Способ получения пептидов


 

C07K1/18 - Пептиды (пептиды в пищевых составах A23, например получение белковых композиций для пищевых составов A23J, препараты для медицинских целей A61K; пептиды, содержащие бета-лактамовые кольца, C07D; циклические дипептиды, не содержащие в молекуле любого другого пептидного звена, кроме образующего их кольцо, например пиперазин-2,5-дионы, C07D; алкалоиды спорыньи циклического пептидного типа C07D519/02; высокомолекулярные соединения, содержащие статистически распределенные аминокислотные единицы в молекулах, т.е. при получении предусматривается не специфическая, а случайная последовательность аминокислотных единиц, гомополиамиды и блоксополиамиды, полученные из аминокислот, C08G 69/00; высокомолекулярные продукты, полученные из протеинов, C08H 1/00; получение

Владельцы патента RU 2544959:

Рязанов Евгений Михайлович (RU)
Бубнов Александр Владимирович (RU)
Островский Давид Исаакович (RU)

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен способ получения пептидов. Проводят автолиз дрожжей. Отделяют клеточные оболочки центрифугированием. Очищают автолизат на гелевом сульфокатионите в водородной форме, содержащем 12-16% дивинилбензола. Полученный водный раствор пептидов пропускают последовательно через гелевый анионит до получения раствора с рН 2,0-2,6, а затем через гелевый катионит с содержанием дивинилбензола 1-2% или макропористый катионит. Преимуществом заявленного способа является получение пептидов высокой степени очистки, которые обладают биологической активностью. 11 пр.

 

Изобретение относится к биотехнологии и касается способа получения пептидов из дрожжевых автолизатов.

В современных технологических процессах дрожжи используют в качестве сырья для получения различных продуктов, биологически активных веществ, аминокислот, нуклеиновых компонентов, витаминов и т.д. К числу известных способов переработки дрожжевой биомассы относится автолиз, осуществляемый собственными гидролитическими ферментами дрожжей. В ходе автолиза происходит накопление в автолизате свободных аминокислот, низших (ди-, три-, тетра-) пептидов и пептидов с более высокой молекулярной массой.

Известны способы получения биологически активных пептидов-аналогов природных пептидных регуляторов, иммуномодуляторов, морфиноподобных пептидов, антимикробных пептидов и других методами химического синтеза или химической модификации природных пептидных регуляторов или активной части их структуры (патенты РФ №№2043769, 2047621, 2060998, 2067000, 2087480, 2107691, 2126014, 2141527, 2145233, 2145234, 2146262, 2316336, 2478105, 2494105, 2182155, 2111215). Недостатком известных способов является необходимость информации о точной структуре природного аналога, дорогостоящая и сложная процедура пептидного синтеза из исходных производных аминокислот, не позволяющая зачастую получить промышленные количества продукта.

Известны способы получения природных пептидов из органов и тканей сельскохозяйственных животных (патенты РФ №№2075944, 2104702, 2161501, 2043364). Недостатком этого способа является дефицит этого вида природного сырья.

Известен способ получения продукта, содержащего гипотензивные пептиды и его применения в качестве антигипертензивного, годного в пищу продукта (патент РФ №2276689, МПК С12Р 21.02; A23J 1/20, публикация 2006 г.). Способ включает стадии ферментации казеинсодержащего заквасочного материала молочно-кислой бактерией, нанофильтрации полученного пептидсодержащего ферментационного продукта и выделения продукта. Полученный продукт используют в качестве антигипертензивного агента, а также как годный в пищу продукт.

Недостатком известного способа является невысокая степень очистки пептидов.

Известен способ получения пептидов и аминокислот из белкового сырья (патент РФ №2333663, МПК A23J 3/04, публикация 2008 г.), по которому сырьем служит казеин молока, а гидролиз его осуществляют в присутствии эндогенных ферментов и далее подвергают разделительной обработке, включающей коагуляцию белковых остатков.

Известен также способ получения пептидов с высоким содержанием триптофана (патент РФ №2043364, МПК C07K 1/12; A61K 38/01, публикация 1995 г.), включающий суспендирование белка фибриногена в воде, последующий щелочной и ферментативный гидролиз белка, инактивирование фермента при 90-100°C в течение 15-20 мин, центрифугирование гидролизата, осаждение конечного продукта из надосадочной жидкости ацетоном и сушку осадка.

Недостатком указанных способов является использование дефицитного сырья и экзогенных ферментов.

Известны способы получения смеси аминокислот и низших пептидов путем автолиза дрожжей с последующей очисткой целевого продукта на ионитах (например, патент США №2272982, патент Великобритании №952713, авт. свидетельства СССР №№957835, 1369300, 1731806).

Известен также способ получения смеси аминокислот и пептидов путем фильтрации автолизата через слабоосновный анионит ИА-1р с последующей сорбцией из фильтрата аминокислот и низших пептидов на сульфокатионите КУ-2×8, упариванием элюата и сушкой готового продукта (авт. свидетельство СССР №602543).

Существенными недостатками известных способов является высокое содержание в целевом продукте аминокислот, составляющих 70-76% от общего количества продукта, что обусловливает ограничение сферы использования продукта в качестве средства пищевого и фармакологического назначения, а также в виде пептидного компонента при создании микробиологических питательных сред и парфюмерных композиций.

Известен способ получения низкомолекулярных пептидов, обладающих интерферонстимулирующей активностью (патент РФ №2409678, МПК С12Р 21/00; C07K 1/34, публикация 2011 г.), согласно которому в качестве сырья используют отход при производстве препарата лактоглобулина, который подвергают диализу на полисульфидных мембранных фильтрах с диаметром пор 1 кДа против дистиллированной воды до достижения концентрации общего белка в препарате 3 мг/мл с последующим концентрированием методом ионообменной хроматографии в геле и элюцией 0,5М раствором хлорида натрия. Исходным сырьем для получения низкомолекулярных пептидов служит отход производства лактоглобулина против условно патогенных бактерий и сальмонелл (патент РФ №2298409, публикация 2007 г.), в соответствии с которым иммунное молозиво коров подвергают сбраживанию пепсином, удаляют творожную массу. Из полученной иммунной сыворотки молозива коров методом ультрафильтрации удаляют денатурированные белки и жир, получая очищенную лактосыворотку. Полученную лактосыворотку разделяют на ультрафильтрационной установке на две фракции: высокомолекулярную фракцию (лактоглобулин) и содержащий низкомолекулярные (1-5 кДа) пептиды фильтрат в качестве отхода производства, который и используют для получения НМП.

Существенным недостатком указанного способа является дефицит сырья (молозиво коров), крайне низкое содержание целевого продукта в отходе, требующее предварительной концентрации на мембранных фильтрах.

Известен способ получения смеси аминокислот и низших пептидов, включающий автолиз дрожжей, отделение клеточных оболочек центрифугированием и очистку автолизата на ионитах, отличающийся тем, что в качестве ионита используют гелевый сульфокатионит в водородной форме, содержащий в качестве сшивающего агента 12-16% дивинилбензола (патент РФ №2284356, МПК С12Р 13/06; A23J 1/18, публикация 2006 г. - ближайший аналог).

Недостатком указанного способа является то, что в отходе (проскоке с катионита) содержится ценный продукт - пептиды, который можно извлечь только с применением дополнительных операций выделения и очистки.

Целью настоящего изобретения является создание эффективного и экономичного способа получения высокоочищенной смеси пептидов из практически неограниченного возобновляемого сырья - дрожжей.

Указанная цель достигается тем, что в качестве сырья используется отход при производстве смеси аминокислот и низших пептидов из дрожжей, содержащий пептиды.

Сущность предложенного способа заключается в следующем.

Способ получения пептидов включает автолиз дрожжей, отделение клеточных оболочек центрифугированием, очистку автолизата на ионитах и получение водного раствора пептидов (проскок), при этом в качестве ионита используют гелевый сульфокатионит в водородной форме, содержащий в качестве сшивающего агента 12-16% дивинилбензола, при этом полученный водный раствор пептидов пропускают последовательно через гелевый анионит до получения раствора с pH 2,0-2,6, а затем через гелевый катионит с содержанием дивинилбензола 1-2% или макропористый катионит.

В ходе производственного процесса по выделению аминокислот и низших пептидов автолизат обрабатывают следующим образом: отделяют клеточные оболочки центрифугированием, полученный раствор подвергают ультрафильтрации через мембраны с номинальной отсекаемой молекулярной массой (НОММ) 5-15 кДа, ультрафильтрат подкисляют до pH 3,0 и пропускают через сульфокатионит в водородной форме, содержащий в качестве сшивающего агента 12-16% дивинилбензола. При этом аминокислоты и низшие пептиды сорбируются на катионите, а пептиды с более высокой молекулярной массой не сорбируются и концентрируются в отходе (проскоке). Это позволяет практически полностью отделить индивидуальные (свободные) аминокислоты от пептидов в одноактном процессе сорбции из автолизата, при этом целевой продукт - пептиды остаются в растворе.

Проскок представляет собой водный раствор целевого продукта (пептидов) с низким pH (1,0-1,2), перегруженный балластными органическими (пигментированными) и минеральными веществами. Сущность предложенного способа получения смеси пептидов заключается в выделении пептидов из проскока. Для этого проскок фильтруют через колонку с анионитом до получения раствора с pH 2,0-2,6 (предпочтительно 2,4), а затем пропускают через гелевый сульфокатионит в водородной форме с содержанием ДВБ 1-2% или через макропористый сульфокатионит. Десорбцию с катионита ведут 2,5-3,0% водным раствором аммиака, полученный элюат упаривают для отгонки аммиака и сушат на сублимационной сушилке.

Существенными преимуществами предлагаемого изобретения по сравнению с известными является то, что в ходе процесса достигается высокая степень очистки продукта от сопутствующих минеральных и органических веществ. Способ позволяет получать пептиды, не

содержащие аллергены и нуклеиновые компоненты, жиры, сахара и соли. Способ позволяет получать пептиды из практически неограниченного возобновляемого сырья - пекарских или пивных дрожжей. Получаемый по заявляемому способу продукт обладает выраженной биологической активностью.

Физико-химический анализ продукта показал, что содержание пептидов в сухом продукте составляет 88-92%, аминокислот 6-9%. Продукт состоит из смеси 22 индивидуальных пептидов с молекулярной массой от 0,8 до 2,5 кДа. В экспериментальном исследовании продукт показал выраженную противоишемическую активность, перспективен в плане профилактики и терапии ишемической болезни сердца.

Пример №1

35 л проскока, полученного после автолиза и извлечения аминокислотного продукта из 50 кг пекарских дрожжей, пропускают через колонну с сильно сшитым (12% ДВБ) сильноосновным анионитом Dowex 550А, объем анионита 3,5 л, подача 0,7 л/ч, затем анионит промывают 1,0 л дистиллированной воды. Получают 36 л раствора с pH 2,2. Полученный раствор фильтруют через колонну с макропористым сульфокатионитом Dowex MSC-1C в Н+ форме, объем катионита 10 л, объемная подача 10 л/ч, затем промывают катионит 4 л подкисленной (pH 1-2) воды и проводят десорбцию 3%) аммиаком. Получают 3 л элюата (pH 10,2), аммиак отгоняют на вакуум-выпарной установке до получения pH 8,5, полученный раствор сушат на сублимационнной сушилке. Получают 0,43 кг продукта, содержащего 90% пептидов и 7% аминокислот.

Пример №2

35 л проскока (pH 1,2), полученного после автолиза и извлечения аминокислотного продукта «Полифармин» из 50 кг пекарских дрожжей, пропускают через колонну с сильноосновным высокоемким полиакриловым гелевым анионитом Purolite А830 в ОН- форме, объем анионита 2,0 л, подача 0,7 л/ч, затем анионит промывают 0,5 л дистиллированной воды. Получают 35,5 л раствора с pH 2,4. Полученный раствор фильтруют через колонну с макропористым сульфокатионитом Dowex MSC-1C в H+ форме, объем катионита 10 л, объемная подача 10 л/ч, затем промывают катионит 4 л подкисленной (pH 1-2) воды и проводят десорбцию 3% аммиаком. Получают 3 л элюата (pH 10,2), аммиак отгоняют на вакуум-выпарной установке до получения pH 8,5, полученный раствор сушат на сублимационнной сушилке. Получают 0,44 кг продукта, содержащего 89% пептидов и 7% аминокислот.

Пример №3

35 л проскока (pH 1,2), полученного после автолиза и извлечения аминокислотного продукта «Полифармин» из 50 кг пекарских дрожжей, пропускают через колонну с анионитом Purolite А830 в ОН- форме, объем анионита 2,0 л, подача 0,7 л/ч, затем анионит промывают 0,5 л дистиллированной воды. Получают 35,5 л раствора с pH 2,4. Полученный раствор фильтруют через колонну с макропористым сульфокатионитом КУ-23 в Н+ форме, объем катионита 10 л, объемная подача 10 л/ч, затем промывают катионит 4 л подкисленной (pH 1-2) воды и проводят десорбцию 3% аммиаком. Получают 3,2 л элюата (pH 10,4), аммиак отгоняют на вакуум-выпарной установке до получения pH 8,5, полученный раствор сушат на сублимационнной сушилке. Получают 0,3 кг продукта, содержащего 76% пептидов и 8% аминокислот.

Пример №4

35 л проскока (pH 1,2), полученного после автолиза и извлечения аминокислотного продукта «Полифармин» из 50 кг пекарских дрожжей, пропускают через колонну с анионитом Purolite А830 в ОН- форме, объем анионита 2,0 л, подача 0,7 л/ч, затем анионит промывают 0,5 л дистиллированной воды. Получают 35,5 л раствора с pH 2,4. Полученный раствор фильтруют через колонну с гелевым слабо сшитым (1% ДВБ) катионитом Dowex W50×l в Н+ форме, объем катионита 13 л, объемная подача 10 л/ч, затем промывают катионит 4 л подкисленной (pH 1-2) воды и проводят десорбцию 3% аммиаком. Получают 3,2 л элюата (pH 10,3), аммиак отгоняют на вакуум-выпарной установке до получения pH 8,5, полученный раствор сушат на сублимационнной сушилке. Получают 0,42 кг продукта, содержащего 91% пептидов и 5% аминокислот.

Пример №5

35 л проскока (pH 1,2), полученного после автолиза и извлечения аминокислотного продукта «Полифармин» из 50 кг пекарских дрожжей, пропускают через колонну с анионитом, объем анионита 2 л, подача 0,7 л/ч, затем анионит промывают 0,5 л дистиллированной воды. Получают 35,5 л раствора с pH 2,4. Полученный раствор фильтруют через колонну с гелевым сульфокатионитом Dowex W50×2, содержащим 2% сшивки (ДВБ) в Н+ форме, объем катионита 10 л, объемная подача 10 л/ч, затем промывают катионит 4 л подкисленной (pH 1-2) воды и проводят десорбцию 3% аммиаком. Получают 2,7 л элюата (pH 10,1), аммиак отгоняют на вакуум-выпарной установке до получения pH 8,5, полученный раствор сушат на сублимационнной сушилке. Получают 0,4 кг продукта, содержащего 88% пептидов и 9% аминокислот.

Пример №6

35 л проскока (pH 1,2), полученного после автолиза и извлечения аминокислотного продукта «Полифармин» из 50 кг пекарских дрожжей, пропускают через колонну с анионитом, объем анионита 2 л, подача 0,7 л/ч, затем анионит промывают 0,5 л дистиллированной воды. Получают 35,5 л раствора с pH 2,4. Полученный раствор фильтруют через колонну с гелевым сульфокатионитом Dowex W50×4 (4% ДВБ) в Н+ форме, объем катионита 10 л, объемная подача 10 л/ч, затем промывают катионит 4 л подкисленной (pH 1-2) воды и проводят десорбцию 3% аммиаком. Получают 2,7 л элюата (pH 10,1), аммиак отгоняют на вакуум-выпарной установке до получения pH 8,5, полученный раствор сушат на сублимационнной сушилке. Получают 0,22 кг продукта, содержащего 75% пептидов и 8% аминокислот.

Пример №7

35 л проскока (pH 1,2), полученного после автолиза и извлечения аминокислотного продукта «Полифармин» из 50 кг пекарских дрожжей, пропускают через колонну с анионитом Purolite А830 в ОН- форме, объем анионита 2,2 л, подача 0,7 л/ч, затем анионит промывают 0,5 л дистиллированной воды и получают 35,5 л раствора с pH 2,7. Полученный раствор фильтруют через колонну с макропористым сульфокатионитом Dowex MSC-1C в Н+ форме, объем катионита 10 л, объемная подача 10 л/ч, затем промывают катионит 4 л подкисленной (pH 1-2) воды и проводят десорбцию 3% аммиаком. Получают 3 л элюата (pH 10,2), аммиак отгоняют на вакуум-выпарной установке до получения pH 8,5, полученный раствор сушат на сублимационнной сушилке. Получают 0,40 кг продукта, содержащего 87% пептидов и 9% аминокислот.

Пример №8

35 л проскока (pH 1,2), полученного после автолиза и извлечения аминокислотного продукта «Полифармин» из 50 кг пекарских дрожжей, пропускают через колонну с анионитом Purolite А830 в ОН- форме, объем анионита 1,8 л, подача 0,7 л/ч, затем анионит промывают 0,5 л дистиллированной воды и получают 35,5 л раствора с pH 1,9. Полученный раствор фильтруют через колонну с макропористым сульфокатионитом Dowex MSC-1C в Н+ форме, объем катионита 10 л, объемная подача 10 л/ч, затем промывают катионит 4 л подкисленной (pH 1-2) воды и проводят десорбцию 3% аммиаком. Получают 3 л элюата (pH 10,2), аммиак отгоняют на вакуум-выпарной установке до получения pH 8,5, полученный раствор сушат на сублимационнной сушилке. Получают 0,39 кг продукта, содержащего 85% пептидов и 9% аминокислот.

Пример №9

35 л проскока с pH 1,2, полученного после автолиза и извлечения аминокислотного продукта «Полифармин» из 50 кг пекарских дрожжей, пропускают через колонну с макропористым сульфокатионитом Dowex MSC-1C в H+ форме, объем катионита 10 л, объемная подача 10 л/ч, и поступают, как в примере №1. Получают 0,15 кг продукта, содержащего 91% пептидов и 8% аминокислот.

Пример №10

28 л проскока (pH 1,2), полученного после автолиза и извлечения аминокислотного продукта «Полифармин» из 50 кг пекарских дрожжей, пропускают через колонну с анионитом Purolite А830 в ОН- форме, объем анионита 1,6 л, подача 0,7 л/ч, затем анионит промывают 0,5 л дистиллированной воды. Получают 28,5 л раствора с pH 2,3. Полученный раствор фильтруют через колонну с макропористым сульфокатионитом Dowex MSC-1C в Н+ форме, объем катионита 10 л, объемная подача 10 л/ч, затем промывают катионит 4 л подкисленной (pH 1-2) воды и проводят десорбцию 3%>аммиаком. Получают 2,9 л элюата (pH 10,1), аммиак отгоняют на вакуум-выпарной установке до получения pH 8,5, полученный раствор сушат на сублимационной сушилке. Получают 0,33 г продукта, содержащего 90% пептидов и 7% аминокислот.

Пример №11

Продукт «Поликардин», полученный по примеру №2, использовали для изучения биологической активности при экспериментальном инфаркте миокарда. Моделирование инфаркта миокарда проводили перевязкой левой коронарной артерии крыс. Препаратом сравнения служил стандартный лекарственный препарат - антигипоксант «Ренитек». Препараты вводили интрагастрально 1 раз в сутки курсом 5 дней до экспериментального инфаркта миокарда и курсом 7 дней после, в виде водных растворов, Ренитек в дозе 1 мг/кг. Поликардин в дозе 100 мг/кг. Обнаружено, что БАД «Поликардин» достоверно обладает противоишемическим действием, сопоставимым с таковым у препарата «Ренитек», препятствует формированию очага некроза и достоверно повышает выживаемость экспериментальных животных в условиях острой гипоксии.

Способ получения пептидов, включающий автолиз дрожжей, отделение клеточных оболочек центрифугированием, очистку автолизата на ионитах и получение водного раствора пептидов, при этом в качестве ионита используют гелевый сульфокатионит в водородной форме, содержащий в качестве сшивающего агента 12-16% дивинилбензола, отличающийся тем, что полученный водный раствор пептидов пропускают последовательно через гелевый анионит до получения раствора с pH 2,0-2,6, а затем через гелевый катионит с содержанием дивинилбензола 1-2% или макропористый катионит.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к очистке различных гамма-карбоксилированных форм полипептида с использованием ионообменной хроматографии. В частности, согласно изобретению предложен способ очистки полипептида, имеющего желаемое содержание гамма-карбоксиглутаминовой кислоты, из образца, содержащего смесь вариантов указанного полипептида, имеющих различные содержания гамма-карбоксиглутаминовой кислоты, при этом указанный способ включает стадии: (а) загрузки указанного образца на анионообменный хроматографический материал; (b) элюирования указанного полипептида с использованием раствора при рН менее чем 9,0, содержащего по меньшей мере одну соль, выбранную из ацетата аммония, хлорида аммония и ацетата натрия; и (с) отбора фракции, полученной после указанного элюирования, при этом полипептиды в данной фракции имеют желаемое содержание гамма-карбоксиглутаминовых кислот.

Изобретение относится к биотехнологии. Предложена композиция антитела для лечения HER2-позитивного рака, содержащая в качестве активного начала антитело, характеризующееся наличием вариабельной области лёгкой и тяжёлой цепи, и его кислые варианты, а именно: гликозилированный, дезаминированный варианты, а также вариант с восстановленной дисульфидной связью, сиалилированный вариант и невосстанавливаемый вариант.

Изобретение относится к области генной инженерии, конкретно к получению пептида GLP-1, модифицированного олигосахаридной цепью, и может быть использовано в медицине для лечения или профилактики заболеваний, ассоциированных с GLP-1.

Настоящее изобретение относится к новой сепарационной матрице, содержащей лиганд, присоединенный к основе. Матрица может быть использована при очистке белков, где белок представляет собой антитело, фрагмент антитела или слитый белок, содержащий антитело.

Изобретение относится к способу очистки циклического липопептида формулы I или его соли. Способ включает стадии: (1) экстракции ферментативного бульона, содержащего соединение формулы I или его соль, с получением экстракта 1 после фильтрации или центрифугирования; (2) разбавления или концентрирования экстракта 1 в вакууме со снижением содержания органического растворителя, с получением экстракта 2; (3) загрузки экстракта 2 в макропористую адсорбционную смолу; (4) промывки макропористой адсорбционной смолы водой или смесью воды и органического растворителя в качестве промывного раствора и (5) элюирования соединения формулы 1 из макропористой адсорбционной смолы смесью воды и органического растворителя в качестве элюента.

Изобретение относится к области биотехнологии и касается рекомбинантной плазмидной ДНК pPA-OPRFI, кодирующей гибридный рекомбинантный белок F-I наружной мембраны Pseudomonas aeruginosa, штамма бактерий E.coli PA-OPRFI, продуцента такого гибридного белка и способа получения указанного рекомбинантного белка.

Изобретение относится к фармацевтически приемлемым кристаллическим или аморфным солям D-изоглутамил-D-триптофана, способам их получения, фармацевтическим композициям, которые их содержат, и их применению для получения фармацевтических композиций для лечения различных состояний и/или заболеваний.

Изобретение относится к кормовым добавкам, содержащим дипептиды или их соли, при этом один аминокислотный остаток дипептида представляет собой DL-метионильный остаток, а другой аминокислотный остаток дипептида представляет собой аминокислоту в L-конфигурации, выбранную из группы, включающей лизин, треонин, триптофан, гистидин, валин, лейцин, изолейцин, фенилаланин, аргинин, цистеин и цистин.

Изобретение относится к способу очистки циклических липопептидов или их солей. Предложенный способ включает стадии: (1) загрузки неочищенного соединения Формулы I в макропористую адсорбционную смолу; (2) промывки макропористой адсорбционной смолы водой, органическим растворителем или смешанным раствором органического растворителя и воды в качестве промывной жидкости; и (3) элюирование соединения Формулы I из макропористой адсорбционной смолы с помощью воды, органического растворителя или смешанного раствора органического растворителя и воды в качестве элюента, где на стадии (1) раствор, содержащий неочищенное соединение Формулы I, содержит способные к ионизации соли; и макропористая адсорбционная смола выбрана из неполярной ароматической адсорбционной смолы, полимеризованной из стирола и дивинилбензола, или метакриловой адсорбционной смолы средней полярности с остатками метакрилата в структуре.
Настоящее изобретение относится к казеинсукцинилату железа (III), в котором содержание железа составляет от 4,5 масс.% до 7 масс.%, растворимость в воде составляет приблизительно более чем 92%, и его соотношение фосфор/азот составляет более чем примерно 5 масс.%.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к иммуностимулирующим соединениям, и может быть использовано в медицине. Иммуностимулирующий пептид с аминокислотной последовательностью XLYDKGYTSKEQKDCVGI, где N-концевой X представляет собой N-ацетилаланин, ковалентно связывают с жирными кислотами, выбранными из С2-С25, с получением PDAG (пептидил-2,3-диацилглицерида). Полученное соединение используют в составе фармацевтической композиции для стимуляции иммунного ответа. Изобретение позволяет эффективно стимулировать иммунный ответ у индивидуума и усиливать иммуногенность антигенного пептида при совместном введении его с PDAG. 6 н. и 23 з.п. ф-лы, 10 ил., 9 пр.

Изобретение относится к области биотехнологии. Предложен способ получения рекомбинантного белка интерфероноподобного фактора III типа (ИПФ III) штамма-продуцента E. coli. Осуществляют отмывку и растворение тел включения E. coli с использованием 2% водного раствора γ-циклодекстрина. Далее последовательно проводят хроматографии на Ni-Sepharose, Q-Sepharose и SP-Sepharose. Далее осуществляют рефолдинг целевого белка с использованием смеси цистеамина и цистамина при рН 10,5. Затем последовательно проводят хроматографии на Amberchrome Profile ХТ20, Amberchrome Profile HPR10 и Kromasil 300-5С18. Изобретение позволяет оптимизировать условия очистки ИПФ III на этапах отмывки и растворения тел включения клеток E.coli и обеспечивает 12% выход целевого белка.3 ил., 4 пр.

Группа изобретений касается ингибитора секреции сидерофоров (SSI) и способа его выделения. Представленный способ получения SSI включает следующие этапы. Штамм Yersinis pestis КМ 1279 выращивают на 1,5% агаре LB, бактерии трехкратно отмывают холодным забуференным физраствором. Бактерии осаждают центрифугированием, суспендируют в растворе 5 мМ NaOH, выдерживают при 37°C два часа и осаждают клетки центрифугированием. Супернатант отбирают и процедуру повторяют трижды, три супернатанта объединяют и фильтруют через нитроцеллюлозную мембрану. Фильтрат трехкратно экстрагируют смесью хлороформ-метанол-вода в соотношении 5:2:1. Хлороформные фракции отделяют центрифугированием, объединяют и освобождают от водорастворимых примесей. Водную фракцию отделяют центрифугированием и удаляют, а хлороформную фракцию высушивают в вакуумном роторном испарителе и получают сухой препарат SSI. Предложенный SSI характеризуется коричневой окраской сухих кристаллов, гидрофобными свойствами, флуоресценцией в ультрафиолете, липопептидной природой, присутствием ионов железа, молекулярной массой 380,6 Да. Представленные изобретения позволяют получить природный регулятор вирулентности возбудителя чумы. 2 н.п. ф-лы, 3 ил., 3 фото, 6 пр.

Изобретение относится к области пептидной химии и касается получения диацетата трипептида H-β-Ala-Pro-DabNHBzl, относящегося к биологически активному соединению, используемому в косметической промышленности в качестве активного компонента для косметических средств, в частности для стимуляции омоложения кожи, разглаживания морщин, предотвращения появления морщин. Способ основан на 6-стадийном синтезе и не содержит стадий постановки и снятия защитных групп. Способ включает ацилирование пролина β-хлорпропионилхлорида, последующее получение пентафторфенилового эфира N-(3-хлорпропионил)пролина в присутствии N,N′-дициклогексилкарбодиимида. Далее конденсацией полученного пентафторфенилового эфира с монометиловым эфиром глутаминовой кислоты получают N-(β-хлорпропионил)-Pro-Glu(δ-OMe)OH. Осуществляют амидирование бензиламином, одновременный последующий аммонолиз и замещение хлора на аминогруппу. Получают трипептид β-Ala-Pro-Glu(δ-NH2)NHBzl, осуществляют перегруппировку по Гофману с использованием диацетата йодобензола и получают целевой продукт. Способ отличается простотой, эффективностью, является более экономичным, использует более доступные и дешевые реагенты. 6 пр.
Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для получения антимикробных белков и пептидов насекомого. Способ получения комплекса антимикробных пептидов насекомого предусматривает инфицирование жирового тела насекомого на стадии личинки бактериями Micrococcus luteus А270 и Escherichia coli D31 с последующим извлечением жирового тела насекомого на стадии личинки. Жировое тело насекомого помещают в питательную среду, содержащую водный раствор сахаров, неорганических солей и антибиотик меропенем в заданном соотношении и инкубируют в течение суток с последующей элюцией комплекса антимикробных пептидов насекомого из культуральной жидкости методом обращенно-фазовой хроматографии на колонке Vydac С18 при линейном градиенте ацетонитрила от 0% до 50%. Изобретение позволяет упростить способ получения антимикробных пептидов. 5 ил., 4 пр.

Изобретение относится к области получения и выделения однодоменных молекул (SDAB). Описан способ выделения или очистки SDAB молекулы, которая представляет собой трехвалентную молекулу нанотела ATN-103, направленную на TNFα и HAS, из смеси, содержащей указанную SDAB молекулу и одно или более загрязняющих веществ. Приводят смесь в контакт с катионообменным носителем в условиях, которые позволяют SDAB молекуле связываться с носителем или абсорбироваться на носителе. Удаляют одно или более загрязняющих веществ и селективно элюируют SDAB с носителя. При этом проводимость среды для кондиционирования (СМ), используемой для загрузки носителя, составляет от примерно 12 до 9 мСм/см и рН в условиях загрузки корректируют до величины от 4,0 до 4,3. Буфер для элюирования соответствует примерно 50 мМ хлорида натрия или меньше и имеет рН от примерно 5,5 до 7,2. Раскрыт способ или процесс получения рекомбинантного SDAB ATN-103. Поддерживают клетку-хозяина в условиях, при которых экспрессируется рекомбинантная SDAB ATN-103. Получают смесь SDAB молекулы и одного или более загрязняющих веществ. Очищают или выделяют SDAB ATN-103, используя катионообменную хроматографию, как указано выше. Использование изобретения обеспечивает новые способы выделения или очистки нанотела, что может найти применение при получении нанотела ATN-103. 2 н. и 17 з.п. ф-лы, 4 ил., 6 пр.
Изобретение относится к области биотехнологии, в частности к способу выделения проурокиназы М5 из телец включения, содержащих данную проурокиназу. Способ включает стадии разрушения телец включения, ренатурации и очистки белка. Перед проведением ренатурации проводят предочистку белка хроматографией на Q-Сефарозе и SP-Сефарозе с использованием совмещенных колонок с Q- и SP-Сефарозой. Проводят, после ренатурации, хелатную и ионообменную хроматографию рекомбинантной проурокиназы М5 без промежуточной элюции целевого белка с использованием металлхелатного сорбента, активированного ионами Со2+ или Zn2+. Предложенное изобретение позволяет выделять проурокиназу М5 из телец включения, содержащих данную проурокиназу, с высоким выходом. 2 н. и 2 з.п. ф-лы, 2 табл., 4 пр.
Изобретение относится к биотехнологии получения гемостатических препаратов. Предложен способ выделения очищенного концентрата фибриногена, свободного от вирусов и балластных белков. Осуществляют солюбилизацию криопреципитата свежезамороженной плазмы человека. Осаждают фибриноген 20-30% раствором ПЭГ. Растворяют отобранный осадок в буфере с цитратом натрия и хлоридом натрия. Проводят вирусную инактивацию раствора сольвент-детергентным методом в присутствии 1-3% Tween-80 и 0,1-1,5% три-н-бутилфосфата. Очищают полученный концентрат от продуктов вирусной инактивации и сольвент-детергентов экстракцией вазелиновым маслом, проводимой трехкратно. Далее переосаждают полученный концентрат фибриногена 1,0-2,5 М раствором глицина. Осуществляют стерильную фильтрацию и лиофильное высушивание с последующим укупориванием лиофилизата под вакуумом и термоинактивацией. Изобретение позволяет получать лиофилизированную форму концентрата фибриногена с выходом около 55%.

Изобретение относится к способу получения множества продуктов из биомассы видов водных растений. Получают биомассу, разрушают ее, разделяют указанную биомассу с получением сока и твердой фазы, фильтруют и осветляют сок. Коагулируют белок из осветленного сока с получением бульона, включающего влажный белковый концентрат. Отделяют указанный концентрат от бульона. Сушат влажный белковый концентрат с получением сухого белкового концентрата. Твердую фазу используют для получения влажного биосырья. Сушат указанное биосырье с получением по меньшей мере одного продукта, выбранного из сухого биосырья и богатой углеводами муки. Способ является экологичным и позволяет получить множество продуктов, выбранных из сухого белкового концентрата, сухого биосырья и богатой углеводами муки. По меньшей мере 50% белка во множестве продуктов присутствует в концентрации сухого белка. 34 з.п. ф-лы, 39 ил., 7 табл., 25 пр.

Изобретение касается применения композиции, включающей гидролизат горохового белка и/или пептид для получения композиции для лечения и/или профилактики инфекции Helicobacter pylori (варианты), а также таких композиций (варианты). Охарактеризованные композиция включают липидную, белковую и углеводную составляющую, в которой белковая составляющая включает источник белка, состоящий из гидролизата горохового белка, полученный гидролизом протеазой, иной, чем химотрипсин, или из пептидов, выбираемых из группы, состоящей из Xaan-Asp-Phe-Leu-Glu-Asp-Ala-Phe-Asn-Val-Asn-Arg-Xaam и Xaan-Glu-Leu-Ala-Phe-Pro-Gly-Ser-Ala-Gln-Glu-Val-Asp-Arg-Xaam, где каждый Хаа независимо может быть любой аминокислотой, и n и m являются целыми числами, независимо варьирующимися от 0-10, где пептид содержится в гидролизате горохового белка, или из того и другого. Представленные изобретения позволяют лечить или предотвращать заболевания, вызванные инфекцией Helicobacter pylori, и/или заболевания, ассоциированные с инфекцией Helicobacter pylori у млекопитающих. 5 н. и 12 з.п. ф-лы, 2 табл., 1 пр.
Наверх