Средство пролонгированного антикальциевого действия в виде 0,1% раствора для внутривенного введения
Изобретение относится к медицине и фармации, в частности, к технологии лекарств, и касается разработки пролонгированной лекарственной формы отечественного блокатора медленных кальциевых каналов - диуманкала, а именно анкардина-retard-AZIn- в виде 0,1% раствора по 1 мл для внутривенного введения в виде комплекса с полиэтиленоксидом 400. Активное начало 7,7-этилендиоксибензопиран-2,2-дион. Проведенные доклинические эксперименты показали, что Анкардин-retard-AZIn является достаточно активным антагонистом ионов кальция и после проведения клинических испытаний он может быть внедрен в медицинскую практику для профилактики и лечения сердечно-сосудистых заболеваний. 6 табл.
Изобретение относится к медицине и фармации, а именно к фармакотерапии паталогии сердечно-сосудистой системы, и касается разработки нового противоишемического средства анкардина-retard AZIn в виде 0,1% раствора для внутривенного введения, обладающего пролонгированным антикальциевым действием.
В медицинской практике применяется ряд противоишемических препаратов, обладающих короткой и пролонгированной антикальциевой активностью: финоптин, нифедипин, дилтиазем, сензит, дифрил (Машковский М.Д. Лекарственные средства. - 2000. - т.1. - с.413-415), а также недавно разработанные нами препараты - короткодействующий диуманкал-forte (Абышев А.З., Агаев Э.М., Морищенко О.В. Патент России 2187303 С1) и анкардин-retard AZT (Абышев A.З., Агаев Э.М. Патент России 2219927 С1).
Однако перечисленные выше антагонисты кальция обладают большой частотой побочных эффектов, например финоптин до 10%, а нифедипин до 30%, проявляющихся в виде отечности голеней, гипотонии, изменения частоты сердечных сокращений, гипергликемии, головной боли, головокружения, повышенной утомляемости, гиперемии кожных покровов (Машковский М.Д. Лекарственные средства. - 2000. - т.1. - с.652, 301, 185). Кроме того, за последние годы отмечено, что использование коротко действующих дигидропиридинов, особенно нифедипина, может увеличивать риск развития злокачественных опухолей, инфаркта миокарда и смерти у больных артериальной гипертонией (Кулешова Э.В. Антагонисты кальция и их роль при лечении заболеваний сердечно-сосудистой системы. - 2002. - часть 1 и 2; Furberg С.D., Psaty B.M, Meyer J.V. Circulation. - 1995. - V.92. - Р.1326-1331; Psaty В.M., Heckbert S.R., Koepsell T.D. et al. JAMA. - 1995. - V.274. - P.620-625; Pahor M., Psaty B.M., Alderman M.H. et al. Lancet. - 2000. - Dec.9. - 356 (9246):1970-4). В опытах на животных также была установлена эмбриотоксичность дилтиазема и большинства антагонистов кальция 1,4-дигидропиридинового ряда. При длительной терапии дилтиаземом, нифедипином и фелодипином в ранние сроки беременности описаны случаи внутриутробной гибели плода и аномалии развития скелета у новорожденных. Поэтому дилтиазем и все 1,4-дигидропиридиновые производные первого и второго поколения противопоказаны в любые сроки беременности (Svensson A. Clin. Exp. Hypertension. - 1993. - V.15. - Р.1353-1361; Lowe S.A., RubinP. C.J. Hypertension. - 1992. - V.10. - P.201-207).
Что касается новых антагонистов кальция диуманкала-forte и анкардина-retard-AZT, то хотя они и являются наиболее активными, чем их аналоги, и не обладают вышеперечисленными побочными явлениями, но первый практически не растворим в водной среде и поэтому медленно проникает через мембраны (в течение 2 часов) и циркулирует в кровяном русле не более 8 часов, а второй проявляет устойчивое пролонгированное действие в течение 26 часов и его максимальная концентрация в плазме крови достигается только через 1,5 часа.
В связи с изложенным разработка нового антагониста кальция в виде раствора для внутривенного введения в экстренних случаях и обладающего пролонгированным действием является актуальной, так как несмотря на незначительное их количество, перечень показаний к их применению расширяется: артериальная гипертензия, хроническая коронарная недостаточность, аритмии, в неврологической, психиатрической практике и др.
Наиболее близким по физико-химическим и фармакологическим свойствам к заявляемому препарату является анкардин-retard AZT (Абышев А.З., Агаев Э.М. Патент России 2219927 С1).
Поэтому целью настоящего изобретения является разработка нового лекарственного средства - антагониста ионов кальция (анкардин-retard-AZIn) в виде 0,1% раствора для внутривенного введения в экстренних случаях, в которых действующим веществом является тот же 7,7’-этилендиоксибензопиран-2,2’-дион.
Указанная цель достигается синтезом нового комбинированного соединения анкардина-retard-AZIn, представляющего собой комплекс 7,7’-этилендиоксибензопиран-2,2’-диона с полиэтиленоксидом со средней молекулярной массой 400 (РЕО-400), широко применяемым в фармацевтической практике для получения водорастворимых форм гидрофобных лекарственных препаратов.
К настоящему времени для заявляемого соединения разработана технология получения лекарственной формы в виде 0,1% раствора по 1 мл (анкардин-retard-AZIn), в который, как указано выше, в качестве активного компонента содержит 0,001 г субстанции диуманкала. Для указанной лекарственной формы изучены технологические и фармакологические показатели.
Изобретение иллюстрируется следующими конкретными примерами доклинических и технологических исследований:
Пример 1. Технология получения инъекционной формы анкардина-retard-AZIn.
В стеклянный реактор вместимостью 3 л помещают навеску растертого порошка субстанции диуманкала и необходимое количество РЕО-400. Смесь при постоянном перемешивании греют в течение 3 часов при температуре 100°С. Затем при постоянном перемешивании, в необходимом объеме доливают инъекционную воду, температура которой близка к 100°С. Далее раствор остужают до комнатной температуры при асептических условиях и фильтруют через бумажный фильтр.
Полученный раствор разливают в ампулы по 1 мл, запаивают, проверяют на их герметичность, стерилизуют в течение 1 часа при температуре 105°С, контролируют на механические включения, маркируют и упаковывают в тару.
По данной технологии получены и испытаны 5 серий препарата, удовлетворяющего требованиям ГФ XI издания (см. таблицу 1).
Пример 2. Испытание противоаритмической активности различных лекарственных форм диуманкала на хлоридкальциевой модели аритмии.
Для установления противоаритмического действия различных форм диуманкала изучают профилактическую активность на модели фибрилляции желудочков, вызванной по методу Malinow и соавт. (Malinow M., Battle F., Malamud В. Nervous mechanisms in ventricular arrhythmias by calcium chloride in rats. Circulat. Res., 1953. - Vol.I. - N 6. - p.554-559).
Для этого группе лабораторных животных (крыс 8 особей) вводят изучаемые препараты (диуманкал-forte, анкардин-retard-AZT и анкардин-retard-AZIn 0,1% по 1 мл) в дозе 1 мг/кг. Для испытаний таблеток двум группам крыс (по 8 особей в каждой) вводят суспензию диуманкала-forte и анкардина-retard-AZT, приготовленную на 0,9% растворе хлорида натрия с добавлением Tween-80, a также анкардина-retard-AZIn в той же дозе. Крысам контрольной серии вводят растворитель, животным группы сравнения - суспензию субстанции диуманкала, приготовленную на 0,9% растворе хлорида натрия с добавлением Tween-80, в той же дозе. После экспозиции (cм. таблицу 2) всем животным внутривенно инъецируют 10% раствор хлорида кальция в дозе 300 мг/кг и проводят запись ЭКГ во II стандартном отведении. Наблюдают развитие фибрилляции желудочков. Учитывают частоту реализации аритмий, частоту восстановления синусового ритма, длительность аритмии, частоту гибели животных. Параметры длительности аритмий оценивают критерием Стьюдента, частоту реализации аритмии, восстановления синусового ритма и гибели животных - критерием хи-квадрат. Результаты экспериментов приведены в таблице 2.
Как следует из таблицы 2, диуманкал достоверно уменьшает частоту гибели животных от аритмии, при этом при реализации аритмии достоверно проявляется свойство препарата восстанавливать синусовый ритм. Различия между различными лекарственными формами дауманкала и его субстанцией по всем представленным параметрам статистически незначимы, вместе с тем достоверно (р<0,05) отличаются от контрольной серии при экспозиции 2,5 часа между введением, в частности диуманкала-forte, анкардина-retard (AZT и AZIn) и аритмогена (частота восстанавливания нормального ритма и способность предупреждать гибель животных). Это свидетельствует о сопоставимой активности указанных лекарственных форм дауманкала и его субстанции. При увеличении экспозиции до 26 часов из перечисленных лекарственных форм только анкардин-retard (AZT и AZIn) сохраняет свой эффект в той же мере, тогда как субстанция и диуманкал-fbrte не проявляют активности. Следовательно, анкардин-retard (AZT и AZIn) сравним по активности с субстанцией и диуманкалом-forte, но достоверно превосходит их по длительности действия, причем последний у анкардин-retard-AZIn наступает почти сразу после введения (в течение 5-10 мин), что также хорошо видно из данных сравнительного фармакокинетического исследования различных лекарственных форм нифедипина и дауманкала (см. табл.3 и 4). Таким образом, можно отметить, что поставленная задача достигнута.
Пример 3. Испытание противоишемической активности различных лекарственных форм диуманкала на модели окклюзии коронарной артерии.
Для установления противоишемического действия различных лекарственных форм дауманкала изучали профилактическую активность на модели острой коронарной окклюзии, вызванной перевязкой передней ветви левой коронарной артерии в средней трети по методу Н.В.Маршутиной (Маршутина Н.В. Об экспериментальном воспроизведении у кроликов инфаркта миокарда с аритмиями (Кардиология. - 1972. - №12. - С.108-111).
Для этого группе лабораторных животных (крыс 8 особей) вводят изучаемые препараты (дйуманкал-forte, анкардин-retard-AZT и анкардин-retard-AZIn 0,1% раствор по 1 мл) в дозе 1 мг/кг. Для испытаний таблеток двум группам крыс (по 8 особей в каждой) вводят суспензию диуманкала-forte и анкардина-retard-AZT, приготовленную на 0,9% растворе хлорида натрия с добавлением Tween-80, а также анкардина-retard-AZIn в той же дозе. Крысам контрольной серии вводят растворитель, животным группы сравнения - суспензию субстанции диуманкала, приготовленную на 0,9% растворе хлорида натрия с добавлением Tween-80, в той же дозе. После экспозиции (см. табл.5) у всех животных вызывают окклюзию коронарной артерии и проводят запись ЭКГ во II стандартном отведении. Наблюдают развитие признаков ишемии миокарда: снижение вольтажа зубца R, выраженный подъем интервала ST (“кошачий горб”). Учитывают выраженность признаков ишемии в % (зубец R - к исходному уровню, интервал ST - к уровню контроля). Параметры выраженности ишемии оценивают критерием Стьюдента. Результаты экспериментов приведены в таблице 5.
Как следует из таблицы 5, при экспозиции 2,5 ч все лекформы диуманкала, а через 20 ч - только анкардин-retard (AZT и AZIn) достоверно (р<0,05) относительно контроля предупреждает снижение вольтажа зубца R (на 11-16%) и подъем сегмента ST (на 16-22%), что свидетельствует о противоишемическом эффекте исследуемого препарата. Различия между лекформами диуманкала при экспозиции 2,5 ч, а также между эффектами анкардина-retard (AZT и AZIn) при обеих экспозициях статистически незначимы, это позволяет заключить о сопоставимой активности всех лекформ диуманкала при экспозиции 2,5 ч, а также и анкардина-retard (AZT и AZIn) (2,5 и 20 ч). При увеличении экспозиции до 20 ч выраженность ишемии на фоне субстанции и диуманкала-forte становится неотличимой от таковой в контрольной серии, тогда как анкардин-retard (AZT и AZIn) проявляет противоишемические свойства в той же мере, что и при экспозиции 2,5 ч. Это свидетельствует о достоверно более длительном по сравнению с остальными лекформами диуманкала противоишемическом эффекте анкардина-retard (AZT и AZIn). Следовательно, анкардин-retard (AZT и AZIn) и диуманкал-forte сравнимы по активности с субстанцией диуманкала, вместе с тем анкардин-retard (AZT и AZIn) достоверно превосходит остальные лекарственные формы и субстанцию по длительности действия.
Пример 4. Испытание депримирующей активности различных лекарственных форм диуманкала в тесте потенцирования подпороговой дозы тиопентал-натрия.
Для установления длительности действия различных лекарственных форм диуманкала изучают потенцирование наркотического действия подпороговой дозы (12 мг/кг, в/в) тиопентал-натрия (Раевский К.С. Фармакология нейролептиков. - М., - 1976., 271 с).
Для этого группе лабораторных животных (крыс 8 особей) вводят изучаемый препарат (диуманкал-forte, анкардина-retard-AZT и анкардина-retard-AZIn 0,1% раствор по 1 мл) в дозе 1 мг/кг. Для испытаний таблеток двум группам крыс (по 8 особей в каждой) вводят суспензию диуманкала-forte и анкардина-retard AZT, приготовленную на 0,9% растворе хлорида натрия с добавлением Tween-80, a также анкардина-retard-AZIn в той же дозе. Крысам контрольной серии вводят растворитель, животным группы сравнения - суспензию субстанции диуманкала, приготовленную на 0,9% растворе хлорида натрия с добавлением Tween-80, в той же дозе. После экспозиции (см. табл. 6) всем животным в/в вводят свежеприготовленный раствор тиопентал-натрия (12 мг/кг). Наблюдают развитие бокового положения животных. Частоту наступления бокового положения оценивают критерием хи-квадрат. Результаты экспериментов приведены в таблице 6.
Как следует из таблицы 6, все формы диуманкала проявляют способность потенцировать наркотическое действие тиопентал-натрия при экспозиции 2 часа между введением препарата и тест-агента. Препарат, введенный во всех лекформах, проявляет сопоставимую активность, статистически значимую относительно контроля, но не различающуюся между различными лекарственными формами препарата. При экспозиции 18 ч между введением диуманкала и тиопентал-натрия активность диуманкала-forte, анкардин-retard и субстанции не отличались от контроля. Вместе с тем анкардин-retard-AZT сохранил свою активность на уровне, характерном для остальных форм при экспозиции 2 час.
Таким образом, диуманкал-forte, анкардин-retard-AZT и субстанция диуманкала сопоставимы по активности, однако, анкардин-retard-AZT по сравнению с другими лекформами и субстанцией имеет большую длительность действия. Тем не менее если учесть, что содержание активного компонента в анкардине-retard-AZIn значительно меньше (в 20 раз), чем в анкардине-retard-AZT и на всех тестах его действия находится практически на уровне последнего, то перспективность применения анкардина-retard-AZIn в экстренних случаях при лечении артериальной гипертензии и ишемической болезни сердца как антиангинального средства более предпочтительна. Кроме того, как видно из фармакокинетических данных, представленных в таблицах 3 и 4, максимальная концентрация анкардина-retard-AZT в плазме крови достигается через 1,5 часа после приема препарата, тогда как аналогичная концентрация у анкардина-retard-AZIn достигается почти сразу после введения в течение 5-10 мин.
В итоге проведенных доклинических фармакодинамических (см. табл.2, 5 и 6) и фармакокинетических (см. табл.3 и 4) исследований показано, что анкардин-retard (AZT и AZIn) обладает пролонгированной высокой активностью и хорошей биодоступностью.
| Таблица 2. Сравнительная активность различных лекарственных форм диуманкала по влиянию на модели хлоридкальциевой аритмии. | ||||||
| № п/п | Вещество | Экспозиция, ч | Частота реализации аритмии, % | Частота восстановления синусового ритма, % | Длительность аритмии, с | Частота гибели животных, % |
| 1. | Диуманкал-forte | 2,5 | 87,5 | 42,9* | 48,7±5,0 | 50,0* |
| 2. | Диуманкал-forte | 26 | 100,0 | 0.0 | 46,8±4,2 | 100,0 |
| 3. | Анкардин-retard AZT | 2,5 | 87,5 | 42,9* | 50,1±5,0 | 50,0* |
| 4. | Анкардин-retard AZT | 26 | 75,0 | 50,0* | 47,7±4,1 | 37,5* |
| 5. | Анкардин-retard AZIn | 2,5 | 75,0 | 33,3 | 44,5±4,6 | 50,0* |
| 6 | Субстанция диуманкала | 26 | 100,0 | 0,0 | 42,2±4,3 | 100,0 |
| 7 | Растворитель | 2,5 | 100,0 | 0,0 | 43,2±4,4 | 100,0 |
| 8. | Растворитель | 26 | 100,0 | 0,0 | 50,1±5,2 | 100,0 |
| * р< 0,05 по сравнению с контрольной серией | ||||||
| Таблица 3 Основные фармакокинетические характеристики ретардных форм нифедипина (“С”) и диуманкала (“AZT”). | ||||||
| Препараты | Cmаx нг/мл | Tmax час | AUC нг/мл * час | Х/А % | ||
| “С” | 40,0 | 3,0 | 423,3 | 116,5 | ||
| “AZT” | 65,5 | 1,5 | 530,8 | 145,6 | ||
| Х/А - относительная биодоступность по сравнению с препаратом “С” |
| Таблица 4 Параметры, характеризующие пролонгированное действие ретардных лекарственных форм нифедипина (“В” и “С”) и диуманкала (“AZT” и “AZIn”). | |||
| Препараты | MRT, час | HV, нг/мл | HVD, час |
| “В” | 7,1 | 16,0 | 6,6 |
| “С” | 9,1 | 20,5 | 7,2 |
| “AZT” | 16,0 | 45,0 | 28,5 |
| “AZIn” | 20.0 | 62.5 | 20.0 |
Данные, представленные в таблицах 3 и 4, получены методами графического и математического моделирования. При этом максимальная концентрация препарата Сmах, относительное время появления Тmах и площади под кривой концентрация-время (AUC), как и в случае нифедипина (Патент США 4,880,623) были вычислены для усредненных кривых
| Таблица 5. Сравнительная активность различных лекарственных форм диуманкала по влиянию на модели коронарной окклюзии. | ||||
| № п/п | Вещество | Экспозиция, ч | Вольтаж зубца R (% к исходному уровню) | Выраженность подъема ST (% к уровню контроля) |
| 1. | Диуманкал-forte | 2,5 | 58,2* | 83,4* |
| 2. | Диуманкал-forte | 20 | 42,2 | 102,1 |
| 3. | Анкардин-retard AZT | 2,5 | 60,0* | 80,4* |
| 4. | Анкардин-retard AZT | 20 | 58,3* | 83,1* |
| 5. | Анкардин-retard AZIn | 2,5 | 62,1* | 78,0* |
| 6. | Субстанция диуманкала | 2,5 | 57,0* | 82,2* |
| 7. | Субстанция диуманкала | 20 | 45,9 | 99,0 |
| 8. | Растворитель | 2,5 | 46,2 | 100,0 |
| 9. | Растворитель | 20 | 44,0 | 100,0 |
| * р<0,05 по сравнению с контрольной серией |
| Таблица 6. Сравнительная активность различных лекарственных форм диуманкала по влиянию на наркотическое действие тиопентал-натрия. | |||
| № п/п | Вещество | Экспозиция, ч | Частота наступления бокового положения, % |
| 1. | Диуманкал-forte | 2- | 62,5* |
| 2. | Диуманкал-forte | 18 | 12,5 |
| 3. | Анкардин-retard AZT | 2 | б2,5* |
| 4. | Анкардин-retard AZT | 18 | 75,0* |
| 5. | Анкардин-retard AZIn | 2 | 75,0* |
| 6. | Анкардин-retard AZIn | 18 | 0,0 |
| 7. | Субстанция диуманкала | 2 | 62,5* |
| 8. | Субстанция диуманкала | 18 | 12,5 |
| 9. | Растворитель | 2 | 0,0 |
| 10. | Растворитель | 18 | 0,0 |
| * р<0,05 по сравнению с контрольной серией |
Средство пролонгированного антикальциевого действия, отличающееся тем, что представляет собой 0,1% раствор по 1 мл для внутривенного введения, содержащий в качестве активного ингридиента 0,001 г 7,7-этилендиоксибензопиран-2,2-диона в виде комплекса с полиэтиленоксидом молекулярной массой 400.
