Способ количественного определения суммы антраценпроизводных веществ в корнях щавеля конского
Владельцы патента RU 2522974:
государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Самарский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (ГБОУ ВПО СамГМУ Минздрава России) (RU)
Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности, в частности к способу количественного определения антраценпроизводных веществ в корнях щавеля конского. Экстракцию сырья осуществляют 70% этиловым спиртом, аликвоту полученного извлечения разбавляют щелочно-аммиачным раствором, оптическую плотность раствора измеряют при длине волны 520 нм и пересчет содержания суммы антраценпроизводных веществ ведется на 8-O-β-D-глюкозид эмодина, который используется в качестве стандартного вещества. Предложенный способ позволяет уменьшить трудоемкость, сократить время и стадии процесса и уменьшить потерю анализируемых веществ. 1 ил., 1 пр.
Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности, в частности к способу анализа антраценпроизводных веществ в корнях щавеля конского.
Корни щавеля конского (Rumex confertus Willd.) применяются в медицине как кровоостанавливающее, бактерицидное, противовоспалительное, гипотензивное и успокаивающее средство (отвар, порошок, сбор слабительный) [1, 2].
Известна методика количественного определения суммы антраценпроизводных веществ в корнях щавеля конского, выбранная в качестве прототипа [3]. Она включает такие стадии, как кислотный гидролиз, многократную экстракцию сырья, перевод целевых веществ в виде агликонов в диэтиловый эфир, последующую обработку эфирного извлечения щелочно-аммиачным раствором, измерение оптической плотности электронного спектра испытуемого раствора при аналитической длине волны 510 нм и расчет содержания антраценпроизводных путем использования построения калибровочного графика на основе значений оптической плотности растворов кобальта хлорида, расчет суммы содержания антраценпроизводных веществ осуществляется на отсутствующий в сырье франгулин.
Недостатками данной методики является многостадийность, трудоемкость, что приводит к потере анализируемых веществ, к невозможности расчета содержания антраценпроизводных веществ на 8-O-β-D-глюкозид эмодина и расчет суммы содержания антраценпроизводных веществ на отсутствующий франгулин, и, соответственно, на присутствующий в сырье 8-O-β-D-глюкозид эмодина.
Данная методика взята нами за прототип.
Целью изобретения является разработка методики количественного определения суммы антраценпроизводных веществ в корнях щавеля конского.
Поставленная цель достигается тем, что экстракцию сырья осуществляют 70% этиловым спиртом, аликвоту полученного извлечения разбавляют до определенно объема щелочно-аммиачным раствором, оптическую плотность раствора измеряют при аналитической длине волны 520 нм и пересчет содержания суммы антраценпроизводных веществ ведется на 8-O-β-D-глюкозид эмодина, который используется в качестве стандартного вещества.
Предложенный способ позволяет достичь следующих технических результатов: уменьшить трудоемкость, сократить время и стадии процесса и уменьшить потерю анализируемых веществ.
Способ реализуется следующим образом.
Аналитическую пробу корней щавеля конского измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм. Около 1 г измельченного сырья (точная навеска) помещают в колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляют 50 мл 70% этилового спирта. Колбу закрывают пробкой и взвешивают на тарированных весах с точностью до ±0,01 г. Колбу присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане (умеренное кипение) в течение 90 мин. Затем охлаждают в течение 30 мин, закрывают той же пробкой, снова взвешивают и восполняют недостающий экстрагент до первоначальной массы. Извлечение фильтруют через бумажный фильтр («красная полоса»). Испытуемый раствор А для определения оптической плотности раствора готовят следующим образом: 1 мл полученного извлечения (аликвоту) помещают в колбу вместимостью 50 мл и доводят объем раствора до метки щелочно-аммиачным раствором, приготовленным по фармакопейной методике (раствор Б) [4]. Испытуемый раствор Б помещают в колбу емкостью 50 мл и нагревают в течение 15 мин на кипящей водяной бане с обратным холодильником. После охлаждения измеряют оптическую плотность испытуемого раствора на спектрофотометре при длине волны 520 нм. В качестве раствора сравнения используют воду очищенную.
Для расчета содержания суммы антраценпроизводных веществ готовят раствор 8-O-β-D-глюкозид эмодина-стандартного образца, разбавляют его щелочно-аммиачным раствором, измеряют оптическую плотность окрашенного комплекса и определенное значение оптической плотности используют в формуле расчета.
Приготовление раствора 8-O-β-D-глюкозид эмодина-стандартного образца. Около 0,02 г (точная навеска) 8-O-β-D-глюкозида эмодина помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в 30 мл 96% этилового спирта при нагревании в течение 15 мин на кипящей водяной бане с обратным холодильником. Затем содержимое колбы охлаждают до комнатной температуры и доводят объем раствора 96% этиловым спиртом до метки (раствор А 8-O-β-D-глюкозида эмодина). 1 мл раствора А 8-O-β-D-глюкозида эмодина (аликвоту) помещают в мерную колбу на 25 мл и доводят объем раствора до метки щелочно-аммиачным раствором (испытуемый раствор Б). Раствор Б помещают в колбу емкостью 50 мл и нагревают в течение 15 мин на кипящей водяной бане с обратным холодильником. После охлаждения измеряют оптическую плотность раствора Б на спектрофотометре при длине волны 520 нм. В качестве раствора сравнения используют воду очищенную.
Содержание суммы антраценпроизводных в пересчете на 8-O-β-D-глюкозид эмодина и абсолютно сухое сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:
где D - оптическая плотность испытуемого раствора;
D0 - оптическая плотность раствора ГСО 8-O-β-D-глюкозида эмодина;
m - масса сырья, г;
m0 - масса ГСО 8-O-β-D-глюкозида эмодина, г;
W - потеря в массе сырья при высушивании, в процентах.
В случае отсутствия стандартного образца 8-O-β-D-глюкозид эмодина целесообразно использовать теоретическое значение удельного показателя поглощения его щелочно-аммиачного раствора (батохромного комплекса) - 160. В этом случае расчетная формула не содержит m0 и принимает следующий вид:
где D - оптическая плотность испытуемого раствора;
m - масса сырья, г;
160 - удельный показатель поглощения 
щелочно-аммиачного раствора ГСО 8-O-β-D-глюкозид эмодина при 520 нм;
W - потеря в массе сырья при высушивании, в процентах.
Предложенный способ иллюстрируется графиком электронного спектра, полученного в сканирующем режиме на спектрофотометре «Specord 40» (Analytik Jena) и позволяющего получать значение оптической плотности испытуемого раствора и раствора стандартного вещества (фиг.1). На фиг.1 изображено по оси ординат - оптическая плотность; по оси абсцисс - длина волны, нм. Кривая 1 показывает кривую светопоглощения раствора водно-спиртового извлечения с щелочно-аммиачным реактивом, кривая 2 - кривую светопоглощения 8-O-β-D-глюкозид эмодина.
Сравнительная характеристика заявляемого способа и способа прототипа свидетельствует о том, что в заявляемом способе обоснованы новые подходы к стандартизации корней щавеля конского, заключающиеся в использовании экстракции сырья 70% этиловым спиртом, а также в исключении стадий кислотного гидролиза, многократной обработки извлечения диэтиловым эфиром и последующего перевода целевых веществ из эфирного извлечения в щелочно-аммиачный раствор.
Пример 1. Аналитическую пробу сырья корней щавеля конского (заготовлено в г. Самаре, Ботанический сад, май 2012 г.) измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм. 1,0023 г измельченного сырья помещают в колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляют 50 мл 70% этилового спирта. Колбу закрывают пробкой и взвешивают на тарированных весах с точностью до ±0,01 г. Колбу присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на кипящей водяной бане (умеренное кипение) в течение 90 мин. Затем охлаждают в течение 30 мин, закрывают той же пробкой, снова взвешивают и восполняют недостающий экстрагент до первоначальной массы. Извлечение фильтруют через бумажный фильтр («красная полоса»). Испытуемый раствор А для определения оптической плотности раствора готовят следующим образом: 1 мл полученного извлечения (аликвоту) помещают в колбу вместимостью 50 мл и доводят объем раствора до метки щелочно-аммиачным раствором, приготовленным по фармакопейной методике. Испытуемый раствор А помещают в колбу емкостью 50 мл и нагревают в течение 15 мин на кипящей водяной бане с обратным холодильником. После охлаждения измеряют оптическую плотность испытуемого раствора на спектрофотометре при длине волны 520 нм. В качестве раствора сравнения используют воду очищенную.
Для расчета содержания суммы антраценпроизводных веществ раствор 8-O-β-D-глюкозид эмодина-стандартного образца, разбавляют его щелочно-аммиачным раствором, измеряют оптическую плотность окрашенного комплекса и определенное значение оптической плотности используют в формуле расчета.
Приготовление раствора 8-O-β-D-глюкозид эмодина-стандартного образца. 0,0023 г 8-O-β-D-глюкозид эмодина помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в 30 мл 96% этилового спирта. Затем содержимое колбы до комнатной температуры доводят объем раствора 96% этиловым спиртом до метки (раствор А 8-O-β-D-глюкозид эмодина). 1 мл раствора А 8-O-β-D-глюкозид эмодина (аликвота) помещают в мерную колбу на 25 мл и доводят объем раствора до метки щелочно-аммиачным раствором (испытуемый раствор Б). Раствор Б помещают в колбу емкостью 50 мл и нагревают в течение 15 мин на кипящей водяной бане с обратным холодильником. После охлаждения измеряют оптическую плотность раствора Б на спектрофотометре при длине волны 520 нм. В качестве раствора сравнения используют воду очищенную.
Содержание суммы антраценпроизводных веществ в пересчете на 8-O-β-D-глюкозид эмодина и абсолютно сухое сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:
Оптическая плотность D=0,3006, содержание антраценпроизводных=4,64%.
ИСТОЧНИКИ ИНФОРМАЦИИ
1. Куркин В.А. Фармакогнозия: Учебное пособие для студентов фармацевтических вузов. - Самара: ООО «Офорт», ГОУ ВПО «СамГМУ Росздрава», 2009. - 1239 с.
2. Куркин В.А. Основы фитотерапии: Учебное пособие для студентов фармацевтических вузов. - Самара: ООО «Офорт», ГОУ ВПО «СамГМУ Росздрава», 2009. - 963 с.
3. Данилов Н.В., Беляков К.В., Попов Д.М. Идентификация и количественное определение антраценпроизводных в корнях щавеля конского // Фармация. - 2000. - №5-6. - С.26-28.
4. Государственная фармакопея СССР: Вып.2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье / МЗ СССР. - 11-е изд., доп. - М.: Медицина, 1990. - 400 с.
Способ количественного определения суммы антраценпроизводных веществ корней щавеля конского, отличающийся тем, что экстракцию сырья осуществляют 70% этиловым спиртом, аликвоту полученного извлечения разбавляют щелочно-аммиачным раствором, оптическую плотность раствора измеряют при длине волны 520 нм, и пересчет содержания суммы антраценпроизводных веществ ведут на 8-O-β-D-глюкозид эмодина, который используется в качестве стандартного вещества, при этом содержание суммы антраценпроизводных в пересчете на 8-O-β-D-глюкозид эмодина и абсолютно сухое сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:
где D - оптическая плотность испытуемого раствора;
D0 - оптическая плотность раствора ГСО 8-O-β-D-глюкозида эмодина;
m - масса сырья, г;
m0 - масса ГСО 8-O-β-D-глюкозида эмодина, г;
W - потеря в массе сырья при высушивании, в процентах;
в случае отсутствия стандартного образца 8-O-β-D-глюкозид эмодина используют теоретическое значение удельного показателя поглощения его щелочно-аммиачного раствора - 160, и абсолютно сухое сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:
где D - оптическая плотность испытуемого раствора;
m - масса сырья, г;
160 - удельный показатель поглощения 
щелочно-аммиачного раствора ГСО 8-O-β-D-глюкозид эмодина при 520 нм;
W - потеря в массе сырья при высушивании, в процентах.
