Способ диагностики стертой формы врожденной гиперплазии коры надпочечников с дефектом 11бета-гидроксилазы
Владельцы патента RU 2279090:
Государственное образовательное учреждение дополнительного профессионального образования Санкт-Петербургская медицинская академия последипломного образования Министерства здравоохранения Российской Федерации (RU)
Изобретение относится к медицине, а именно к эндокринологии и лабораторной диагностике и может быть использовано для диагностики стертой формы врожденной гиперплазии коры надпочечников (ВГКН) с дефектом 11β-гидроксилазы при вирильных синдромах, аденомах коры надпочечников и у больных с артериальной гипертензией неясного генеза. Для этого проводят пробу с адренокортикотропным гормоном и методом высокоэффективной жидкостной хроматографии определяют в крови уровни 11-дезоксикортизола (S), кортизола (F), кортизона (Е), кортикостерона (В), рассчитывают соотношения уровня кортизола к уровню кортизона (F/E) и к уровню 11-дезоксикортизола (F/S) и при уровне 11-дезоксикортизола более 7,0 нг/мл, уровне кортикостерона менее 17 нг/мл, соотношении F/E менее 5 и соотношении F/S менее 16 диагностируют стертую форму ВГКН с дефектом 11β-гидроксилазы. Способ обеспечивает дополнительные критерии диагностики.
Изобретение относится к медицине, а именно к эндокринологии и лабораторной диагностике, и может быть использовано для диагностики стертой формы врожденной гиперплазии коры надпочечников (ВГКН) с дефектом 11β-гидроксилазы при вирильных синдромах, аденомах коры надпочечников и у больных с артериальной гипертензией неясного генеза.
Важнейшим биохимическим маркером 11β-гидроксилазной недостаточности является 11-дезоксикортизол. Повышение содержания в крови 11-дезоксикортизола (S) и 11-дезоксикортикостерона (DOC) считается характерным лабораторным признаком недостаточности 11β-гидроксилазы. Диагноз может быть заподозрен при повышении концентраций гормонов после стимуляции адренокортикотропным гормоном (АКТГ) в 3 и более раз над 95-м перцентилем нормы для соответствующего возраста (White P.С. Steroid 11β-hydroxylase deficiency and related disorders // Endocrinol. Metab. Clin. N. Am. - 2001. - Vol.30, №1. - P.61-79.). Наиболее распространенными в нашей стране являются пробы с использованием препарата «Синактен-депо», который является синтетическим аналогом АКТГ с длительностью действия 36 часов (пик через 9 часов после введения).
Ряд авторов обращает внимание на то, что у многих пациентов с дефектом 11β-гидроксилазы повышен уровень 17-ОНП, что вполне объяснимо, так как данный стероид является субстратом для синтеза S. Однако это может привести к ошибочной диагностике дефекта 21-гидроксилазы, что повлечет за собой неправильный выбор тактики лечения.
Задачей изобретения является расширение арсенала средств диагностики стертой формы ВГКН с дефектом 11β-гидроксилазы.
Поставленная задача решается тем, что в способе диагностики стертой формы ВГКН с дефектом 11β-гидроксилазы, включающем проведение пробы с адренокортикотропным гормоном и определение в крови уровня 11-дезоксикортизола (S), согласно изобретению методом высокоэффективной жидкостной хроматографии дополнительно определяют в крови уровни кортизола (F), кортизона (Е), кортикостерона (В), рассчитывают соотношения уровня кортизола к уровню кортизона (F/E) и к уровню 11-дезоксикортизола (F/S) и при уровне 11-дезоксикортизола более 7,0 нг/мл, уровне кортикостерона менее 17 нг/мл, соотношении F/E менее 5 и соотношении F/S менее 16 диагностируют стертую форму ВГКН с дефектом 11β-гидроксилазы.
Для определения критериев диагностики были обследованы 26 больных со случайно выявленными опухолями коры надпочечников (инциденталомами), 45 женщин с вирильным синдромом и 19 больных с гипоталамическим синдромом, у которых были установлены нарушения надпочечникового стероидогенеза, характерные для дефекта 11β-гидроксилазы, и 30 здоровых людей, которые составили контрольную группу.
На основании изучения данных, полученных при количественном определении в крови кортикостероидов методом обращенно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) при стимуляции кортикотропином пациентов исследуемых групп, были установлены диагностические критерии стертой формы ВГКН с дефектом 11β-гидроксилазы.
Статистическая обработка данных осуществлялась с использованием пакета STATISTICA for WINDOWS (версия 5.11). Количественные показатели представлялись в виде Me (LQ-UQ), где Ме-медиана, LQ-нижний квартиль, UQ-верхний квартиль. В случае распределения, близкого к нормальному, данные представлялись в виде средних значений (М)±стандартное отклонение (STD). Сравнение средних значений количественных показателей осуществлялось с использованием непараметрического критерия Манна-Уитни. Статистически значимым считался критерий достоверности р<0,05.
Способ осуществляют, например, следующим образом.
Исследования проводят до пробы и на пробе через 9 часов после введения 1 мг «Синактен-депо». Для анализа берут 1 мл сыворотки крови. Хроматографирование проводят, например, при следующих условиях: хроматограф жидкостный Чехия, насос НРР 4001, УФ детектор LCD 2563 (λ=254 нм), колонка Kromasil С-18 150 мм, 5 мкм, изократический режим элюирования, подвижная фаза 30% и 45% ацетонитрил-вода CH3CN-H2O (1 часть - 26:74 v/v, 2 часть - 41:59 v/v), скорость элюента 0,3 мл/мин. Для улучшения разделения стероидов, имеющих близкие времена удерживания, применяют β-циклодекстрин. Предел обнаружения 1-2 нг/мл.
Определяют уровни 11-дезоксикортизола, кортизола, кортизона, кортикостерона, рассчитывают соотношения уровня кортизола к уровню кортизона (F/E) и к уровню 11-дезоксикортизола (F/S) и при уровне 11-дезоксикортизола более 7,0 нг/мл, уровне кортикостерона менее 17 нг/мл, соотношении F/E менее 5 и соотношении F/S менее 16 на пробе диагностируют стертую форму ВГКН с дефектом 11β-гидроксилазы.
Способ иллюстрируется следующими клиническими примерами.
1. Пациентка Н. 32 г., Вирильный синдром, мышечная слабость, акне, гиперандрогения.
Традиционные методы диагностики:
Проба с синактеном: кортизол - 315-600 нмоль/л, 17-ОНП - 0,9-3,5 нг/мл, андростендион - 1,1-0,9 нг/мл, ДЭА - 15 нг/мл. На основании традиционных методов исключен дефект 21-гидроксилазы.
| Данные ВЭЖХ кортикостероидов крови: | ||||
| № | Наименование | Фон | Проба с синактеном | Ед. измерения |
| 1 | Кортизол (F) | 73,6 | 133,6 | нг/мл |
| 2 | Кортизон (Е) | 15,4 | 32,1 | нг/мл |
| 3 | Кортикостерон (В) | 2,4 | 11,9 | нг/мл |
| 4 | 11-дезоксикортикостерон (DOC) | 1 | 1 | нг/мл |
| 5 | 11-дезоксикортизол (S) | 11,2 | 15,7 | нг/мл |
| 6 | F/E | 4,7 | 4,1 | |
| 7 | F/S | 6,6 | 8,5 |
Увеличение уровня 11-дезоксикортизола на пробе с синактеном до 15,7 нг/мл, повышение кортикостерона до 11,9 нг/мл и индексы F/E и F/S свидетельствуют о стертой форме ВГКН с дефектом 11β-гидроксилазы.
2. Пациент Ш. 18 л. 167 см, 46 кг. Слабость, артериальная гипертензия, задержка полового развития.
| № | Наименование | Фон | Проба с синактеном | Ед. измерения. |
| 1 | Кортизол (F) | 24,2 | 160,6 | нг/мл |
| 2 | Кортизон (Е) | 14,2 | 40 | нг/мл |
| 3 | Кортикостерон (В) | 1 | 15,4 | нг/мл |
| 4 | 11-дезоксикортикостерон (DOC) | 3,8 | 2 | нг/мл |
| 5 | 11-дезоксикортизол (S) | 6,3 | 23,5 | нг/мл |
| 6 | F/E | 1,7 | 4,0 | |
| 7 | F/S | 3,8 | 6,8 | |
| 8 | 17-ОНП | 1,0 | 3,0 | нг/мл |
| 9 | Кортизол | 258 | 1000 | Н моль/л |
| 10 | Андростендион | 2,4 | 2,5 | нг/мл |
| 11 | Тестостерон | 12 | Н моль/л | |
| 12 | ДЭА | 12 | 20 | Мкг/мл |
| 13 | ЛГ | 1,7 | МЕ/л | |
| 14 | ФСГ | 1,1 | МЕ/л |
Увеличение уровня 11-дезоксикортизола, уровень кортикостерона и индексы F/S и F/E на пробе с синактеном свидетельствуют о стертой форме ВГКН с дефектом 11β-гидроксилазы.
3. Пациентка Д. 47 лет. - инциденталома 1,3×1,4 см, артериальная гипертензия с 20 лет, ожирение (ИМТ=53,0), синдром поликистозных яичников.
| № | Наименование | Фон | Проба с синактеном | Ед. измерения |
| 1 | Кортизол (F) | 40,7 | 187,2 | нг/мл |
| 2 | Кортизон (Е) | 10,5 | 38,2 | нг/мл |
| 3 | Кортикостерон (В) | 2 | 9,8 | нг/мл |
| 4 | 11-дезоксикортикостерон (DOC) | 1 | 1 | нг/мл |
| 5 | 11-дезоксикортизол (S) | 8,4 | 28,7 | нг/мл |
| 6 | F/E | 3,8 | 4,9 | |
| 7 | F/S | 4,8 | 6,5 | |
| 8 | 17-ОНП | 0,5 | 2,5 | нг/мл |
| 9 | Кортизол | 290 | 872 | Н моль/л |
| 10 | Андростендион | 3,7 | 3,3 | нг/мл |
| 11 | ДЭА-сульфат | 2,4 | Мкг/мл |
Увеличение уровня 11-дезоксикортизола, уровень кортикостерона и индексы F/S и F/E на пробе с синактеном свидетельствуют о стертой форме ВГКН с дефектом 11β-гидроксилазы.
Заявленный способ диагностики стертой формы врожденной гиперплазии коры надпочечников с дефектом 11β-гидроксилазы дает дополнительные критерии диагностики, расширяя тем самым арсенал средств.
Способ диагностики стертой формы врожденной гиперплазии коры надпочечников с дефектом 11β-гидроксилазы, включающий проведение пробы с адренокортикотропным гормоном и определение в крови уровня 11-дезоксикортизола, отличающийся тем, что методом высокоэффективной жидкостной хроматографии дополнительно определяют в крови уровни кортизола, кортизона, кортикостерона, рассчитывают соотношения уровня кортизола к уровню кортизона и к уровню 11-дезоксикортизола и при уровне 11-дезоксикортизола более 7,0 нг/мл, уровне кортикостерона менее 17 нг/мл, соотношении уровня кортизола к уровню кортизона менее 5 и соотношении уровня кортизола к уровню 11-дезоксикортизола менее 16 диагностируют стертую форму врожденной гиперплазии коры надпочечников с дефектом 11β-гидроксилазы.
