Способ моделирования неоваскуляризации роговицы
Владельцы патента RU 2440620:
Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Российский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" (ГОУ ВПО РГМУ Росздрава) (RU)
Изобретение относится к экспериментальной медицине и касается моделирования неоваскуляризации роговицы. Для этого лабораторному животному формируют ожог роговицы раствором соляной кислоты. Просвет трепана для пересадки роговицы диаметром не менее 2 мм заполняют тампоном и пропитывают его 10% раствором соляной кислоты, устанавливают трепан на 20 секунд на центральную или парацентральную зону роговицы, обеспечивая контакт тампона и роговицы. Затем на 3-4 день после вмешательства трепаном для пересадки роговицы в области ожога выкраивают диск роговицы на 1/2 ее толщины, отсепаровывают и удаляют его. Способ обеспечивает упрощение моделирования за счет исключения сложных микрохирургических методик, а также устранение повреждения других структур глаза за счет локального дозированного воздействия, при сокращении сроков получения адекватной модели. 2 з.п. ф-лы.
Изобретение относится к экспериментальной медицине и может быть применено при моделирования неоваскуляризации роговицы.
Известен способ моделирования неоваскуляризации роговицы, принятый за прототип (Белый Ю.А., Терещенко А.В., Володин П.Л., Каплан М.А., Пупкова Т.Н., Федотова М.В., Иванов A.M., Абносов А.А., Царенков В.М. Фотодинамическая терапия экспериментальной модели неоваскуляризации роговицы с использованием препарата «Фотолон» // Актуальные проблемы офтальмологии: Сб. тезисов по материалам 8-й научно-практич. конференции. - М., 2005 - С.23-24.). Данный способ заключается в следующем: исследования проведены на глазах кроликов породы шиншилла и массой 2,5-3 кг; под местной анестезией, включавшей инсталляции раствора «Инокаин» (0,4% оксибупрокаин), в верхнем полюсе роговицы накладывались интрастромальные роговичные швы (шелк 5,00), захватывавшие перилимбальную зону и доходившие до центра роговицы. Затем в месте наложения швов роговица тушировалась 10% раствором едкого натра (NaOH). Время экспозиции раствора составляло 20 с. Снятие роговичных швов производили на 30 сутки, когда наблюдалась состоятельная индуцированная неоваскулярная сеть роговицы.
Таким образом, известный способ предполагает необходимость использования микрохирургических методик, работу в стерильных условиях операционной, использование щелочных ожогов, которые являются более тяжелыми и непредсказуемыми по своей глубине и тяжести, а также получение отсроченных результатов.
Нами поставлена задача - разработать простой, воспроизводимый способ моделирования неоваскуляризации роговицы.
Технический результат заключается в упрощении моделирования за счет исключения сложных микрохирургических методик, в профилактике осложнений, связанных с повреждением других структур глаза, за счет формирования локального дозированного ожога, а также в сокращении сроков получения адекватной модели за счет выбора сочетанного повреждающего воздействия, вызывающего гипоксическое повреждение ткани роговицы в зоне воздействия.
Технический результат достигается тем, что животному формируют ожог роговицы с последующим на 3-4 день после вмешательства выкраиванием в области сформированного ожога диска роговицы на 1/2 ее толщины, который отсепаровывают и удаляют.
Сущность изобретения заключается в следующем: для моделирования неоваскуляризации роговицы у кролика формируют ожог роговицы. Для этого просвет трепана для пересадки роговицы диаметром не менее 2 мм заполняют тампоном и пропитывают его 10% раствором соляной кислоты. Затем устанавливают трепан на 20 секунд на центральную или парацентральную зону роговицы, обеспечивая контакт тампона и роговицы. Через 3-4 дня после вмешательства трепаном для пересадки роговицы диаметром, равным или менее диаметра трепана, использованного ранее, в области ожога выкраивают диск роговицы на 1/2 ее толщины, отсепаровывают и удаляют его. В частном случае может быть использован тампон из ваты и трепан диаметром не менее 5 мм.
Способ реализуется следующим образом.
Кролика породы шиншилла массой 2,5 кг содержали на стандартном рационе питания и свободном доступе к пище и воде в условиях вивария. Кролик помещался в ящик, в котором голова животного плотно фиксируется снаружи, однократно в конъюнктивальную полость инсталлировали раствор фурациллина 1:5000 и 10% раствор лидокаина. Затем, через 2-3 мин. удаляли третье веко на обоих глазах кролика. Оперируемый глаз накрывался стерильной марлевой салфеткой с отверстием по середине, в которое устанавливался векорасширитель. Повторно инсталлировали раствор фурациллина 1:5000 и 10% раствор лидокаина в глаз. Трепан для пересадки роговицы диаметром 5 мм плотно набивался ватным тампоном, который затем пропитывали раствором 10% соляной кислоты. Трепан устанавливался в центральной или парацентральной зоне роговицы на 20 секунд. Конъюнктивальную полость глаз после эксперимента не промывали. Сразу после удаления трепана на месте его контакта с роговицей оставался правильной округлой формы, одинакового диаметра у всех кроликов ожог роговицы II-III ст. На 3-4 день эксперимента проводили второй этап создания модели неоваскуляризации роговицы - создание стандартной по глубине и площади язвы роговицы. Трепаном для пересадки роговицы диаметром 2 мм в области ожоговой поверхности выкраивали диск на 1/2 толщины роговицы; затем он отсепаровывался с помощью копьевидного ножа и удалялся. Образовывалась стандартная по глубине и площади язва роговицы.
На 7-й день после ожога и 3-4-й день после формирования язвы отмечался рост сети новообразованных сосудов роговицы.
При биомикроскопии переднего отдела глаза оценивали состоятельность индуцированной неоваскулярной сети роговицы. Морфологическое исследование ткани роговицы проводили с фиксированием ткани по стандартной методике и окрашивали гематоксилином и эозином.
Для доказательства возможности реализации указанной модели и достижения технического результата, указанного выше, приводим следующие доказательства:
Пример 1.
Кролика породы шиншилла массой 2,5 кг содержали на стандартном рационе питания и свободном доступе к пище и воде в условиях вивария. Кролик помещался в ящик, в котором голова животного плотно фиксируется снаружи, однократно в конъюнктивальную полость инсталлировали раствор фурациллина 1:5000 и 10% раствор лидокаина. Затем, через 2-3 мин удаляли третье веко на обоих глазах кролика. Оперируемый глаз накрывался стерильной марлевой салфеткой с отверстием по середине, в которое устанавливался векорасширитель. Повторно инсталлировали раствор фурациллина 1:5000 и 10% раствор лидокаина в глаз. Трепан для пересадки роговицы диаметром 5 мм плотно набивался ватным тампоном, который затем пропитывали раствором 10% соляной кислоты. Трепан устанавливался в центральной зоне роговицы на 20 секунд. Конъюнктивальную полость глаз после эксперимента не промывали. Сразу после удаления трепана на месте его контакта с роговицей оставался правильной округлой формы, одинакового диаметра у всех кроликов ожог роговицы II-III ст. На 3 день эксперимента проводили второй этап создания модели неоваскуляризации роговицы - создание стандартной по глубине и площади язвы роговицы. Трепаном для пересадки роговицы диаметром 2 мм в области ожога выкраивали диск на 1/2 толщины роговицы; затем он отсепаровывался с помощью копьевидного ножа и удалялся. Образовывалась стандартная по глубине и площади язва роговицы.
На 7-й день после ожога и 4-й день после формирования язвы отмечался рост сети новообразованных сосудов роговицы. При биомикроскопии переднего отдела глаза четко визуализировалась неоваскулярная сеть роговицы. При морфологическом исследовании роговицы обнаружена состоятельная сеть новообразованных сосудов.
Пример 2.
Кролика породы шиншилла массой 2,0 кг содержали на стандартном рационе питания и свободном доступе к пище и воде в условиях вивария. Кролик помещался в ящик, в котором голова животного плотно фиксируется снаружи, однократно в конъюнктивальную полость инсталлировали раствор фурациллина 1:5000 и 10% раствор лидокаина. Затем, через 2-3 мин удаляли третье веко на обоих глазах кролика. Оперируемый глаз накрывался стерильной марлевой салфеткой с отверстием по середине, в которое устанавливался векорасширитель. Повторно инсталлировали раствор фурациллина 1:5000 и 10% раствор лидокаина в глаз. Трепан для пересадки роговицы диаметром 5 мм плотно набивался ватным тампоном, который затем пропитывали раствором 10% соляной кислоты. Трепан устанавливался в парацентральной зоне роговицы на 20 секунд. Конъюнктивальную полость глаз после эксперимента не промывали. Сразу после удаления трепана на месте его контакта с роговицей оставался правильной округлой формы, одинакового диаметра у всех кроликов ожог роговицы II-III ст. На 4 день эксперимента проводили второй этап создания модели неоваскуляризации роговицы - создание стандартной по глубине и площади язвы роговицы. Трепаном для пересадки роговицы диаметром 2 мм в области ожога выкраивали диск на 1/2 толщины роговицы; затем он отсепаровывался с помощью копьевидного ножа и удалялся. Образовывалась стандартная по глубине и площади язва роговицы.
На 7-й день после ожога и 3-й день после формирования язвы отмечался рост сети новообразованных сосудов роговицы. При биомикроскопии переднего отдела глаза четко визуализировалась неоваскулярная сеть роговицы. При морфологическом исследовании роговицы обнаружена состоятельная сеть новообразованных сосудов.
Пример 3.
Кролика породы шиншилла массой 2,2 кг содержали на стандартном рационе питания и свободном доступе к пище и воде в условиях вивария. Кролик помещался в ящик, в котором голова животного плотно фиксируется снаружи, однократно в конъюнктивальную полость инсталлировали раствор фурациллина 1:5000 и 10% раствор лидокаина. Затем, через 2-3 мин удаляли третье веко на обоих глазах кролика. Оперируемый глаз накрывался стерильной марлевой салфеткой с отверстием по середине, в которое устанавливался векорасширитель. Повторно инсталлировали раствор фурациллина 1:5000 и 10% раствор лидокаина в глаз. Трепан для пересадки роговицы диаметром 5 мм плотно набивался ватным тампоном, который затем пропитывали раствором 10% соляной кислоты. Трепан устанавливался в центральной зоне роговицы на 20 секунд. Конъюнктивальную полость глаз после эксперимента не промывали. Сразу после удаления трепана на месте его контакта с роговицей оставался правильной округлой формы, одинакового диаметра у всех кроликов ожог роговицы II-III ст. На 3 день эксперимента проводили второй этап создания модели неоваскуляризации роговицы - создание стандартной по глубине и площади язвы роговицы. Трепаном для пересадки роговицы диаметром 2 мм в области ожога выкраивали диск на 1/2 толщины роговицы; затем он отсепаровывался с помощью копьевидного ножа и удалялся. Образовывалась стандартная по глубине и площади язва роговицы. На 7-й день после ожога и 4-й день после формирования язвы отмечался рост сети новообразованных сосудов роговицы. При биомикроскопии переднего отдела глаза четко визуализировалась неоваскулярная сеть роговицы. При морфологическом исследовании роговицы обнаружена состоятельная сеть новообразованных сосудов.
Предложенный способ моделирования был использован у 8 кроликов (16 глаз). Во всех случаях на 7 день была получена адекватная модель неовасукяризации роговицы, что было подтверждено при морфологическом исследовании роговицы.
Результат: предложенный способ является простым, не требующим микрохирургических вмешательств, ни в одном случае мы не получали повреждения окружающих структур и адекватная модель получена на 7 сутки.
1. Способ моделирования неоваскуляризации роговицы у кролика, отличающийся тем, что формируют ожог роговицы, для чего просвет трепана для пересадки роговицы диаметром не менее 2 мм заполняют тампоном и пропитывают его 10%-ным раствором соляной кислоты, устанавливают трепан на 20 с на центральную или парацентральную зону роговицы, обеспечивая контакт тампона и роговицы, затем на 3-4 день после вмешательства трепаном для пересадки роговицы диаметром, равным или менее диаметра трепана, использованного ранее, в области ожога выкраивают диск роговицы на 1/2 ее толщины, отсепаровывают и удаляют его.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что используют тампон из ваты.
3. Способ по любому из пп.1 или 2, отличающийся тем, что для формирования ожога используют трепан диаметром не менее 5 мм.
