидных фракций рыбьего жира (А. с. СССР N 1825629, A 61 K 35/60, 45/96, 07.07.93, Бюл. N 25).

Использование предлагаемого экстерицида обеспечивает эффект пролонгации свойств препарата в организме в течение 8 дней. Способ показал достаточно высокую эффективность профилактики экспериментального туберкулеза и в контролируемом эпизоотологическом опыте на телятах, полученных от больных туберкулезом коров.

Массовое использование этого способа ограничено не только дороговизной препарата и трудоемкостью, но и недостаточно надежной профилактикой в силу того, что препарат не оказывает воздействия на внутриклеточные бактерии, не исключена вероятность появления устойчивых к препарату штаммов, возникновения рецидивов заболевания.

Ветеринарной практикой установлено, что у зараженных телят болезнь, как правило, прогрессирует во взрослом состоянии после первого-второго отела. В данной закономерности проявления туберкулеза среди репродуктивного поголовья кроется одна из причин рецидивов болезни в оздоровленных хозяйствах. Целью группы изобретений является выбор наиболее оптимального лечебного средства для антибиотикотерапии заболеваний сельскохозяйственных животных и птицы бактериальной этиологии, повышения эффективности профилактики и лечения цыплят, лечения респираторной болезни телят, профилактики заболевания туберкулезом у КРС и молодняка.

Поставленная цель достигается тем, что антибактериальное лечебное средство для лечения сельскохозяйственных животных и птиц бактериальной этиологии представляет собой эмульсию липосом, мембрана которых содержит липиды, экстрагированные из органов и тканей теплокровных животных (мозга, печени, почек КРС), с включенным в них антибиотиком класса аминогликозидов, например стрептомицина сульфатом, в эффективном количестве для парентерального и перорального применения.

Способ профилактики и лечения цыплят при заболеваниях бактериальной этиологии включает пероральное введение эмульсии липосом, мембрана которых содержит липиды, экстрагированные из органов и тканей теплокровных животных (мозга, печени, почек КРС) с включенным в них антибиотиком класса аминогликозидов, например стрептомицина сульфатом, в эффективном количестве, путем смешивания ее с кормом и скармливания в первые 7 дней и на 28-32 день жизни птицы из расчета 14.3-20.0 мг антибиотика на 1 кг живой массы.

Способ лечения респираторной болезни телят бактериальной этиологии включает внутримышечное введение эмульсии липосом, мембрана которых содержит липиды, экстрагированные из органов и тканей теплокровных животных (мозга, печени, почек КРС) с включенным в них антибиотиком класса аминогликозидов, например стрептомицина сульфатом, в эффективном количестве, один раз в трое суток в дозе 6.2-6.25 мг антибиотика на 1 кг живой массы в течение 9-12 дней.

Способ профилактики туберкулеза у КРС включает внутримышечное введение животным с положительной туберкулиновой пробой эмульсии липосом, мембрана которых содержит липиды, экстрагированные из органов и тканей теплокровных животных (мозга, печени, почек КРС) с включенным в них антибиотиком класса аминогликозидов, например стрептомицина сульфатом, в эффективном количестве, в дозе 20.0-21.0 мг антибиотика на 1 кг живой массы один раз в трое суток в течение 2-х месяцев с одновременным пероральным использованием тубазида с кормом.

По отношению к прототипам заявляемая группа изобретений имеет следующие отличительные признаки.

Использование для конструирования мембраны липосом липидов, выделенных из органов и тканей теплокровных животных, например мозга, печени, почек КРС, обеспечивает сбалансированное эквимолярное соотношение всех типов липидов с максимальным использованием их функциональной активности по отношению к различным органам макроорганизма, что создает оптимальные условия для антибиотикотерапии внутриклеточной инфекции. Известно, что в смеси липидов, выделенных из белого вещества мозга быков, содержится 50% холестерина, церебрезина, фосфатидилэтаноламина, остальное - фосфатидилхолин (лецитин), фосфатидиллинозит, фосфатидилсерин, а липиды растительного происхождения, например сои, содержат почти 87% фосфатидилхолина (Омельченко А.М. и др. Вести. Акад. мед. наук СССР, 1990, N 8, с. 27-29).

Сбалансированный состав липидов мембран липосом обеспечивает достаточно стабильную герметизацию антибиотика в желудке при пероральном применении с постепенным переходом и абсорбции его в лимфатическую систему.

Таким образом, заявляемый в качестве антибактериального средства липосомальный стрептомицин имеет ряд преимуществ.

Возможность использования препарата как парентерально, так и перорально.

Обеспечение прологированности действия, снижение применяемой дозы вводимого препарата, уменьшение его токсического воздействия.

Повышение эффективности лечения за счет транспортировки антибиотика внутрь клеток макроорганизма, где часто локализуются возбудители инфекции.

Пероральное использование заявляемого антибактериального средства в первые 7 дней и на 28-32-й день жизни птицы обусловлено наиболее сильным влиянием патогенной микрофлоры на организм птиц в эти периоды.

Доза вводимого птицам антибиотика, включенного в липосомы, 14.3-20.0 мг на 1 кг живой массы является терапевтически необходимой и достаточной для излечивания и профилактики.

Снижение дозы антибиотика ниже заявляемого предела снижает эффективность его действия, повышение же - нецелесообразно.

Пролонгированность и эффективность действия липосомального препарата обеспечивает значительные экономические преимущества по сокращению расхода дорогостоящего антибиотика по сравнению с известными способами.

По отношению к известному способу лечения телят при заболеваниях бактериальной этиологии внутримышечным введением липосомального стрептомицина заявляемый способ отличается тем, что мембрана липосом содержит липиды животного происхождения, курс лечения состоит из 3-4 кратной инъекции (1 раз в 3-е суток) в дозе 6.20-6.25 мг антибиотика на 1 кг живой массы. Совокупность этих приемов обеспечивает повышение эффективности антибиотикотерапии, в том числе внутриклеточной инфекции.

Доза вводимого антибиотика 6.20-6.25 мг на 1 кг живой массы 1 раз в 3-е суток является терапевтически необходимой для излечения. Снижение дозы антибиотика ниже заявляемого предела снижает эффективность и прологированность его действия, повышение же - нецелесообразно.

Существенными отличительными признаками заявляемого способа профилактики туберкулеза у КРС по отношению к принятым в ветеринарной практике методам является внутримышечное введение животным с положительной туберкулиновой пробой эмульсии, мембрана которых содержит липиды, экстрагированные из органов и тканей теплокровных животных (мозга, печени, почек КРС), с включенным в них антибиотиком класса аминогликозидов, например стрептомицина сульфатом, в эффективном количестве, в дозе 20.0-21.0 мг антибиотика на 1 кг живой массы один раз в трое суток в течение 2-х месяцев.

Сочетанное использование заявляемых приемов в совокупности с пероральным использованием тубазида обеспечивает повышение антибиотикотерапии туберкулезных и атипичных микобактерий, в том числе локализованных внутриклеточно.

Доза вводимого антибиотика 20.0-21.0 мг на 1 кг живой массы 1 раз в 3-е суток является терапевтически необходимой и достаточной для пролонгированности и эффективности его действия.

Возможность практического использования заявляемой группы изобретений подтверждается примерами их конкретного выполнения.

Пример 1. Приготовление антибактериального лечебного средства. 10 кг мозгов или печени, почек, легких КРС гомогенизируют и полученную массу заливают смесью 16.7 л метанола и 33.3 л хлороформа в соотношении 1:5. Массу экстрагируют при перемешивании, при комнатной температуре не менее 5 ч. Отделяют экстракт и добавляют 1 л 0.7% раствора хлорида натрия (20% от объема экстракта). Полученный раствор перемешивают и отстаивают 2-3 ч для растворения белковых фракций. После расслоения системы на 2 фракции отделяется нижняя фракция, содержащая липиды. Определяют количество липидов по весу сухого остатка, оно составляет 30-50 мг/мл.

В литровую колбу наливают 23,7 мл экстракта липидов и выпаривают на роторном испарителе для удаления азеотропной смеси и образования пленки липидов на стенке колбы. Затем смывают высушенные липиды 114 мл хлороформа (из расчета на 56.7 мг липидов 3.8 мл хлороформа, 1.5 мл стрептомицина сульфата в 0.01 М фосфатном буфере pH 7.2). Перемешивают смесь до полного растворения осадка. Содержимое выливают в стакан, добавляют 459 мг холестерина из расчета молярного соотношения экстракта липидов и холестерина, равном 7: 2), 45 мл антибиотика, растворенного в фосфатном буфере pH 7.2 (из расчета 125 мг/мл суспензии липосом при 70% включении вещества в везикулу) и обрабатывают смесь на ультразвуковом дезинтеграторе при мощности 200 Вт 20 кГц в течение 5 мин. Эмульсию выливают в круглодонную литровую колбу, присоединяют ее к роторному испарителю и выпаривают под вакуумом при вращении колбы в водяной бане с температурой не менее 40^oC. Выпаривание ведется не менее 40 мин до полного исчезновения запаха органического растворителя. Затем в колбу вносят 3-5 штук стеклянных бусинок и смывают образовавшийся гель вращательными движениями до образования гомогенной эмульсии. Эмульсию подвергают методами гельхроматографии и ультрацентрифугирования очистке от невключившегося материала и концентрированию липосом. Содержимое колбы выливают в мерный стакан и доводят объем до 150 мл фосфатным буфером pH 7.2. С использованием бактериологического метода контролируют степень включения антибиотика в везикулы, она должна быть не менее 70%. Проводят электронно-микроскопический контроль размеров и структуры липосом.

Пример 2. Опытно-экспериментальные исследования при лечении бройлерных цыплят на базе Ставропольской птицефабрики.

В опыте исследовали 900 цыплят со средним весом 35 г, 300 из которых лечили традиционно с использованием тетрациклина, 300 - с использованием стрептомицина сульфата лимосомального, 300 - контрольная группа - без лечения.

Наблюдения проводили в первые 7 дней жизни цыплят.

Для 2-й опытной группы эмульсию липосомального стрептомицина, приготовленную по примеру 1, в количестве 1.3 мл (из расчета 15 мг антибиотика на 1 кг веса живой массы при содержании препарата в эмульсии липосом 125 мг/мл), взбалтывали и размешивали в 10 л водопроводной воды (20-25^oC), затем равномерно смешивали с задаваемым кормом. Лечебный корм скармливали цыплятам на пустой желудок, в ранние часы, контролировали съедаемость, пищевой и температурный режимы.

В табл. 1 приведены результаты проведенного эксперимента по привесу и падежу птицы через 7 суток после лечения.

Как свидетельствуют данные табл. 1, падеж птицы в группе N 2 по сравнению с группой N 1 и группой N 3 снизился более чем в 4 раза, привес у группы N 2 на 17% выше, чем у группы N 1 и на 32% выше, чем у группы N 1. При этом в группе с использованием тетрациклина по сравнению с контрольной наблюдается при повышении привеса увеличение падежа птицы, что обусловлено токсикацией при интактном использовании антибиотика.

Пример 3. Проводили экспериментальные наблюдения над опытной группой (15000 цыплят) с использованием липосомального стрептомицина и контрольной группой без лечения (15000 цыплят) в первые 7 суток и на 28-32 сутки жизни птицы.

Лечение осуществляли аналогично описанию примера 2, за исключением того, что в первые 7 суток и на 28-32 сутки использовали ежедневно количество эмульсии из расчета 20.0 мг антибиотика на 1 кг живой массы.

В табл. 2 приведены результаты эксперимента, характеризующие эффективность использования липосомального препарата по снижению падежа и повышению привеса птицы.

Пример 4. Проводили опытные исследования в производственных условиях в 7 цехах, в которых в опытах были по 36 тыс. цыплят. В шести цехах проводили лечение липосомальным стрептомицином на 1-7 и 28-32 дни жизни. В седьмом цехе наблюдали контрольную группу без лечения. Лечение проводилось аналогично примерам 2, 3 из расчета 14.3 мг антибиотика на 1 кг живой массы.

В табл. 3 приведены результаты экспериментального лечения с целью снижения падежа большой партии цыплят, расположенных в разных цехах.

Результаты экспериментов, приведенные в табл. 1-3, свидетельствуют об эффективном терапевтическом и биологическом действии стрептомицина сульфата липосомального, проявляющемся в заметном снижении падежа в 1.3-1.5 раз и увеличении привеса птицы. Экономические преимущества лечения цыплят липосомальной формой стрептомицина заключаются в снижении расхода антибиотика в 5-7 раз по сравнению с традиционном способом, в общем снижении падежа птицы с 21 до 15% и увеличении веса птицы по сравнению с контрольной партией на 95 г на голову.

Пример 5. Опытно-экспериментальные исследования при лечении респираторных заболеваний телят бактериальной этиологии на базе СХП им. С.М. Кирова Советского района Ставропольского края. В опыте исследовали 20 телят в возрасте 6 месяцев с клиническими показателями респираторного заболевания и с положительной реакцией на туберкулин. Лечение телят осуществляли внутримышечными инъекциями липосомального стрептомицина сульфата 1 раз в трое суток в дозе 0.25 мг антибиотика или 0.05 мл эмульсии, приготовленной по примеру 1 на 1 кг живой массы. На 9-12 день клинические признаки заболевания у всех животных отсутствовали. После курса лечения телятам была сделана туберкулиновая проба и было отобрано 5 сывороток от животных с отрицательной внутрикожной туберкулированной пробой, 5 сывороток - с сомнительной и 5 сывороток - с положительной пробой. Все сыворотки были исследованы на наличие антител к туберкулезу методом встречного иммуноэлектрофореза (ВИЭФ), реакцией непрямой иммунофлуоресценции (НИФ), реакцией конкурентного иммунодотинга (КИД). В результате проведенных исследований ни одним из указанных методов во всех испытанных сыворотках наличия специфических туберкулезных иммуноглобулинов не выявлено.

Пример 6. Опытно-экспериментальные исследования при профилактике туберкулеза у КСР на базе СХП им. С.М. Кирова Советского района Ставропольского края. Для проведения опытов отобрана 21 голова коров, положительно реагирующих на туберкулиновую пробу и предназначенных по санитарно-ветеринарным нормам к убою.

В течение 2-х месяцев каждой корове через два дня на третьи сутки вводили 20.5 мг стрептомицина липосомального или 0.16 мл эмульсии на 1 кг живой массы, приготовленной по примеру 1, внутримышечно. Одновременно в корм задавали по 20 г тубазида на голову. В течении курса лечения осложнений у подопытных животных не наблюдалось, не снизились и удои молока, которое после кипячения направляли на корм телятам. На 5-й день после завершения лечения животных исследовали на туберкулез, у 18 коров реакция была отрицательной, у 3 - слабоположительной. Повторные исследования через месяц показали те же результаты.

Положительно реагирующие на туберкулин животные были забиты, возбудитель туберкулеза не был выделен микроскопическим, бактериологическим и биологическим методами. С 18 коров сняли карантин и перевели их в общее стадо.

Таким образом, заявляемая группа изобретений практически осуществима, использование их в общем комплексе санитарно- ветеринарных мероприятий не только качественно улучшит поголовье животных и птиц, но и позволит получить значительный экономический эффект.

Формула изобретения

1. Антибактериальное средство для лечения заболеваний сельскохозяйственных животных и птиц, представляющее эмульсию липосом с включенным в них антибиотиком класса аминогликозидов в эффективном количестве, отличающееся тем, что мембрана липосом содержит липиды, экстрагированные из органов и тканей крупного рогатого скота.

2. Способ профилактики и лечения цыплят при заболеваниях бактериальной этиологии, включающий пероральное введение препарата, содержащего антибиотик, отличающийся тем, что в качестве препарата используют антибактериальное средство по п.1, при этом препарат смешивают с кормом и скармливают в первые 7 дней и на 28 - 32 день жизни птицы из расчета 14,3 - 20,00 мг антибиотика на 1 кг живой массы.

3. Способ лечения респираторной болезни телят бактериальной этиологии, включающий внутримышечное введение препарата, содержащего антибиотик, отличающийся тем, что в качестве препарата используют антибактериальное средство по п.1, при этом препарат вводят один раз в трое суток в дозе 6,20 - 6,25 мг антибиотика на 1 кг живой массы в течение 9 - 12 дней.

4. Способ профилактики туберкулеза у крупного рогатого скота, включающий пероральное введение тубазида с кормом, отличающийся тем, что животным с положительной туберкулиновой пробой дополнительно внутримышечно вводят антибактериальное средство по п.1 из расчета 20,0 - 21,0 мг антибиотика на 1 кг живой массы один раз в трое суток в течение двух месяцев.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4

PD4A - Изменение наименования обладателя патента Российской Федерации на изобретение

(73) Новое наименование патентообладателя:Общество с ограниченной ответственностью Научно-производственное объединение "ПУЛЬС"

Извещение опубликовано: 20.05.2005        БИ: 14/2005