Способ предпосевной обработки проб, снятых с объектов внешней среды, на выделение микобактерий


 


Владельцы патента RU 2402781:

Государственное научное учреждение "Прикаспийский зональный НИВИ" Россельхозакадемии (RU)

Изобретение относится к медицине и ветеринарии, в частности к лабораторным методам исследования. Способ предпосевной обработки проб, снятых с объектов внешней среды, на выделение микобактерий заключается в том, что измельченные пробы биологического материала заливают физиологическим раствором на 24 часа при комнатной температуре, фильтруют через вату, центрифугируют 20 мин при 3-4 тыс. оборотах в минуту. Далее к осадку добавляют 1,5% раствор лаурилсульфата на 1,5% растворе едкого натра, выдерживают 20 мин, центрифугируют 20 мин при 3-4 тыс. оборотах в минуту, осадок 2-3 раза отмывают физиологическим раствором и делают посев на питательную среду. Использование способа позволяет оптимизировать условия предпосевной обработки биоматериала, что позволяет повысить эффективность бактериологической диагностики туберкулеза. 1 табл.

 

Изобретение относится к ветеринарии и медицине, в частности к обнаружению микобактерий туберкулеза в пробах, снятых с объектов внешней среды.

Предпосевная обработка исследуемого материала на выделение микобактерий основана на том, что вещества, используемые в этих целях, должны оказывать бактерицидное действие на сопутствующую микрофлору, при этом существенно не влияя на жизнеспособность микобактерий. Обнаружение таких веществ составляет одну из актуальных задач ветеринарной и гуманной медицины, так же, как и для микробиологии в целом.

В этих целях в практике микробиологических лабораторий в настоящее время используют растворы серной (А.Ф.Коржинская, 1926; К.К.Креслинг, 1929; А.Н.Маккавейская, 1956), соляной (Ю.А.Юденич, 1928), щавелевой кислот (метод Гона, Левенштейна-Сумиоши, метод А.П.Аликаевой, 1971), едкого натра (метод флотации О.В.Мартова, 1971), гипохлорита кальция и других растворов.

К недостаткам перечисленных способов следует отнести губительное, в некоторой степени, действие кислот и щелочей на микобактерии. Однако процент загрязнения остается высоким, особенно при обработке проб, снятых с объектов внешней среды. Растворы кислот в малых концентрациях для обработки исследуемого на наличие микобактерий материала не обеспечивают освобождение его от сопутствующей микрофлоры.

Используемые в медицинской практике детергенты для обработки материала непригодны, так как в 70-87,5% случаев не обеспечивают подавление роста сопутствующей микрофлоры в пробах, снятых с объектов внешней среды, и в гомогенатах биоматериала, полученного от животного.

Следует отметить, что при обработке материала 5%-ным раствором щавелевой кислоты без последующего промывания физиологическим раствором как рекомендует Банникова Б.Н. (1980), рост микобактерий на средах Левенштейна-Йенсена, Финн II не происходит, так как рН среды в ней изменяется ниже 6,8.

Из перечисленных способов наиболее близким по технической сущности заявляемому изобретению является способ обработки проб с объектов внешней среды 2-4% раствором едкого натра с последующим двукратным отмыванием стерильным физиологическим раствором.

Исследуемую пробу растирали в ступке пестиком вместе с мелкобитым стеклом, заливали 4% раствором едкого натра, выдерживали 30 минут. Затем центрифугировали 20 минут при 3-4 тыс. оборотах в минуту. Надосадочную жидкость сливали и 2 раза отмывали стерильным физиологическим раствором. Осадок высевали на среду Финн II.

К недостаткам этих методов следует отнести низкую частоту выделения микобактерий и высокий процент проростов сопутствующей микрофлоры на питательных средах. Эксперименты показали недостаточное избавление гомогената от сопутствующей микрофлоры. Кроме того, частота выделения микобактерий при предварительной обработке проб этим способом была низкая. Опыты также показали, что едкий натр недостаточно снижал вязкость гомогената, в связи с чем посевы на питательные среды становились затруднительными, не полностью покрывали всю поверхность среды, и, вероятно, микобактерии, находящиеся в обволоченном слизью состоянии, не находят контакта с питательной средой.

Целью изобретения явилось повышение эффективности бактериологической диагностики туберкулеза за счет оптимизации условий предпосевной обработки биоматериала раствором, оказывающим высокое бактерицидное действие на сопутствующую микрофлору и максимально низкое - на микобактерии.

Поставленная цель достигается обработкой проб, снятых с объектов внешней среды, 1,5% раствором лаурилсульфата на 1,5% растворе едкого натра. Предварительную обработку гомогената проводили по следующей прописи: пробы, снятые с объектов внешней среды, измельчали и заливали физиологическим раствором. Оставляли на 24 часа при комнатной температуре, затем фильтровали через смоченную физиологическим раствором вату, и фильтрат центрифугировали 20 минут при 3-4 тыс. оборотах в минуту. К осадку добавляли 1,5% раствор лаурилсульфата на 1,5% растворе едкого натра, выдерживали 20 минут, центрифугировали еще 20 минут при 3-4 тыс. оборотах в минуту. В стерильных условиях надосадочную жидкость сливали, осадок отмывали физиологическим раствором 2-3 раза. Из полученного осадка делали высевы на поверхность питательной среды путем равномерного втирания.

Сопоставительный анализ с прототипом позволяет сделать вывод, что заявляемый состав раствора отличается от прототипа введением новых компонентов, а именно: лаурилсульфата натра и едкого натра. Таким образом заявляемое техническое решение соответствует критерию «новизна». Анализ известных способов, используемых в целях предварительной обработки материалов на выделение микобактерий, показал, что использованные компоненты известны. Однако их применение в отдельности не обеспечивает таких свойств, которые они проявляют в заявленном решении, а именно значительное расширение бактерицидной и бактериостатической способности на сопутствующую микрофлору (за счет детергентного воздействия лаурилсульфата) и щадящее - на микобактерии. Таким образом, данный состав компонентов придает раствору новые свойства, что позволяет сделать вывод о соответствии заявляемого решения критерию «существенные отличия»

В пробах, снятых с объектов внешней среды, куда вносили микобактерии птичьего вида или БЦЖ, предварительную обработку которых проводили предлагаемым методом, всегда обнаруживали исходную культуру.

Бактериологическое исследование как проб объектов внешней среды, так и патологического материала по предлагаемому методу доступно каждой ветеринарной лаборатории и вполне приемлемо для исследований в практике медицинских учреждений.

При экспериментальной проверке определяли влияние растворов лаурилсульфата натра на растворе едкого натра в разных концентрациях: 3% раствор лаурилсульфата натра на 1, 2, 3% растворах едкого натра; 1,5% раствор лаурилсульфата натра на 1,5 и 2% растворе едкого натра при экспозициях 30, 40, 60 минут и 3 часа. Порядок проведения испытания был следующий: в пробу, взятую из объекта внешней среды, вносили микобактерии птичьего вида, обрабатывали испытуемыми растворами в различных концентрациях и экспозициях. У выделенных первичных культур изучали и описывали следующие свойства:

- сроки обнаружения первичного роста;

- характер роста;

- интенсивность роста (слабый, умеренный, хороший, обильный).

По результатам многократных исследований наилучшие результаты получили при обработке 1,5% раствором лаурилсульфата на 1,5% растворе едкого натра. При этом первичный рост обнаруживали на 5-6 дней раньше. Причем рост происходил сплошной и более обильный. В нашем опыте экспозиция особой роли не играла, поскольку лаурилсульфат оказался намного более щадящим даже при 3-часовой экспозиции. Это очень важно при обработке сильно загрязненных материалов.

В следующих опытах проводили испытание 1,5% раствора лаурилсульфата на 1,5% растворе едкого натра при экспозиции 40 минут для предпосевной обработки проб, снятых с объектов внешней среды. Эти исследования проводили сравнительно. Контролем служили способы предпосевной обработки 10% раствором серной кислоты при экспозиции 20 минут и 4% раствором едкого натра при экспозиции 30 минут (таблица). Исследовали 47 проб (соскобы с кормушек, с пола, со стен), корма (сено, солома), взятые из неблагополучного по туберкулезу хозяйства. Было выделено 11 культур: 2- паратуберкулезные, 1 - птичьего вида и 8 - атипичных микобактерий.

Таким образом, проведенные исследования показали, что при предпосевной обработке проб внешней среды на выделение микобактерий наиболее эффективным является 1,5% раствор лаурилсульфата натра на 1,5% растворе едкого натра при экспозиции 40 минут.

Источники информации

1. Щуревский В.Е., Косенко В.И., Тажгалиев Н.М. Использование различных химических веществ для обработки патологического материала и влияние их на высеваемость микобактерий. / Бюллетень ВИЭВ. - 1987. - В. 64. - С.15-19.

2. Колычев М.Н., Шлыгин И.В. Значение прямого бактериологического контроля качества дезинфекции в комплексе мер борьбы с туберкулезом крупного рогатого скота. / Тр. Омского вет. института. - С.54-55.

3. Банникова В.Н. Совершенствование методов бактериологического исследования патологического материала на туберкулез. /Тез. докл. научн. конф. Омск, 1980. - В.4, - С.63-64.

4. Колычев Н. характеристика микобактерий, изолированных из объектов звероводческих и животноводческих ферм. / Сб. н.т. Сиб. НИВИ. - 1976. - С.47-55.

Способ предпосевной обработки проб, снятых с объектов внешней среды, на выделение микобактерий, заключающийся в воздействии на них раствором едкого натра, отличающийся тем, что измельченные пробы заливают физиологическим раствором на 24 ч при комнатной температуре, фильтруют через вату, центрифугируют 20 мин при 3-4 тыс. оборотах в минуту, к осадку добавляют 1,5%-ный раствор лаурилсульфата на 1,5%-ном растворе едкого натра, выдерживают 20 мин, центрифугируют 20 мин при 3-4 тыс. оборотах в минуту, осадок 2-3 раза отмывают физиологическим раствором и делают посев на питательную среду.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине, точнее к урологической диагностике, и предназначено для оценки прогноза развития одностороннего или двустороннего камнеобразования.
Изобретение относится к области медицины, в частности к способам лабораторной диагностики заболеваний ротовой полости по элементному составу слюны. .
Изобретение относится к области медицины, а именно, урологии, и может быть использовано при дифференциальной диагностике форм хронического абактериального простатита.
Изобретение относится к области судебно-ветеринарной экспертизы и может быть использовано для посмертной диагностики случайных отравлений соединениями алюминия.
Изобретение относится к области медицины, а именно к ортопедии и травматологии, в частности к лабораторной диагностике, и применяется для оценки готовности организма к повторному удлинению конечности.
Изобретение относится к области медицины, а именно к клинической лабораторной диагностике и гепатологии. .
Изобретение относится к области медицины, а именно к урологии, и касается способа дифференциальной диагностики форм хронического абактериального простатита. .
Изобретение относится к медицине, в частности к офтальмологии, и может быть использовано для прогнозирования доклинической манифестации рассеянного склероза. .
Изобретение относится к медицине, в частности лабораторным методам исследования
Изобретение относится к медицине и предназначено для выявления у лиц молодого возраста риска развития кариеса и воспалительных заболеваний пародонта
Изобретение относится к области медицины и касается способа прогнозирования постгипоксической кардиопатии у новорожденных от матерей с врожденными пороками сердца
Изобретение относится к области медицины, в частности к терапевтической стоматологии, а именно к способу диагностики хронического генерализованного пародонтита

Группа изобретений относится к определению наличия мочи. Представлен способ определения наличия мочи, включающий: применение датчика индикации мочи, содержащего матрикс, при этом матрикс содержит распределенную по нему смесь термохромного вещества и изменяющего температуру средства, где данное изменяющее температуру средство способно вызывать либо повышение температуры, либо понижение температуры при контакте с мочой, таким образом данное изменяющее температуру средство способно вызывать изменение температуры в термохромном веществе, что приводит к изменению цвета; контакт мочи с матриксом датчика и определение наличия мочи на основании изменения цвета термохромного вещества. Также описан датчик для определения наличия или отсутствия мочи. Достигается повышение точности и надежности определения. 2 н. и 9 з.п. ф-лы, 7 пр., 2 ил.

Изобретение относится к области медицины, в частности к педиатрии. При уровне ионизированного кальция сыворотки крови ниже 0,9 ммоль/л и соотношении ионизированного Са/фосфор неорганический равным или большим 0,3 осуществляют внутривенное введение 1,0 мл кальция глюконата 7-10 раз/сутки с пероральным введением 5,0 мл 10% кальция хлорида 7-10 раз/сутки и 8000 ME 0,5% спиртового раствора витамина Д2 в сутки. При сопутствующей гипомагнезиемии (Mg ниже 0,66 ммоль/л) вводят внутримышечно 1 мл 25% раствора сульфата магния 1 раз/сутки. При уровне кальция меньше 0,9 ммоль/л и соотношении ионизированный Са/фосфор неорганический меньше 0,3 вместо витамина Д2, назначают 25-0,5 мл паратиреоидина внутримышечно 3 раза в сутки. При уровнях ионизированного кальция больше 1,1 ммоль/л и магния больше 0,66 ммоль/л перорально вводят 5,0 мл 10% кальция хлорида 7-10 раз/сутки и 8000 ME витамина Д2 или заменяющего его паратиреодина в дозе 0,25-05 мл 3 раза/сутки, внутримышечно. После стойкой нормализации уровней кальция и магния паратиреоидин замещают на 0,5% спиртовый раствор витамина Д2. Использование способа позволяет значительно быстрее ликвидировать гипокальциемию, восстановить в крови нормальное содержание 25(ОН)Д, что предупреждает появление повторных судорог. 2 табл., 2 пр.

Изобретение относится к области молекулярной биологии и медицинской диагностики. Предложен способ детекции белков в амилоидном состоянии, в котором получают образец лизата культуры дрожжей или ткани млекопитающего, добавляют к образцу ионный детергент, концентрируют белки в амилоидной форме на ацетатцеллюлозной мембране и детектируют их с использованием аптамеров, их конъюгатов или антител, специфичных к амилоидной форме белков. Также предложен набор для детекции белков в амилоидном состоянии. Изобретение может быть использовано в медицине для диагностики амилоидозов. 2 н. и 7 з. п. ф-лы, 6 ил., 7 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к педиатрии. Проводят суточное мониторирование внутрипищеводного pH и холтеровское мониторирование. Вариабельность сердечного ритма оценивают в совокупности с анализом тренда частоты сердечных сокращений в период ночного сна. При обнаружении более 5 эпизодов периодов повышенной дисперсии частоты сердечных сокращений, совпадающих с эпизодами рефлюкса, или их процентной представленности более 50% в структуре ночного сна диагностируют нарушение вегетативной регуляции сердечного ритма, связанное с гастроэзофагеальной рефлюксной болезнью. Способ позволяет диагностировать внепищеводные проявления гастроэзофагеальной рефлюксной болезни на ранней стадии заболевания до появления субъективных проявлений.

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу диагностики функциональной задержки полового развития у мальчиков-подростков. Сущность способа состоит в том, что предварительно у ребенка определяют росто-весовой индекс (РВИ), если его значение менее 340 отн.ед., дополнительно атомно-абсорбционным методом определяют в суточной моче концентрации цинка, селена, свинца и вычисляют соотношения концентраций пар свинец/цинк, свинец/селен. Если индекс соотношения превышает не менее чем в 2 раза установленные нормативы, то диагностируют у данного мальчика-подростка задержку полового развития полимикроэлементозного генеза. У мальчиков с росто-весовым индексом более 400 отн.ед. определяют концентрацию хрома в моче и если его уровень не менее чем в 2 раза ниже установленного норматива, диагностируют задержку полового развития мономикроэлементозной этиологии. Использование заявленного способа позволяет повысить точность и достоверность диагностики функциональной задержки полового развития у мальчиков-подростков с ранним его выявлением. 2 табл., 2 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к болезням внутренних органов, и предназначено для выбора индивидуального лечения больных бронхиальной астмы. Согласно изобретению для выбора индивидуального лечения больных бронхиальной астмой проводят микроскопическое исследование системной организации суточной фации сыворотки крови методом клиновидной дегидратации и локальные структуры сыворотки крови методом краевой дегидратации. При выявлении конкреций в центральной зоне фации сыворотки крови и наличии маркера усиленной пролиферации в аналитической ячейке назначают фотогемотерапию красным светом. При отсутствии хотя бы одного из указанных признаков назначают фотогемотерапию синим светом. Способ позволяет повысить эффективность лечения бронхиальной астмы за счет выбора индивидуальной немедикаментозной терапии, основанного на объективной оценке пролиферативной и энергетической активности структур организма; оптимальный подбор фотогемотерапии позволяет добиться стойкой ремиссии бронхиальной астмы при полной отмене либо существенном снижении дозировки стероидных препаратов. 4 пр., 4 ил., 4 табл.
Наверх