Способ получения проб для спектрального биохимического анализа крови


 


Владельцы патента RU 2533258:

Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Северо-Восточный федеральный университет имени М.К. Аммосова" (RU)

Изобретение относится к медицине и может быть использовано при анализе сыворотки венозной крови человека и животных методом жидкостной хроматографии, а также любым другим методом, непосредственным объектом исследования которого может являться водно-метанольный экстракт, получаемый из высушенной сыворотки крови. Способ получения проб для спектрального биохимического анализа крови, включающий этапы подготовки, высушивания сыворотки крови и получения экстракта для хроматографических исследований, отличается тем, что процесс получения сухого остатка сыворотки крови проводится в условиях постоянного встряхивания при температуре 50-60°C в течение 21-27 часов до получения сухого остатка в виде пробки с уплотнением в центре и пленкой на поверхности, которая прокалывается стерильным и химически интактным предметом, после чего в пробирку с сухим остатком помещается 85% раствор метанола. Полученная смесь снова помещается в устройство для встряхивания при температуре 48-52°C в течение 21-27 часов, после чего уплотняется в центрифуге при ускорении 11500-12500g. Готовая проба переносится в пробирку автосемплера жидкостного хроматографа в объеме, занимающем 3/4-2/3 объема пробирки. Использование настоящего изобретения позволяет получить хроматограммы с воспроизводимостью с относительной погрешностью не более 5% в пределах одной пробы, что является достаточным для обеспечения достоверности результатов анализа сыворотки с использованием жидкостной хроматографии.

 

Изобретение относится к медицине и может быть использовано при анализе сыворотки венозной крови человека и животных методом жидкостной хроматографии, а также любым другим методом, непосредственным объектом исследования которого может являться водно-метанольный экстракт, получаемый из высушенной сыворотки крови.

Биохимический анализ крови - одно из самых распространенных в современной медицине лабораторных исследований, отражающее функциональное состояние органов и систем организма (печени, почек, поджелудочной железы и др.), позволяющее оценить состояние обменных процессов (белковый, углеводный, жировой обмен, водно-электролитный обмен, дисбаланс микроэлементов). Биохимический анализ крови - базовое исследование для оценки состояния здоровья, которое помогает поставить диагноз, определить форму или стадию заболевания, назначить и проконтролировать лечение.

Благодаря большому количеству исследуемых показателей биохимический анализ крови используется во всех областях медицины. Он позволяет выявить нарушения в работе органов и систем организма, когда еще нет никаких внешних симптомов болезни, и поэтому широко применяется для ранней диагностики многих заболеваний: эндокринологических, урологических, гинекологических, кардиологических и других.

Известен способ проведения клинического и биохимического анализа биологических жидкостей, предусматривающий взятие анализируемого образца, его нанесение на реагентную зону диагностической полоски, выдерживание для проведения реакции, размещение диагностической полоски в приборе - анализаторе изображения и считывание полученных результатов анализа (см. RU №2157994, G01N 33/48, 20.10.2000 г.). Использование диагностических полосок малоэффективно при верификации заболеваний, кроме того, оно отличается относительно высокой стоимостью аналитических работ из-за высокой стоимости самих расходуемых индикаторов.

Известен способ проведения иммунологического анализа биологических жидкостей, характеризующийся тем, что аппликатор с микростержнями погружают в латексную суспензию, сенсибилизированную антителами, с взятием микрокапель латексной суспензии, эти микрокапли наносят на носитель в геометрически определенных местах в виде упорядоченной матрицы, затем другим аппликатором берут образцы биологической жидкости и наносят на тот же носитель так, чтобы образцы смешались с латексной суспензией, перемешивают и инкубируют 2-3 мин и помещают в видеоцифровое устройство для регистрации агглютинации (см. RU №2325644, G01N 33/48, G01N 33/53, 20.10.2000 г.). Способ ограничен количеством диагностируемого параметра, что также в целом способствует снижению эффективности верификационных работ.

Известный способ подготовки пробы для газохроматографического определения хлорорганических пестицидов в крови, включающий экстракцию пестицидов из крови n-гексаном, очистку от соэкстративных веществ концентрированной серной кислотой, концентрирование n-гексанового экстракта (см. RU №2414711, G01N 33/50, G01N 33/48, G01N 33/00, G01N 1/10, G01N 30/02, 20.03.2011 г.), отличается тем, что для исследования берут 5-7 см3 крови и предварительно перед экстракцией пробу обрабатывают 2 см3 60% серной кислоты, экстракцию проводят 30 см3 n-гексана однократно и перед газохроматографическим исследованием n-гексановый экстракт однократно обрабатывают 10 см3 концентрированной серной кислоты. Способ также разработан для определения конкретного параметра, в данном случае наличия пестицидов в крови.

Наиболее близким по технической сущности к заявляемому решению является способ подготовки проб сыворотки крови, описанный в медицинской технологии (см. Разрешение Росздравсоцнадзора №2008/246 от 18.09.2008 г.), который предусматривает следующие манипуляции: сыворотка крови в количестве 1 мл, полученная стандартным путем, наливается в чашку Петри (d=40 мм), высушивается при комнатной температуре до состояния сухой корочки, после чего помещается в эксикатор с хлоридом кальция и досушивается в течение 14 дней. Полученный сухой остаток перемалывается на планетарной мельнице при 750 об/мин в течение 3 мин. Готовится навеска перемолотой пробы в количестве 40 мг, насыпается в пробирку типа «Эппендорф», заливается 85% раствором метанола. Экстракция происходит в течение 1 часа при комнатной температуре и постоянном встряхивании на шейкере при 500 об/мин. После чего проба центрифугируется при 12000g в течение 3 мин. Полученный экстракт в количестве 50 мкл помещается в пробирку автодозатора хроматографа.

Несовершенство данного способа заключается в недостаточно четком регламентировании условий и сроков, отсутствии критериев готовности пробы к анализу, а также в высокой трудоемкости производимых операций и их количестве, что неизбежно приводит к влиянию человеческого фактора на результаты анализа.

Задача, на решение которой направлено заявленное изобретение, выражается в упрощении процедуры пробоподготовки и сокращении сроков при спектральном биохимическом анализе крови.

Технический эффект, получаемый при решении поставленной задачи, выражается в получении воспроизводимого, нетрудоемкого способа подготовки проб с четко обозначенными режимами и минимальным количеством операций.

Для решения поставленной задачи способ получения проб для спектрального биохимического анализа крови, включающий этапы подготовки, высушивания сыворотки крови и получения экстракта для хроматографических исследований, отличается тем, что процесс получения сухого остатка сыворотки крови проводится в условиях постоянного встряхивания при температуре 50-60°C в течение 21-27 часов до получения сухого остатка в виде пробки с уплотнением в центре и пленкой на поверхности, которая прокалывается стерильным и химически интактным предметом, после чего в пробирку с сухим остатком помещается 85% раствор метанола. Полученная смесь снова помещается в устройство для встряхивания при температуре 48-52°C в течение 21-27 часов, после чего уплотняется в центрифуге при ускорении 11500-12500g. Готовая проба переносится в пробирку автосемплера жидкостного хроматографа в объеме, занимающем 3/4-2/3 объема пробирки.

Сопоставительный анализ признаков заявленного решения с признаками аналогов свидетельствует о соответствии заявленного решения критерию «новизна».

Признаки отличительной части формулы изобретения обеспечивают ускорение процедуры получения пробы с высокой воспроизводимостью хроматограммы.

Сущность данного способа заключается в приготовлении водно-метанольного экстракта сыворотки крови по строго детерминированным алгоритму и условиям его приготовления.

Заявляемый способ осуществляется следующим образом.

Для подготовки проб используется сыворотка крови, полученная стандартным путем, в количестве 500 мкл, которая помещается в микропробирку (например, типа «Эппендорф») емкостью 1,5 мл. Открытая пробирка помещается в ячейку устройства для встряхивания с возможностью температурного контроля (например, термошейкер) и перемешивается в режиме постоянного встряхивания при температуре 50-60°C в течение 21-27 часов до получения осадка из сухой сыворотки в виде прозрачной пробки желто-коричневого цвета. Для получения экстракта пробка в нескольких местах прокалывается чистым наконечником на 200 мкл. В пробирку помещается 85% раствор метанола в количестве 500 мкл, приготовленный из реактивов градации не ниже: «химически чистый». Закрытая пробирка со смесью инкубируется в термошейкере при температуре 48-52°C в течение 21-27 часов при скорости встряхивания 500 об/мин. Полученная проба центрифугируется при ускорении 12000g в течение 3 мин. Готовый экстракт в количестве 200 мкл помещается в пробирку автодозатора хроматографа или непосредственно инжектируется в хроматографическую колонку.

Поставленная задача была решена путем подбора оптимальных условий высушивания и экстракции, полагаясь на основные принципы влияния внешних факторов на протекание этих двух процессов. Кроме того, количество операций, производимых с сывороткой, было минимизировано. Получаемые хроматограммы обладают воспроизводимостью с относительной погрешностью не более 5% в пределах одной пробы, что является достаточным уровнем воспроизводимости, обеспечивающим достоверность результатов анализа сыворотки с использованием жидкостной хроматографии.

Способ получения проб для спектрального биохимического анализа крови, включающий этапы подготовки, высушивания сыворотки крови и получения экстракта для хроматографических исследований, отличающийся тем, что процесс получения сухого остатка сыворотки крови проводится в условиях постоянного встряхивания при температуре 50-60°C в течение 21-27 часов, причем сухой остаток для получения экстракта пробы перемешивается с 85% раствором метанола в условиях постоянного встряхивания при температуре 48-52°C в течение 21-27 часов, после чего осаждается в центрифуге при ускорении 11500-12500g.



 

Похожие патенты:
Настоящее изобретение относится к медицине, а именно к исследованию биологических материалов и описывает способ лабораторной оценки состояния слизистой влагалища в процессе лучевой или химиолучевой терапии злокачественных новообразований на фоне сопроводительной терапии.

Изобретение относится к медицине, а именно к способу определения выраженности воспалительного процесса при остеоартрозе. Сущность способа состоит в том, что проводят люминолзависимую железоиндуцированную хемилюминесценцию модельной системы, которая имеет следующий состав: 2,72 г KH2PO4, 7,82 г KCl, 1,5 г цитрата натрия C6H8O7Na3*5,5H2O на 1 литр дистиллированной воды, pH 7,45 с 0,2 мл 10-5 М раствора люминола, затем в присутствии синовиальной жидкости определяют интенсивность свечения модельной системы до и после добавления синовиальной жидкости.

Изобретение относится к области биохимии. Предложен способ оценки жизнеспособности клеток в микробиореакторе с помощью оптического световода.

Изобретение относится к судебной медицине и биохимии и может быть использовано для установления причины смерти, обусловленной наличием синдрома эндогенной интоксикации.
Изобретение относится к области медицины и представляет собой способ прогнозирования риска развития врожденных инфекций путем определения количества специфических антител классов Ig М и Ig G в биологическом материале, отличающееся тем, что в качестве биологического материала используют мазок со слизистой оболочки цервикального канала при первичном обследовании в сроке до 12-й недели гестации, одновременно в мазках определяют количество антител Ig М и Ig G к вирусу краснухи, цитомегаловирусу, парвовирусу B19V, токсоплазмам, вирусу простого герпеса 1 и 2 типов и величины авидности специфических Ig G к этим возбудителям, дополнительно в том же мазке определяют уровень секреторного неспецифического Ig A методом РИФ к антигенам цитомегаловируса, хламидий, микоплазм, и генетического материала этих микроорганизмов методом ПЦР и в зависимости от полученных результатов прогнозируют группы высокого, умеренного или низкого риска развития врожденных инфекций.

Изобретение относится к области медицины. Сущность способа прогнозирования вероятности развития рестеноза с учетом локализации стента в правой коронарной артерии, огибающей артерии состоит в том, что на момент стентирования осуществляют забор крови пациента и регистрируют в физических величинах значения протромбинового индекса, коэффициента атерогенности, липопротеидов очень низкой плотности, липопротеидов высокой плотности, вычисляют величину стеноза S.
Изобретение относится к медицине, а именно к иммунологии, и может быть использовано для оценки влияния искусственного света на факторы врожденного иммунитета. Для этого оценивают влияние света, генерируемого светодиодами, лампами накаливания, люминесцентными лампами на нейтрофильные гранулоциты, выделенные из периферической крови здоровых доноров.

Изобретение относится к области лабораторной диагностики и может быть использовано для определения присутствия патогенных микроорганизмов в биологических образцах.
Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, и может быть использовано в лечебных учреждениях для оценки риска метаболического синдрома (МС). Определяют диагностические показатели клинико-лабораторными и функциональным методами с последующим расчетом прогностического индекса.
Изобретение относится к медицине, а именно к хирургии, и может быть использовано при проведении холецистэктомии у пациентов с желчнокаменной болезнью. Для этого предварительно определяют индекс массы тела (ИМТ) пациентов, уровень гликемии, глюкозурии, осуществляют измерение артериального давления, выявляют наличие остеохондроза позвоночника и артроза коленных суставов.

Заявленное изобретение относится к области птицеводства. Способ включает разделку и обвалку потрошеных тушек птицы на 11 базовых частей 1) грудная (в т.ч.

Изобретение относится к области мясной промышленности и предназначено для определения видовой принадлежности, свежести и термического состояния мясного сырья. .
Изобретение относится к области животноводства и технологии производства говядины и предназначено для оценки и классификации говядины по качеству на группы PSE, RSE, DFD и NOR при жизни убойных животных.
Изобретение относится к области животноводства и технологии производства говядины и предназначено для оценки и классификации говядины по качеству на группы: PSE, DFD и NOR при жизни убойных животных.

Изобретение относится к мясной отрасти для производства мясных полуфабрикатов. .

Изобретение относится к методам определения качественных показателей мясного сырья, в частности оценки количества инъецированного рассола в отдельные части отрубов (далее уровня инжекции) мясного сырья.

Изобретение относится к аналитической химии и контролю качества мясных продуктов. .

Изобретение относится к ветеринарной санитарии и гельминтологии, в частности к экспертизе мясных продуктов на трихинеллез. .

Изобретение относится к методам определения качественных показателей мясного сырья, в частности оценки влагосвязывающей способности мяса. .

Изобретение относится к способу получения активной фармацевтической субстанции для синтеза препаратов галлия-68, применяемых в позитронно-эмиссионной томографии.
Наверх