Способ оценки напряженности поствакционального иммунитета к вирусу гриппа


 


Владельцы патента RU 2533272:

Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт экологии и генетики микроогранизмов Уральского отделения РАН (RU)

Изобретение относится к медицине, а именно к инфекционной иммунологии. Способ предусматривает использование для сенсибилизации твердой фазы противогриппозной вакцины, при том что визуализацию сформировавшихся в ходе инкубации сенсибилизированной поверхности иммуносорбента с тестируемой сывороткой, содержащей антитела к вирусу гриппа, комплексов антиген-антитело проводят при помощи оптически контрастного конъюгата G белок-углерод в течение 10-15 минут. Технический результат: создание простой, высокочувствительной, оперативной, наглядной и надежной диагностической системы для оценки напряженности поствакцинального иммунитета к вирусу гриппа. 1 пр., 1 ил.

 

Изобретение относится к медицине, а именно к инфекционной иммунологии, и касается разработки иммунологической видоспецифической системы для оценки сероконверсии в ответ на иммунизацию в ходе вакцинопрофилактики гриппа на основе безинструментального определения уровня антител.

Ежегодно в РФ проводится профилактическая иммунизация населения, направленная на предупреждение, ограничение распространения и ликвидацию инфекционных болезней. Законодательством регламентирована вакцинация населения в рамках национального календаря прививок, а также по эпидемическим показателям. Для оценки эффективности профилактических мер осуществляют мониторинг напряженности поствакцинального иммунитета, основанный на измерении содержания антител в сыворотке крови испытуемых.

Одним из наиболее социально значимых заболеваний в РФ является грипп. Ежегодно в течение первого полугодия происходит сезонный подъем заболеваемости гриппом, в период которого количество больных достигает в определенных регионах 70-100 человек на 10000 населения. Профилактические мероприятия ежегодно затрагивают более 30 млн человек, из которых примерно половину составляют дети. При этом статистика свидетельствует о том, что процент заболеваемости среди привитых пациентов весьма высок и достигает 35-40%. Система тотального мониторинга эффективности вакцинации в системе противоэпидемических мер отсутствует. В качестве причины чаще всего называют отсутствие аналитических инструментов (тест-систем), пригодных для быстрого, эффективного, упрощенного тестирования.

Высокая продолжительность эпидемического подъема заболевания (в среднем по РФ 4-6 недель), масштаб его негативного влияния на социально-экономическую сферу обуславливают необходимость совершенствования методов серологической диагностики, которые позволили бы более оперативно, и в то же время с высокой степенью надежности, производить мониторинг состояния противогриппозного иммунитета среди населения в условиях напряженной эпидемической ситуации.

Основным и наиболее близким по технической сущности к разработанному способу является метод серологического анализа гриппа при помощи сухого гриппозного диагностикума, используемого в реакции торможения гемагглютинации (РТГА) (Рег. номер 94/161/330 ФС 42-310 ВС-90, утв. приказом Минздравмедпрома РФ от 10.08.1994 №161).

Сущность способа-прототипа заключается в следующем.

Диагностикум представляет собой лиофильно высушенные штаммы вируса гриппа. Реакция основывается на способности иммунной сыворотки ингибировать инициированную вирусом агглютинацию эритроцитов кур.

Реакцию проводят в U-образных лунках полистирольного планшета. Готовят серию двукратных разведений исследуемого образца, к каждому разведению добавляют диагностикум. Инкубацию проводят в течение часа при температуре 25°C. После этого в лунки вносят 1% суспензию эритроцитов, предварительно трехкратно отмытых физиологическим раствором и центрифугированием. При наличии в сыворотке антител к вирусу гриппа агглютинации эритроцитов не наблюдается.

Основными недостатками описанного метода является:

- необходимость наличия и предварительной подготовки эритроцитов кур;

- необходимость длительной подготовки пробы и диагностикума перед процедурой анализа (титрование раствора антигена, истощение пробы в отношении неспецифических индукторов агглютинации);

- нестабильность при хранении эритроцитарного диагностикума;

- невозможность сохранения (документирования) результатов анализа;

- потребность в постановке дополнительных контрольных опытов, демонстрирующих отсутствие неспецифической агглютинации.

Предлагаемое изобретение решает задачу по созданию более простой, высокочувствительной, оперативной, наглядной и надежной диагностической системы для оценки напряженности поствакцинального иммунитета к вирусу гриппа.

Решение задачи осуществляется благодаря тому, что процедурный формат тест-системы носит безинструментальный характер и предусматривает использование для сенсибилизации твердой фазы противогриппозной вакцины, при том что визуализация сформировавшихся в ходе инкубации сенсибилизированной поверхности иммуносорбента с тестируемой сывороткой, содержащей антитела к вирусу гриппа, комплексов антиген-антитело проводят при помощи оптически контрастного конъюгата G белок-углерод в течение 10-15 минут.

Новизна разработанного способа заключается в использовании противогриппозной вакцины в качестве сенситина. Идентичность антигенов, используемых в вакцине и применяемых для сенсибилизации твердой фазы, обеспечивает высокую чувствительность и специфичность разработанной системы. Высокие показатели чувствительности, позволяющие определять наличие антител в разведении сыворотки 1/51200, делают возможным использование разработанного способа не только для анализа поствакцинального иммунитета, но и для качественной характеристики вакцин, выпускаемых различными производителями.

Описание разработанного способа. В качестве твердой фазы используется мембрана из нитроцеллюлозы с диаметром пор 0,45 мкм (Bio-Rad, США).

На диски из нитроцеллюлозной мембраны диаметром 5 мм наносили сенситин (вакцину) по 5 мкл в забуференном фосфатами физиологическом растворе с азидом натрия (ЗФР). В качестве внутреннего отрицательного контроля сорбировали бычий сывороточный альбумин (БСА) в концентрации 0,1 мг/мл.

После подсушивания мембраны и инкубации (5 мин) в блокирующем растворе, в качестве которого использовали забуференный фосфатами физиологический раствор, содержащий 0,05% твина-20 (ЗФРТ), мембраны помещали в лунки планшета, заполненные сыворотками вакцинированных пациентов с серийным разведением, кратным двум, начиная с разведения 1:50 на 30 минут. После чего мембраны промывали ЗФРТ и осуществляли детекцию конъюгатом G белок-углерод в течение 10-15 минут. Конъюгат G белок-углерод готовили по оригинальному способу (Раев М.Б. Частицы коллоидного углерода в качестве меток диагностических реагентов // Вестник уральской медицинской академической науки. 2006. №3(1). С.202-205). В качестве источника частиц углерода использовали аморфный углерод, который получали в виде сажи путем конденсирования из пламени горящего толуола на стеклянной поверхности с последующей тщательной промывкой и высушиванием.

В процессе получения суспензии углеродных частиц к 2-х процентному раствору белка G в ЗФР добавляли аморфный углерод до конечной концентрации 5% в условиях вихревого перемешивания на магнитной мешалке. Полученную суспензию озвучивали в ультразвуковом дезинтеграторе, центрифугировали, активировали при помощи глутарового альдегида в присутствии G белка. Процесс конъюгирования проводили в течение 1 часа 40 минут при комнатной температуре и интенсивном перемешивании, после чего реагент центрифугировали при 6000 g и освобождали от избытка глутарового альдегида и несвязавшегося анти-лиганда гель-фильтрацией на колонке с Сефарозой CL-6B. Полученный конъюгат использовали для детекции в системах анализа.

Пример

На диски из нитроцеллюлозной мембраны диаметром 5 мм наносили сенситин (вакцину противогриппозную «Ваксигрипп», разведенную в ЗФР 1:16) по 5 мкл. В качестве внутреннего отрицательного контроля сорбировали бычий сывороточный альбумин (БСА) в концентрации 0,1 мг/мл.

После подсушивания мембраны и инкубации (5 мин) в блокирующем растворе, в качестве которого использовали забуференный фосфатами физиологический раствор, содержащий 0,05% твина-20 (ЗФРТ), мембраны помещали в лунки планшета, заполненные сывороткой вакцинированных с серийным разведением, кратным двум, начиная с разведения 1:50. Тестированию подвергали по четыре сыворотки от каждого пациента: взятые в день вакцинации, спустя 3, 4 и 5 недель после нее. В качестве внешнего положительного контроля использовали сыворотку здорового кролика в аналогичных разведениях в том же буфере. После этого мембраны промывали ЗФРТ и осуществляли детекцию конъюгатом G белок-углерод в течение 10-15 минут.

Результаты представлены на рисунке 1. Чувствительность сконструированной системы превышает на 2 порядка чувствительность РТГА - стандартного метода серологической диагностики гриппа, длительность аналитической процедуры не превышает 45 минут, результаты исследования можно хранить бесконечно долго и использовать при необходимости мониторинга качественных показателей иммуногенности вакцин и иммунореактивности вакцинируемых пациентов.

Каждый ряд дисков на рис.1 соответствует одной исследованной сыворотке, в верхней части рисунка указаны их разведения, на все диски нанесена вакцина в разведении 1:16. 0, 3, 4, 5 - сыворотки пациента, полученные соответственно в день вакцинации, спустя 3, 4 и пять недель после нее; Кр - сыворотка здорового кролика; ОК - внутренний отрицательный контроль - диск с нанесенным БСА в концентрации 0,1 мг/мл, инкубированный с сывороткой пациента, полученной в день вакцинации. Стрелками обозначены последние визуализированные точки в рядах серийных разведений.

На рисунке видно, что с помощью разработанной системы были выявлены восьмикратный прирост титра антител в сыворотке крови пациента спустя 3 недели после вакцинации и его сохранение в течение последующих двух недель. Максимальное разведение сыворотки, в котором были обнаружены антитела против вируса гриппа, составило 1:51200, что на 2 порядка выше, чем в стандартном методе анализа (РТГА).

Таким образом, разработанный метод позволяет усовершенствовать оценку состояния поствакцинального противогриппозного иммунитета, упростить ее на фоне существенного повышения чувствительности тестирования, создав условия для возможности тотальной оценки эффективности профилактических мер. Важнейшими составляющими результатов внедрения разработанного способа является возможность своевременного внесения коррекции в процесс вакцинации и/или оценить качество вакцинного препарата.

Таким образом, предложенный способ позволяет существенно улучшить и сократить по времени оценку напряженности иммунитета в ответ на вакцинацию, за счет высокой чувствительности системы определения специфических антител в сыворотке: 1:51200, и увеличить специфичность оценки за счет использования в качестве сенситина противогриппозной вакцины.

Технический результат от использования изобретения заключается в повышении диагностической эффективности при сохранении высокой чувствительности и видоспецифичности способа, сокращении времени на проведение исследования, неинструментальной визуализации результатов исследования и возможности сохранения (документирования) результата исследования в течение длительного времени.

Заявляемое техническое решение соответствует критерию «промышленное применение», так как применяемые реагенты доступны, а исследования легко выполняемы.

Способ безынструментальной оценки напряженности поствакцинального иммунитета к вирусу гриппа путем прямой визуализации связанных сенситином антител к вирусу гриппа, отличающийся тем, что в качестве сенситина, сенсибилизирующего поверхность твердой фазы, используют противогриппозную вакцину, а для визуализации образующегося иммунного комплекса используют конъюгат белок G-углерод в течение 10-15 минут.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к медицине, в частности к гинекологии, и может быть использовано для прогнозирования риска развития инфекционно-воспалительных осложнений у женщин с внутриматочной патологией после гистероскопии.
Изобретение относится к области вирусологии и касается штамма вируса гриппа H10N7-cyбтипа. Охарактеризованный штамм вируса гриппа A/pochard/Siberia/249/08-МА H10N7-субтипа выделен из клоакального смыва красноголового нырка и адаптирован к линии BALB/c мышей.

Изобретение относится к штамму вируса иммунодефицита человека, принадлежащему к субтипу B, и может быть использовано в вирусологии, медицине и биотехнологии. Представленный штамм вируса иммунодефицита человека I-го типа ИВ735 субтипа В депонирован в Государственной коллекции вирусов ФГБУ НИИ вирусологии им.

Изобретение относится к области фармацевтики. Создана иммуногенная композиция, способная индуцировать иммунный ответ в отношении по меньшей мере двух штаммов и/или серотипов Streptococcus uberis, включающая по меньшей мере один выделенный и/или рекомбинантный белок, имеющий определенную аминокислотную последовательность, полученный способом, включающим трансформацию прокариотической, эукариотической клеток или микроорганизма, такого как бактерия, дрожжи или грибы, конструкцией нуклеиновой кислоты, кодирующей указанный протеин, рекомбинантную молекулу нуклеиновой кислоты, рекомбинантный носитель и/или их иммуногенную часть, производное и/или аналог.

Изобретение относится к области биотехнологии и представляет собой способ определения неспецифической устойчивости патогенных микроорганизмов к антибиотикам и факта присутствия бактериальных биопленок на основании измерения каталитической активности фосфодиэстераз, расщепляющих циклический дигуанозинмонофосфат, с пороговой чувствительностью 50 пг/мл, включающий: 1) выделение фосфодиэстеразы-мишени из лизированных бактериальных клеток; 2) связывание фосфодиэстеразы биотинилированными антителами, специфичными к некаталитическим доменам фосфодиэстеразы; 3) аффинную очистку комплексов, сформированных фосфодиэстеразой-мишенью и биотинилированным антителом при помощи парамагнитных частиц, содержащих нейтравидин или его аналоги, связывающие биотин; 4) взаимодействие комплексов фосфодиэстераза/биотинилированное антитело, иммобилизованных на парамагнитных частицах, с комплексами, содержащими с-di-GMP в форме G-квадруплексов с интеркалированным красителем, сопровождающееся падением интенсивности флуоресценции по мере разрушения комплексов интеркалирующего красителя c-di-GMP; 5) измерение падения флуоресценции при гидролизе c-di-GMP и разрушении комплекса c-di-GMP с интеркалирующим красителем с последующим количественным определением активности фосфодиэстеразы на основании калибровочных кривых, построенных с использованием известных количеств рекомбинантного фермента фосфодиэстеразы, идентичного исследуемой мишени; 6) выявление повышенного уровня фосфодиэстеразной активности, обнаруживаемого тестируемыми антибиотикоустойчивыми бактериальными штаммами, способными к формированию биопленок, по сравнению с уровнем фосфодиэстеразной активности, обнаруживаемым для контрольных штаммов бактерий того же вида, не обладающих антибиотикоустойчивостью и способностью к формированию биопленок.

Изобретение относится к штамму вируса иммунодефицита человека, принадлежащему к субтипу А, и может быть использовано в вирусологии, медицине и биотехнологии. Штамм вируса иммунодефицита человека I-го типа ИВ742 депонирован в Государственной коллекции вирусов ФГБУ НИИ вирусологии им.

Изобретение относится к штамму вируса иммунодефицита человека, принадлежащему к субтипу А, и может быть использовано в вирусологии, медицине и биотехнологии. Представленный штамм вируса иммунодефицита человека I-го типа ИВ710 депонирован в Государственной коллекции вирусов ФГБУ НИИ вирусологии им.
Изобретение относится к вирусологии и биотехнологии, в частности к культивированию клеток с целью изучения вирусов и конструирования новых антигенных препаратов.

Изобретение относится к вирусологии, в частности к области культивирования клеток и тканей для наработки и изучения вирусов. Целью изобретения является получение штамма клеток синовиальной мембраны поросенка (СМП), стабильного по биологическим характеристикам, пригодного для вирусологических и диагностических исследований, обладающего чувствительностью к вирусам-возбудителям болезням свиней, таких как африканская и классическая чума, болезнь Ауески.
Настоящее изобретение относится к области медицины, а именно к клинической лабораторной диагностике, и описывает способ конструирования полимерного иммуноглобулинового диагностикума для выявления Legionella pneumophila 1, 3 и 6 серогрупп, включающий получение иммунных кроличьих сывороток с последующей их сенсибилизацией на полимерный носитель в виде микросфер для обнаружения клеток штаммов L.
Изобретение относится к медицине, в частности к элюированию сконцентрированного на магнитной матрице патогена. Способ элюции осуществляется следующим образом: 0,1 мл 10% взвеси магнитно-иммунного сорбента (МИС) туляремийного, чумного или бруцеллезного инкубируют с микробными взвесями возбудителей туляремии, бруцеллеза или чумы в течение 30 мин, удаляют надосадок, далее МИС инкубируют с 0,5 мл элюирующего раствора в течение 10 мин, pH элюата возвращают к физиологическому значению, проводят постановку реакции непрямой гемагглютинации или реакции агглютинации латекса. Технический результат: способ позволяет качественно элюировать патоген с магнитной иммобилизованной матрицы для последующего исследования в серологических реакциях и сохранять функциональную активность антитела на магнитной матрице для повторного использования. 3 пр., 1 табл.

Группа изобретений относится к области медицины и может быть использована для определения присутствия клинически релевантного количества бактерий в донорской крови или ткани. Способ выявления бактериального заражения донорской крови, или продукта крови, или донорской ткани от донора-млекопитающего, хранящейся в жидкости, заключается в контактировании исследуемого образца с серией общеродовых антител, которые специфически связываются с грамотрицательным бактериальным антигеном и/или с грамположительным бактериальным антигеном, и выявлении связывания серии антител с образцом. Присутствие бактерий в количестве более 1×103 КОЕ бактерий на мл образца, указывает на непригодность донорской крови, продукта крови или ткани для переноса пациенту, а отсутствие указанного количества бактерий указывает на пригодность донорской крови, продукта или донорской ткани для переноса пациенту. Группа изобретений относится также к варианту указанного способа. Группа изобретений обеспечивает повышение точности и ускорение обнаружения присутствия клинически-релевантного количества инфицирующих бактерий в донорской крови, продуктах крови, или в донорской ткани. 2 н. и 8 з.п. ф-лы, 6 ил., 9 пр.
Изобретение относится к области медицины, а именно к неврологии, и может быть использовано в клинической практике инфекционистов и неврологов. Определяют наличие коматозного состояния в днях; на МРТ - очаги структурных изменений головного мозга; на ЭЭГ - эпилептиформную активность, диффузные острые волны, острые волны, спайки, редуцированные комплексы, высокоамплитудные пароксизмы медленной активности, частые пароксизмы комплексов «пик-медленная волна», «спайк-медленная волна». Также на ЭЭГ выявляют ирритативную активность, локальную непостоянную высокочастотную бета-активность, распространенную непостоянную низкоамплитудную и распространенную длительную высокоамплитудную активность. Определяют наличие этиологического агента-возбудителя заболевания, вызванного вирусом клещевого энцефалита или наличие энцефалита другой и невыясненной этиологии. Полученные показатели оценивают в баллах в зависимости наличия, отсутствия и их выраженности. По полученным данным рассчитывают линейно-классификационные функции и определяют показатель благоприятного (ЛКФ1) исхода энцефалита без развития симптоматической эпилепсии (СЭ) и неблагоприятного (ЛКФ2) исхода энцефалита с развитием СЭ. При ЛКФ1>ЛКФ2 прогнозируют исход энцефалита без развития СЭ, а при ЛКФ2>ЛКФГ - неблагоприятный исход с развитием СЭ. Способ повышает достоверность оценки развития СЭ при энцефалите, что достигается за счет учета дополнительных данных ЭЭГ и расчета линейно-классификационных функций. 2 пр.
Группа изобретений относится к области медицинской микробиологии, в частности к лабораторной диагностике возбудителей инфекционных заболеваний. Заявлен унифицированный, ускоренный, высокочувствительный, высокоспецифичный, малотрудоемкий способ для ускоренной лабораторной диагностики коклюшной инфекции, включающий проведение следующих этапов: взятие патологического материала с задней стенки глотки больного, пробоподготовка клинического образца, выделение ДНК из клинического материала сорбционным методом, проведение амплификации при изотермальных условиях и электрофореза в агарозном геле, а также диагностический набор. Использование группы изобретений позволяет выявить возбудителя заболевания коклюша в течение 4,5-5 часов от начала исследования непосредственно в материале от больного вне зависимости от стадии заболевания и при различных формах клинического течения. Использование группы изобретений также позволяет в практическом здравоохранении быстро подтвердить диагноз «коклюш» независимо от сроков заболевания и формы клинического течения для назначения своевременной и адекватной терапии, значительно повысить возможности обследования детей в возрасте до 1 года при коклюшеподобных заболеваниях и взрослых со стертой клинической картиной заболевания, проводить выявление больных коклюшем при обследовании очагов коклюшной инфекции и установить источника инфекции в окружении больного в максимально короткие сроки. 2 н.п. ф-лы, 2 пр.
Изобретение относится к медицине и описывает способ предпосевной обработки патологического материала для выделения микобактерий, включающий воздействие дезинфекционным средством, где в качестве дезинфекционного средства используют «Септустин», причем обработку проводят смешиванием водного раствора «Септустина» в концентрации 0,5% и патологического материала в объемном соотношении 1:2 в течение 30 минут при комнатной температуре с последующей двукратной в течение 15 минут отмывкой физиологическим раствором. Изобретение обеспечивает высокую выявляемость при чистоте посевов. 3 табл., 4 пр.

Предложенная группа изобретений относится к области медицины. Предложены способы и устройства для определения количества процессированного полипептида нейротоксина в растворе путем вычитания количества частично процессированного и непроцессированного нейротоксина из количества общего нейротоксина. Предложены наборы, содержащие систему первого антитела захвата, второго антитела захвата и антитела обнаружения, средства для вычисления количества зрелого полипептида нейротоксина и соответствующие инструкции. Предложенная группа изобретений позволяет эффективно определять количество процессированного нейротоксина в препарате. 6 н. и 18 з.п. ф-лы, 4 ил., 3 табл.
Группа изобретений относится к медицине, в частности к клинической лабораторной диагностике, иммунохимии, и касается диагностики цитомегаловирусной инфекции методом иммунного блоттинга, который является референтным, наиболее высокочувствительным, высокоспецифичным, подтверждающим (или исключающим) диагноз при подозрении на инфицирование в случае получения положительных или сомнительных (неопределенных) результатов. Группа изобретений представляет собой способ получения тест-системы для диагностики цитомегаловирусной инфекции, включающий получение очищенного вирусного лизата, приготовление иммуносорбента, содержащего специфичные ЦМВ белки рр 150, рр 130, gp 75, рр 65, gp 55, pp52, p 38, pp 28, приготовление растворов для электрофореза, приготовление раствора для разведения сывороток, приготовление 5-кратного концентрата промывочного раствора, приготовление конъюгата, комплектацию тест-системы, а также тест-систему, полученную вышеуказанным способом. Использование натурального лизатного высокоочищенного антигена цитомегаловируса штамм «CMV AD 169» при получении иммуносорбента и наличие в нем полного спектра белков, специфичных ЦМВ (всего 8 белков), имеет следующие преимущества: значительно повышается чувствительность анализа, сокращается время постановки, отсутствует необходимость в предварительном разведении образцов и отсутствует первоначальный этап блокировки иммуносорбента, более удобная упаковка значительно сокращает время исследования. 2 н. и 2 з.п. ф-лы, 6 табл.
Изобретение относится к медицинской микробиологии и может быть использовано для определения жизнеспособности некультивируемых форм (НФ) Vibrio cholerae O1/O139 в водных объектах при мониторинговых исследованиях, в научно-исследовательской работе с НФ в экспериментах по индукции НС, при изучении устойчивости НФ к физическим и химическим воздействиям, в других исследованиях, в которых необходимо подтвердить жизнеспособность культуры, нивелировав отсутствие роста НФ на плотных питательных средах. Способ заключается в том, что проводят предварительную подготовку контрольных вегетативных культур V. cholerae O1 и V. cholerae O139 и исследуемых образцов, определяют во всех образцах концентрацию белка по Лоури, параллельно из всех образцов готовят препараты «раздавленная капля» с акридиновым оранжевым, фиксируя в люминесцентном микроскопе характер флуоресценции (зеленая - жизнеспособные, красная/оранжевая - мертвые), с последующим определением активности рибулозодифосфаткарбоксилазы (РДФК) радиоизотопным методом с меченым бикарбонатом. Результаты учитывают в сцинтилляционном счетчике, выражают в имп.мин/мкг белка. Наличие в исследуемой пробе активности РДФК указывает на жизнеспособность НФ V. cholerae O1/O139. Использование способа позволяет определить жизнеспособность НФ V. cholerae O1/O139 разного возраста в водной среде различного состава. 2 табл., 2 пр.

Изобретение относится к способам цитологического или гистологического анализа. Согласно способу производят обработку пробы для выделения патологических клеток среди здоровых. Получают множество изображений пробы, каждое из которых характеризует одну зону пластинки для анализа. Множество изображений, расположенных рядом друг с другом, образуют изображение всей пробы, в результате чего получают виртуальную пластинку для анализа. На полученной виртуальной пластинке выполняют компьютерную обработку по окрашиванию изображений. Указанное окрашивание соответствует виртуальному окрашиванию типа окрашивания по Папаниколау, Шорру, Маю-Грюнвальду-Гимзе или Гимзе. При этом обработка обеспечивает возможность менять указанные цвета и интенсивность цвета по усмотрению лица, производящего анализ. Технический результат - повышение достоверности и качества анализа. 7 з.п. ф-лы, 6 ил.
Изобретение относится к области медицинской микробиологии, а именно к способу диагностики токсигенных штаммов Clostridium difficile. Сущность способа состоит в том, что пробу кала пациента выдерживают в абсолютном 96% спирте 30-60 мин при соотношении спирта и кала 1:1, центрифугируют 15-20 минут, далее обрабатывают пробу кала 1% раствором дезоксихолата натрия при соотношении 1:1 30-60 минут, центрифугируют, удаляют надосадочную жидкость, затем проводят первичный посев осадка на среде с добавлением 1% лактозы и 0,5-1,0 мМ арабинозы, инкубируют в анаэростате в течение 24-48 ч, выросшие колонии наносят на стандартные диски, пропитанные хромогенным субстратом - орто-нитрофенил-β-D-галактозидазой. При появлении ярко-желтой окраски диска диагностируют токсигенные штаммы Clostridium difficile. Использование заявленного способа позволяет с высокой чувствительностью и специфичностью, простотой и доступностью диагностировать токсигенные штаммы Clostridium difficile. 3 пр.
Наверх