Способ забора десневой жидкости

Изобретение относится к стоматологии и может быть использовано для оценки реакции тканей пародонта на микробный фактор. В способе забора десневой жидкости с помощью адсорбирующего материала в качестве рабочего материала используют адсорбирующие полоски-мишени клиновидной формы из лавсановой пластинки. Пластинки имеют толщину 50-70 мкм, округлую рабочую часть шириной 1,0-1,5 мм и высотой 0,8-1,0 мм и свободный конец шириной 10 мм и высотой до 25 мм. Полоску-мишень на 3-5 с вводят в зубодесневую борозду без усилий и без касания ее стенок и дна. Забор материала проводят в среднем, медиальном и латеральном участках зубодесневой борозды в области обследуемого зуба через 3-5 часов после чистки зубов, при условии, что обследуемый не употреблял пищу в указанный промежуток времени. Каждый раз используют новую пластинку-мишень. Технический результат - способ позволяет диагностировать донозологические формы проявления заболевания, осуществлять контроль эффективности лечения и мониторинг пародонтологического статуса. 1 табл.

 

Изобретение относится к медицине, а именно к стоматологии, и может быть использовано для оценки реакции тканей пародонта на микробный фактор.

Диагностика и лечение заболеваний тканей пародонта остается одной из ведущих проблем в стоматологии, что определяется высокой распространенностью данной патологии среди населения. В современной пародонтологии существует ряд клинико-лабораторных методов, позволяющих диагностировать ранние проявления заболевания, осуществлять контроль эффективности лечения и мониторинг пародонтологического статуса. Одним из таких методов является цитологический метод [1, 2, 3].

Известен способ забора цитологического материала для оценки состояния пародонта [4]. Отпечатки с десны получают с помощью мишени: клиновидного фрагмента резинки-ластика с размером рабочей части не более 1 мм. Мишени хранят в чашках Петри, залитых 50% раствором этилового спирта. Перед изготовлением отпечатков с десны мишень извлекают из чашки Петри, высушивают струей воздуха из воздушного пистолета и затем легко прижимают к десне в области зубодесневого соединения или пародонтального кармана с язычной поверхности обследуемого зуба через 4±1 часа после чистки зубов.

Отпечатки наносят на заранее подготовленное посредством обезжиривания предметное стекло, отмаркированное номером протокола цитологического исследования и разметкой в соответствии с областью забора материала. На каждом стекле помещают по 3-4 отпечатка в каждом квадранте (область 4-6 зубов). Стекло высушивают и окрашивают по методике Романовского-Гимзе.

Цитологические препараты изучают под микроскопом с помощью окуляров ×10 (или ×20) и объектива ×40. Подсчет клеток проводят в 3-5 полях в эпителиальной и соединительнотканной клеточных популяциях. При подсчете эпителиальных клеток учитывают их общее число и клетки с признаками цитопатологии: базофилия цитоплазмы, дистрофические изменения (вакуолизация цитоплазмы, деструкция ядра и т.д.), «фагирующие» клетки, X-клетки и выводят относительные показатели. Затем их относительные средние значения используют для вычисления индекса деструкции (ИД). Соединительнотканные клетки: лейкоциты, моноциты - порознь сохранившие свою цитоплазму и голоядерные элементы, фибробласты (эндотелиоподобные клетки) подсчитывают в абсолютных цифрах, выводят средние показатели, по которым вычисляют воспалительно-деструктивный индекс (ВДИ).

Зубодесневая бороздка представляет собой щелевидное пространство, и использование фрагмента резинки-ластика с размером рабочей части до 1 мм обусловливает травматический эффект. При этом осуществляют забор не столько десневой жидкости, сколько соединительнотканных клеток стенок зубодесневой борозды.

Известен «внутрижелобковый» способ забора десневой жидкости с помощью полосок фильтровальной бумаги (N.Brill, В.Krasse, 1958) [5].

Подлежащую исследованию область осторожно очищают от зубного налета, изолируют ватными валиками от слюны и высушивают ватными тампонами или струей воздуха, после этого полоски фильтровальной бумаги шириной 1-4 мм и длиной 10-15 мм вводят в десневой желобок на различную глубину. Концы полосок для более удобного введения в желобок рекомендуют делать заостренными, округлыми или срезать под углом 45°.

По данной методике полоску вводят на всю глубину десневого желобка, чтобы исключить механическое раздражение тканей желобка и предупредить увеличение тока жидкости, рекомендуют помещать конец бумажной полоски на устье желобка или не доводить его до дна.

Количество десневой жидкости определяют путем взвешивания бумажных полосок или измерения площади пропитывания. Для выявления зоны пропитывания используют 0,2% спиртовой раствор нингидрина, который окрашивает десневую жидкость в голубой или пурпурный цвет. Данный способ используют как для определения количества, так и свойств десневой жидкости. Полоска фильтровальной бумаги обладает адсорбцией за счет пористости, что обусловливает потерю некоторой части материала (клеточных элементов десневой жидкости) при изготовлении препаратов, кроме того, при завешивании полосок иногда наблюдается испарение десневой жидкости.

Известен способ забора десневой жидкости для оценки компонентов местного иммунитета (полости рта) [6].

Десневую жидкость забирают из 2-3 участков зубодесневой борозды одного зуба при помощи шприц-тюбика с иглой, у которой острие зашлифовано так, что представляет собой закругленный конец. Для взятия десневой жидкости закругленную иглу шприца-тюбика с небольшим количеством раствора Хенкса осторожно вводят в десневую борозду и выпускают в нее каплю раствора. На следующем этапе иглу шприц-тюбика прижимают к десневой стенке борозды и с небольшим усилием проводят вдоль него, осторожно всасывают содержимое в иглу. Полученную жидкость и материал соскоба вносят в лунки планшета, содержащие 0,2 мл раствора Хенкса, интенсивно ресуспендируют. Клетки десневой жидкости осаждают на дно лунки центрифугированием при 200 об/мин в течение 5 мин. Надосадочную жидкость осторожно отсасывают пипеткой, а к осадку приливают 0,1 мл раствора Хенкса и вновь ресуспендируют. Приготовление препаратов: в лунки приливают 0,025 мл фиксатора, выдерживают 10 мин, затем надосадочную жидкость удаляют встряхиванием. В каждую лунку планшета заливают по 0,05 мл краски, после чего сверху накладывают Тацпленку, покрытую дубленым слоем желатина, затем к планшету прикладывают лист поролона толщиной 0,5 см и крышку, которую плотно прижимают к планшету при помощи винтовых зажимов. Осадки клеток ресуспендируют, затем планшет центрифугируют вверх дном лунок при 200-250 об/мин в течение 5-10 мин для осаждения клеток на пленку. Планшет вынимают из центрифуги, переворачивают и оставляют на 5-10 мин для стекания жидкости из лунки. После этого пленку высушивают, затем немедленно промывают водопроводной водой, промокают фильтровальной бумагой и вновь сушат воздухом. На высушенную пленку с препаратами наносят слой канадского бальзама в ксилоле и прижимают ее к предметному стеклу. На одном стекле помещается до 24 препаратов.

В препаратах подсчитывают формулу смыва (процентное соотношение эпителиальных клеток:нейтрофилов:лимфоцитов, э:н:л).

Получают не столько десневую жидкость, сколько смыв из десневого желобка и материал соскоба, взвесь клеток десневой жидкости и соединительнотканные клетки стенок или дна зубодесневой борозды. Данный способ может приводить к раздражению или травме зубодесневой борозды. Метод трудоемкий, требующий временных затрат.

Известен способ забора десневой жидкости для определения защитных факторов десневой жидкости, взятый в качестве прототипа.

Десневую жидкость получают при помощи стерильных нитей (длина 81 мм), приготовленных из марли. Предварительно тщательно высушивают окружающие ткани стерильными тампонами, затем при помощи зонда с тупым концом помещают марлевые нити на дно десневого желобка либо клинического кармана в области зубов 11, 13, 26, 24, 31, 36, 44, 46 с контактных поверхностей на 5-8 мин, изолируя исследуемый участок от слюны марлевыми тампонами. Нити извлекают пинцетом и вращательными движениями по стеклу готовят мазки-отпечатки. После высушивания и фиксации мазки окрашивают по Романовскому-Гимзе. Под микроскопом изучают состав экссудата, оценка которого позволяет получить представление о защитной реакции тканей пародонта (наличие или отсутствие фагоцитоза, незавершенный фагоцитоз). Определяют качественное состояние и количество нейтрофилов, стадию их дистрофии, состояние других клеточных элементов: лимфоцитов, полибластов, эпителиальных и плазматических клеток [7].

Способ травматичен, так как марлевая нить находится в зубодесневой борозде 5-8 мин, это может приводить к раздражению стенок и дна зубодесневой борозды и увеличению продукции десневой жидкости. Марлевая нить обладает адсорбцией за счет гидрофильности, что обусловливает потерю материала (клеток десневой жидкости) при изготовлении препаратов. Способ требует временных затрат врача и пациента.

Для повышения эффективности, снижения травматичности и экономии времени при проведении способа забор десневой жидкости осуществляют с помощью полоски из лавсановой пластинки клиновидной формы. Рабочая часть округлая, ширина - 1,0-1,5 мм, высота - 0,8-1,0 мм, толщина - 50-70 мкм, свободный конец: ширина - 10 мм, высота до 25 мм.

Способ осуществляют следующим образом.

Полоски готовят из лавсановой пластинки и хранят в банках с притертыми крышками в 70% растворе этилового спирта. Непосредственно перед забором десневой жидкости обследуемую область (16, 11, 26 - с вестибулярной поверхности, а 36, 31, 46 - с язычной) изолируют от слюны стерильными ватными валиками. На следующем этапе - полоски из лавсановой пластинки извлекают из банки и высушивают ватным тампоном, а затем осторожно, с помощью стоматологического пинцета вводят на 3-5 с в зубодесневую борозду без усилий и касания ее стенок и дна (чтобы избежать травмы и соскоба клеток). Забор материала проводят из трех разных участков зубодесневой борозды (среднего, медиального и латерального) в области обследуемого зуба через 3-5 часов после чистки зубов (при условии, что обследуемый не употреблял пищу в данный временной промежуток), каждый раз используя новую полоску из лавсановой пластинки. Мазки готовят из полученных капелек десневой жидкости на заранее подготовленном обезжиренном предметном стекле с разметкой в виде сегментов, с указанием области забора материала (16, 11, 26, 36, 31, 46), а также кода пациента, произведенных с помощью стеклографа. В каждом сегменте предметного стекла удается поместить по 6 мазков десневой жидкости. Препараты высушивают при комнатной температуре и окрашивают по методике Романовского-Гимзе.

Исследования нативных цитологических препаратов проводят с помощью микроскопа «Olympus СХ 31» (Япония), окуляр ×10, объектив ×40.

Лавсан - химическое название полиэтилентерефталата, который получают путем реакции поликонденсации этиленгликоля и терефталевой кислоты. Материал обладает уникальными свойствами: высокая глянцевость и гидрофобность, на поверхности несет положительный электронный заряд, за счет которого притягивается десневая жидкость зубодесневой бороздки, содержащая ионы с отрицательным зарядом. Лавсан - экологически чистый материал и прост в утилизации [8, 9, 10, 11].

Округлая форма рабочей части полоски из лавсановой пластинки позволяет осуществлять забор десневой жидкости, не травмируя зубодесневую борозду и не вызывая ее раздражение. Вышеописанные размеры рабочей части продиктованы анатомическими особенностями строения зубодесневой борозды и с целью получения одинакового количества материала.

Положительные стороны описанного способа в сравнении с прототипом и аналогами представлены в таблице.

Таблица
	материал для исследования	потеря клеток	травматичность	специальное лабораторное оснащение	трудоемкость	временные и материальные затраты	интерпретация результатов
аналог 1	отпечаток зубодесневой борозды	нет	есть	нет	нет	нет	сложная
аналог 2	десневая жидкость	есть	нет	есть	есть	есть	не сложная
аналог 3	смыв зубодесневой борозды и клетки соскоба	есть	есть	есть	есть	есть	не сложная
прототип	экссудат или десневая жидкость	есть	есть	нет	есть	есть	не сложная
способ	клеточный состав десневой жидкости	нет	нет	нет	нет	нет	не сложная

С помощью данного способа проведен забор десневой жидкости у 74 пациентов молодого возраста (18-21 года).

Результаты. В нативных препаратах десневой жидкости обнаружены клетки лейкоцитарного ряда: лимфоциты (Л), моноциты (М), нормальные сегментоядерные нейтрофилы (Н.Н), нейтрофилы со вспененной цитоплазмой (В.Н - клетки с признаками фагоцитоза), фагоциты, лишенные цитоплазмы, с размытыми границами и слабо окрашенным ядром - так называемые «голоядерные» клетки (Г); эпителиальные клетки: нормальные эпителиоциты (Н.Э); эпителиоциты с вакуолизированной цитоплазмой (В.Э - дистрофически измененные клетки); пластинки (Пл. - эпителиоциты без ядра). Ни в одном препарате не обнаружены соединительнотканные клетки - фибробласты и фиброциты, а также форменные элементы крови - эритроциты.

Пример 1. Проведен забор десневой жидкости у больного простым маргинальным гингивитом легкой степени тяжести в стадии обострения, код препарата 11 (А).

Непосредственно перед забором десневой жидкости обследуемую область (16, 11, 26 - с вестибулярной поверхности, а 36, 31, 46 - с язычной) изолировали от слюны стерильными ватными валиками. Полоску из лавсановой пластинки извлекали из раствора 70% этилового спирта и высушивали ватным тампоном, а затем осторожно, с помощью стоматологического пинцета вводили на 3 с в зубодесневую борозду без усилий и касания ее стенок и дна (чтобы избежать травмы и соскоба клеток). Забор материала проводили из трех разных участков зубодесневой борозды (среднего, медиального и латерального) в области обследуемого зуба через 5 часов после чистки зубов (пациент не принимал пищу в данный временной промежуток), каждый раз используя новую полоску из лавсановой пластинки. Мазки готовили из полученных капелек десневой жидкости на заранее подготовленном обезжиренном предметном стекле с разметкой в виде сегментов, с указанием области забора материала (16, 11, 26, 36, 31, 46), а также кода пациента - 11 (А). В каждом сегменте предметного стекла удалось поместить по 6 мазков десневой жидкости. Препарат высушивали при комнатной температуре и окрашивали по методике Романовского-Гимзе.

Исследование препарата проводили с помощью микроскопа «Olympus СХ 31» (Япония), окуляр ×10, объектив ×40. В препарате десневой жидкости обнаружили клетки лейкоцитарного ряда: Л - 18,49%, М - 0,86%, Н.Н - 68,92%, В.Н - 2,04%, Г - 9,67%; эпителиальные клетки: Н.Э - 95,02%, В.Э - 4,45%, Пл. - 0,52%, при этом соотношение эпителиоцитов:лейкоцитов составило - 0,41.

Пример 2. Проведен забор десневой жидкости у больного простым маргинальным гингивитом легкой степени тяжести в стадии обострения, код препарата 37 (А).

Непосредственно перед забором десневой жидкости обследуемую область (16, 11, 26 - с вестибулярной поверхности, а 36, 31, 46 - с язычной) изолировали от слюны стерильными ватными валиками. Полоску из лавсановой пластинки извлекали из раствора 70% этилового спирта и высушивали ватным тампоном, а затем осторожно, с помощью стоматологического пинцета вводили на 3 с в зубодесневую борозду без усилий и касания ее стенок и дна (чтобы избежать травмы и соскоба клеток). Забор материала проводили из трех разных участков зубодесневой борозды (среднего, медиального и латерального) в области обследуемого зуба через 4 часа после чистки зубов (пациент не принимал пищу в данный временной промежуток), каждый раз используя новую полоску из лавсановой пластинки. Мазки готовили из полученных капелек десневой жидкости на заранее подготовленном обезжиренном предметном стекле с разметкой в виде сегментов, с указанием области забора материала (16, 11, 26, 36, 31, 46), а также кода пациента - 37 (А). В каждом сегменте предметного стекла удалось поместить по 6 мазков десневой жидкости. Препарат высушивали при комнатной температуре и окрашивали по методике Романовского-Гимзе.

Исследование препарата проводили с помощью микроскопа «Olympus СХ 31» (Япония), окуляр ×10, объектив ×40. В препарате десневой жидкости обнаружили клетки лейкоцитарного ряда: Л - 14,91%, М - 10,51%, Н.Н - 55,92%, В.Н - 14,46%, Г - 4,17%; эпителиальные клетки: Н.Э - 94,42%, В.Э - 0,87%, Пл. - 4,63%, при этом соотношение эпителиоцитов:лейкоцитов составило - 0,25.

Источники информации

1. Григорьян А.С. Роль и место феномена повреждения в патогенезе заболеваний пародонта / А.С.Григорьян // Стоматология. - 1999. - №1. - С.16-20.

2. Иванов B.C. Заболевания пародонта / B.C.Иванов. - 2-ое изд. доп. и перераб. - М.: МИА, 2001. - С.13-21.

3. Михалева Л.М. Хронический пародонтит - клиническая морфология и иммунология / Л.М.Михалева, В.Д.Шаповалов, Т.Г.Бархина. - М.: Триада - фарм, 2004. - С.16-57.

4. Григорьян А.С.Новый диагностический метод оценки состояния пародонта по данным цитоморфометрии отпечатков с десны / А.С.Григорьян, А.И.Грудянов // Стоматология. - 2000. - №5. - С.4-9.

5. Барер Г.М. Десневая жидкость: состав и свойства (обзор литературы) / Г.М.Барер, В.В.Кочержинский, Э.С.Халитова // Стоматология. - 1986. - №4. - С.86-90.

6. Лебедев К.А. Иммунограмма в клинической практике / К.А.Лебедев, И.Д.Понякина. - М.: Наука, 1990. - С.21-53.

7. Максимовский Ю.М. Терапевтическая стоматология / Ю.М.Максимовский, Л.Н.Максимовская, Л.Ю.Орехова. - М.: Медицина, 2002. - С.360.

8. Органическая химия / С.Э.Зурабян, Ю.А.Колесник, А.А.Кост и др. - М.: Медицина, 1989. - С.291.

9. Чучелок А.С. Автореферат магистерской диссертации http://masters.donntu.edu.ua/2005/fgtu/chuchelok/diss/index.htm [17 мая 2007).

10. УпакГруп лавсановые пленки - http://www.uhackgrop.ru20.01.2006 (17 мая 2007).

11. Предприятие ООО «Лавсан Индустрия» - http://www.rcc.ru./Rus/ Chemicals/?/D=41957 от 10.06.2003 (17 мая 2007).

Способ забора десневой жидкости с помощью адсорбирующего материала, отличающийся тем, что в качестве адсорбирующего материала используют полоски-мишени клиновидной формы из лавсановой пластинки, которые имеют толщину 50-70 мкм, округлую рабочую часть шириной 1,0-1,5 мм и высотой 0,8-1,0 мм и свободный конец, шириной 10 мм и высотой до 25 мм, при этом полоску-мишень на 3-5 с вводят в зубодесневую борозду без усилий и без касания ее стенок и дна, а затем проводят забор материала в среднем, медиальном и латеральном участке зубодесневой борозды в области обследуемого зуба через 3-5 ч после чистки зубов, при условии, что обследуемый не употреблял пищу в указанный промежуток времени, причем каждый раз используют новую пластинку - мишень.