Способ выявления гиперкоагуляции и активации внутрисосудистого свертывания у больных острым лимфобластным лейкозом при манифестации заболевания


 


Владельцы патента RU 2497127:

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки "Кировский научно-исследовательский институт гематологии и переливания крови Федерального медико-биологического агентства" (RU)

Настоящее изобретение относится к медицине и описывает способ выявления наличия гиперкоагуляции и активации внутрисосудистого свертывания у больных с впервые выявленным острым лимфобластным лейкозом путем лабораторного исследования антигена фактора Виллебранда, тромбомодулина, D-димеров, где без исследования целого ряда показателей плазменного гемостаза, таких как протромбиновый индекс, концентрация фибриногена и РФМК, время ХIIа-ЗЭЛ, активность антитромбина III, протеина С, плазминогена и ф.VIII, отклонения которых характеризуют состояние гиперкоагуляции, при уровне указанных маркеров нарушения функции эндотелия, превышающих 152% (ФB:Ag) и 3,99 нг/мл (ТМ), и увеличении D-димеров до 2001-2500 нг/мл и более с высокой долей вероятности устанавливают наличие гиперкоагуляции и активации внутрисосудистого свертывания. Способ обеспечивает определение наличия гиперкоагуляции и активации внутрисосудистого свертывания у больных острым лимфобластным лейкозом без инфекционных осложнений при диагностике заболевания. 1 табл., 1 пр.

 

Изобретение относится к медицине и отражает способ прогнозирования наличия гиперкоагуляции и тромбогенности у больных острым лимфобластным лейкозом (ОЛЛ) без инфекционных осложнений в дебюте заболевания. Сущность способа заключается в том, что определяют показатели, характеризующие плазменное звено гемостаза: протромбиновый индекс, время Хагеман-зависимого эуглобулинового лизиса, концентрацию фибриногена, растворимых фибрин-мономерных комплексов, D-димеров, активность ф. VIII, антитромбина III, протеина С и плазминогена. Исследуют также показатели, отражающие нарушение функции эндотелия: антиген фактора Виллебранда (ФВ:Ag) и тромбомодулин (ТМ). По отклонению результатов исследования плазменного гемостаза констатируют наличие гиперкоагуляции и сопоставляют его с изменением маркеров эндотелиальной дисфункции: ФB:Ag и ТМ, а также уровнем D-димеров, являющихся показателем активации внутрисосудистого свертывания. При увеличении уровней ФВ:Ag, ТМ и D-димеров выше нормы и определенных величин наличие состояния гиперкоагуляции и активации внутрисосудистого свертывания с высокой долей вероятности констатируют без определения показателей плазменного гемостаза.

Изобретение относится к медицине и касается выявления методов исследования показателей дисфункции эндотелия и их значений, при которых имеет место гиперкоагуляция и тромбогенность у больных ОЛЛ без инфекции в дебюте заболевания.

В литературе широко дискутируются различные механизмы нарушения свертывания крови у больных острыми лейкозами (ОЛ), в том числе зависящие от самого лейкозного процесса: повышенная активность протеиназ лейкоцитов, активация свертывания и фибринолиза [12]. Освещаются также вопросы нарушения функции эндотелия, повреждение которого вызывает запуск коагуляционного каскада [7]. Следовательно, ОЛ ассоциируются с гиперкоагуляцией и высоким риском тромбогеморрагических осложнений [15, 17]. Эндотелиальные клетки (ЭК) играют ключевую роль в регуляции циркуляции крови и процессов гемостаза. В норме эндотелиальная стенка атромбогенна, однако при повреждении эндотелия развивается его дисфункция, которая приводит к утрате тромборезистентности, продуцированию веществ, стимулирующих адгезию и агрегацию тромбоцитов, выработку тканевого фактора (ТФ). Все это приводит к запуску свертывания крови. Важным фактором регуляции гемостаза является высвобождение в местах повреждения сосудистого эндотелия фактора Виллебранда (ФВ) [16]. Последний принадлежит к адгезивным белкам и представляет собой гетерогенную популяцию гликопротеиновых мультимеров. Повышенный уровень его антигена (ФB:Ag) в крови является общепризнанным маркером повреждения ЭК.

Ключевым звеном комплекса реакций, регулирующих скорость и направление процессов гемостаза, является гликопротеид эндотелиальной мембраны - тромбомодулин (ТМ) [1]. Экспрессию ТМ на эндотелии снижают цитокины, увеличивая его содержание в крови [5]. Поскольку часть ТМ находится в растворимой форме, концентрация которой повышается при повреждении ЭК, его также относят к маркерам повреждения эндотелия [1, 6]; помимо того, он является предиктором органной дисфункции и неблагоприятного прогноза ДВС. Повышенное содержание ТМ отражает активацию эндотелия и может прогнозировать риск развития тромботических осложнений [13].

Понятие «гиперкоагуляция» было впервые введено А.И.Воробьевым (2002). Иначе это состояние называют гиперкоагуляционным синдромом [3, 8]; это повышенная готовность к свертыванию при отсутствии образования тромбов. Длительность его зависит от компенсаторных возможностей организма. Гиперкоагуляция характерна для целого ряда патологических состояний. При ОЛ она может привести как к клинически выраженному ДВС-синдрому с тяжелыми геморрагиями, так и возникновению тромбозов [11]. ДВС-синдром может развиваться как длительно, так и молниеносно. Учитывая это, очень важно определять четкие ранние диагностические критерии предшествующей ему гиперкоагуляции. Несмотря на значительные успехи в изучении нарушений плазменного звена гемостаза, несовершенство ряда существующих методов особенно сильно проявляется при диагностике гиперкоагуляции [8]. Лабораторными критериями ее считают: увеличение времени лизиса сгустков эуглобулинов [8, 11], повышенную активность ф. VIII, характерную для злокачественных заболеваний [9, 18], увеличенное содержание маркеров тромбинемии (РФМК и ПДФ), нормальную или сниженную активность антитромбина III (AT III), возможный низкий уровень протеина С (ПрС) [14] и повышенное содержание фибриногена [11].

Запуск коагуляции осуществляется посредством ТФ, который экспрессируется на многих типах клеток организма [5]. Прокоагулянтная активность лейкозных клеток также реализуется посредством ТФ, образующего комплекс с ф. VII, активирующим ф. Х и XI [2]. Властные клетки способны активировать эндотелий посредством секреции провоспалительных цитокинов [10]. Вне зависимости от факторов, вызвавших появление цитокинов, будь то экспрессия бластными клетками или воспаление, они могут привести к дисфункции эндотелия и активировать свертывающую систему крови.

Учитывая изложенное, следует обратить внимание на поиск ранних маркеров, которые отражают возможность возникновения гиперкоагуляции или пре-ДВС. Это позволит своевременно предотвратить развитие ДВС-синдрома и обеспечить профилактику тромбозов или геморрагии.

В качестве прототипа использовали публикацию М.А.Пантелеева и соавт. (2011, с.62-65) [8]. Метод исследования нарушений свертывания, по мнению авторов, наиболее близок к условиям in vivo. Он выполняется с помощью прибора, который фиксирует скорость роста сгустка фибрина. Принцип метода состоит в том, что используя этот прибор, исследование проводят без перемешивания в тонком слое плазмы; свертывание активируется по внешнему пути на пластинке, воспроизводящей участок поврежденного эндотелия, вокруг которого формируется сгусток. Производится видеосъемка растущего сгустка; анализ последней дает информацию о динамике свертывания во времени и пространстве. Авторы считают, что прибор позволяет проводить раннюю диагностику состояния гиперкоагуляции у пациентов с различной патологией.

Недостатком прототипа является то, что покрытая тканевым фактором (тромбопластином) пластинка не является полным воспроизведением процессов in vivo, так как в качестве исследуемого образца берется плазма, отделенная от форменных элементов крови, в том числе тромбоцитов. In vivo в месте повреждения сосуда кровь контактирует не только с тканевым фактором, но и с коллагеном. Таким образом, активация свертывания происходит не только по внешнему, но и внутреннему пути.

Источник получения тканевого фактора четко не указан. Являясь реагентом биологического происхождения (из тканей млекопитающих или рекомбинантным - из культуры клеток), он мало стабилен, кроме того, имеет разную активность, поэтому должен быть стандартизован. Все это также требует затрат и усилий. В заключение следует особо отметить, как широко может внедриться метод выявления гиперкоагуляции в практику научных и клинико-диагностических лабораторий с помощью этого прибора и какова будет стоимость исследований.

Принцип работы прибора не дает конкретных указаний на объективность выявления гиперкоагуляции при сниженном числе тромбоцитов, характерном для больных ОЛЛ.

Целью настоящего изобретения явилось достоверное определение факторов прогноза развития состояния гиперкоагуляции у больных ОЛЛ при манифестации заболевания.

Поставленная цель достигается тем, что при исследовании показателей дисфункции эндотелия и постановки тестов, отражающих нарушения в плазменном звене гемостаза и подтверждающих гиперкоагуляцию у больных, и сопоставлении их с результатами здоровых лиц использовали ряд методов.

Применяли следующие методы:

- время Хагеман-зависимого эуглобулинового лизиса (ХIIа-ЗЭЛ), метод Г.Ф.Еремина, А.П.Архипова (норма 7,0-12,0 мин)

- активность фактора VIII (ф. VIII:К) по унифицированному одностадийному методу Л.П.Папаян и П.В.Хроловой (норма 70-150%);

- растворимые фибрин-мономерные комплексы (РФМК) исследовали количественным методом с помощью ортофенантролинового теста по В.А.Елыкомову и А.П.Момоту (норма 30-40 мкг/мл);

- продукты деградации фибрина - D-димеры, определяемые полуколичественно методом латексной агглютинации. Результаты теста получали в следующих интервалах:<500, 500, 501-1000, 1001-1500, 1501-2000, 2001-2500, 2501-3000,>3000 нг/мл (норма<500 нг/мл); им присвоены соответственные баллы от 1 до 8. Использовали набор реагентов "D-dimer Test" Diagnostica Stago, Roche, Франция;

- активность антитромбина III (AT III) в % методом Ю.Л.Кацадзе и М.А.Котовщиковой (норма 75-125%);

- активность протеина С (ПрС) методом хромогенных субстратов (норма 70-140%). Использовали наборы "Реахром-Протеин С" (НПО РЕПАМ, г.Москва). Результаты оценивали на фотоэлектрическом фотометре КФК-3;

- активность плазминогена с применением хромогенного субстрата по методу А.П.Момота и соавт. (норма 75-140%). Использовали набор реагентов "ХромоТех-Плазминоген" ("Технология - Стандарт", г.Барнаул). Результаты оценивали на фотоэлектрическом фотометре КФК-3;

- протромбиновое время (ПВ) в секундах по Квику выражали как протромбиновый индекс (ПТИ) по общепринятой формуле: ПТИ=(ПВ контрольной стандартной плазмы/ПВ больного)×100% (норма 85-115%);

- концентрацию фибриногена определяли хронометрическим методом по Клауссу (норма 2,00-4,00 г/л). При исследовании дисфункции эндотелия применяли следующие тесты:

- антиген фактора Виллебранда (ФB:Ag) плазмы - твердофазным иммуноферментным анализом (ИФА) «сендвич-Elisa» методом. Использовали тест-системы фирмы «Technoclone», Австрия (норма 60-110%);

- концентрацию тромбомодулина (ТМ) сыворотки крови - методом ИФА. Использовали тест-системы фирмы «Diaclone» (Diaclone CD141 Thrombomodulin), Франция (норма 0,15-1,60 нг/мл).

Для оценки полученных результатов применяли программу «BIOSTAT 4.03». Поскольку полученные выборки не подчинялись закону нормального распределения, данные представляли с помощью медианы, минимального и максимального значений [4]. Для сравнения выборки с нормой использовали непараметрический критерий Данна. Критический уровень достоверности нулевой статистической гипотезы (р) принимали равным 0,05.

ПРИМЕР ОПИСАНИЯ СПОСОБА

Больной З., 40 лет, поступил в гематологическую клинику ФГБУН «Кировский НИИ гематологии и переливания крови ФМБА России» 20.10.2008 г. Диагноз: острый лимфобластный лейкоз, впервые выявленный, острый период, пре-В вариант, высокий риск; был подтвержден морфологическими, цитохимическими, генетическими методами исследования и иммунофенотипированием. При поступлении гемоглобин 89 г/л, количество тромбоцитов 30·109/л, лейкоцитов 25,7·109/л, бластов 79%, гранулоцитов 0,514·109/л. Состояние плазменного гемостаза на 21.10.2008 г: индекс АПТВ снижен (0,71), ПТИ и концентрация фибриногена в пределах нормальных значений (98% и 3,69 г/л соответственно), время ХIIа-ЗЭЛ удлинено (48, 17 мин) при нормальной активности плазминогена (101%), содержание маркеров тромбинемии и активации внутрисосудистого свертывания и фибринолиза повышено (РФМК в ортофенантролиновом тесте 270 мкг/мл, D-димеры - 2001-2500 нг/мл); содержание ф. VII, ФВ:Ag и ТМ высокое (197%, 298% и 3,72 нг/мл соответственно); активность AT III компенсаторно повышена (134%), а ПрС - в пределах нормальных величин (95%). Таким образом, у пациента при поступлении выявлена гиперкоагуляция и активация внутрисосудистого свертывания. Она установлена на основании показателей, отражающих плазменный гемостаз, и подтверждена результатами исследования дисфункции эндотелия и высоким уровнем D-димеров.

КЛИНИКО-ЛАБОРАТОРНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Был проведен анализ результатов 25 больных с впервые выявленным ОЛЛ в возрасте 16-70 лет (медиана - 42; м/ж - 16/9). При поступлении им выполняли общепринятые в гематологии клинические и лабораторные методы обследования. Показатели коагулограммы при диагностике заболевания оценили у 19 больных. При диагностике заболевания установлено повышенное по сравнению с нормой содержание ФВ:Ag и ТМ, которые являются маркерами дисфункции эндотелия (табл.1; р<0,05). Так как дисфункция эндотелия приводит к запуску свертывания крови, мы исследовали основные показатели плазменного гемостаза, изменение которых характеризует состояние гиперкоагуляции, являющейся стадией пре-ДВС. Полученные результаты приведены в таблице 1.

Таблица 1
Лабораторные показатели больных с впервые выявленным ОЛЛ (медиана, размах)
Показатели ОЛЛ Здоровые лица
ТМ, нг/мл 3,99*
(0,9-13,5)
0,55
(0,12-1,98)
ФB:Ag, % 152*
(69-298)
82
(46-146)
Ф.VIII, % 178*
(98-241)
86
(41-166)
ПТИ, % 90*
(74-98)
100
(85-114)
Фибриноген, г/л 3,69
(2,00-7,18)
2,83
(1,94-3,59)
Время ХIIа-ЗЭЛ, мин 14,00*
(5,00->60,00)
7,0
(5,0-12,5)
AT-III, % 114
(69-178)
105
(84-162)
ПрС, % 90
(41-154)
87
(58-146)
Плазминоген, % 88
(66-124)
96
(72-139)
РФМК в ортофенантролиновом тесте, мкг/мл 90*
(30-280)
35
(30-55)
D-димеры, нг/мл 2001-2500*
(501->3000)
≤500
Примечание: * - отличие от нормы; р<0,05

В целом по группе больных ОЛЛ до лечения выявлено состояние гиперкоагуляции: достоверное (р<0,05) по отношению к норме увеличение ф. VIII, угнетение фибринолитической активности (ХIIа-ЗЭЛ), повышение РФМК и D-димеров. Последние являются продуктами деградации фибрина, следовательно, маркерами активации внутрисосудистого свертывания. Следует также отметить снижение прокоагулянтов, протромбинового комплекса (ПТИ), вероятнее всего, вследствие их усиленного потребления. Физиологические антикоагулянты AT III и ПрС в среднем от нормы не отклонялись, как и активность плазминогена, и концентрация фибриногена. Следует отметить, что гипофибриногенемия не была выявлена ни у одного пациента, в то время как гиперфибриногенемия установлена у 31,6% больных. D-димеры были повышены у всех больных. Выявлена положительная корреляция между содержанием РФМК и временем ХIIа-ЗЭЛ (rs=0,496; p<0,05). Это дополнительно подтверждает, что у больных ОЛЛ в дебюте заболевания существует риск микротромбирования, который может при последующей терапии привести к тромбоэмболиям. Таким образом, статистически доказано, что показатели плазменного звена гемостаза подтверждали наличие гиперкоагуляции у больных ОЛЛ при диагностике заболевания. Чтобы это устанавливать с высокой долей вероятности, необходимо выполнить многочисленные исследования. Учитывая это, мы рекомендуем такое состояние определять по повышению показателей, являющихся маркерами дисфункции эндотелия, а также D-димеров; они были повышены статистически значимо в целом по группе больных одновременно с показателями плазменного гемостаза, характеризующими гиперкоагуляцию и активацию внутрисосудистого свертывания.

ЛИТЕРАТУРА

1. Баринов, В.Г. Эндотелиальная регуляция гемостаза: система тромбомодулина [Текст]/ В.Г.Баринов, О.Ю.Кудряшова, Т.Е.Цимбалова, Д.А.Затейщиков// Лабораторная медицина - 2001. - №4. - С.27-30.

2. Баркаган, З.С. ДВС-синдром и тромботическая тромбоцитопеническая пурпура при онкогематологических заболеваниях [Текст]/ З.С.Баркаган, А.П.Момот// Проблемы клинической медицины. - 2005. - №1. - С.22-24.

3. Воробьев, А.И. Гиперкоагуляционный синдром: патогенез, диагностика, лечение [Текст]/ А.И.Воробьев, С.А.Васильев, В.М.Городецкий// Терапевтический архив. - 2002. - №7. - С.73-76.

4. Гланц, С. Медико-биологическая статистика [Текст]/ С.Гланц. - пер. с англ. - М.: Практика, 1999. - 459 с.

5. Зубаиров, Д.М. Молекулярные основы свертывания крови и тромбообразования [Текст]/ Д.М.Зубаиров. - Казань: «Фэн», 2000. -364 с.

6. Клиническая биохимия/ под ред. В.А.Ткачука. - М.: «ГЭОТАР-МЕД», 2002. - 360 с.

7. Момот, А.П. Роль гемостатических и воспалительных реакций в формировании очагов гнойной деструкции органов и тканей [Текст]/ А.П.Момот, Я.Н.Шойхет// Тромбоз, гемостаз и реология. - 2009. - №1. - С.23-39.

8. Практическая коагулология/ М.А.Пантелеев, С.А.Васильев, Е.И.Cинауридзе и др; под ред. А.И.Воробьева// М.: «Практическая медицина». - 2011. - 192 с.

9. Претромботическое состояние: Тромбоз и его профилактика [Текст]/ В.П.Балуда, М.В.Балуда, А.П.Гольдберг [и др.]// М.: Зеркало - М. - 1999. - 297 с.

10. Червонцева, A.M. Влияние цитарабина на экспрессию молекул клеточной адгезии и взаимодействие эндотелий-лейкоцит in vitro [Текст]/ A.M.Червонцева, Ю.А.Романо, В.Г.Савченко// Терапевтический архив. - 2006. - №7. - С.67-72.

11. Черепанова, В.В. Нарушения свертывающей системы крови при острых лейкозах взрослых [Текст]/ В.В.Черепанова, Л.Н.Тарасова, В.И.Андрюхин. - Киров, 2011. - 110 с.

12. Hemostatic balance on the surface of leukemic cells: the role of tissue factor and urokinase plasminogen activator recetor [Text]/ Y.Nadir, T.Katz, G.Sarig [et al.]// Haematologica. - 2005. - Vol.90. - P.1549-1556.

13. Increased levels of the soluble adhesion molecule E-selectin in patients woth chronic myeloproliferative disorders and thromboembolic complications [Text]/ C.Musolino, A.Alonci, A.Allegra [et al.]// Am. J.Hematol. - 1998. -Vol.57, №2.-P. 109-112.

14. Knoebl, P.N. Human protein С concentrates for replacement therapy in congenital and acquired protein С deficiency [Text]/ P.N.Knoebl// Drugs Today (Bare). - 2008. - Vol.44, №6. - P.429-441. 15. Kwaan, H.C. Double Hazard of Thrombophilia and Bleeding in Leukemia [Text]/ H.C.Kwaan// Hematology. - 2007. - №1. - P.151-158.

16.Platelet-VWF complexes are preferred substrates of ADAMTS13 under fluid shear stress [Text]/ K.Shim, P.J.Anderson, E.A.Tuley [et al.]// Blood. - 2008. - Vol.111, №2. - P.651-657.

17. Venous thromboembolism in patients with acute leukemia: incidence, risk factors, and effect on survival [Text]/ G.H.Ku, R.H.White, H.K.Chew [et al.]// Blood. - 2009. - Vol.113, №17. - P.3911-3917.

18. Von Willebrand factor and its propeptide: the influence of secretion and clearance on protein levels and the risk of venous thrombosis [Text]/ A.Y.Nossent, V. van Marion, N.H. van Tilburg [et al.]// J.Thromb. Haemost. - 2006. - Vol.12, №4. - P.2556-2562.

Способ выявления наличия гиперкоагуляции и активации внутрисосудистого свертывания у больных с впервые выявленным острым лимфобластным лейкозом путем лабораторного исследования антигена фактора Виллебранда, тромбомодулина, D-димеров, отличающийся тем, что без исследования целого ряда показателей плазменного гемостаза, таких как протромбиновый индекс, концентрация фибриногена и РФМК, время ХIIа-ЗЭЛ, активность антитромбина III, протеина С, плазминогена и ф. VIII, отклонения которых характеризуют состояние гиперкоагуляции, при уровне указанных маркеров нарушения функции эндотелия, превышающих 152% (ФB:Ag) и 3,99 нг/мл (ТМ), и увеличении D-димеров до 2001-2500 нг/мл и более с высокой долей вероятности устанавливают наличие гиперкоагуляции и активации внутрисосудистого свертывания.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способу снижения предела обнаружения иммунохроматографических методов контроля содержания низкомолекулярных соединений.
Изобретение относится к медицине, а именно к психиатрии, и может быть использовано для прогнозирования эффективности лечения непсихотических вариантов психоорганического синдрома.

Настоящее изобретение относится к медицине, а именно к клинической иммунологии, и может быть использовано для подбора иммунотропных препаратов у пациентов с ургентной хирургической патологией органов брюшной полости.
Настоящее изобретение относится к области аналитической химии и описывает способ высокочувствительного определения хлорамфеникола с помощью пьезокварцевого иммуносенсора, основанный на регистрации изменения частоты колебания сенсора в связи с изменением массы покрытия, включающий регенерацию рецепторного покрытия для проведения последующих определений, обеспечивая многократное использование сенсора, где на поверхность пьезокварцевого иммуносенсора наносят рецепторное покрытие на основе хлорамфеникол-белкового конъюгата (соевый трипсиновый ингибитор), к пробе добавляют фиксированное количество антител к хлорамфениколу и выдерживают в течение 5-10 мин при 20°С до образования иммунокомплекса, вводят в проточно-инжекторную ячейку и регистрируют изменение частоты колебания сенсора при взаимодействии хлорамфеникол-белкового конъюгата с несвязавшимися антителами к хлорамфениколу, аналитический отклик сенсора обратно пропорционален концентрации хлорамфеникола в анализируемом растворе, концентрацию определяют по градуировочному графику, регенерацию рецепторного покрытия осуществляют пропусканием 0,04 mM раствора тиоционата калия над поверхностью электрода сенсора.
Изобретение относится к области медицины, в частности гастроэнтерологии, а именно к способу прогнозирования развития избыточного бактериального роста в кишечнике у пациентов, перенесших холецистэктомию.
Настоящее изобретение относится к клинической биохимии и описывает способ определения модифицированных липопротеинов низкой плотности (мЛПНП) в сыворотке (плазме) крови человека путем обработки буфером, содержащим поливинилпирролидон (ПВП) с последующей турбидиметрической регистрацией смеси, где обработку сыворотки или плазмы крови человека ведут 10% раствором ПВП-35000±5000 в 0,01 М Трис-HCl-буфере, рН 7,4, содержащем 0,15 М NaCl, при объемном соотношении сыворотка(плазма) : ПВП от (1:2) до (1:10), инкубируют 10 мин при комнатной температуре, измеряют светопоглощение в опытной и контрольной пробах, вычисляют разность между ними и при величине разности более 15 Е констатируют повышенный уровень атерогенных мЛПНП в крови и наличие атеросклеротического процесса у обследуемого человека.

Изобретение относится к области медицины. Предложен набор для многопрофильного иммунологического анализа антител в препаратах крови.

Изобретение относится к области медицины. Предложен набор реагентов для иммуноферментного определения антител к эндогенным биорегуляторам в сыворотке крови для выявления заболеваний зависимости методом двухстадийного иммуноферментного анализа в сыворотке крови человека in vitro.

Группа изобретений относится к медицинской иммунологии, а именно к способу определения функциональной активности компонентов комплемента в сыворотке крови человека при диагностике ряда заболеваний и в биологических препаратах и набору для ее определения.

Изобретение относится к медицине, в частности к способу прогнозирования развития репродуктивных нарушений. Сущность способа состоит в том, что у мужчин исследуют эякулят, а у женщин - цервикальное отделяемое на десятый день менструального цикла, в качестве параметров определяют уровни интерлейкина 1 бета и интерферона гамма одновременно.

Способ одновременного определения двух аналитов биолюминесцентным молекулярным микроанализом относится к биохимии, а именно к способам проведения иммуноферментного и ДНК гибридизационного анализа. Способ одновременного определения двух аналитов биолюминесцентным молекулярным микроанализом включает обработку твердой фазы биоспецифическим реагентом, отделение непрореагировавшей жидкой фазы, обработку твердой фазы ферментосодержащим конъюгатом, разделение жидкой и твердой фаз и анализ твердой фазы, в котором в качестве биоспецифического реагента для первой обработки твердой фазы используют два иммуноглобулина или один иммуноглобулин с двойной специфичностью или два олигонуклеотида, а конечную обработку твердой фазы проводят одновременно двумя ферментсодержащими конъюгатами, состоящими, соответственно, из рекомбинантных Cа2+ зависимых фотопротеинов обелинов с разными характеристиками биолюминесценции и молекул разной биоспецифичностью, где в качестве рекомбинантных обелинов используют обелин W92F; H22E и обелин Y138F, с последующим анализом на планшетном биолюминометре с быстро перемещающимися широкополостными светофильтрами с разделением сигналов и по спектру и по времени. 4 ил., 3 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к дерматологии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики синдрома Сезари от эритродермий. Для этого проводят гистологическое исследование биоптатов пораженной кожи путем световой микроскопии, иммунофенотипирование клеток инфильтрата. При схожей гистологической картине, описываемой как отслойка рогового слоя, неравномерный акантоз, выраженный гиперкератоз, резкое расширение сосудов, отек дермы, диффузные инфильтраты с проникновением лимфоцитов в эпидермис, одинаковом иммунофенотипе клеток инфильтрата, представленном CD3+, CD4+, CD43+, CD45RO+, CD2- CD5- лимфоцитами, дополнительно проводят морфометрические исследования антигенпредставляющих клеток в гистологических препаратах биоптатов пораженной кожи, считают их количество на 1 мм длины эпидермиса, измеряют их площадь и ядерно-цитоплазматическое соотношение. При увеличении количества антигенпредставляющих клеток на 1 мм длины эпидермиса в 2,8 и более раза, чем в норме, увеличении площади антигенпредставляющих клеток в 1,36 и более раза, чем в норме, и увеличении ядерно-цитоплазматического соотношения антигенпредставляющих клеток в 1,65 и более раза, чем в норме, диагностируют эритродермии. При уменьшении количества антигенпредставляющих клеток в 1,3 и более раза чем в норме, уменьшении площади антигенпредставляющих клеток в 1,9 и более раза, чем в норме и уменьшении ядерно-цитоплазматического соотношения антигенпредставляющих клеток в 2 и более раза, чем в норме, диагностируют синдром Сезари. Использование изобретения обеспечивает повышение точности диагностики начальных клинических проявлений синдрома Сезари, возникающих при доброкачественных воспалительных дерматозах. 2 табл., 3 пр.
Изобретение относится к области медицины, в частности к кардиологии, иммунологии, и может быть применено для определения степени риска формирования клинических осложнений атеросклероза. Сущность изобретения заключается в том, что методом иммуноферментного анализа в сыворотке крови людей определяют содержание окисленных липопротеидов низкой плотности (оЛПНП). При концентрации оЛПНП более 400 нг/мл устанавливают повышенную степень риска формирования клинических осложнений атеросклероза. Преимуществом способа является доступность, дешевизна и простота в постановке исследования с применением широко используемого в лабораторной диагностике иммуноферментного метода исследования. 5 пр.

Настоящее изобретение относится к медицине и описывает способ ранней диагностики развивающегося пролапса тазовых органов у женщин репродуктивного возраста при отсутствии клинических признаков, заключающийся в отборе материала ткани стенки влагалища, проведении гистохимического анализа, определении количества и состояния эластиновых фибрилл, содержания матриксных белков LOXL1 и FBLN5, в котором развивающийся пролапс тазовых органов диагностируют при снижении количества эластиновых фибрилл и их фрагментации и при одновременном уменьшении содержания матриксных белков LOXL1 и в эпителии, эндотелии сосудов, фибробластах, экстрацеллюлярном матриксе по отношению к одноименным показателям у здоровых женщин. Способ позволяет оценить патофизиологические процессы при начальных доклинических признаках развития пролапса тазовых органов, что позволит наиболее точно интерпретировать причины развития дисфункции тазового дна и разработать основные принципы профилактики развития данной патологии у женщин репродуктивного возраста. 1 ил., 1 табл.

Заявленная группа изобретений относится к области медицины и предназначена для выявления пациентов с повреждением сердца и оценки эффективности проводимой терапии. У пациентов определяют внутриклеточные уровни кардиального белка тропонина Т (cTnT) или кардиального белка тропонина I (cTnl) в сердечной ткани. Уменьшение этих показателей по меньшей мере на 50% относительно контрольных или нормальных является показателем повреждения сердца у пациента. Способ лечения включает выявление пациентов с повреждением сердца заявленным способом и введение терапевтически эффективного количества GGF2 и ингибитора протеасом. Увеличение внутриклеточных уровней белка cTnT или cTnl в сердечной ткани пациента после введения GGF2 является позитивным индикатором эффективности введения GGF2 для лечения пациента с повреждением сердца. Использование заявленной группы изобретений позволяет быстро и точно диагностировать повреждения сердца у пациента, а также быстро и точно оценить эффективность проводимого лечения. 4 н. и 15 з.п. ф-лы, 26 ил., 1 пр., 1 табл.

Группа изобретений относится к лабораторной диагностике и может быть использована для проведения анализов, основанных на реакции агглютинации частиц. Аналитический наконечник (100), предназначенный для выполнения визуально детектируемой реакции агглютинации после всасывания в него реактивов и образца, включает: первое отверстие (110) для приложения отрицательного или положительного давления к внутреннему объему аналитического наконечника; камеру для образца (120); по меньшей мере, одну боковую камеру (130), которая расположена по периметру камеры для образца; камеру детектирования (150), находящуюся в жидкостной связи с камерой для образца; переходную зону (140) между камерой детектирования и камерой для образца для вращательного перемешивания образца; второе отверстие (160) для всасывания реактивов и образца во внутренний объем аналитического наконечника или для удаления их оттуда. Группа изобретений относится также к способу выполнения реакции агглютинации в указанном аналитическом наконечнике и к набору для выполнения визуально детектируемых реакций агглютинации, включающему указанный аналитический наконечник и реактивы для агглютинации. Группа изобретений обеспечивает возможность автоматизации анализов по типу реакции агглютинации, позволяя тем самым повысить безопасность и надежность их проведения. 3 н. и 15 з.п. ф-лы, 10 ил., 1 табл., 1 пр.

Изобретение относится к медицине, а именно к фтизиатрии, может быть использовано для диагностики скрытой активности туберкулеза у детей и подростков. Для этого проводят оценку состояния специфического клеточного иммунитета с помощью модифицированной реакции бластной трансформации лимфоцитов (мРБТЛ) с туберкулином (ППД-Л) и определение уровня интерферона-гамма (ИФН-γ) с ППД-Л с использованием малого объема (200 мкл) цельной крови и 4-х разведении антигена ППД-Л. При показателях индекса стимуляции клеточного ответа более 3,2 и ИФН-γ с ППД-Л более 7,0 диагностируют активный туберкулезный процесс, а при показателе мРБТЛ с ППД-Л более 3,2 и ИФН-γ с ППД-Л менее 7,0 - не активную туберкулезную инфекцию. Использование данного способа позволяет повысить специфичность диагностики туберкулезной инфекции, а также оценить эффективность проводимого лечения. 2 табл., 2 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к онкогематологии, и может быть использовано у больных гемобластозами для прогноза развития рецидива заболевания после проведения аутологичной трансплантации стволовых кроветворных клеток (АТСКК). Для этого определяют относительное содержание CD4+FOXP3+Т-клеток в периферической крови больных гемобластозами после проведения АТСКК в период восстановления лимфоцитов до уровня >500 клеток/мкл. При увеличении количества CD4+FOXP3+T-клеток более 9,1% прогнозируют развитие раннего рецидива в посттрансплантационном периоде. Использование данного способа позволяет выделить больных гемобластозами в группу высокого риска развития раннего рецидива основного заболевания после АТСКК и при необходимости проводить дополнительные курсы лучевой и/или химиотерапии с целью повышения эффективности АТСКК. 4 пр.

Настоящее изобретение относится к иммунологии и биотехнологии. Предложены варианты антитела или его фрагмента, специфичных в отношении β-амилоидного белка. Каждый из вариантов характеризуется тем, что включает Н и L-цепи, или области VH и VL, каждая из которых содержит по три соответствующих CDR. Описаны: полипептид VL, полипептид VH, a также кодирующая нуклеиновая кислота, экспрессионный вектор, ее содержащий, и клетка, несущая вектор, используемые для получения антитела или его функционального фрагмента. Предложены: тест-набор, варианты фармацевтической композиции, смесь для применения в качестве лекарственного средства на основе антитела или его функционального фрагмента. Раскрыты варианты способа получения антитела: с использованием клетки, НК или вектора. Описан способ приготовления композиции, а также способ диагностирования амилоидоза in vitro, способ определения степени загрузки амилоидогенными бляшками in vitro, способ лечения или облегчения воздействий амилоидоза, использующие антитело или его функциональный фрагмент. Предложенное изобретение обеспечивает новые антитела, которые связывают эпитоп, находящийся в области 12-23 белка Aβ1-42, причем остатки 15-20 имеют решающее значение. Изобретение может найти применение в терапии и диагностике болезни Альцгеймера и других перечисленных амилоидозах. 19 н. и 25 з.п. ф-лы, 18 ил., 9 табл., 16 пр.
Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способу определения антител к Mycobacterium leprae. Способ включает выявление в сыворотках крови антител к Mycobacterium leprae с помощью иммуноферментного метода. В качестве тест-антигена в иммуноферментном анализе используют водную суспензию из культивируемых в условиях термостата на среде Левенштейна-Йенсена в течение 7 суток при температуре 37°C Mycobacterium lufu, прогретую при 100°C в течение 1,5 часов на водяной бане. Предложенное изобретение позволяет упростить способ определения антител к Mycobacterium leprae. 1 табл.
Наверх