Способы и композиции для модуляции взаимодействия между apj- рецептором и вирусом иммунодефицита человека (вич)

 

Изобретение относится к области медицинской генетики. Сущность изобретения: состоящий из семи трансмембранных доменов рецептор орфана APJ может функционировать в качестве корецептора при заражении клеток вирусом ВИЧ. Первым объектом изобретения является линия человеческих клеток, трансформированная полинуклеотидом, кодирующим полипептид APJ и/или полинуклеотид, кодирующий полипептид CD4, причем она совместно экспрессирует полипептиды APJ и CD4. Изобретение также относится к антителу, которое специфично связывается с внеклеточным доменом APJ, и ингибирует заражение ВИЧ клетки-мишени, которая совместно экспрессирует полипептиды APJ и CD4, или ингибирует мембранное слияние между первой клеткой, совместно экспрессирующей APJ и CD4, и второй клеткой, экспрессирующей env-протеин ВИЧ. Объектом изобретения также является практически очищенный пептидный фрагмент APJ, который ингибирует заражение ВИЧ клетки-мишени, совместно экспрессирующей полипептиды APJ и CD4, или ингибирует мембранное слияние между первой клеткой, совместно экспрессирующей APJ и CD4, и второй клеткой, экспрессирующей env-протеин ВИЧ. Кроме того, объектами изобретения являются способы выявления соединений, которые модулируют взаимодействие между вирусом ВИЧ и APJ-рецептором, способ ингибирования заражения ВИЧ клетки-мишени, экспрессирующей полипептиды APJ и CD4, который предусматривает приведение в контакт клетки-мишени с эффективным количеством агента, связывающего или блокирующего APJ, а также способ ингибирования заражения ВИЧ или родственным заболеванием, предусматривающий введение пациенту терапевтически эффективного количества антитела к APJ. Технический результат изобретения - расширение арсенала средств для борьбы с ВИЧ-инфекцией. 11 с. и 23 з.п. ф-лы, 9 ил., 1 табл.

Текст описания в факсимильном виде (см. графическую часть).

Формула изобретения

1. Линия человеческих клеток, трансформированная полинуклеотидом, который кодирует полипептид APJ, или полинуклеотидом, кодирующим полипептид CD4, которая совместно экспрессирует полипептиды APJ и CD4.

2. Линия человеческих клеток по п.1, где клетку стабильно трансформируют.

3. Линия человеческих клеток, трансформированная полинуклеотидом, который кодирует полипептид APJ, и полинуклеотидом, кодирующим полипептид CD4, которая совместно экспрессирует полипептиды APJ и CD4.

4. Линия человеческих клеток по п.2, где клетку стабильно трансформируют обоими полинуклеотидами.

5. Антитело для ингибирования заражения ВИЧ клетки-мишени, которая совместно экспрессирует полипептиды APJ и CD4, специфично связывающееся с внеклеточным доменом APJ.

6. Антитело для ингибирования слияния мембран между первой клеткой, которая совместно экспрессирует полипептиды APJ и CD4, и второй клеткой, которая экспрессирует env-протеин ВИЧ, специфично связывающееся с внеклеточным доменом APJ.

7. Антитело по п.5 или 6, где антитело представляет собой моноклональное антитело.

8. Антитело по п.7, где антитело распознает эпитоп, включающий аминокислотную последовательность, которая является частью первого внеклеточного домена APJ.

9. Антитело по п.8, где аминокислотная последовательность соответствует части первого внеклеточного домена APJ, включающей аминокислотную последовательность Asn-Tyr-Tyr-Gly (SEQ ID NO:3).

10. Антитело по п.7, где антитело распознает эпитоп, включающий аминокислотную последовательность, которая является частью второго внеклеточного домена APJ.

11. Практически очищенный пептидный фрагмент APJ, ингибирующий заражение ВИЧ клетки-мишени, которая совместно экспрессирует полипептиды APJ и CD4.

12. Практически очищенный пептидный фрагмент APJ, ингибирующий клеточное слияние между первой клеткой, которая совместно экспрессирует полипептиды APJ и CD4, и второй клеткой, которая экспрессирует env-протеин ВИЧ.

13. Практически очищенный пептидный фрагмент APJ по п.11 или 12, где пептидный фрагмент включает аминокислотную последовательность, которая является частью первого внеклеточного домена APJ.

14. Практически очищенный пептидный фрагмент APJ по п.13, где аминокислотная последовательность соответствует части первого внеклеточного домена APJ, включающей аминокислотную последовательность Asn-Tyr-Tyr-Gly (SEQ ID NO:3).

15. Практически очищенный пептидный фрагмент APJ по п.11 или 12, где пептидный фрагмент включает аминокислотную последовательность, которая является частью второго внеклеточного домена APJ.

16. Способ идентификации соединения, которое модулирует взаимодействие между вирусом ВИЧ и APJ-рецептором, предусматривающий инкубацию первой линии клеток человека, которая совместно экспрессирует полипептиды CD4 и APJ, и второй линией клеток человека, которая экспрессирует env-протеин, в условиях, которые усиливают слияние клеток, в присутствии тестируемого соединения или без него, и выявление наличия ингибирования тестируемым соединением клеточного слияния между первой и второй линиями клеток.

17. Способ по п.16, где клеточное слияние определяют путем выявления репортерной молекулы.

18. Способ по п.17, где репортерную молекулу выбирают из группы, включающей радиоактивный изотоп, флуоресцентное соединение, биолюминисцентное соединение, хемилюминисцентное соединение, хелатирующий металл или фермент.

19. Способ по п.17, где репортерная молекула представляет собой β-галактозидазу или люциферазу.

20. Способ идентификации соединения, которое модулирует взаимодействие между вирусом ВИЧ и APJ-рецептором, предусматривающий инкубацию линии клеток человека, которая совместно экспрессирует полипептиды CD4 и APJ, с тестируемым вирусом, несущим env-протеин, в присутствии тестируемого соединения или без него, и выявление наличия ингибирования тестируемым соединением заражения линии человеческих линий тестируемым вирусом.

21. Способ по п.20, где заражение определяют путем выявления репортерной молекулы.

22. Способ по п.21, где репортерную молекулу выбирают из группы, включающей радиоактивный изотоп, флуоресцентное соединение, биолюминисцентное соединение, хемилюминисцентное соединение, хелатирующий металл или фермент.

23. Способ по п.21, где репортерная молекула представляет собой β-галактозидазу или люциферазу.

24. Способ ингибирования заражения ВИЧ клетки-мишени, которая экспрессирует полипептиды APJ и CD4, предусматривающий использование лекарственного средства, содержащего эффективное количество связывающего или блокирующего APJ агента.

25. Способ по п.24, где агент представляет собой антитело к APJ или его эпитопсвязывающий фрагмент.

26. Способ по п.25, где антитело представляет собой моноклональное антитело или поликлональное антитело.

27. Способ по п.24, где агент представляет собой пептидный фрагмент APJ.

28. Способ ингибирования родственного ВИЧ заболевания, связанного с экспрессией APJ, предусматривающий введение пациенту лекарственного средства, которое подавляет его APJ.

29. Способ по п.28, где агент представляет собой антитело к APJ.

30. Способ по п.28, где агент представляет собой антисмысловой полинуклеотид, который гибридизуется с полинуклеотидом APJ.

31. Способ по п.28, где агент интродуцируют в клетку с помощью носителя.

32. Способ по п.31, где носитель представляет собой вектор.

33. Способ ингибирования заражения ВИЧ, предусматривающий введение пациенту, имеющему риск заражения ВИЧ или родственным заболеванием, лекарственного средства, включающего терапевтически эффективное количество антитела к APJ или его пептидного фрагмента.

34. Способ по п.33, где пациент представляет собой эмбрион.

РИСУНКИ

Рисунок 1, Рисунок 2, Рисунок 3, Рисунок 4, Рисунок 5, Рисунок 6, Рисунок 7, Рисунок 8, Рисунок 9, Рисунок 10, Рисунок 11, Рисунок 12, Рисунок 13, Рисунок 14, Рисунок 15, Рисунок 16, Рисунок 17, Рисунок 18, Рисунок 19, Рисунок 20, Рисунок 21, Рисунок 22, Рисунок 23, Рисунок 24, Рисунок 25, Рисунок 26, Рисунок 27, Рисунок 28, Рисунок 29, Рисунок 30, Рисунок 31, Рисунок 32, Рисунок 33, Рисунок 34, Рисунок 35, Рисунок 36, Рисунок 37, Рисунок 38, Рисунок 39, Рисунок 40, Рисунок 41, Рисунок 42, Рисунок 43, Рисунок 44, Рисунок 45, Рисунок 46, Рисунок 47, Рисунок 48, Рисунок 49, Рисунок 50, Рисунок 51, Рисунок 52, Рисунок 53, Рисунок 54, Рисунок 55, Рисунок 56, Рисунок 57, Рисунок 58, Рисунок 59, Рисунок 60, Рисунок 61, Рисунок 62, Рисунок 63