Желатиновые капсулы на основе 3,31-дииндолилметана и эпикатехин-3-галлата и способ их получения
Владельцы патента RU 2448700:
Енгашев Сергей Владимирович (RU)
Якубова Елена Владимировна (RU)
Сидорин Дмитрий Николаевич (RU)
Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности и касается фармацевтической композиции в виде капсул, содержащей в качестве действующих веществ 3,31-дииндолилметан и эпикатехин-3-галлат, и способа получения этой композиции. Способ заключается в том, что смешивают 3,31-дииндолилметан и эпикатехин-3-галлат с жидким жировым наполнителем и добавляют солюбилизатор. При перемешивании нагревают полученную смесь до 35-45°С до получения раствора. Затем охлаждают полученный раствор до 22-25°С и наполняют им желатиновые капсулы при следующем соотношении компонентов, г/капсулу: 3,31-дииндолилметан - 0,01-0,1, эпикатехин-3-галлат - 0,02-0,04, жидкий жировой наполнитель - 0,05-0,1, солюбилизатор - 0,4-0,45. Полученное лекарственное средство в виде мягких желатиновых капсул, содержащих 3,31-дииндолилметан и эпикатехин-3-галлат в виде раствора, позволяет на порядок увеличить биодоступность действующих веществ. Полученное лекарственное средство нетоксично, безопасно при длительном введении, не обладает местно-раздражающим действием, не оказывает токсического воздействия на иммунную и репродуктивную системы. 2 н. и 3 з.п. ф-лы, 6 пр., 7 табл., 4 ил.
Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности, в частности к технологии получения новой лекарственной формы биологически активных субстанций, а именно фармацевтической композиции в виде капсул, содержащей в качестве действующих веществ 3,31-дииндолилметан и эпикатехин-3-галлат, и способу получения этой композиции.
В настоящее время ведется активный поиск новых компонентных смесей, обладающих широкими внутриклеточными регуляторными механизмами с возможностью воздействия на все звенья этиопатогенеза заболевания. Одной из таких композиций является компонентная смесь 3,31-дииндолилметана (дииндолилметан, ДИМ) и эпикатехин-3-галлата (EGCG).
3,31-дииндолилметан и эпикатехин-3-галлат являются уникальными биологически активными веществами, уже вошедшими в клиническую практику в Европе и в США. Показана способность этих веществ блокировать молекулярные механизмы, приводящие к патологической клеточной пролиферации, опухолевому неоангиогенезу и повышению инвазивной активности трансформированных клеток. Известна также их антиметастатическая активность.
Так, в патенте US 6086915 А, 11.07.2000, обсуждается применение многокомпонентной смеси для нормализации метаболизма стероидных гормонов. В состав комбинации наряду с другими веществами входят ДИМ и экстракт зеленого чая, содержащий в качестве основного вещества эпикатехин-3-галлат (EGCG) - самый активный из катехинов зеленого чая.
Известны также фармацевтические композиции (патенты RU 2328282 С1, 10.07.2008, 2276993 С1, 27.05.2006, 2377984 С1, 10.01.2010), состоящие из индол-3 карбинола и эпикатехин-3-галлата, также используемые для лечения и профилактики пролиферативных заболеваний.
Соединение индол-3-карбинол обладает широким спектром противоопухолевой активности, однако является нестабильным соединением.
Более стабилен при хранении и перспективен для применения в качестве лекарственного средства 3,31-дииндолилметан, представляющий собой димер, образующийся из индол-3-карбинола под действием различных факторов (влаги, температуры, pH, света). Экспериментально доказано, что практически все механизмы, индуцируемые индол-3-карбинолом in vitro и in vivo, характерны и для 3,31-дииндолилметана.
Из патента RU 2318508 С1Б 10.08.2008 известно получение фармацевтической композиции, включающей дииндолилметан, тамоксифен и вспомогательные вещества. Композиция используется для лечения пролиферативных заболеваний молочной железы.
Известна фармацевтическая композиция, содержащая в качестве действующих веществ 3,31-дииндолилметан и эпиактехин-3-галлат, катализатор ингибирующей активности в отношении метилтрансаминаз в виде солей магния, поливинилпирролидон, бутилгидроксианизол и липофильную основу - твердый жир.
Фармацевтическая композиция выполнена в виде вагинальных и ректальных суппозиториев (RU 2395281 С2, 27.07.2010).
Однако в данной композиции невозможно использовать в полной мере потенциальные возможности 3,31-дииндолилметана из-за его низкой биодоступности, напрямую связанной с его растворимостью. Кроме того, композиция содержит высокие дозы действующих веществ.
Наиболее близким техническим решением к заявленной группе изобретений является фармацевтическая композиция для лечения и профилактики аденомиоза, выполненная в виде капсул или таблетки, содержащая в качестве действующих веществ 3,31-дииндолилметан и эпикатехин-3-галлат и приемлемый носитель. В качестве последнего могут быть использованы фармацевтический крахмал, лактоза, стеарат магния (RU 2406497 С1, 20.12.2010).
Недостатком известной композиции является низкая биодоступность 3,31-дииндолилметана (20-30%) и, как следствие, высокое содержание действующих веществ в капсуле.
Из фармацевтических факторов основное значение при оценке биодоступности лекарственного вещества имеют его химические и физико-химические свойства, лекарственная форма, в которой оно назначается, природа используемых для изготовления лекарственной формы вспомогательных веществ, особенности технологии производства лекарственной формы и др. (Лакин К.М., Крылов Ю.Ф., Биотрансформация лекарственных веществ, М., 1981).
Поступление лекарственного вещества в системный кровоток происходит путем высвобождения его из лекарственной формы и последующего всасывания через биологические мембраны. Высвобождение биологически активного вещества определяется скоростью дезинтеграции лекарственной формы и временем растворения вещества в биологических жидкостях. Оценка биодоступности является одним из важнейших этапов процесса разработки и внедрения новых лекарственных форм биологически активных соединений.
Главное внимание при создании лекарственных форм дииндолилметана сосредоточено на создании условий, обеспечивающих увеличение биодоступности препарата.
Биодоступность дииндолилметана мала, и она учитывается при выборе режима терапии.
Доза (внутрь)=Ссредн×(Биодоступность/Интервал), где Интервал - интервал между введениями лекарственного средства, определяется количеством действующего вещества, содержавшегося во вводимом препарате, которое попадает в системный кровоток в неизмененном виде. Ее величину измеряют отношением количества действующего вещества в крови к введенной дозе и выражают в процентах.
Задачей настоящей группы изобретений является повышение биодоступности действующих веществ, снижение их дозы без снижения эффективности, а также упрощение способа приготовления лекарственного средства и возможность его использования для более широкого круга заболеваний.
Поставленная задача решается за счет того, что разработана новая лекарственная форма лекарственного средства в виде желатиновых капсул на основе 3,31-дииндолилметана и эпикатехин-3-галлата и способ ее получения.
Способ получения желатиновых капсул на основе 3,31-дииндолилметана и эпикатехин-3-галлата, согласно изобретению, отличается тем, что смешивают 3,31-дииндолилметан и эпикатехин-3-галлат с жидким жировым наполнителем, добавляют солюбилизатор, при перемешивании нагревают полученную смесь до 35-45°C до получения раствора, затем охлаждают полученный раствор до 22-25°C и наполняют им желатиновые капсулы при следующем соотношении компонентов, г/капсулу:
| 3,31-дииндолилметан | 0,01-0,1 |
| эпикатехин-3-галлат | 0,02-0,04 |
| жидкий жировой наполнитель | 0,05-0,1 |
| солюбилизатор | 0,4-0,45 |
Рекомендуется в качестве жидкого жирового наполнителя использовать растительное масло или рыбий жир.
Из растительных масел можно использовать подсолнечное, кукурузное, оливковое, соевое или касторовое масла.
Целесообразно в качестве солюбилизатора использовать твин-80.
Полученные по описанному способу желатиновые капсулы, содержащие, г/капс.:
| 3,31-дииндолилметан | 0,01-0,1 |
| эпикатехин-3-галлат | 0,02-0,04 |
| жидкий жировой наполнитель | 0,05-0,1 |
| солюбилизатор | 0,4-0,45 |
являются самостоятельным объектом изобретения.
Техническим результатом заявленной группы изобретений является то, что экспериментально подобранное соотношение жидкого жирового наполнителя, солюбилизатора и режимов температурной обработки позволило получить раствор 3,31-дииндолилметана и эпикатехин-3-галлата, в результате чего его биодоступность повысилась на порядок.
Полученное лекарственное средство нетоксично, безопасно при длительном (90 дней) ежедневном внутрижелудочном введении экспериментальным теплокровным животным, не обладает местно-раздражающим действием, не оказывает токсического воздействия на иммунную и репродуктивную системы.
Изобретение иллюстрируется следующими примерами.
Пример 1
50 мг 3,31-дииндолилметана и 20 мг эпикатехин-3-галлата смешивают со 100 мг рыбьего жира, в смесь добавляют 400 мг твина-80. Полученную смесь при перемешивании нагревают до температуры 40°C до получения раствора, после чего охлаждают до температуры 22°C и вводят в мягкую желатиновую капсулу.
Таким образом, получают желатиновую капсулу, содержащую (г/капс.):
| 3,31-дииндолилметан | 0,05 |
| эпикатехин-3-галлат | 0,02 |
| рыбий жир | 0,1 |
| твин-80 | 0,4 |
Пример 2
20 мг 3,31-дииндолилметана смешивают с 20 мг эпикатехин-3-галлата, добавляют 80 мг подсолнечного масла и 450 мг твина-80. Полученную смесь при перемешивании нагревают до температуры 40°C до получения раствора, охлаждают до температуры 23°C и используют для заполнения мягких желатиновых капсул.
Получают желатиновую капсулу, содержащую (г/капс.):
| 3,31-дииндолилметан | 0,02 |
| эпикатехин-3-галлат | 0,02 |
| подсолнечное масло | 0,08 |
| твин-80 | 0,45 |
Пример 3
90 мг 3,31-дииндолилметана смешивают с 25 мг эпикатехин-3-галлата, при перемешивании добавляют 90 мг оливкового масла и 430 мг твина-80. Полученную смесь при перемешивании нагревают до температуры 43°C до получения раствора, охлаждают полученный раствор до температуры 22°C и используют для заполнения мягких желатиновых капсул.
Получают желатиновую капсулу, содержащую (г/капс.):
| 3,31-дииндолилметан | 0,09 |
| эпикатехин-3-галлат | 0,025 |
| оливковое масло | 0,09 |
| твин-80 | 0,43 |
Пример 4
10 мг 3,31-дииндолилметана смешивают с 40 мг эпикатехин-3-галлата, при перемешивании добавляют 60 мг соевого масла и 400 мг твина-80. Полученную смесь при перемешивании нагревают до температуры 39°C до получения раствора, охлаждают полученный раствор до температуры 24°C и используют для заполнения мягких желатиновых капсул.
Получают желатиновую капсулу, содержащую (г/капс.):
| 3,31-дииндолилметан | 0,01 |
| эпикатехин-3-галлат | 0,04 |
| соевое масло | 0,06 |
| твин-80 | 0,4 |
Пример 5
100 мг 3,31-дииндолилметана смешивают с 40 мг эпикатехин-3-галлата, при перемешивании добавляют 100 мг кукурузного масла и 450 мг твина-80. Полученную смесь при перемешивании нагревают до температуры 45°C до получения раствора, охлаждают полученный раствор до температуры 24°C и используют для заполнения мягких желатиновых капсул.
Получают желатиновую капсулу, содержащую (г/капс.):
| 3,31-дииндолилметан | 0,1 |
| эпикатехин-3-галлат | 0,04 |
| соевое масло | 0,1 |
| твин-80 | 0,45 |
Пример 6
50 мг 3,31-дииндолилметана смешивают с 40 мг эпикатехин-3-галлата и 100 мг касторового масла, при перемешивании в смесь добавляют 400 мг твина-80. Полученную смесь нагревают до температуры 40°C, перемешивают до получения раствора, после чего охлаждают до температуры 23°C и вводят в мягкую желатиновую капсулу.
Получают желатиновую капсулу, содержащую (г/капс.):
| 3,31-дииндолилметан | 0,05 |
| эпикатехин-3-галлат | 0,04 |
| касторовое масло | 0,1 |
| твин-80 | 0,4 |
Было проведено изучение сравнительной фармакокинетики и биодоступности субстанции 3,31-дииндолилметана и полученных по заявленному способу желатиновых капсул при внутрижелудочном введении крысам.
Исследуемый препарат:
1. Субстанция дииндолилметана.
2. Мягкие желатиновые капсулы.
Состав на 1 капсулу:
| Дииндолилметан | 0,1 г |
| Эпикатехин-3-галлат | 0,04 г |
| Твин-80 | 0,45 г |
| Масляная основа | 0,1 г |
Субстанция является 3,3-дииндолилметаном и представляет собой порошок, практически нерастворимый в воде. Препараты обладают антиандрогенным и противоопухолевым действием. Дииндолилметан связывается с андрогенными рецепторами, подавляя стимулирующее влияние андрогенов. В результате этого происходит регрессия гиперплазии предстательной железы. Антиандрогенное и вазопротекторное действия способствуют уменьшению симптомов доброкачественной гипертрофии предстательной железы. Он показан при доброкачественной гиперплазии предстательной железы (аденоме) и миоме матки.
Исследования проведены на 200 крысах массой 0.23±0.02 кг. Животные содержались в стандартных клетках при 12-часовом режиме освещения и свободном доступе к корму и воде.
Длительность карантина (акклиматизационного периода) животных составляла четырнадцать (14) дней. В течение карантина проводили ежедневный осмотр каждого животного (поведение и общее состояние).
Образцы вводили с утра натощак внутрижелудочно: субстанция - в дозе 200 мг/кг, содержимое капсул - 0,69 мг/кг, что в пересчете на дозу дииндолилметана составило 0,1 мг/кг.
Стандартное питание животные получали через 2 часа после начала эксперимента. Забор крови проводился после декапитации животных через: 0.25; 0.5; 1.0; 2.0; 4.0; 6.0; 8.0 и 12.0 часов после введения препарата.
Пробы крови центрифугировали 15 минут при 3000 об/мин, отбирали по 1.5-2.0 мл плазмы, замораживали и хранили при -20°C до анализа.
Анализ содержания дииндолилметана в плазме крови производили по специально разработанной методике количественного определения с применением высокоэффективной жидкостной хроматографии с предварительной экстракцией из биоматериала (Соловьев В.Н., Фирсов А.А., Филов В.А. Фармакокинетика. М.: «Медицина», 1980, 423 стр.).
Для проведения хроматографического анализа и экстракции препарата из взятых проб использовали следующие реактивы и органические растворители: ацетонитрил, этилацетат, додецилсульфат, кислый фосфорнокислый калий, фосфорную кислоту, дистиллированную и деионизированную воду.
Центрифугирование образцов проводили на центрифуге ОПн - 8 УХЛ4.2 (Россия).
Анализ проб с целью определения концентрации дииндолилметана в образцах плазмы крови осуществляли методом ВЭЖХ на жидкостном хроматографе «LC-20 Prominence» (Beckman, США) с УФ-детектором с диодной матрицей SPD М20А фирмы Шимадзу.
Хроматографические характеристики методики количественного определения дииндолилметана в плазме крови экспериментальных животных представлены в таблице 1.
| Таблица 1 | ||
| Хроматографические характеристики методики количественного определения дииндолилметана в плазме крови | ||
| Параметры | Обозначение | Значение |
| Время удерживания | - | 5.07±0.1 |
| Эффективность колонки (Число теоретических тарелок) | n | 15100 |
| Селективность | α | 2.4 |
Во все образцы плазмы крови в объеме 1 мл добавляли 5 мл этилацетата, встряхивали пробирку в течение 2 минут и затем центрифугировали 10 мин при 4000 об/мин. Отбирали надосадочный слой, упаривали, добавляли 200 мкл ацетонитрила и аликвоту вводили в хроматограф.
Аналогично проводили анализ проб плазмы крови с внесенными стандартными количествами дииндолилметана.
Количественное определение дииндолилметана в плазме крови проводили методом ВЭЖХ на жидкостном хроматографе «LC-20 Prominence» (Beckman, США) с УФ-детектором с диодной матрицей SPD М20А фирмы Шимадзу, длина волны 230 нм.
Колонка Ascentis, С18, 5 мкм (4.6×25 мм). Элюент: 70% ацетонитрила, 30% водного буфера, содержащего 6 мг додецилсульфата, 0.6 мг кислого фосфорнокислого калия на 1 л Н2O, закисленного до pH 5 фосфорной кислотой.
Скорость элюирования - 1.0 мл/мин. Хроматографирование проводили при комнатной температуре (22-24°C). Перед хроматографированием подвижную фазу дегазировали и фильтровали. Объем вводимой в хроматограф пробы составил 5 мкл. Время удерживания дииндолилметана в данных условиях - 5.07 мин.
Установлена линейная зависимость между концентрациями дииндолилметана и площадями хроматографических пиков в диапазоне 0.03-2.0 мкг/мл. Концентрацию лекарственного вещества в пробах определяли по калибровочному графику. Минимальная чувствительность метода анализа составила 0.03 мкг/мл.
Достоверность результатов количественного определения дииндолилметана в плазме крови оценивали, рассчитывая метрологические характеристики данной методики по результатам 5 параллельных измерений концентраций в трех образцах плазмы крови, которые представлены в таблице 2.
| Таблица 2 | ||||
| Метрологические характеристики методики количественного определения дииндолилметана в плазме крови | ||||
| Концентрация препарата, мкг/мл | Объем выборки, n | Относительное стандартное отклонение, % | Относительная погрешность, % | |
| Введено | Найдено | |||
| 0.03 мкг/мл | 0.033 | 5 | 7.27 | 8.36 |
| 0.30 мкг/мл | 0.31 | 5 | 0.77 | 0.89 |
| 2.0 мкг/мл | 1.96 | 5 | 0.12 | 0.14 |
Как следует из данных таблицы 2, показатель, характеризующий точность методики (относительная погрешность среднего значения), составляет 8.36, 0.89, 0.14%. Показатель, характеризующий воспроизводимость методики (относительное стандартное отклонение), составляет 7.27, 0.77, 0.12% для концентрации дииндолилметана 0.03, 0.30 и 2.0 мкг/мл плазмы соответственно.
Содержание препарата в пробах находится в рассчитанных доверительных границах, а методики количественного определения дииндолилметана в плазме крови не зависят от систематических ошибок. Полученные результаты удовлетворяют критериям и нормативам, отраженным в регуляторных требованиях FDA (Analytical Methods Validation: Bioavailability, Bioequivalence and Pharmacokinetic Studies Conference Report - Pharmaceutical Research, Vol.9, №4, 1992).
Для описания фармакокинетики препарата в плазме крови были привлечены следующие показатели (в их условных обозначениях, принятых в литературе (Лабораторный контроль лекарственной терапии. Аналитические процедуры/Под ред. В.В.Меньшикова. Клиническая лабораторная аналитика. М., 1999, т.2, стр.323-346)):
| β | - постоянная убывания на хвосте распределения (ч-1) |
| Tmax | - время максимума концентрации (ч) |
| Cmax | - максимальная концентрация (мкг/мл) |
| AUC12 (ч·мкг/мл) | - площадь под кривой в интервале 0-12 часов |
| AUC∞ (ч·мкг/мл) | - полная площадь под кривой |
| MRT | - среднее время удерживания (присутствия) (ч) |
| Cl | - общий клиренс (мл/ч/кг) |
| Vss (мл/кг) | - стационарный объем распределения |
| T½=0.693/β | - период полувыведения (ч) |
| Тэфф=AUC∞/Cmax | - эффективная длительность (ч) |
Показатели Tmax, Cmax и β оцениваются из вида кривой концентрации. Исходные формулы для расчета остальных показателей следующие:
где D - введенная доза препарата.
Расчет показателей выполнялся модельно-независимым способом с помощью метода интегральных моментов (Методические рекомендации по проведению качественных клинических исследований биоэквивалентности лекарственных препаратов. Москва. 2004). Используемый метод не опирается ни на какие предположения о внутренних механизмах, лежащих в основе кинетики препаратов, кроме самых общих, и в этом смысле является наиболее устойчивым.
Для расчета использовалась оригинальная программа, разработанная в Институте токсикологии.
Результаты измерения концентрации субстанции дииндолилметана в плазме крови крыс при внутрижелудочном введении представлены в таблице 3.
Усредненные фармакокинетические кривые отображены на рисунках 1, 2.
| Таблица 3 | ||||||||
| Концентрации дииндолилметана в плазме крови экспериментальных животных (мкг/мл) при внутрижелудочном введении микрогенизированной субстанции дииндолилметана, 200.0 мг/кг | ||||||||
| №№ | Время взятия пробы крови, ч | |||||||
| 0,25 | 0,5 | 1,0 | 2,0 | 4,0 | 6,0 | 8,0 | 12,0 | |
| 1 | 0.05 | 0.13 | 0.17 | 0.12 | 0.07 | 0.04 | 0.03 | <0.03 |
| 2 | 0.05 | 0.12 | 0.15 | 0.12 | 0.06 | 0.03 | 0.03 | <0.03 |
| 3 | 0.04 | 0.11 | 0.16 | 0.10 | 0.07 | 0.04 | 0.03 | <0.03 |
| 4 | 0.03 | 0.12 | 0.13 | 0.11 | 0.06 | 0.05 | 0.04 | <0.03 |
| 5 | 0.04 | 0.13 | 0.15 | 0.13 | 0.06 | 0.04 | 0.03 | <0.03 |
| 6 | 0.03 | 0.15 | 0.14 | 0.12 | 0.08 | 0.03 | 0.03 | <0.03 |
| Арифм. среднее | 0.04 | 0.13 | 0.15 | 0.12 | 0.07 | 0.04 | 0.03 | <0.03 |
| Ош. среднего | 0.00 | 0.01 | 0.01 | 0.00 | 0.00 | 0.00 | 0.00 | 0.00 |
| Станд. откл. | 0.01 | 0.01 | 0.01 | 0.01 | 0.01 | 0.01 | 0.00 | 0.0 |
| Коэфф. вариац. | 22.36% | 10.79% | 9.43% | 8.85% | 12.25% | 19.97% | 12.27% | |
| Медиана | 0.04 | 0.13 | 0.15 | 0.12 | 0.07 | 0.04 | 0.03 | |
| Геом. ср. | 0.04 | 0.13 | 0.15 | 0.12 | 0.07 | 0.04 | 0.03 |
После введения дииндолилметан начинал определяться в системном кровотоке через 15 минут, максимум концентрации наблюдался около 1 часа (0.13-0.17 мкг/мл). Далее концентрация дииндолилметана начинала плавно снижаться, и через 12 часов после введения дииндолилметан определялся в крови в минимальных количествах (менее 0.03 мкг/мл). Разброс индивидуальных значений умеренный: коэффициент вариации CV составил 8-22%.
Результаты измерения концентрации дииндолилметана в плазме крови крыс при внутрижелудочном введении капсулы представлены в таблице 4. Усредненные фармакокинетические кривые отображены на рисунках 3-4.
| Таблица 4 | ||||||||
| Концентрации дииндолилметана в плазме крови экспериментальных животных (мкг/мл) при внутрижелудочном введении капсул дииндолилметана, 0.69 мг/кг | ||||||||
| №№ | Время взятия пробы крови, ч | |||||||
| 0,25 | 0,5 | 1,0 | 2,0 | 4,0 | 6,0 | 8,0 | 12,0 | |
| 1 | 1.25 | 1.40 | 0.07 | 0.87 | 0.31 | 0.24 | 0.15 | 0.08 |
| 2 | 0.90 | 1.72 | 0.14 | 0.90 | 0.53 | 0.38 | 0.22 | 0.17 |
| 3 | 1.39 | 1.71 | 0.16 | 1.07 | 0.26 | 0.18 | 0.12 | 0.13 |
| 4 | 1.42 | 1.64 | 0.20 | 1.00 | 0.52 | 0.21 | 0.18 | 0.09 |
| 5 | 1.23 | 1.51 | 0.14 | 0.76 | 0.53 | 0.36 | 0.25 | 0.12 |
| 6 | 1.55 | 1.40 | 0.23 | 0.99 | 0.47 | 0.25 | 0.15 | 0.09 |
| Арифм. среднее | 1.29 | 1.57 | 0.16 | 0.93 | 0.44 | 0.27 | 0.18 | 0.11 |
| Ош. среднего | 0.09 | 0.06 | 0.02 | 0.05 | 0.05 | 0.03 | 0.02 | 0.01 |
| Станд. откл. | 0.22 | 0.15 | 0.06 | 0.11 | 0.12 | 0.08 | 0.05 | 0.03 |
| Коэфф. вариац. | 17.40% | 9.53% | 35.35% | 11.87% | 27.54% | 30.46% | 27.64% | 28.79% |
| Медиана | 1.32 | 1.59 | 0.15 | 0.95 | 0.50 | 0.25 | 0.17 | 0.11 |
| Геом. ср. | 1.27 | 1.56 | 0.15 | 0.93 | 0.42 | 0.26 | 0.17 | 0.11 |
После введения дииндолилметан начинал определяться в системном кровотоке через 15 минут, максимум концентрации наблюдался около 30 минут (1.4-1.8 мкг/мл), далее концентрация снижалась в 8-9 раз, и через 2 часа после введения наблюдался повторный максимум концентрации (0.8-1.1 мкг/мл). Далее концентрация дииндолилметана начинала плавно снижаться, и через 12 часов после введения дииндолилметан определялся в крови в минимальных количествах (около 0.1 мкг/мл). Разброс индивидуальных значений умеренный: коэффициент вариации CV составил 9-35%.
Расчет фармакокинетических показателей выполнен модельно-независимым (прямым) способом на основе метода интегральных моментов. Рассчитанные значения показателей приведены в таблицах 5-7.
| Таблица 5 | |||||||||
| Показатели фармакокинетики дииндолилметана у крыс при внутрижелудочном введении субстанции дииндолилметана, 200.0 мг/кг | |||||||||
| №№ | Показатель | ||||||||
| Tmax | Cmax | AUC12 | AUC00 | MRT | Cl | Vss | T1/2 | Тэфф | |
| ч | мкг/мл | мкг·ч/мл | мкг·ч/мл | ч | л/кг/ч | л/кг | ч | ч | |
| 1 | 1.00 | 0.17 | 0.72 | 0.75 | 4.47 | 252.97 | 1131.19 | 2.02 | 4.43 |
| 2 | 1.00 | 0.15 | 0.63 | 0.65 | 4.01 | 344.43 | 1381.78 | 2.07 | 4.30 |
| 3 | 1.00 | 0.16 | 0.64 | 0.67 | 4.25 | 260.20 | 1104.92 | 2.22 | 4.18 |
| 4 | 1.00 | 0.13 | 0.72 | 0.75 | 5.18 | 312.26 | 1616.8 | 2.12 | 5.80 |
| 5 | 1.00 | 0.15 | 0.69 | 0.71 | 4.40 | 311.54 | 1371.65 | 1.99 | 4.76 |
| 6 | 1.00 | 0.15 | 0.69 | 0.72 | 4.45 | 276.87 | 1231.92 | 2.22 | 4.82 |
| Арифм. среднее | 1.00 | 0.15 | 0.68 | 0.71 | 4.46 | 293.04 | 1306.40 | 2.11 | 4.71 |
| Ош. среднего | 0.00 | 0.01 | 0.02 | 0.02 | 0.16 | 14.49 | 78.15 | 0.04 | 0.24 |
| Станд. откл. | 0.00 | 0.01 | 0.04 | 0.04 | 0.39 | 35.49 | 191.44 | 0.10 | 0.59 |
| Коэфф. вариац. | 0.00% | 8.76% | 5.76% | 6.25% | 8.78% | 12.11% | 14.65% | 4.78% | 12.46% |
| Медиана | 1.00 | 0.15 | 0.69 | 0.72 | 4.43 | 294.21 | 1301.78 | 2.09 | 4.59 |
| Геом. ср. | 1.00 | 0.15 | 0.68 | 0.71 | 4.45 | 291.27 | 1295.11 | 2.11 | 4.68 |
Полученные оценки позволяют сделать ряд выводов о фармакокинетике субстанции дииндолилметана при внутрижелудочном введении.
Концентрация дииндолилметана начинает определяться в системном кровотоке через 15 минут. Максимум концентрации Cmax достигается через 1 час и составляет порядка 0.15 мкг/мл (0.15±0.01 мкг/мл). Последующее снижение концентрации характеризуется временем половинного убывания Т1/2 порядка 2 часов (2.11±0.04 ч). Общее среднее время присутствия препарата в организме - показатель MRT - составляет порядка 4.5 часов (4.46±0.16 ч). Величина кажущегося стационарного объема распределения - показатель Vss - составляет порядка 1300 л/кг.
Концентрация дииндолилметана начинает определяться в системном кровотоке через 15 минут. Максимум концентрации Cmax достигается через 0.5 ч порядка 1.6 мкг/мл (1.52±0.06 мкг/мл) и 2 часа порядка 1.0 мкг/мл (0.93±0.05 мкг/мл). Последующее снижение концентрации характеризуется временем половинного убывания Т1/2 порядка 4 часов (4.07±0.09 ч). Общее среднее время присутствия препарата в организме - показатель MRT - составляет порядка 6 часов (6.20±0.10 ч). Величина кажущегося стационарного объема распределения - показатель Vss - составляет порядка 112 мл/кг.
Результаты исследования сравнительной фармакокинетики и биодоступности субстанции дииндолилметана при внутрижелудочном введении у крыс показали (табл.7):
| Таблица 7 | ||||
| Показатели относительной биодоступности дииндолилметана у крыс при введении образцов дииндолилметана, по отношению к внутрижелудочному введению субстанции №1 | ||||
| № образца | Субстанция | AUC 00 мкг·ч/мл | Относительная биодоступность (AUC 00n)/AUC1 00 | Изменение относительной биодоступности (AUC 00-AUC1 00)/AUC1 00, % |
| 1 | Дииндолилметан | 0.71 | - | - |
| 2 | Дииндолилметан капсулы | 5.83 | 8.21 | 721.1 |
Субстанция дииндолилметана
Концентрация дииндолилметана начинает определяться в системном кровотоке через 15 минут. Максимум концентрации Cmax достигается через 1 час и составляет порядка 0.15 мкг/мл (0.15±0.01 мкг/мл). Последующее снижение концентрации характеризуется временем половинного убывания Т1/2 порядка 2 часов (2.11±0.04 ч). Общее среднее время присутствия препарата в организме - показатель MRT - составляет порядка 4.5 часов (4.46±0.16 ч). Величина кажущегося стационарного объема распределения - показатель Vss - составляет порядка 1300 л/кг.
Мягкие желатиновые капсулы
Концентрация дииндолилметана начинает определяться в системном кровотоке через 15 минут. Максимум концентрации Cmax достигается через 0.5 ч порядка 1.6 мкг/мл (1.52±0.06 мкг/мл) и 2 часа порядка 1.0 мкг/мл (0.98±0.05 мкг/мл). Последующее снижение концентрации характеризуется временем половинного убывания Т1/2 порядка 4 часов (3.89±0.09 ч). Общее среднее время присутствия препарата в организме - показатель MRT - составляет порядка 6 часов (5.99±0.14 ч). Величина кажущегося стационарного объема распределения - показатель Vss - составляет порядка 108 мл/кг.
Полученные результаты свидетельствуют о минимальной биодоступности при внутрижелудочном введении субстанции дииндолилиметана, что, по-видимому, связано с ее практической нерастворимостью в воде, а также с инактивацией активного соединения химической средой ЖКТ.
Введение активного вещества в мягких желатиновых капсулах в виде раствора в жидких маслах растительного и животного происхождения не только предохраняет его от воздействия кислой желудочной среды, но и обеспечивает практически 100% биодоступность.
Как видно из представленных данных, поставленная задача решена.
Получено лекарственное средство в виде мягких желатиновых капсул, содержащих 3,31-дииндолилметан в виде раствора, позволяющих увеличить биодоступность действующего вещества, и в результате снизить его дозу. Полученное лекарственное средство нетоксично, безопасно при длительном введении, не обладает местно-раздражающим действием, не оказывает токсического воздействия на иммунную и репродуктивную системы.
1. Способ получения желатиновых капсул на основе 3,31-дииндолилметана и эпикатехин-3-галлата, отличающийся тем, что смешивают 3,31-дииндолилметан и эпикатехин-3-галлат с жидким жировым наполнителем, добавляют солюбилизатор, при перемешивании нагревают полученную смесь до 35-45°С до получения раствора, затем охлаждают полученный раствор до 22-25°С и наполняют им желатиновые капсулы при следующем соотношении компонентов, г/капсулу:
| 3,31-дииндолилметан | 0,01-0,1 |
| эпикатехин-3-галлат | 0,02-0,04 |
| жидкий жировой наполнитель | 0,05-0,1 |
| солюбилизатор | 0,4-0,45 |
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве жидкого жирового наполнителя используют растительное масло или рыбий жир.
3. Способ по п.2, отличающийся тем, что из растительных масел используют подсолнечное, кукурузное, оливковое, соевое или касторовое масла.
4. Способ по п.1, отличающийся тем, что в качестве солюбилизатора используют твин-80.
5. Желатиновые капсулы на основе 3,31-дииндолилметана и эпикатехин-3-галлата, содержащие, г/капсула:
| 3,31-дииндолилметан | 0,01-0,1 |
| эпикатехин-3-галлат | 0,02-0,04 |
| жидкий жировой наполнитель | 0,05-0,1 |
| солюбилизатор | 0,4-0,45, |
полученные по способу по любому из пп.1-4.
