Вакцина против репродуктивного и респираторного синдрома свиней (prrs), способ иммунизации свиньи против prrs, способ получения вакцины, выделенный и очищенный штамм вируса репродуктивного и респираторного синдрома свиней

 

Изобретение относится к получению живой вакцины, способу иммунизации свиньи против репродуктивного и респираторного синдрома свиней (PRRS) и, по существу, выделенному и очищенному вирусному штамму АТСС VR2509. Вакцина вводится свиноматкам, подсвинкам и поросятам-отъемышам для иммунизации против PRRS. Вакцина включает живой штамм вируса VR2509, который является авирулентным и вызывает эффективный иммунитет. Вакцина должна содержать приблизительно 10⁴ -10⁸ бляшкообразующих единиц вируса, что позволяет получать оптимальный результат при иммунизации животных. 4 с. и 10 з.п. ф-лы, 3 ил., 4 табл.

Предпосылки изобретения 1. Область изобретения Настоящее изобретение широко связано с низкопатогенными живыми вирусными вакцинами для введения свиньям с целью выработки эффективного иммунитета у свиней против инфекций вирусом репродуктивного и респираторного синдрома свиней (PRRS). Более конкретно, изобретение относится к таким живым вакцинам совместно со способами иммунизации свиней против вируса PRRS и способами получения таких вакцин. Новый, по существу выделенный и очищенный вирус PRRS с низкой патогенностью, под VR2509 доступа в базу данных АТСС, также составляет часть изобретения.

2. Описание предшествующего уровня техники PRRS возник в последние несколько лет как важное вирусное заболевание свиней. PRRS вызывает тяжелую репродуктивную недостаточность у беременных свиноматок, проявляющуюся в форме преждевременных опоросов, возросшего количества мертворожденных, мумифицированных и слабых поросят, сниженной частоты опоросов и задержки восстановления течки. На пораженных фермах острые признаки репродуктивных расстройств при PRRS в целом продолжаются 2-4 месяца, но респираторные симптомы заболевания могут продолжаться в течение многих лет, вызывая значительные продуктивные потери. Были опубликованы несколько исследований патогенеза инфекции вирусом PRRS у беременных свиноматок/подсвинков на поздних сроках беременности (77-95 дней беременности). В каждом из этих исследований была продемонстрирована способность вируса PRRS вызывать трансплацентарную инфекцию и патологическое состояние плода. Однако у свиноматок в средние сроки беременности патологическое состояние плода не развивалось, и плоды, инфицированные внутриутробно в средние сроки беременности, оставались в целом нормальными.

В полевых условиях есть несколько ферм, на которых не было выявлено ни острых репродуктивных расстройств, ни хронической респираторной формы заболевания, но которые являются серологически положительными на PRRS. Причины отсутствия клинических симптомов заболевания в таких случаях недостаточно понятны. Было высказано предположение, что могут существовать штаммы вируса PRRS с низкой патогенностью, и что они ответственны за инфекции у популяций свиней, не проявляющих клинические симптомы PRRS. Различные исследователи сообщали о ряде изолятов вируса PRRS. Было показано, что все они имеют РНК и содержащие липиды оболочки, но не обладают гемагглютинирующей способностью к эритроцитам различных видов животных.

Сущность изобретения Настоящее изобретение преодолевает указанные выше проблемы и предоставляет усовершенствованные живые или модифицированные живые вакцины против PRRS для введения свиньям. Вакцины изобретения включают достаточное количество живого или модифицированного живого вируса для выработки эффективного иммунитета у свиней против инфекции вирулентным PRRS дикого типа. Используемый здесь термин "эффективный иммунитет" относится к способности вакцины предотвратить у свиней инфекции PRRS, вызывающие развитие существенных клинических признаков заболевания. То есть иммунизированная свинья может быть или может не быть серологически положительной по PRRS, но у нее нет проявления любых существенных клинических симптомов.

В предпочтительных формах вакцины изобретения включают новый живой вирус, обозначенный как MN-Hs, который был депонирован в Американской коллекции типовых культур (АТСС), 12301 Parklawn Drive, Rockville, MD, 20852, и ему был присвоен VR2509 доступа в базу данных АТСС. Было показано, что этот вирус является по существу авирулентным и вызывает эффективный иммунитет. Его вакцины можно вводить свиноматкам-производителям, подсвинкам, боровам или поросятам-отъемышам, и такое введение может осуществляться любым удобным способом, таким как внутримышечная инъекция или пероральное-интраназальное введение. В целом, дозы вакцины должны содержать от приблизительно 10⁴ до приблизительно 10⁸ бляшкообразующих единиц вируса.

Более обобщенно, изобретение также относится к способу получения свиных вакцин против PRRS, который включает сначала получение с помощью метода клонирования бляшек штамма или изолята вируса PRRS, имеющего средний диаметр бляшки не меньше приблизительно 2 мм на конфлюентном газоне клеток MARC-145, и получение живой вакцины из такого штамма. Линия клеток MARC-145 была депонирована в АТСС, и ей был присвоен доступа в базу данных АТСС VR2509. Предпочтительно, вакцины изобретения состоят по существу из такого вируса с маленьким диаметром бляшки, который получен в основном в очищенной форме. Предпочтительный вирус VR2509 доступа в базу данных АТСС имеет такой маленький диаметр бляшки и, как указано, является по существу полностью авирулентным, в то же время вызывая выработку иммунитета.

Краткое описание чертежей Фиг. 1 представляет собой фотографию, иллюстрирующую морфологию и размер бляшки изолята MN-Hs вируса PRRS (<2 мм) на линии клеток MARC-145; Фиг. 2 представляет собой фотографию, иллюстрирующую морфологию и размер бляшки изолята MN-HL вируса PRRS (3-5 мм) на линии клеток MARC-145; и Фиг. 3 представляет собой фотографию, иллюстрирующую морфологию и размер бляшки изолята MN-W вируса PRRS (2-3 мм) на линии клеток MARC-145.

Подробное описание предпочтительного варианта реализации Следующие примеры представляют предпочтительные методики выделения, идентификации и клонирования низкопатогенного штамма вируса PRRS, а также предпочтительную методику производства вакцин из него; следует понимать, что эта информация предоставлена только в качестве иллюстрации, и ничто в ней не следует расценивать как ограничение общего объема притязаний изобретения. Упомянутые литературные источники включены в описание в качестве ссылки.

Пример 1 Реферат
В этом примере был исследован патогенез образующего мелкие бляшки варианта (MN-Hs) вируса репродуктивного и респираторного синдрома свиней (PRRS) у беременных свиноматок. Штамм MN-Hs первоначально клонировали из вируса MN-H, который представляет собой смесь вирусов, образующих мелкие и крупные бляшки (MN-H). В первом эксперименте для сравнения патогенности для плода по 2 беременные свиноматки, каждую на 86 день беременности, интраназально инокулировали соответственно MN-Hs, MN-HL, полевым изолятом (MN-W) или вводили среду для культуры клеток (контроли). Всем свиноматкам давали возможность опороситься по окончании их беременности, за исключением контрольных свиноматок. На 7 день после инокуляции (ПИ) у инфицированных свиноматок наблюдали вирусемию, и на 14 день ПИ с помощью реакции непрямой иммунофлюоресценции (НИФ) выявляли сероконверсию. Две свиноматки, инфицированные вирусом MN-Hs, родили 14 живых и 5 мертвых поросят, тогда как 2 свиноматки, инфицированные вирусом MN-HL, опоросились 25 мертвыми поросятами при отсутствии живых поросят. Две свиноматки, инфицированные MN-W, опоросились 10 живыми и 20 мертвыми поросятами. У двух контрольных свиноматок при забое на 107 день беременности было 16 нормальных плодов. Вирус был выделен у 16 (66,7%) из 24 живорожденных, 9 (64,3%) из 14 мертворожденных и 3 (12,0%) из 25 мумифицированных поросят от 6 инфицированных свиноматок. В сыворотке у шести из 13 мертворожденных поросят от 4 свиноматок, инфицированных MN-HL или MN-W, титры антител против вируса PRRS были, по данным определения с помощью НИФ, в диапазоне от 1:16 до 1:1,024. В последующем эксперименте для повторения результатов, полученных с вирусом MN-Hs, 2 беременных свиноматок, каждую на 86 день беременности, инфицировали соответственно интраназально MN-Hs, внутримышечно MN-Hs и интраназально другим полевым изолятом (OVL-173), и всем свиноматкам давали возможность опороситься по окончании их беременности. Две свиноматки, инфицированные интраназально и внутримышечно вирусом MN-Hs, опоросились соответственно 15 живыми и 6 мертвыми и 25 живыми и 5 мертвыми поросятами, тогда как 2 свиноматки, инфицированные OVL-173, родили 6 живых и 24 мертвых поросенка. Эти результаты свидетельствуют о том, что среди выделенных вирусов патогенность вируса PRRS различна для плодов свиней, и штамм MN-Hs вируса PRRS представляет собой слабопатогенный вирус. Было установлено, что выявление антитела против вируса PRRS в сыворотке мертворожденных поросят является применимым способом диагностики инфекции плода.

Материалы и методы
Вирус и клеточная культура. В этом исследовании использовались три различных изолята вируса PRRS. Изолят MN-H был получен из сыворотки здорового содержащегося в питомнике поросенка на ферме с субклиническим признаком инфекции вирусом PRRS. Первоначально вирус MN-H представлял собой смесь популяций вирусов с варьирующими размерами бляшек. Вирусы, образующие мелкие (MN-Hs) и крупные (MN-HL) бляшки, клонировались отдельно от вируса MN-H, и каждый вирус четыре раза выделяли из бляшки для нового эксперимента и шесть дополнительных раз для последующего эксперимента с помощью метода клонирования бляшек в соответствии с Him et al., Am. J. Vet. Res., 52:1649-1652 (1991). При каждом таком пассаже бляшек конфлюентные монослои клеток MARC-145 (пермиссивный клон, полученный из клеточной линии почек зеленой африканской мартышки (МА-104)) выращивали в чашках Петри размером 60 мм•15 мм (клетки поддерживали в минимальной основной среде Игла (МОС) с добавкой 3% плодной бараньей сыворотки (ПБС), 0,15% карбоната натрия и антибиотиков (Kim et al., Arch. Virol., 133:477-483 (1993)) и инфицировали соответствующим вирусом. Культуры инкубировали в течение 60 мин при 37^oС, после чего инокулят удаляли и культуры однократно промывали МОС. После этого в каждую чашку добавляли 5 мл аликвоту жидкой культуральной среды, состоящую из равного объема 2Х МОС и 1,6% кипяченого агара Noble (Disco Laboratories) с добавкой 50 мкг диэтиламиноэтил (ДЭАЭ)-декстрана/мл. Чашки продолжали инкубировать в течение 5 дней при 37^oС в CO₂ инкубаторе. В конце периода инкубации бляшечные культуры визуализировали с помощью добавления в них 3 мл физиологического раствора с фосфатным буфером с добавкой 1% нейтрального красного. Отобранные бляшки клонировали с помощью взятия стерильной пастеровской пипеткой и переноса путем инокуляции на неинфицированные монослои клеток MARC-145. Для постоянного окрашивания агар осторожно удаляли и клеточные монослои окрашивали 2 мл 1% кристаллическим фиолетовым в 20% этаноле в течение 10 мин. Чашки ополаскивали водопроводной водой для облегчения исследования бляшек.

Штамм MN-W вируса PRRS выделяли из сыворотки больных свиноматок фермы с типичными признаками острого PRRS, a OVL-173 получали из Oxford Veterinary Laboratories, Worthington, MN.

Животные и структура эксперимента. Беременных свиноматок приблизительно на 80 день беременности приобретали на ферме, где в прошлом не было клинических или серологических данных за инфекцию вирусом PRRS. Свиноматок дважды в год вакцинировали против свиного парвовируса (PPV) и видов Leptospira на ферме. Получали точные данные о датах выведения каждой свиноматки. После закупки каждую свиноматку содержали отдельно в изолированном помещении в университете Миннесоты. На 86 день беременности каждую из двух свиноматок интраназально инокулировали соответственно вирусом MN-Hs, MN-HL и MN-W (2 мл, 10^5-5,5 TCID₅₀/мл). Оставшихся двух свиноматок инокулировали средой для культуры клеток, и они служили контролем. Образцы сыворотки от каждой свиноматки брали через интервалы времени для выделения вируса и серологического исследования. Шести инфицированным свиноматкам дали возможность опороситься естественным путем, а двух контрольных свиноматок забивали на 107 день беременности для исследования плодов. После опороса для выделения вируса и серологического исследования брали образцы крови и легких у живых и мертворожденных поросят и жидкости из грудной полости у мумифицированных плодов. Во втором эксперименте перед инокуляцией вирус MN-Hs шесть дополнительных раз выделяли из бляшек. Двух беременных свиноматок, на 86 день беременности каждую, интраназально инокулировали MN-Hs и интраназально другим полевым изолятом (OVL-173), и всем свиноматкам давали возможность опороситься по окончании сроков их беременности. После опороса у мумифицированных или мертворожденных плодов измеряли венечно-крестцовую длину для оценки времени смерти (Marrable et al., J. Agric. Sci., 69:443-447 (1967)). Образцы крови и легких брали и анализировали, как описано в первом эксперименте.

Выделение и серология вируса. Для выделения вируса каждый образец сыворотки или надосадочной жидкости легочного гомогената помещали на ячейки 24-ячеечной планшеты и добавляли клетки MARC-145 (1-2•10⁵ клеток/мл), суспендированные в МОС с добавкой 3% ПБС. Культуры наблюдали в течение 5-7 дней для выявления цитопатических эффектов (ЦПЭ), типичных для вируса PRRS. Планшеты дважды замораживали и оттаивали, и образцы надосадочной жидкости инокулировали в ячейках 96-ячеечных планшет свежей суспензией клеток MARC-145 и инкубировали в течение 3-4 дней. Данные за вирусную инфекцию исследовали с помощью наблюдений как за СПЭ, так и специфической флюоресценцией с использованием эталонной свиной сыворотки, содержащей вирус PRRS.

Сыворотку от свиноматок и поросят испытывали на наличие антител с помощью реакции непрямой иммунофлюоресценции (НИФ) (Yoon et al., J. Vet. Diag. Invest, 4: 144-147 (1992)). 96-ячеечные тестирующие планшеты готовили с использованием линий клеток MARC-145. Некоторые образцы сыворотки испытывали на наличие антител против PPV (вируса прогрессирующей пневмонии овец) с помощью теста подавления гемаглютинации (HL), как описано ранее (Joo et al., Aust. Vet. J., 52:422-424 (1976)).

Результаты
При первоначальном выделении изоляты вируса PRRS давали различные размеры бляшки. Изолят MN-H по размеру их бляшки клонировали на две различные популяции MN-Hs и MN-HL. После клонирования соответствующие размеры MN-Hs и MN-HL устойчиво находились в диапазоне от <2 мм до 3-5 мм в диаметре, тогда как эти размеры у MN-W составляли 2-3 мм (см. фигуры).

Кроме незначительной анорексии, выявленной у свиноматок 112 и 153 в течение 5 дней после инокуляции (ПИ), у свиноматок после инфекции изолятами вируса PRRS не наблюдались выраженные клинические признаки. Вирус выделяли из образцов сыворотки у шести из шести свиноматок через семь дней ПИ и у одной из шести свиноматок через 14 дней ПИ. Как представлено в таблице 1, у всех инфицированных свиноматок через 14 дней ПИ были выявлены высокие титры антител.

Вирус выделяли у одного или более плодов у каждого приплода инфицированных свиноматок. Результаты выделения вируса у отдельных поросят от шести инфицированных свиноматок в эксперименте 1 показали, что приблизительно половина исследованных плодов (28 из 63 поросят) была положительной по выделению вируса. Среди поросят, исследованных на присутствие вируса, 16 (66,7%) из 24 живорожденных поросят, 9 (64,3%) из 14 мертворожденных поросят и 3 (12,0%) из 25 мумифицированных поросят были вирус-положительными. Из 28 поросят, вирус-положительных по образцам их сыворотки, 10 поросят были отрицательными по вирусу, когда на выделение вируса исследовали образцы их легких.

Образцы сыворотки от мертворожденных поросят свиноматок 153, 147, 68 и 112 исследовали на наличие антител к вирусу PRRS с помощью НИФ и PPV с помощью HL, и результаты представлены в таблице 3. В шести из 13 образцов от мертворожденных поросят и в 2 из 25 образцов жидкости от мумифицированных поросят имелось антитело к вирусу PRRS. Титры НИФ варьировали от 1:16 до 1: 1,024, тогда как ни в одном из образцов сыворотки не было антитела к PPV. У тринадцати из 14 живорожденных поросят от свиноматок 17 и 53 были антитела и к вирусу PRRS (титры НИФ 1:64 до 1:1,024), и PPV (титры HL 1:512 1:16,384).

Обсуждение
Настоящее исследование подтвердило способность различных изолятов вируса PRRS вызывать трансплацентарную инфекцию и оказывать патогенное влияние на плоды свиноматок на поздних сроках беременности. Однако между изолятами вируса PRRS наблюдалось очевидное различие патогенности. Когда проводили интраназальную инокуляцию многократно рожавших свиноматок вирусом PRRS ATCC-VR2332 на 93 день беременности (Chistianson, W.T. et al., Can. J. Vet. Res. , 57: 262-268 (1993)), они в среднем рожали 5,8 живых поросят и 6,0 мертвых плодов на приплод. В настоящем исследовании 6 свиноматок, инфицированных MN-HL или 2 полевыми вирусами, опоросились в среднем 2,7 живыми и 11,5 мертвыми поросятами на приплод, и, таким образом, эти вирусы расцениваются как высоко вирулентные. Патогенность ATCC-VR2332 и вирулентных вирусов, использованных в этом исследовании, была различной. Это может быть вследствие сроков беременности во время инфекции, поскольку вирусом ATCC-VR2332 инфицировали на 7 дней позже. Между тем 6 свиноматок, инфицированных MN-Hs, рожали в среднем 9,0 живорожденных и 2,7 мертвых поросят на опорос. Эти результаты значительно отличаются от результатов для вирулентных вирусов, показывая, что вирус MN-Hs представляет собой слабо патогенный штамм.

Интересно, что наблюдалось очевидное различие опороса свиноматок, инфицированных вирусами MN-Hs и MN-HL, которые были одинакового происхождения. В одинаковых условиях вирусы MN-Hs и MN-HL вызывали рождение соответственно 5 и 25 мертвых поросят (р<0,005). По результатам настоящего исследования можно придти к заключению, что патогенность MN-Hs и MN-HL существенно различна, причем один представляет собой слабопатогенный штамм, а другой - высокопатогенный вирус.

Выделение вируса у приплодов, инфицированных вирусом PRRS, было относительно легким, и вирус выделялся с одинаковой частотой у живых и мертворожденных поросят. Ввиду того, что вирус нельзя было выделить у всех поросят в инфицированном приплоде, попытку выделения вируса с диагностической целью следует предпринимать по меньшей мере у 2 или более поросят на приплод. Выло также обнаружено, что выделение вируса более удобно проводилось из образцов сыворотки, чем из образцов легочной ткани.

У приплодов свиноматок, инфицированных вирулентным вирусом, у одного или более мертворожденного поросенка имелось выявляемое антитело, специфичное для вируса PRRS. Эти результаты свидетельствуют о том, что выявление антитела у мертворожденных или еще не сосавших мать поросят может быть пригодным способом для диагностики инфекции вирусом PRRS у патологических приплодов. Этот способ стоило бы применять в лабораториях, где нет методик и средств для выделения вируса. В настоящем исследовании у 6 из 13 мертворожденных поросят имелись положительные титры антител к вирусу PRRS, но не к PPV, убеждая в том, что выявленные антитела имеют плодное происхождение и образуются вследствие наличия вируса PRRS.

Известно, почему в некоторых стадах, инфицированных вирусом PRRS, не развиваются клинические признаки. Наблюдалось, что в стадах с хорошим состоянием здоровья перед инфекцией вирусом PRRS проявлялась более слабая клиническая реакция, в сравнении со стадами с более низким уровнем здоровья. Преобладающее состояние здоровья наряду с различиями штаммов, показанные в этом исследовании, являются возможными объяснениями очевидных различий клинического проявления. Кроме того, можно утверждать, что взаимодействие между вирусами, образующими мелкие и крупные бляшки, может происходить в организме животного и изменять патогенность. Это может быть истиной, если мы учтем, что на ферме, где был выделен вирус MN-H, не было репродуктивных проблем, несмотря на присутствие на ферме патогенного вируса MN-HL PRRS.

Пример 2
Предпочтительные вакцины в соответствии с изобретением могут вводиться селекционным подсвинкам, свиноматкам, боровам или поросятам-отъемышам. Введение может производиться внутримышечно или перорально-интраназально и проводиться в любое время. Однако для защиты на весь период беременности предпочтительны вакцинации свиноматок-производителей перед спариванием и вскоре после отъема маленьких поросят для их защиты в поздние сроки вскармливания, роста и на завершающих стадиях.

В целом, вакцины изобретения вводятся в дозах 2 мл, которые содержат от приблизительно 10⁴ до приблизительно 10⁸ бляшкообразующих единиц (БОЕ), и более предпочтительно приблизительно 10⁶ БОЕ. В случае свиноматок-производителей иммунитет будет продолжаться по меньшей мере один период беременности, тогда как вакцинация маленьких поросят после отъема вызовет выработку иммунитета для защиты в течение всего заключительного периода откорма. Предпочтительные вакцины в соответствии с изобретением могут дать широкий диапазон перекрестной защиты.

Вакцины в соответствии с изобретением могут включать живой или модифицированный живой (ослабленный) вирус, а также обычные носители, стабилизаторы и/или адъюванты.

Пример 3
Введение
В этом примере была исследована способность вакцины, составленной из штамма MN-Hs Северно-американского вируса PRRS, защитить поросят 3-недельного возраста от виремии, вызванной инфекцией вирулентным штаммом MN-HL Северно-американского вируса PRRS. Респираторное заболевание, связанное с инфекцией Северно-американским вирусом, в первую очередь вызвано инфекцией вторичными патогенами, присутствующими на свинофермах. Однако в экспериментальных условиях респираторные клинические признаки у свиней, инфицированных Северно-американским вирусом PRRS, не воспроизводятся с постоянством вследствие отсутствия этих вторичных патогенов. Поэтому выявление виремии является лучшим показателем инфекции Северно-американским вирусом PRRS. Отсутствие виремии после контрольного заражения штаммом MN-HL указывает, что поросята, вакцинированные штаммом MN-Hs, обладают иммунитетом к инфекции штаммом MN-HL.

Материалы и методы
Двадцать поросят 3-недельного возраста были приобретены на ферме, где не было PRRS. Двенадцать поросят были интраназально вакцинированы штаммом MH-Hs (2 мл, 10^4,5 TCID₅₀/MA), а оставшиеся 8 поросят служили в качестве контроля. Вакцинированные и контрольные поросята содержались в отдельных помещениях блока-изолятора. Через 2 недели после вакцинации проводили контрольное заражение шести вакцинированных поросят (поросята с 81 по 86) и 4 контрольных поросят (поросята с 93 по 96) интраназальным введением штамма MH-HL (2 мл, 10^4,5 TCID₅₀/мл) (группа I). Аналогичным образом через 6 недель после вакцинации проводили контрольное заражение оставшихся 6 вакцинированных поросят (поросята с 87 по 92) и 4 контрольных поросят (поросята с 97 по 100) (группа II). Всех поросят ежедневно наблюдали для выявления клинических признаков. Кроме того, у каждого поросенка еженедельно брали образцы крови для (1) выделения вируса с использованием культуры клеток MARC-145 (Yoon et al., J. Vet. Diag. Invest., 6:289-292 (1994)) b (2) определения титров антитела нейтрализации сыворотки (НС) (Park et al. , Am. J. Vet. Res., 57:320-323 (1996)); выявление антитела НС у вакцинированных поросят указывает на защитный иммунитет к вирулентному Северно-американскому вирусу PRRS.

Результаты
После вакцинации у поросят групп I и II вирус вакцины выделяли до 3 недель после вакцинации. После контрольного заражения клинические признаки не наблюдали ни у одного из контрольных и вакцинированных поросят групп I и II.

Группа I. Во время контрольного заражения антитело НС не было выявлено ни у одного поросенка. После контрольного заражения вирус контрольного заражения был выделен как у вакцинированных, так и у контрольных поросят. Кроме того, как у вакцинированных, так и у контрольных поросят развилась виремия (таблица 1).

Группа II. Вакцинированные поросята вырабатывали антитело НС, начиная с 3 недель после вакцинации, и во время контрольного заражения у них были титры от 1:2 до 1:8. После контрольного заражения вирус контрольного заражения не был выделен у вакцинированных поросят, тогда как у контрольных поросят развилась виремия (таблица 4). Эти результаты показывают, что у вакцинированных поросят был приобретенный защитный иммунитет к вирулентному Северно-американскому вирусу PRRS.

Формула изобретения

1. Вакцина против репродуктивного и респираторного синдрома свиней (PRRS), содержащая штамм вируса репродуктивного и респираторного синдрома свиней (PRRS) ATCC-VR2509.

2. Вакцина по п. 1, отличающаяся тем, что штамм вируса репродуктивного и респираторного синдрома свиней (PRRS) является живым.

3. Вакцина по п. 1, отличающаяся тем, что доза штамма вируса репродуктивного и респираторного синдрома свиней (PRRS) составляет 10⁴-10⁸ БОЕ.

4. Способ иммунизации свиньи против репродуктивного и респираторного синдрома свиней (PRRS), включающий этапы введения вакцины по п. 1.

5. Способ по п. 4, отличающийся тем, что штамм вируса репродуктивного и респираторного синдрома свиней (PRRS) является живым.

6. Способ по п. 4, отличающийся тем, что свинья представляет собой свиноматку.

7. Способ по п. 4, отличающийся тем, что свинья представляет собой поросенка-сосунка, или поросенка-отъемыша, или подсвинка.

8. Способ по п. 4, отличающийся тем, что вакцина вводится животному внутримышечно, интраназально или перорально.

9. Способ получения вакцины по п. 1, включающий клонирование бляшек штамма вируса репродуктивного и респираторного синдрома свиней (PRRS) путем (a) инфицирования аликвоты клеток штамма CRL 12219, причем аликвота получена из конфлюентного монослоя клеток, поддерживаемых в минимальной основной среде Игла с добавкой 3% фетальной сыворотки теленка и 0,15% карбоната натрия, при этом аликвота включает 1-2•10⁵ клеток на мл минимальной основной среды Игла с добавкой 3% фетальной сыворотки теленка и 0,15% карбоната натрия; (b) инкубации аликвоты при 37^oС в течение 6 мин; (c) удаления инокулята из аликвоты; (d) промывания аликвоты минимальной основной средой Игла; (e) повторного суспендирования аликвоты в 5 мл 2Х минимальной основной среды Игла и 1,6% кипяченого агара Noble с добавкой 250 мкг диэтиламиноэтил (ДЭАЭ)-декстрана; (f) помещения аликвоты на чашки; (g) дальнейшей инкубации аликвоты при 37^oС в течение 5 дней в СО₂ инкубаторе для получения бляшек; отбор бляшек, имеющих диаметр менее 2 мм, для получения вакцины.

10. Способ по п. 9, отличающийся тем, что вакцина содержит живой штамм вируса репродуктивного и респираторного синдрома свиней (PRRS).

11. Способ по п. 9, отличающийся тем, что используют очищенный штамм вируса репродуктивного и респираторного синдрома свиней (PRRS).

12. Способ по п. 9, отличающийся тем, что используют штамм вируса репродуктивного и респираторного синдрома свиней (PRRS) ATCC-VR2509.

13. Выделенный и очищенный штамм вируса репродуктивного и респираторного синдрома свиней (PRRS), ATCC-VR2509, предназначенный для получения вакцины.

14. Штамм по п. 13, отличающийся тем, что штамм является живым.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6, Рисунок 7