Вещество с противовирусной и антибактериальной активностью на основе производных 2,8-дитиоксо-1h-пирано[2,3-d, 6,5-d`] дипиримидина и их 10-аза-аналогов
Изобретение относится к новому веществу, обладающему антивирусной и антибактериальной активностью на основе производных 2,8-дитиоксо-1Н-пирано[2,3-d; 6,5-d']дипиримидина и их 10-аза-аналогов, отличающееся тем, что включает производное указанной группы общей формулы А1 * М:
где Х выбран из группы: О, NH, N-Alkyl;
R1 выбран из группы: Н, ОН, Cl, O-Alkyl, NH2, NH-Alkyl, NH-Ar, N(Alkyl)2, SH, S-Alkyl;
R2 выбран из группы: фенилнезамещенный или замещенный, нафтил,тиенил;
R3 выбран из группы: Н, Cl, O-Alkyl, NH2, NH-Alkyl, S-
дигидроксипиримидинил;
М либо отсутствует, либо выбран из группы: катион Na, К, Li,
аммония, или любой другой фармакологически приемлемый катион; либо комплекс фармакологически приемлемого катиона (см. выше) с анионом одного из производных А1 (варианты R1-R3 заданы выше).
Технический результат - получение новых соединений, обладающих противовирусной и антибактериальной активностью. 1 н. и 16 з.п. ф-лы, 7 табл.
Изобретение относится к области органической химии и медицины, конкретно к синтетическим производным пиримидина -2,8-дитиоксо-1Н-пирано[2,3-(1; 6,5-d']дипиримидина и их 10-аза-аналогам, а также их комплексам и солям, обладающим противовирусной и противобактериальной активностью. Изобретение предназначено в основном для использования в медицине и ветеринарии для лечения вирусных заболеваний и заболеваний, вызываемых бактериями, а также в косметологии в качестве добавки для профилактики и лечения инфекций.
Как известно, многие производные пиримидина обладают выраженной биологической активностью и участвуют в процессах жизнедеятельности организмов [1 - Досон Р. и др. Справочник биохимика. М., Мир, 1991, 544]. Большое значение имеют и синтетические производные пиримидина, из которых широкое использование в медицине приобрели замещенные барбитуровые кислоты, урацилы и др. [2 - Машковский М.Д. Лекарственные средства, 14-е изд., М., "Новая Волна", 2000]. Данные о биологической активности 5-илиденпроизводных барбитуровых кислот суммированы в обзоре [3 - Sans R.G., Chosas M.G. // Pharmazie, 1988, Bd 43, N12, S.827-829], где отмечено антиконвульсантное, антимикробное, спазмолитическое, жаропонижающее, противоопухолевое действие этих веществ. Получены данные о биологической активности некоторых 5-арилиденбарбитуровых кислот Singh А. и др. // Pharmacol. Res., 1989, Vol.21, N1, P.59-64 (Chemical Abstracts, Vol.11, 49906z); Патент Японии No 05213755, опубл. 24.08.1993 (Chemical Abstracts, 1993, Vol.119, 262520 г); Kumar А., и др. // Indian J., Chem. Sect. 1988, Vol.27, N5, P.443-447], 5-аминометиленбарбитуровых кислот [9 -.Kreutzberger А. и др. // Arch. Pharm., 1983, Bd 316, Н. 1, S.6-9], 5-арилкарбамоилбарбитуровых кислот [10, 11 - Minatelli J.A. и др. заявка Германии №3446371, опубл. 27.06.1985; Brewer A.D. Патент США №4920126, опубл. 24.04.1990]. Высокая активность обнаружена также у аннелированных производных пиримидина, например у пиразоло[3,4-d]пиримидинов, [12 -Naka Т. и др. заявка ЕПВ №. 237289 (1987)], 5-деазафлавинов [13, 14-.Kimachi Т. и др. // J. Heterocycl. Chem., 1992, Vol.29, N4, P.763-765; 5-диалкиламинометилуридинов [19 -Motawia M.S. и др. // Monatsh. Chem., 1993, Bd 124, Н. 1, S.55-64] и пиримидо[4,5-с]пиридазинов [20 - Billings B.K. и др. // J. Heterocycl. Chem., 1975, Vol.12, N6, P.1221-1224]. Перечисленные соединения обладают пестицидным, противоопухолевым, антимикробным, иммуносупрессивным, ноотропным, антигипертензионным и антиаллергическим действием.
В то же время многие группы производных пиримидина остаются практически неисследованными, с одной стороны, из-за их синтетической труднодоступности, а с другой стороны, из-за отсутствия объективных критериев, позволяющих заранее ожидать, что они проявят желаемую биологическую активность, и не будут при этом обладать высокой токсичностью и другими побочными эффектами. Поэтому, несмотря на теоретические и практические сложности, синтез новых групп производных пиримидина и изучение их биологической активности, остается актуальным направлением поиска эффективных средств лечения основных болезней человечества. В связи с этим особенно интересен синтез соединений редкой и малоисследованной группы - производных пирано[2,3-d: 6,5-d']дипиримидина. К настоящему времени известно лишь несколько единичных примеров образования пиранодипиримидиновой системы, в частности, при взаимодействии барбитуровых кислот с 3-ацилхромонами [21, 22 - Eiden F. и др. // Chemische Berichte, 1968, Bd 101, N8, S.2894-2898; [21, 22 - Eiden F. и др. // Chemische Berichte, 1968, Bd 101, N 8, S.2894-2898; Eiden F. и др..// Arch. Pharm., 1972, Bd 305, N 3, S. 187-193]. Сведения об их биологической активности отсутствуют.
Наиболее близкими к заявляемым соединениям по химическому строению и назначению являются производные 5Н-пирано[2,3-d:6,5-d']дипиримидина, обладающие антибактериальным, антивирусным и иммуномодулирующим действием [23 - Ашкинази Р.И. PCT/RU97/00371 от 19.11.1997, патент RU 2188201]. Это соединения выбраны нами в качестве прототипа. При этом вещества прототипа обладают ограниченным спектром противовирусного и антибактериального действия: они не активны против вирусов гриппа не или мало активны против ретровирусов.
Задачей изобретения является получение новых, более эффективных химических соединений с противовирусным и антибактериальным действием.
Поставленная задача решается синтезом новых веществ общей формулы А1*М:
где Х выбран из группы: О, NH, N-Alkyl;
R1 выбран из группы: Н, ОН, Cl, O-Alkyl, NH2, NH-Alkyl, NH-Ar, N(Alkyl)2, SH, S-Alkyl;
R2 выбран из группы: фенилнезамещенный или замещенный, нафтил, тиенил;
R3 выбран из группы: Н, Cl, O-Alkyl, NH2, NH-Alkyl, S-дигидроксипиримидинил;
М либо отсутствует, либо выбран из группы: катион Na, К, Li, аммония, или любой другой фармакологически приемлемый катион; либо комплекс фармакологически приемлемого катиона (см. выше) с анионом одного из производных А1 (варианты R1-R3 заданы выше).
В данной серии экспериментов наилучшую активность среди заявленных веществ А1*М (где М отсутствует) проявили следующие производные:
Как видно из вышеприведенных материалов, заявляемые нами производные пирано[2,3-d: 6,5-d']дипиримидина А1*М отличаются от прототипа наличием других функциональных групп в пиримидиновых фрагментах и не могут быть получены по методам, указанным в прототипе. Необходимо отметить, что наличие высокой биологической активности у заявляемых веществ не вытекает из существующего уровня техники, так как пирано[2,3-d;6,5-d']дипиримидины и их 10-аза-аналоги являются сложной и на настоящий момент малоисследованной группой, для новых представителей которой спектр и уровень активности невозможно предсказать заранее. Заявляемые вещества являются новыми, так как они отсутствуют в известных источниках информации. Таким образом, изобретение является новым, неочевидным и обладает преимуществами перед известными на настоящий момент образцами.
Следует отметить, что изобретение распространяется не только на наиболее активные соединения (Ia, Ib, IIа, III-XII) и их комплексные соли (XIII-XV), но также и на все производные А1*М, предусмотренные формулой изобретения. Проведенные нами исследования показали, что все вещества, полученные на основе предложенного нами общего способа синтеза, обладают заявленными видами активности в той или иной степени. Это позволяет заключить, что как для процесса синтеза, так и для биологических свойств заявляемых соединений наиболее существенное значение имеют не частные особенности строения радикалов R1, R2, R3, а их принадлежность к указанным в общей формуле химическим группам.
Сущность изобретения поясняется приведенными далее сведениями:
А) Синтез и анализ заявляемых соединений:
Общий способ синтеза - два этапа.
Примеры синтеза заявленных веществ, где:
Пример 1 - вариант выполнения первого этапа - синтеза промежуточного (и одновременно целевого) продукта, а именно -4-хлор-6-гидрокси-5-арил-5,9-дигидро-1Н-пирано[2,3-d; 6,5-d']дипиримидин-2,8-дитиона (Iа).
Пример 2 - Вариант выполнения первого этапа -синтеза промежуточного (и одновременно целевого) продукта, а именно-4,6-дихлор-5-арил-5,9-дигидро-1Н-пирано[2,3-d; 6,5-d']дипиримидин-2,8-дитиона (IIа).
Пример 3 - Вариант выполнения второго этапа - синтеза целевого продукта, а именно -4-амино-6-гидрокси-5-арил-5,9-дигидро-1Н-пирано[2,3-d; 6,5-d']дипиримидин-2,8-дитиона (III).
Пример 4 - Вариант выполнения второго этапа - синтеза целевого продукта, а именно -4-хлор-6-амино-5-(4-нитрофенил)-5,9-дигидро-1Н-пирано[2,3-d; 6,5-d']дипиримидин-2,8-дитиона (IV).
Пример 5 - Вариант выполнения второго этапа - синтеза целевого продукта, а именно -4,6-диамино-5-арил-5,9-дигидро-1Н-пирано[2,3-d; 6,5-d']дипиримидин-2,8-дитиона (V).
Пример 6 - Вариант выполнения второго этапа - синтеза целевого продукта, а именно -4,5-диамино-10-арил-9,10-дигидро-1Н, 8Н-1, 3, 6, 8, 9-пентаазаантрацен-2,7-дитиона (VI).
Пример 7. - Вариант выполнения второго этапа - синтеза целевого продукта, а именно -4-(4,6-дигидроксипиримидин-2-сульфанил)-6-гидрокси-5-арил-5,9-дигидро-1Н-пирано[2,3-d; 6,5-d']дипиримидин-2,8-дитиона (X).
Пример 8 - Вариант выполнения второго этапа - синтеза целевого продукта, а именно -6-гидрокси-5-(4-нитрофенил)-5,9-дигидро-1Н-пирано[2,3-d; 6,5-d']дипиримидин-2,8-дитиона (XI).
Пример 9 - Вариант выполнения второго этапа - синтеза целевого продукта, а именно -комплексной соли XIII, в состав которой входят соединения Ib, XII и аммиак {1b (1 моль), XII (1 моль), NH3 (1 моль)}.
Пример 10 - Вариант выполнения второго этапа - синтеза целевого продукта, а именно -комплексной соли XIV, в состав которой входят соединения III, XII и аммиак {III (1 моль), XII (1 моль), NН3 (1 моль)}.
Физико-химические характеристики - с двумя сводными таблицами:
Таблица 1 - спектры ПМР заявляемых соединений
Таблица 2 - температуры разложения и результаты элементного анализа.
Б) Экспериментальное определение биологических свойств заявленных соединений:
Пример 11 - определение действия на вирус герпеса (с Таблицей 3).
Пример 12 - определение действия на Chlamydia trachomatis (с Таблицей 4).
Пример 13 - определение действия на вирусы гриппа А и Б (с Таблицей 5)
Пример 14 - определение активности против вируса иммунодефицита человека (с Таблицей 6).
Пример 15 - Использование заявляемых соединений совместно с препаратами, применяемыми для лечения СПИДа (с Таблицей 7).
Пример 16 - определение острой токсичности заявляемых веществ.
А. СИНТЕЗ И АНАЛИЗ ЗАЯВЛЯЕМЫХ СОЕДИНЕНИЙ
Общий способ синтеза заявленных соединений (два этапа).
Предлагаемый нами синтез включает в себя два основных этапа:
Первый этап: Синтезируют 5-арилпроизводные 4-хлор-6-гидрокси-5,9-дигидро-1Н-пирано[2,3-d; 6,5-d']дипиримидин-2,8-дитиона (Ia, b) или 4,6-дихлор-5,9-дигидро-1Н-пирано[2,3-d; 6,5-d']дипиримидин-2,8-дитиона (IIа) из соответствующих ароматических альдегидов и 2-тиобарбитуровой кислоты с последующей обработкой РОСl3 или другими хлорирующими и водоотнимающими агентами. Полученные при этом промежуточные соединения (Ia, b IIа и их аналоги) являются одновременно и целевыми, так как обладают достаточно высоким уровнем заявляемой биологической активности.
Второй этап.Синтезируют целевые соединения (III-V, VIII-XII и их аналоги, где Х=О, R1=ОН, незамещенная или замещенная аминогруппа, R2=незамещенное или замещенное бензольное кольцо, R3 -незамещенная или замещенная аминогруппа, или алкоксигруппа, незамещенная или замещенная меркаптогруппа) из полученных на первом этапе промежуточных веществ (I и II) путем замещения одного или двух атомов хлора в трициклической 1Н-пирано[2,3-d; 6,5-d']дипиримидин-2,8-дитионовой системе на NH2-, алкиламино-или диалкиламиногруппу, алкоксигруппу, SH-, алкилтио-, арилтио-или гетарилтиогруппу с помощью обработки соответствующими нуклеофильными реагентами (аминами, алкоголятами или тиолятами);
- Синтезируют целевые соединения (VI, VII и их аналоги, где X=NH или N-Alkyl, R1=ОН, незамещенная или замещенная аминогруппа, R2 -незамещенное или замещенное бензольное кольцо, R3 - незамещенная или замещенная аминогруппа) из полученных на первом этапе промежуточных веществ (Ia, b и IIа) путем замещения одного или двух атомов хлора в трициклической 1Н-пирано[2,3-d; 6,5-d']дипиримидин-2,8-дитионовой системе на NH2 или алкиламиногруппу, с одновременным обменом пиранового атома кислорода (O10) на аминогруппу;
- Синтезируют целевые соединения (XI и его аналоги, где R2 - незамещенное или замещенное бензольное кольцо) из полученного на первом этапе промежуточного вещества (Iа) путем его восстановительного дегалогенирования;
- Синтезируют целевые соединения (комплексные соли XIII-XV) путем растворения эквимольных количеств соединений III и ХII или XI и XII, или Ib и XII в избытке аммиака и с дальнейшим подкислением раствора.
Пример 1. Вариант выполнения первого этапа - синтеза промежуточного (и одновременно целевого) продукта, а именно 4-хлор-6-гидрокси-5-фенил-5,9-дигидро-1Н-пирано[2,3-d; 6,5-d']дипиримидин-2,8-дитиона (Iа).
Растворяют 0.1 моль 2-тиобарбитуровой кислоты (XVI) в 50 мл диметилацетамида. К этому раствору при перемешивании прибавляют смесь 0.05 моль бензальдегида * и 0.05 моль основания (триэтиламина) в растворе диметилацетамида. Через несколько часов разбавляют эфиром, осадок промывают эфиром и сушат триэтиламмониевую соль XVII.
К полученной соли XVII (27 г) приливают 0.3 моль РОСl3, 100 мл хлороформа и кипятят 3 ч. Затем растворитель отгоняют, к остатку прибавляют воду и отделяют твердое вещество, промывают его водой и сушат. Получают продукт Iа с выходом 81%.
*Примечание. 4-Хлор-6-гидрокси-5-(4-нитрофенил)-5,9-дигидро-1Н-пирано[2,3-d; 6,5-d']дипиримидин-2,8-дитион (Ib) и 4-хлор-6-гидрокси-5-(4-хлорфенил)-5,9-дигидро-1Н-пирано[2,3-d; 6,5-d']дипиримидин-2,8-дитион (Iс) получают по аналогичной методике (выход 84 и 77%) при использовании п-нитробензальдегида или п-хлорбензальдегида вместо бензальдегида соответственно.
Аналогично при использовании других ароматических альдегидов получаются соответствующие 5-арилпроизводные 4-хлор-6-гидрокси-5,9-дигидро-1Н-пирано [2,3-d; 6,5-d']дипиpимидин-2,8-дитиoнa (см. общую формулу, Х=О, R1=ОН, R2=Aryl, R3=Cl, M - нет). Соответственно получены производные Id-Li (расшифровка радикалов - см. общую формулу):
n-метилбензальдегида - Id (R1=OH, R2=n-толил, R3=С1);
из n-фторбензальдегида - Ie (R1=OH, R2=C6H4-F(p), R3=C1);
из n-этоксибензальдегида - If(R1=OН, R2=C6H4-OEt(p), R3=C1);
из 3,4-диметоксибензальдегида - Ig (R1=OH, R2=C6H3-3,4-(OMe)2, R3=C1);
из 1-нафтальдегида- Ih (R1=OH, R2=1-Нафтил, R3=C1);
из тиофен-2-альдегида - Ii (R1=OH, R2=2-Tиeнил, R3=C1).
Мы не перечисляем все эти варианты, ограничиваясь наиболее активными представителями (Iа, Ib), приведенными в таблице 1.
Пример 2. Вариант выполнения первого этапа - синтеза промежуточного (и одновременно целевого) продукта, а именно 4,6-дихлор-5-(4-нитрофенил)-5,9-дигидро-1Н-пирано[2,3-d; 6,5-d']дипиримидин-2,8-дитиона (IIа).
К 0.1 моль 2-тиобарбитуровой кислоты (XII) в 50 мл пиридина прибавляют 0.05 моль п-нитробензальдегида и нагревают смесь до полного растворения. Через несколько часов разбавляют эфиром, осадок промывают эфиром и сушат пиридиниевую соль (XVIII).
К полученной соли XVIII (26,5 г) приливают 0,5 моль POCl3* и нагревают с обратным холодильником около 1 ч до растворения осадка. Затем избыток POCl3 отгоняют, к остатку прибавляют воду и отделяют твердое вещество, промывают его водой и сушат. К этому веществу вновь прибавляют 0,5 моль РОСl3 и повторяют вышеописанную процедуру. После промывки и сушки получают продукт IIа с выходом 77%.
*Примечание. По аналогичной методике, при использовании вместо РОСl3 трифторуксусного ангидрида, получают 4,6-дигидрокси-5,9-дигидро-1Н-пирано[2,3-d; 6,5-d']дипиримидин-2,8-дитион XII и его аналоги (см. общую формулу, Х=О, R1=R3=ОН, R2=Aryl, M отсутствует)
Пример 3. Вариант выполнения второго этапа -синтеза целевого продукта, а именно 4-амино-6-гидрокси-5-(4-нитрофенил)-5,9-дигидро-1Н-пирано[2,3-d; 6,5-d']дипиримидин-2,8-дитиона (III).
0.01 моль соединения Iб при перемешивании порциями растворяют в 30 мл 25%-ного аммиака *. Нерастворенное вещество отделяют, а раствор выдерживают сутки при комнатной температуре, затем разбавляют водой и подкисляют до рН 5-6. Выделившийся осадок отделяют, промывают водой, спиртом и сушат. Получают продукт III с выходом 71%.
*Примечание. По аналогичной методике, при использовании метиламина вместо аммиака, получают 4-метиламино-6-гидрокси-5-(4-нитрофенил)-5,9-дигидро-1Н-пирано[2,3-d; 6,5-d']дипиримидин-2,8-дитион (VIII), выход 78% и 4-диметиламино-6-гидрокси-5-(4-нитрофенил)-5,9-дигидро-1Н-пирано[2,3-d; 6,5-d']дипиримидин-2,8-дитион (IX), выход 73%. Методика, приведенная в примере 3, является общей и позволяет аналогично, исходя из других 5-арилпроизводных 4-хлор-6-гидрокси-5,9-дигидро-1Н-пирано[2,3-d; 6,5-d']дипиримидин-2,8-дитиона, замещением атом хлора в реакции с аммиаком (или алкиламинами) на аминогруппу, получать соответствующие 5-арил-4-аминопроизводные 6-гидрокси-5,9-дигидро-1Н-пирано[2,3-d; 6,5-d']дипиримидин-2,8-дитиона (см. общую формулу, где Х=О, R1=ОН, R2=незамещенный или замещенный фенил или др. арил, R3=NH2 или NHAlk, или NAlk2, M отсутствует). Мы не перечисляем все эти варианты, ограничиваясь наиболее активными представителями (III, VIII, IX), приведенными в таблице 1.
Пример 4. Вариант выполнения второго этапа - синтеза целевого продукта, а именно 4-хлор-6-амино-5-(4-нитрофенил)-5,9-дигидро-1Н-пирано[2,3-d; 6,5-d']дипиримидин-2,8-дитиона (IV).
К 0.01 моль соединения IIa приливают 10 мл спирта, содержащего 0.02 моль NH4OH, и перемешивают. Смесь выдерживают сутки при комнатной температуре, затем разбавляют водой и подкисляют до рН 5-6. Выделившийся осадок отделяют, промывают водой и сушат. Получают продукт IV с выходом 54%.
Пример 5. Вариант выполнения второго этапа синтеза и получения целевого продукта, а именно 4,6-диамино-5-(4-нитрофенил)-5,9-дигидро-1Н-пирано[2,3-d; 6,5-d']дипиримидин-2,8-дитиона (V).*
0.01 моль соединения IIa при перемешивании порциями растворяют в 30 мл 25%-ного аммиака. Нерастворенное вещество отделяют, а раствор выдерживают сутки при комнатной температуре, затем разбавляют водой и подкисляют до рН 5-6. Выделившийся осадок отделяют, промывают водой, спиртом и сушат. Получают продукт V с выходом 66%.
*Примечание. Методика, приведенная в примере 5, является общей и позволяет аналогично, исходя из других 5-арилпроизводных 4,6-дихлор-5,9-дигидро-1Н-пирано[2,3-d; 6,5-d']дипиримидин-2,8-дитиона, замещать атомы хлора в реакции с аммиаком (или алкиламинами) на аминогруппы и получать соответствующие 5-арил-4,6-диаминопроизводные 5,9-дигидро-1Н-пирано[2,3-d; 6,5-d']дипиримидин-2,8-дитиона (см. общую формулу, где Х=О, R1, R3=NH2 или NHAlk, или NAlk2, R2=незамещенный или замещенный фенил или др. арил, М отсутствует). Мы не перечисляем все эти варианты, ограничиваясь наиболее активными представителями (III, VIII, IX), приведенными в таблице 1.
Пример 6. Вариант выполнения второго этапа синтеза и получения целевого продукта, а именно 4,5-диамино-10-(4-нитрофенил)-9,10-дигидро-1Н, 8Н-1, 3, 6, 8, 9-пентаазаантрацен-2,7-дитиона(VI).
0.01 моль соединения IIа растворяют в 80 мл 25%-ного аммиака. Раствор фильтруют от нерастворенных частиц и нагревают сутки с обратным холодильником. Затем упаривают до 40 мл, охлаждают, выпавший осадок промывают водой, спиртом и сушат. Получают продукт VI с выходом 31%.
Примечание. По аналогичной методике, из соединения Iс (см. Пример 1) получают 4-гидрокси-5-амино-10-(4-хлорфенил)-9,10-дигидро-1Н, 8Н-1, 3, 6, 8, 9 -пентаазаантрацен-2,7-дитион(VII).
Пример 7. Вариант выполнения второго этапа -синтеза целевого продукта, а именно 4-(4,6-дигидроксипиримидин-2-сульфанил)-6-гидрокси-5-(4-нитрофенил)-5,9-дигидро 1Н-пирано[2,3-d; 6,5-d']дипиримидин 2,8-дитиона (X).
0.015 моль 2-тиобарбитуровой кислоты (XVI) при перемешивании растворяют в 20 мл воды, содержащей 0.03 моль NaOH. К полученному раствору приливают 20 мл диметилсульфоксида, затем добавляют раствор 0.01 моль соединения Ib в диметилсульфоксиде и перемешивают несколько часов при комнатной температуре. Раствор разбавляют водой, подкисляют до рН 5-6, выпавший осадок отделяют, промывают его водой, спиртом и сушат. Получают продукт Х с выходом 42%.
Пример 8. Вариант выполнения второго этапа -синтеза целевого продукта, а именно -6-гидрокси-5-(4-нитрофенил)-5,9-дигидро-1Н-пирано[2,3-d; 6,5-d']дипиримидин-2,8-дитиона (XI).
0.01 моль соединения Ib растворяют в 25 мл ледяной уксусной кислоты. К этому раствору в течение 0.5 ч при перемешивании прибавляют небольшими порциями 0.02 моль NaBH4, поддерживая температуру не выше 30°С. Перемешивают еще 4 ч и выливают смесь в воду, выпавший осадок отделяют, промывают водой, спиртом и перекристаллизовывают из диметилформамида. Получают продукт XI с выходом 36%.
Пример 9 - Вариант выполнения второго этапа -синтеза целевого продукта, а именно комплексной соли XIII, в состав которой входят следующие вещества: соединение Ib (1 моль), соединение XII (1 моль) и NH3 (1 моль).
0.01 моль соединения Ib * и 0.01 моль соединения XII растворяют при перемешивании без нагревания в 200 мл 0.5% аммиака. Нерастворившийся остаток отделяют и обрабатывают новой порцией 50 мл 0.5% аммиака. Объединенный прозрачный раствор подкисляют уксусной кислотой и выдерживают несколько часов при комнатной температуре. Выпавший осадок отделяют, промывают его водой, спиртом и сушат. Получают 6.9 г комплексной соли XIII, выход 80%.
*Примечание 1. По аналогичной методике, при использовании вместо Ib других соединений (III или XI) получают соответственно комплексные соли XIV и XV.
Пример 10 - Вариант выполнения второго этапа синтеза и получения целевого продукта, а именно комплексной соли XIV, в состав которой входят следующие вещества: III (1 моль), XII (1 моль) и NН3 (1 моль).
К 0.01 моль пиридиниевой соли XVIII (см. Пример 2) приливают 12 мл РОСl3 и нагревают с обратным холодильником около 40-50 мин до тех пор, пока подавляющая часть осадка не перейдет в раствор. Декантируют раствор от осадка и отгоняют 5 мл РОСl3, выливают в лед и после гидролиза отделяют твердое вещество и промывают его водой. К полученному продукту прибавляют 40 мл воды и 10 мл конц. аммиака и перемешивают 4 часа без нагревания, при этом подавляющая часть осадка растворяется. Раствор фильтруют от нерастворенных частиц и подкисляют уксусной кислотой. Через несколько часов фильтруют выпавший осадок, промывают водой и сушат. Получают продукт XIV с выходом 71%.
ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ ЗАЯВЛЯЕМЫХ ВЕЩЕСТВ
Таблица 1. Спектры ПМР заявляемых веществ (ДМСО-d6, δ, м.д., J, Гц) | ||||
№ | С(5)Н 1Н,с* | Ar | NH (ОН) уш.с | NH2 (NMe) уш.с |
la | 5.02 | 6.79 (1Н, т), 7.16 (2Н, т), 7.33 (2Н, д) J 8.0 | 11.05 (1 Н), 12.44 (1 Н), 13.55 (1 Н) | - |
Ib | 5.03 | 7.54 (2Н, д) 8.02 (2Н, д), J 8.4 | 11.18(1Н),12.35(1Н),13.40(1Н) | - |
Ic | 5.01 | 7.14 (2Н,д) 7.45 (2Н, д), J 8.4 | 11.11 (1Н), 12.20 (1Н), 13.35 (1Н) | - |
IIа | 5.39 | 7.56 (2Н, д) 8.04 (2Н, д), J 8.3 | 12.91 (2Н) | - |
III | 4.94 | 7.50 (2Н, д) 7.92 (2Н, д), J 8.3 | 11.80(2Н),12.84(1Н) | 11.96 (21-1) |
IV | 5.10 | 7.52 (2Н, д) 8.00 (2Н, д), J 8.0 | 12.70(2Н) | 12.25 (2Н) |
V | 4.99 | 7.48 (2Н, д) 7.89 (2Н, д), J 8.2 | 12.84(2Н) | 11.90 (41-1) |
VI | 4.54 | 7.52 (2Н, д) 8.00 (2Н, д), J 8.4 | 12.90(3Н) | 11.66 (41-1) |
VII | 4.66 | 7.16 (2Н,д) 7.33 (2H, д),J 8,0 | 11.15(1Н), 12.91 (2Н) | 12.34 (2Н) |
VIII | 4.85 | 7.52 (2Н, д) 8.04 (2Н, д), J 8.4 | 11.20(1Н), 12.45(3Н) | 3.59 (3Н, с) |
IX | 4.95+5.19 | 7.65 (2Н, д), 7.86 (4Н, м), 8.07 (2Н, д), J 8.0 | 11.10(2Н), 12.85 (3Н) | - |
Х | 4.92с | 5.28 (1Н, с), 7.56 (2Н, д) 8.04 (2Н, Д), J 8.1 | 11.23(1Н), 12.35 (4Н) | - |
XI | 5.02 | 7.55 (2Н, д) 7.97 (2Н, д), 8.31 (1Н, с) | 11.14(1Н), 12.80 (2Н) | - |
XII | 4.75 | 7.65(2Н, д)8.11 (2Н, д),и8.0 | 12.55 (2Н), 13.9 (2Н, уш) | - |
XIII | 4.80 уш | 7.55 (4Н, уш) 8.10 (4Н, уш) | 9.11 (1Н уш), 11.05 (2Н, уш); 12.45 | 7.25 (4Н уш) |
5.25 уш | (2Н, уш) | |||
XIV | 4.95 уш | 7.53 (4Н, уш) 8.12 (4Н, уш) | 10.00-13.50 (5Н, уш) | 7.24 (4Н уш) |
5.13 уш | ||||
XV | 4.95 уш | 7.50 (4Н, уш) 8.07 (4Н, уш); 8.35 (1Н, уш) | 9.70-13.40 (5Н, уш) | 7.25 (4Н уш) |
5.13 уш | ||||
*с - синглет, уш. с.- уширенный синглет, д - дублет, т - триплет, м - мультиплет |
Таблица 2. Температуры разложения и данные элементного анализа заявляемых веществ | ||||||||||||
Ia | 230 | 47.90 | 2.47 | 9.33 | 14.55 | 17.19 | C15H9ClN4O2S2 | 47.81 | 2.41 | 9.41 | 14.87 | 17.02 |
Ib | 230 | 42.56 | 1.98 | 8.23 | 16.32 | 15.14 | C15H8ClN5O4S2 | 42.71 | 1.91 | 8.40 | 16.60 | 15.20 |
Ic | 245 | 43.65 | 1.99 | 17.08 | 13.46 | 15.43 | C15H8ClN4O2S2 | 43.81 | 1.96 | 17.24 | 13.62 | 15.59 |
Id | 240 | 43.65 | 1.99 | 17.08 | 13.46 | 15.43 | C16H11ClN4O2S2 | 49.17 | 2.84 | 9.07 | 14.33 | 16.41 |
Ie | 245 | 45.63 | 1.99 | 17.08 | 13.46 | 15.43 | C16H8ClFN4O2S2 | 45.63 | 2.04 | 8.98 | 14.19 | 16.24 |
If | 235 | 43.65 | 1.99 | 17.08 | 13.46 | 15.43 | C17H13ClN4O3S2 | 48.51 | 3.11 | 8.42 | 13.31 | 15.24 |
Ig | 235 | 43.65 | 1.99 | 17.08 | 13.46 | 15.43 | C17H13ClN4O4S2 | 46.74 | 3.00 | 8.11 | 12.82 | 14.68 |
Ih | 230 | 43.65 | 1.99 | 17.08 | 13.46 | 15.43 | C19H11ClN4O2S2 | 53.46 | 2.60 | 8.30 | 13.12 | 15.02 |
Ii | 230 | 43.65 | 1.99 | 17.08 | 13.46 | 15.43 | Cl3H7ClN4O2S3 | 40.78 | 1.84 | 9.26 | 8.36 | 25.12 |
IIa | 240 | 40.71 | 1.55 | 15.92 | 15.88 | 14.34 | C15H7Cl2N5O3S2 | 40.92 | 1.60 | 16.10 | 15.91 | 14.56 |
III | 290 | 44.49 | 2.56 | - | 20.73 | 15.67 | С15Н10N6O4S2 | 44.77 | 2.50 | - | 20.88 | 15.94 |
IV | 220 | 43.31 | 2.24 | 8.30 | 19.64 | 15.04 | С15Н9СlN6O3S2 | 42.81 | 2.16 | 8.42 | 19.97 | 15.24 |
V | 300 | 44.99 | 2.90 | - | 24.48 | 15.56 | C15H11N7O3S2 | 44.88 | 2.76 | - | 24.42 | 15.97 |
VI | 300 | 45.23 | 3.14 | - | 27.90 | 15.89 | C15H12N8O2S2 | 44.99 | 3.02 | - | 27.98 | 16.01 |
VII | 300 | 45.67 | 2.68 | 8.94 | 17.75 | 16.22 | C15H10ClN5O2S2 | 45.98 | 2.57 | 9.05 | 17.87 | 16.37 |
VIII | 300 | 46.02 | 2.95 | - | 20.03 | 15.24 | C16H12N6O4S2 | 46.15 | 2.90 | - | 20.18 | 15.40 |
IX | 265 | 47.90 | 3.41 | - | 19.43 | 14.69 | Cl7H14N6O4S2 | 47.43 | 3.28 | - | 19,52 | 14.90 |
X | 260 | 42.87 | 2.16 | - | 18.33 | 17.95 | С19Н11N7O6S3 | 43.10 | 2.09 | - | 18.52 | 18,17 |
XI | 290 | 46.13 | 2.51 | - | 17.77 | 16.29 | C15H9N5O4S2 | 46.51 | 2.34 | - | 18.08 | 16.55 |
XII | 300 | 44.28 | 2.49 | - | 17.04 | 15.61 | C15H9N5O5S2 | 44.66 | 2.25 | - | 17.36 | 15.90 |
XIII | 230 | 42.22 | 2.87 | 4.04 | 18.01 | 14.87 | C30H22ClN11O9S4 | 42.68 | 2.63 | 4.20 | 18.25 | 15.19 |
XIV | 230 | 43.14 | 3.16 | - | 20.15 | 15.33 | С30Н24N12O9S4 | 43.68 | 2.93 | - | 20.38 | 15.55 |
XV | 230 | 44.36 | 2.99 | - | 18.93 | 15.68 | С30Н23N11O9S4 | 44.49 | 2.86 | - | 19.03 | 15.84 |
Б. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ЗАЯВЛЯЕМЫХ СОЕДИНЕНИЙ.
Пример 11. Определение действия на вирус простого герпеса.
Антивирусную активность изучали по отношению к вирусу герпеса I типа (ВПГ - I/ Ленинград/248/88) по общепринятому методу [24 - Gentry G.A. и др. J. of Clinical Microbiology, 1985, 22, 2, P.I 99-204]. Вирусы выращивали на перевиваемой культуре клеток Vero, полученной из банка клеточных культур Института цитологии Российской Академии Наук.
Таблица 3. Действие заявляемых соединений на вирус простого герпеса. | ||||
NN | Соединение | 100* | Число клеток 50: | 10* |
1 | Ацикловир | ** | - | 9600***(80%)**** |
2 | DMCO | 10000 | 10000 | 10000 |
3 | Контроль клеток | 10000 | 10000 | 10000 |
4 | la | 10800(90%) | 9600(80%) | 7200(60%) |
5 | lib | 12000(100%) | 10800(90%) | 8400(70%) |
6 | III | 12000(100%) | 9600(80%) | 8400(70%) |
7 | IV | 9600(80%) | 8400(70%) | 6000(50%) |
8 | V | 10800(90%) | 9600(80%) | 7200(60%) |
9 | VI | 12000(100%) | 10800(90%) | 8400(70%) |
10 | VII | 8400(70%) | 6000(50%) | 4000(30%) |
11 | VII | 9600(80%) | 8400(70%) | 6000(50%) |
12 | IX | 9600(80%) | 8400(70%) | 6000(50%) |
13 | X | 10800 (90%) | 9600 (80%) | 7200 (60%) |
14 | XI | 9600 (80%) | 8400 (70%) | 6000 (50%) |
15 | XII | 6000 (50%) | 3600 (30%) | 1200(10%) |
16 | XIV | 9600 (80%) | 8400 (70%) | 6000 (50%) |
* Концентрация заявляемых соединений (мг/л) ** - препарат в данной концентрации не исследовали. *** - число клеток в 100 полях зрения, **** процент защиты клеток от инфекции |
Полученные результаты, приведенные в таблице 3, показывают, что заявляемые соединения обладают активностью против вируса герпеса.
Пример 12. Определение действия на Chlamydia trachomatis
Антимикробную активность заявляемых соединений изучали по отношению к С.trachomatis D323 -стандартному штамму из коллекции кафедры микробиологии Санкт-Петербургского Государственного Медицинского университета им. ак. И.П.Павлова. Данный штамм, выделенный от больного с хламидийным уретритом, имеет морфологию и физиологическую активность характерную для представителей данного вида, чувствителен к действию препаратов, используемых для лечения хламидийной инфекции.
Эффективность действия препаратов оценивали по защите клеток МсСоу и L929, при инфицировании хламидиями в концентрации 1·106 кл/мл [25, 26 - Judson В.А. и др. J. of Clinical Microbiology, 1988, vol.26, N12, р.2657-2658; Fenelon L.E. и др. J, of Antiimcrobial Chemotherapy, 1990, 26, р.763-767]. Оценку результатов проводили путем выявления хламидийных цитоплазматических включений методом иммунофлюоресценции (MicroTrac Chlamydia trachomatis Direct Specimen Test) и хламидийных антигенов методом CylaMonoScreen (Russian-British Joint Venture 66 Regent's Pare Road London NW1 7SX) [26 - Fenelon L.E. и др. J. of Antimicrobial Chemotherapy, 1990, 26, р.763-767].
Эффект действия препарата определяли, анализируя состояние монослоя и число клеток с ЦПВ по сравнению с контролем (культура клеток, зараженная C.trachomatis D323), при этом учитывали число неизмененных клеток в 100 полях зрения, полученных при использовании специальной сетки окуляра микроскопа.
Таблица 4. Действие заявляемых соединений на C.trachomatis. | |||
NN | Соединение | Процент защиты клеток от хламидий, % | |
100* | 30* | ||
1. | Ib | 80 | 60 |
2. | Iia | 90 | 70 |
3. | III | 100 | 70 |
4. | IV | 80 | 50 |
5 | V | 80 | 50 |
6 | VI | 80 | 50 |
7 | VII | 90 | 50 |
8 | VIII | 90 | 70 |
9 | IX | 80 | 50 |
10 | X | 100 | 60 |
11 | XI | 90 | 50 |
12 | XII | 60 | 40 |
13. | XIII | 80 | 60 |
* Концентрация заявляемых соединений (мг/л) |
Полученные данные свидетельствуют, что исследованные заявляемые соединения могут быть применены для лечения заболеваний, вызванных хламидиями.
Пример 13. Активность против вирусов гриппа.
Определение противовирусной активности соединений в отношении вируса гриппа проводили на модели хорион аллантоисной оболочки (ХАО).
Соединения в исследуемых концентрациях растворяли в среде для ХАО и вносили в лунки панелей с фрагментами ХАО, куда затем добавляли вирус, и инкубировали при температуре 33-34°С в течение 48 (для гриппа типа А) и 72 (для гриппа типа В) часов. Вирусингибирующее действие исследуемых соединений оценивали по реакции гемагглютинации (РГА) при добавлении 1% куриных эритроцитов в культуральную жидкость.
Эффективность соединений оценивали по снижению инфекционной активности вируса в опыте по сравнению с контролем - индекс нейтрализации (ИН). При значении ИН до 1,0 препарат считали неактивным, при ИН от 1,0 до 2,0, при ИН выше 2,0 - активным.
Титр вируса рассчитывали по методу Рида и Мэнча.
Таблица 5. Активность заявляемых препаратов против вирусов гриппа. | ||
Соединение | Индекс нейтрализации | |
Вирус гриппа А | Вирус гриппа В | |
Iв | 0.5 | 0,5 |
Iia | 1,5 | 1,5 |
III | 0.5 | 1,0 |
IV | 2,0 | 1,5 |
V | 1,0 | 1,5 |
VI | 20 | 1,5 |
VII | 2,0 | 1,5 |
VIII | 2,0 | 1,5 |
IX | 2,0 | 1,5 |
X | 1,5 | 1,0 |
XI | 1,5 | 1,5 |
Таким образом, заявляемые соединения обладают активностью против вирусов гриппа А и В.
Пример 14. Активность против вируса иммунодефицита человека. Активность по отношению к вирусу иммунодефицита человека определяли по защите Т лимфобластоидных клеток МТ4 при инфицировании вируссодержащей жидкостью культуры HTHIV27. Клетки, инфицированные вирусом, анализировали методами 1) непрямой иммунофлюоресценции (ИФА) с поликлональной пулированной антисывороткой от ВИЧ-инфицированных и больных СПИД (титр антител в ИФА равен 1:1000000). В тестах использовали разведение 1:40. 2) В конкурентном ИФА с моноклональными антителами (МоnАb) к р24 ВИЧ и поликлональной подложкой. В качестве контроля использован азидотимидин (AZT) (Sigma).
Таблица 6. Анти-ВИЧ активность заявленных соединений. | ||
Вещество | Концентрация | Уровень угнетения репродукции вируса (в %) |
1Ь | 100 мг/л | 100 |
50 мг/л | 90 | |
5 мг/л | 70 | |
III | 100 мг/л | 100 |
50 мг/л | 90 | |
5 мг/л | 70 | |
V | 100 мг/л | 100 |
50 мг/л | 100 | |
5 мг/л | 90 | |
XIV | 100 мг/л | 100 |
50 мг/л | 100 | |
5 мг/л | 100 | |
XV | 100 мг/л | 100 |
50 мг/л | 100 | |
5 мг/л | 90 | |
Контроль (AZT) | 100 мг/л | 100 |
50 мг/л | 100 | |
5 мг/л | 100 |
Таким образом, испытанные образцы угнетают репродукцию вируса иммунодефицита 1.
Пример 15. Использование заявляемых соединений совместно с препаратами, применяемыми для лечения СПИДа.
Совместное действие оценивали по защите клеток при одновременном добавлении испытуемых веществ и азидотимидина. Активность определяли по защите Т лимфобластоидных клеток МТ4 при инфицировании вируссодержащей жидкостью культуры HTHIV27. Клетки, инфицированные вирусом, анализировали методами 1) непрямой иммунофлюоресценции (ИФА) с поликлональной пулированной антисывороткой от ВИЧ-инфицированных и больных СПИД (титр антител
в ИФА равен 1:1000000). В тестах использовали разведение 1:40. 2) В конкурентном ИФА с моноклональными антителами (МоnАb) к р24 ВИЧ и поликлональной подложкой.
Таблица 7. Угнетение репродукции вируса иммунодефицита | ||
Вещество | Концентрация, мг/л | Уровень угнетения репродукции вируса (в %) |
1b | 5.0 | 70 |
0,5 | 20 | |
AZT | 5.0 | 100 |
0,05 | 50 | |
Ib+AZT | 0,5+0,05 | 100 |
XIV | 5 | 100 |
0.5 | 60 | |
Ib+AZT | 0,5+0,05 | 100 |
Полученные результаты показывают, что заявляемые соединения могут быть использованы совместно со стандартным препаратом - азидотимидином, применяемым для лечения СПИДа.
Пример 16. Определение острой токсичности заявляемых соединений Испытуемые соединения вводили через рот с помощью желудочного зонда (1000 мг/кг) или внутрибрюшинно (200 мг/кг) белым нелинейным мышам массой 20-25 г (по 5 самцов и 5 самок в каждой из испытуемых групп), после чего наблюдали за их состоянием на протяжении 14 дней. Отсутствие симптоматики, свойственной токсическим эффектам, и отсутствие гибели животных в течение указанного времени позволяет сделать вывод, что в пределах исследованных доз вещества не проявляют острой токсичности в использованной модели.
Промышленная применимость
Примеры 1-8 практического синтеза и химико-физический анализ заявляемых соединений, приведенный в таблицах 1 и 2, подтверждают возможность лабораторного и промышленного синтеза всех заявляемых соединений средствами, освоенными современной фармацевтической промышленностью, а также их четкую идентификацию общепринятыми методами контроля.
Серия приведенных экспериментов по определению биологических свойств показала, что заявляемые соединения обладают биологической активностью по отношению к различным микроорганизмам и прежде всего вирусам иммунодефицита, герпеса, гриппа А и В), что указывает на возможность их использования при лечении различных вирусных инфекций, вызванных ДНК содержащими вирусами (вирус простого герпеса) и РНК содержащими (вирусы гриппа и иммунодефицита), а также и некоторых бактериальных заболеваний, вызванных хламидиями. На основе полученных веществ могут быть созданы фармацевтически приемлемые композиции и модификации с совместимыми лекарственными препаратами, а также системами доставки лекарств, обеспечивающими максимальную системную циркуляцию действующего компонента в плазме крови. Основной путь введения - внутривенный. Однако могут быть использованы другие методы введения, обеспечивающие поступление действующего компонента в системную циркуляцию - подкожный, внутримышечный, ингаляционный, внутрибрюшинный и др. Дозы и режимы введения при этом определяются природой используемого активного ингредиента, зависят от пути введения.
Полученные результаты свидетельствуют о достижении задач, поставленных изобретением - синтезированы производные 2,8-дитиоксо-1Н-пирано[2,3-d; 6,5-d']дипиримидина и их 10-аза-аналоги. Для синтеза заявляемых соединений использованы новые технологии, описанные в заявке. Таким образом, по нашему мнению, заявляемые средства (новые вещества) удовлетворяют всем требованиям, предъявляемым к изобретению: они новы, неочевидны и промышленно применимы.
1. Вещество, обладающее антивирусной и антибактериальной активностью на основе производных 2,8-дитиоксо-1Н-пирано[2,3-d; 6,5-d']дипиримидина и их 10-аза-аналогов, отличающееся тем, что включает 5 производное указанной группы общей формулы А1 *М:
где Х выбран из группы: О, NH, N-Alkyl;
R1 выбран из группы: Н, ОН, Cl, O-Alkyl, NH2, NH-Alkyl, NH-Ar. N(Alkyl)2, SH, S-Alkyl, S-Ar, S-Hetaryl;
R2 выбран из группы: C6H5, Aryl;
R3 выбран из группы: Н, Cl, O-Alkyl, NH2, NH-Alkyl, NH-Ar, S-Hetaryl;
М либо отсутствует, либо выбран из группы: катион Na, К, Li, аммония, или любой другой фармакологически приемлемый катион; либо комплекс фармакологически приемлемого катиона (см. выше) с анионом одного из производных А1 (варианты R1-R3 заданы выше).
2. Вещество по п.1, отличающееся тем, что Х=O, R1=OH, R2=C6H5, R3=Cl, М отсутствует (Ia).
3. Вещество по п.1, отличающееся тем, что Х=O, R1=OH, R2=C6H4-4-NO2, R3=Cl, M отсутствует (Ib).
4. Вещество по п.1, отличающееся тем, что Х=O, R1=R3=Cl, R2=С6Н4-4-NO2, М отсутствует (IIа).
5. Вещество по п.1, отличающееся тем, что Х=O, R1=OH, R2=С6Н4-4-NО2, R3=NH2, М отсутствует (III).
6. Вещество по п.1, отличающееся тем, что Х=O, R1=Cl, R2=C6H4-4-NO2, R3=NH2, М отсутствует (IV).
7. Вещество по п.1, отличающееся тем, что Х=O, R1=R3=NH2, R2=C6H4-4-NO2, М отсутствует (V).
8. Вещество по п.1, отличающееся тем, что X=NH, R1=R3=NH2, R2=C6H4-4-NO2, M отсутствует (VI).
9. Вещество по п.1, отличающееся тем, что X=NH, R1=OH, R2=C6H4-4-С1, R3=NH2, М отсутствует (VII).
10. Вещество по п.1, отличающееся тем, что Х=O, R1=OH, R2=C6H4-4-NO2, R3=NHCH3, М отсутствует (VIII).
11. Вещество по п.1, отличающееся тем, что Х=O, R1=OH, R2=C6H4-4-NO2, М отсутствует (IX).
12. Вещество по п.1, отличающееся тем, что
13. Вещество по п.1, отличающееся тем, что Х=O, R1=OH, R2=C6H4-4-NO2, R3=H, М отсутствует (XI).
14. Вещество по п.1, отличающееся тем, что Х=O, R1=R3=ОН, R2=C6H4-4-NO2, М отсутствует (XII).
15. Вещество по п.1, отличающееся тем, что Х=O, R1=OH, R2=C6H4-4-NO2, R3=Cl, M=NH3+Al по п.1, где Х=O, R1-R3=ОН, R2=C6H4-4-NO2 (XIII).
16. Вещество по п.1, отличающееся тем, что Х=O, R1=OH, R2=C6H4-4-NO2, R3=NH2, M=NH3+Al по п.1, где Х=O, R1=R3=ОН, R2=C6H4-4-NO2 (XIV).
17. Вещество по п.1, отличающееся тем, что Х=O, R1=OH, R2=C6H4-4-NO2, R3=H, M=NH3+Al по п.1, где Х=O, R1=R3=ОН, R2=C6H4-4-NO2 (XV).