Способ получения диацетата трипептида



Способ получения диацетата трипептида
Способ получения диацетата трипептида

 

C07K1/107 - Пептиды (пептиды в пищевых составах A23, например получение белковых композиций для пищевых составов A23J, препараты для медицинских целей A61K; пептиды, содержащие бета-лактамовые кольца, C07D; циклические дипептиды, не содержащие в молекуле любого другого пептидного звена, кроме образующего их кольцо, например пиперазин-2,5-дионы, C07D; алкалоиды спорыньи циклического пептидного типа C07D519/02; высокомолекулярные соединения, содержащие статистически распределенные аминокислотные единицы в молекулах, т.е. при получении предусматривается не специфическая, а случайная последовательность аминокислотных единиц, гомополиамиды и блоксополиамиды, полученные из аминокислот, C08G 69/00; высокомолекулярные продукты, полученные из протеинов, C08H 1/00; получение

Владельцы патента RU 2551276:

Закрытое акционерное общество "Фарм-Синтез" (RU)

Изобретение относится к области пептидной химии и касается получения диацетата трипептида H-β-Ala-Pro-DabNHBzl, относящегося к биологически активному соединению, используемому в косметической промышленности в качестве активного компонента для косметических средств, в частности для стимуляции омоложения кожи, разглаживания морщин, предотвращения появления морщин. Способ основан на 6-стадийном синтезе и не содержит стадий постановки и снятия защитных групп. Способ включает ацилирование пролина β-хлорпропионилхлорида, последующее получение пентафторфенилового эфира N-(3-хлорпропионил)пролина в присутствии N,N′-дициклогексилкарбодиимида. Далее конденсацией полученного пентафторфенилового эфира с монометиловым эфиром глутаминовой кислоты получают N-(β-хлорпропионил)-Pro-Glu(δ-OMe)OH. Осуществляют амидирование бензиламином, одновременный последующий аммонолиз и замещение хлора на аминогруппу. Получают трипептид β-Ala-Pro-Glu(δ-NH2)NHBzl, осуществляют перегруппировку по Гофману с использованием диацетата йодобензола и получают целевой продукт. Способ отличается простотой, эффективностью, является более экономичным, использует более доступные и дешевые реагенты. 6 пр.

 

Изобретение относится к области пептидной химии и конкретно касается получения диацетата трипептида H-β-Ala-Pro-DabNHBzl (Syn-Ake), относящегося к биологически активным соединениям и используемого в качестве активного компонента для косметических средств.

Синтетические пептиды широко используются как в фармацевтической промышленности, так и в современной косметологии. В частности, Syn-Ake вызывает стимуляцию омоложения кожи за счет разглаживания морщин и относится к группе пептидов ботулоподобного действия (блокаторы нейромышечной передачи) наряду с такими синтетическими пептидами, как, например, Аргирелин (Аргирелин NP, ацетил гексапептид-3, ацетил гексапептид-8), SNAP-8 (ацетил глутамил гептапептид-1, EEMQRPA) (DERMAQUEST SKIN THERAPY, http://WWW.Dermaquestinc.Ru), Leuphasyl (пентапептид-18), Vialox (пентапептид-3), Inyline (ацетил гексапептид-25).

Особенности синтеза пептидов определенного строения являются следствием бифункциональности исходных аминокислот и, следовательно, возможности образования пептидных связей как между различными, так и между одинаковыми молекулами аминокислот. Для предотвращения этих осложнений необходимо защищать амино- или карбоксильную группу. Защитная группа должна устанавливаться селективно именно по защищаемой группе и удаляться в таких условиях, в которых не будут затрагиваться остальные функциональные группы в составе молекул. Кроме того, желательно, чтобы защита ставилась и снималась с высоким выходом. Например, один из наиболее распространенных способов защиты (блокировки) аминогруппы заключается во взаимодействии аминокислоты с бензилхлорформиатом или третбутоксикарбонильной группой (БОК) («Химический синтез пептидов», г. Киев, Наук. думка, 1992).

В пептидной химии широко используют ступенчатый способ получения пептидов путем наращивания цепи с C-конца исходной аминокислоты с применением активированных производных аминокислот, например пентафторфениловых эфиров (Боданский М., Клаузнер Я.С. Активированные эфиры и стратегия пептидного синтеза. - Химия полипептидов. Под ред. П. Катосояниса. М., «Мир», 1977, с.30-51).

В WO 2006047900, 11.05.2006 (или US 7964630) описаны соединения, в частности пептиды H-Ala-Pro-Arg-Arg-NHBzl, H-β-Ala-Pro-Dab-NHBzl, H-Dap-Pro-Arg-NHBzl и кислотно-аддитивные соли этих соединений, такие как соли, например, уксусной кислоты, трифторуксусной кислоты и др. Данные соединения - пептиды - пригодны для сглаживания мимических и возрастных морщин в коже человека. Данные соединения (пептиды) могут быть получены в соответствии с известными методами в химии пептидов, включая полностью синтез этих соединений, при необходимости отщепления (снятия) защитной группы, необязательное алкилирование свободной аминогруппы или превращение его в функцию гуанидино и/или этерификацию или амидирование свободной карбоксильной группы, и/или преобразование полученного основного соединения в кислотно-аддитиную соль, и/или получение кислотно-аддитивной соли в другую соль.

Так, в случае синтеза H-β-Ala-Pro-DabNHBzl известный способ состоит из 10 стадий (включая стадии постановки защитных групп) и в качестве исходных аминокислот использует L-пролин, L-2,4-диаминомасляную кислоту (DabOH) и β-аланин. Следует отметить, что L-(DabOH) не является природной аминокислотой и имеет достаточно высокую стоимость.

Диацетат H-β-Ala-Pro-DabNHBz (Syn-Ake) - уксуснокислая соль синтетического пептида, действие которого направлено на непосредственное и длительное расслабление мимических морщин. Это действие подобно действию протеина, содержащегося в яде храмовой куфии (Tropidolaemus wagleri), который препятствует передаче нервных импульсов на мышцы. Применение его в косметике позволяет не только разглаживать мелкие мимические морщины, но и предотвращает их дальнейшее появление (Fragrance Journal V34, N10, h.93-98 (2006). DE 202012002309, Anti-aging cosmetic foam, 2012)

Задачей данного изобретения является упрощение процесса получения, исключение реагентов на постановку и снятие защитных групп, снижение себестоимости производства диацетата H-β-Ala-Pro-DabNHBzl (I).

Заявленный способ относится к области пептидной химии, конкретно к способу получения диацетата H-β-Ala-Pro-DabNHBzl, используемого в качестве биологически активного компонента для косметических средств, формулы I:

и имеет своей целью разработку простого и удобного способа синтеза целевого соединения. Сущность изобретения заключается в том, что трипептид (I) получают в результате 6 стадийного синтеза без использования стадий постановки и снятия защитных групп и включающей следующие стадии многоступенчатого синтеза пептида:

1. Ацилирование пролина в диоксане β-хлорпропионилхлоридом с использованием избытка пролина в качестве акцептора хлористого водорода дает N-(3-хлорпропионил)пролин (II);

2. Реакция (II) пентафторфенола в этилацетате в присутствии N,N′-дициклогексилкарбодиимида (ДЦК) приводит к петафторфениловому эфиру N-(3-хлорпропионил)пролин (III);

3. Конденсация III с монометиловым эфиром глутаминовой кислоты в диметилформамиде дает N-(β-Хлорпропионил)-Pro-Glu(δ-OMe)OH (IV);

4. Амидирование IV бензиламином с использованием HOBt и ДЦК с образованием N-(β-хлорпропионил)-Pro-Glu(δ-OMe)NHBzl (V);

5. Одновременный аммонолиз и замещение хлора на аминогруппу в V, выполненный в метанольном растворе аммиака, приводит к трипептиду гидрохлориду β-Ala-Pro-Glu(δ-NH2)NHBzl (VI);

6. Перегруппировка по Гофману VI с использованием в качестве реагента диацетата иодбензола дает целевой I.

Используемые выше и ниже сокращения обозначают:

Pro - пролин;

Ala - аланин;

HOBt - 1-гидроксибензотриазол;

ДЦК - N,N′-дициклогексилкарбодиимид;

Bzl - бензил;

Dab - 2,4-диаминомасляная кислота;

AcOH - уксусная кислота;

β-Ala - бета-аланин (3-аминопропионовая кислота).

Итак, решение поставленной задачи достигается 6 стадийным синтезом, не использующим в качестве исходного реагента L-DabOH и не содержащим стадии постановки и снятия защитных групп:

Как видно из нижеприведенных примеров, заявленный в качестве изобретения способ отличается простотой, отсутствием стадий постановки и снятия защитных групп и использует более доступные и дешевые реагенты и исходные продукты.

Разработанный метод позволяет не только упростить процесс получения целевого соединения (уменьшает количество стадий синтеза), но и делает его экономически более эффективным (более доступное и дешевое сырье, отсутствие стадий постановки и снятия защитных групп).

На первой стадии ацилирования L-пролина используют в качестве акцептора выделяющегося хлористого водорода избыток пролина. Процесс проводят при комнатной температуре в диоксане. Выделяющийся гидрохлорид пролина удаляют фильтрованием. Остаток пролина отмывают кислым раствором хлористого натрия (pH 1) и после удаления растворителя в вакууме и промывки остатка серным и петролейным эфиром получают II в виде вязкой прозрачной жидкости (чистота 97.8%).

Пентафторфениловый эфир III получают реакцией II с пентафторфенолом в этилацетате. В качестве конденсирующего агента используют ДНК. Реакцию проводят при комнатной температуре в течение 2 ч. После отделения дициклогексилмочевины фильтрованием, удаления растворителя в вакууме и растирания остатка в петролейном эфире получают кристаллический III с содержанием основного вещества 95.1%.

Взаимодействие III и гидрохлорида монометилового эфира глутаминовой кислоты в диметилформамиде в течение 20 ч при комнатной температуре дает IV. N-Метилморфолин используют для связывания хлористого водорода. Диметилформамид удаляют в вакууме, остаток растворяют этилацетате и отмывают основные примеси лимоннокислым водным раствором хлористого натрия. После отгонки растворителя в вакууме и растирания в системе растворителей хлороформ - диэтиловый эфир 1:1 получают аморфный IV с содержанием основного вещества 94.6%.

Амидирование IV бензиламином проводят в растворе диметилформамида при 5°C с использованием HOBt и ДЦК в течение 18 ч. Увеличение температуры выше 5°C приводит к снижению чистоты конечного продукта за счет побочных реакций: образования бис-бензиламида и нуклеофильного замещения атома хлора. Полученный аморфный V содержит 95.9% основного вещества.

При взаимодействии V с аммиаком в метиловом спирте (20% раствор) происходит одновременный аммонолиз метилового эфира и замена хлора на аминогруппу. Реакцию проводят в герметичном стальном сосуде (для предотвращения испарения аммиака) в течение 70-80 ч. После удаления метилового спирта в вакууме и затирания в тетрагидрофуране остатка получают аморфное вещество с содержанием VI 63%. Дополнительная хроматографическая очистка на силикагеле дает VI с содержанием основного вещества 96.8%.

Целевой I получают перегруппировкой по Гофману VI в смеси диоксан - пиридин с использованием диацетата иодбензола при температуре 5°C. Дробное прибавление диацетата иодбензола позволяет уменьшить побочные процессы и увеличивает выход I. Оптимальное мольное соотношение диацетата иодбензола/VI 4-5/1. Окончательную очистку I и перевод его в диацетатную форму проводят препаративной ВЭЖХ.

Чистота полученного диацетата H-β-Ala-Pro-DabNHBz и его полупродуктов подтверждена ВЭЖХ и ЯМР спектроскопией. Аналитическую ВЭЖХ проводили на хроматографе фирмы Shimadzu. Колонка: Grom-Sil 12J ODS-4HE, 5 µm, 250*4,6 mm. Условия: градиент 20%B (0 мин) 60%B (10 мин) 70%B (15 мин) 70%B (30 мин). A - фосфатный буфер pH 3 (20,4 г KH2PO4 растворяли в 3 л дистиллированной воды и доводили pH до 3 добавлением концентрированной фосфорной кислоты), B - ацетонитрил. Спектры ПМР получены на приборе Bruker AM-360 (рабочая частота 360.13 МГц). Спектры ЯМР 13C получены на приборе Bruker AM-360 (рабочая частота 90.56 МГц). ИК-спектры получены на ИК-фурье спектрометре Nicolet 6700 (Thermo Scientific) в таблетке с KBr (2.5 мг/300 мг KBr). Угол удельного вращения измеряли на автоматическом поляриметре "OTAGO" AP-300. Спектры ESI-MS регестрировали на приборе "Agilent LC/MS 1200" при ионизации пробы электрораспылением в режиме регистрации положительных ионов. Пробы готовили в системе ацетонитрил/вода 1/1, концентрация 2 мг/мл. Условия анализа: поток 1 мл/мин, давление на нибулайзере 20 psi, температура 360°C, скорость потока осушающего газа 9 л/мин, напряжение 3500 B, целевая масса от 100 до 2000.

Описываемый способ иллюстрируется следующими примерами.

Экспериментальная часть

Пример 1. N-(3-Хлорпропионил)пролин (II)

Суспендируют 53 г (0.46 моль) L-пролина в 300 мл безводного диоксана при комнатной температуре. При перемешивании прикапывают 29.5 г (0.18 моль) β-хлорпропионилхлорида (разогрев до 35-45°C). Перемешивают реакционную массу при комнатной температуре 5 ч. Отфильтровывают выпавший осадок гидрохлорида пролина, промывают его на фильтре 50 мл диоксана и объединенные органические фазы отгоняют в вакууме (45°C, 30 мм рт.ст.) до прекращения отгонки. Растворяют остаток в 150 мл этилацетата. Промывают полученный раствор 2 раза по 50 мл насыщенным водным раствором хлорида натрия, подкисленного до pH до 1 концентрированной соляной кислотой. Разбавляют 50 мл гексана, сушат сульфатом натрия и упаривают в вакууме до полной отгонки растворителей (50°C, 3 мм рт.ст.). Вязкий остаток разбавляют 50 мл серного эфира, перемешивают 10 мин и добавляют 50 мл петролейного эфира. Жидкую фазу декантируют, масло промывают 100 мл петролейного эфира и сушат в вакууме до постоянного веса (50°C, 3 мм рт.ст.). Получают 25.5 г (68.9%) бесцветной очень вязкой жидкости. Содержание основного вещества 97.8% (ВЭЖХ). [ α ] D 25 = 74.95 (5% р-р, метанол); ESMS, m/z (I%): 206.5 [M+H]+ (100), 228.2 [M+Na]+ (28.4), 433.3 [2M+Na]+ (94.0). Спектр ЯМР 1H (CDCl3, δ, м.д.): 1.84-2.27 (m, 4H, β-CH 2-Pro+γ-CH 2-Pro), 2.76-2.84 (m, 2H, COCH 2), 3.46-3.65 (m, 2H, δ-CH 2-Pro), 3.66-3.83 (m, 2H, ClCH 2), 4.42-4.54 (m, 1H, α-CH-Pro), 10.25 (s, 1H, COOH).

Пример 2. Пентафторфениловый эфир N-(3-хлорпропионил)пролина (III)

Растворяют 28.4 г (0.14 моль) II и 28 г (0.15 моль) пентафторфенола в 250 мл этилацетата при комнатной температуре. Охлаждают до 10°C и при этой температуре прикапывают раствор 31 г (0.15 моль) дициклогексилкарбодиимида в 80 мл. Отогревают реакционную массу до комнатной температуры и перемешивают в течение 2 ч. Отфильтровывают выпавшую дициклогексилмочевину и отгоняют этилацетат в вакууме (50°C, 25 мм рт.ст.). Маслообразный остаток растирают 4 раза с 50 мл петролейного эфира до начала кристаллизации. Кристаллический продукт сушат в вакууме до постоянного веса (30°C, 2 мм рт.ст.). Получают 30.5 г (58.6%) бесцветных легкоплавких кристаллов. Содержание основного вещества 95.1% (ВЭЖХ). ТСХ: этилацетат/AcOH 100/1 (алюминиевая пластинка, проявление р-р перманганата калия). Rf(II)=0.20, Rf(III)=0.75. [ α ] D 24 = 78.8 (5% р-р, хлороформ). Т. пл. 51-53°C. ESMS, m/z (I%): 372.4 [M+H]+ (100), 394.1 [M+Na]+ (4.8). Спектр ЯМР 1H (CDCl3, δ, м.д.): 1.98-2.29 (m, 3H, β-CH 2-Pro+γ-CH-Pro), 2.33-2.54 (m, 1H, γ-CH-Pro), 2.82 (t, 2H, COCH 2) 3.57-3.93 (m, 4H, δ-CH 2-Pro+ClCH 2), 4.77-4.86 (m, 1H, α-CH-Pro).

Пример 3. N-(β-Хлорпропионил)-Pro-Glu(δ-OMe)OH (IV)

Растворяют 20 г (0.054 моль) III и 12.8 г (0.065 моль) гидрохлорида метилового эфиром глутаминовой кислоты в 200 мл диметилформамида при комнатной температуре. Охлаждают полученный раствор до 10°C и при этой температуре прикапывают в течение 15 мин 6.5 г (0.064 моль) N-метилморфолина. Перемешивают реакционную массу при комнатной температуре 20 ч. После окончания реакции (ТСХ) отгоняют диметилформамид в вакууме (45°C, 1 мм рт.ст.), маслообразный остаток растворяют в 500 мл этилацетата и полученный раствор промывают 100 и 50 мл насыщенного раствора хлористого натрия с добавкой лимонной кислоты до pH 3. Органическую фазу сушат сульфатом натрия, упаривают в вакууме до полной отгонки растворителя (45°C, 15 мм рт.ст.). Полутвердый остаток растирают 2 раза с 100 мл диэтилового эфира, 2 раза по 40 мл смесью хлороформ-диэтиловый эфир 1/1. Аморфный IV сушат в вакууме до постоянного веса (40-50°C, 2 мм рт.ст.). Получают 15.1 г (80.2%) белого аморфного порошка. Содержание основного вещества 94.6% (ВЭЖХ). ТСХ: BuOH/AcOH/H2O 2/1/1 (алюминиевая пластинка, проявление р-ра перманганата калия). Rf(III)=0.97, Rf(IV)=0.76. [ α ] D 25 = 66.8 (5% p-p, метиловый спирт). ESMS, m/z (I%): 349.3 [M+H]+ (100). Спектр ЯМР 1H (d6-DMSO, δ, м.д.): 1.70-1.94 (m, 4H, β-CH 2-Pro+γ-CH-Pro), 1.96-2.12 (m, 2H, β-CH 2-Glu), 2.33-2.41 (m, 2H, γ-CH 2-Glu), 2.66-2.88 (m, 2H, CH 2CO), 3.35-3.56 (m, 2H, δ-CH 2-Pro), 3.59 (s, 3H, COOCH 3), 3.68-3.81 (m, 2H, CH 2Cl), 4.14-4.30 (m, 1H, α-CH-Glu), 4.32-4.45 (m, 1H, α-CH-Pro), 8.05+8.33 (dd, 1H, CONH), 12.58 (br. s, 1H, COOH).

Пример 4. N-(β-Хлорпропионил)-Pro-Glu(δ-OMe)NHBz (V)

Растворяют 13.8 г (0.040 моль) IV, 6.6 г (0.043) моногидрата N-гидроксибензотриазола и 5.3 г (0.049 моль) бензиламина в 130 мл диметилформамида при комнатной температуре. Охлаждают полученный раствор до 0°C и при этой температуре прикапывают 8.5 г (0.041 моль) дициклогексилкарбодиимида в 20 мл диметилформамида. Перемешивают реакционную массу 18 ч при 5°C. По окончании реакции (ТСХ) отфильтровывают выпавшую дициклогексилмочевину, приливают 500 мл этилацетата. Полученный раствор промывают последовательно 2 раза по 250 мл насыщенным раствором хлористого натрия, 2 раза по 100 мл 1% водного раствора лимонной кислоты, 2 раза по 150 мл 2% водным раствором бикарбоната натрия и 3 раза по 70 мл воды. Органический слой сушат сульфатом натрия и отгоняют растворители в вакууме (50°C, 20 мм рт.ст.). К остатку добавляют 150 мл диэтилового эфира, оставляют полученную суспензию на 12 ч, фильтруют V и сушат в вакууме до постоянного веса (40°C, 2 мм рт.ст.). Получают 12.1 г (69.1%) белого аморфного порошка V. Содержание основного вещества 95.9% (ВЭЖХ). ТСХ: этилацетат/MeOH 5/1 (алюминиевая пластинка, проявление р-ра перманганата калия). Rf(V)=0.06, Rf(VI)=0.71. [ α ] D 25 = 62.6 (5% р-р, метиловый спирт). ESMS, m/z (I%): 438.4 [M+H]+ (100), 460.0 [M+Na]+ (1.6). Спектр ЯМР 1H (CDCl3, δ, м.д.): 1.94-2.18 (m, 6H, β-CH 2-Pro+γ-CH 2-Pro+β-CH 2-Glu), 2.35-2.51 (m, 2H, γ-CH 2-Glu), 2.67-2.88 (m, 2H, CH 2CO), 3.45-3.76 (m, 4H, δ-CH 2-Pro+CH 2Cl), 3.62 (s, 3H, COOCH 3), 4.24-4.32 (m, 1H, α-CH-Pro), 4.40-4.58 (m, 3H, α-CH-Glu+CH 2Ph), 7.15-7.36 (m, 6H, CONHBz+Ph), 7.56 (d, 1H, CONH).

Пример 5. β-Ala-Pro-Glu(δ-NH2)NHBz гидрохлорид (VI)

Растворяют 7.8 г (0.018 моль) V в 300 мл 20% раствора аммиака в метиловом спирте при 10°C. Переливают полученный раствор в герметичный сосуд (стальная пробирка) и выдерживают при комнатной температуре 70-80 ч до окончания реакции (ТСХ). Отгоняют растворитель в вакууме (40°C, 25 мм рт.ст.) до окончания отгонки, к остатку добавляют 20 мл метилового спирта и повторяют отгонку еще раз. Промывают маслообразный остаток 3 раза по 20 мл тетрагидрофурана до затвердевания продукта. Сушат сырой VI в вакууме до постоянного веса (40°C, 2 мм рт.ст.). Получают 6.6 г белого аморфного порошка. Содержание основного вещества 63% (ВЭЖХ). Полученный сырец VI растворяют в 8 мл метилового спирта и хроматографически очищают на силикагеле (колонка: длина 75 см, диаметр 3 см, элюент метиловый спирт/хлороформ 1/1). Целевые фракции (ТСХ) упаривают в вакууме (40°C, 22 мм рт.ст.) и окончательно досушивают при 30-35°C, 1 мм рт.ст. Получают 4.2 г (53%) белого аморфного VI. Содержание основного вещества 96.8% (ВЭЖХ). ТСХ: метанол/уксусная кислота 50/1 (алюминиевая пластинка, проявление нингидрином). Rf(V)=0.87, Rf(VI)=0.23. [ α ] D 23 = 40.7 (5% р-р, метиловый спирт). ESMS, m/z 404.3 [M+H]+ (100), 426.2 [M+Na]+ (12.5), 807.5 [2M+H]+ (10.2), 829.4 [2M+Na]+ (1.6). Спектр ЯМР 1Н (DMSO-d6, δ, м.д.): 1.72-2.38 (m, 8H, β-CH 2-Pro+γ-CH 2-Pro+β-CH 2-Glu+γ-CH 2-Glu), 2.53-2.75 (m, 2H, α-CH 2-Ala), 2.91-3.05 (m, 2H, β-CH 2-Ala), 3.36-3.61 (m, 2H, δ-CH 2-Pro), 4.09-4.44 (m, 4H, α-CH-Glu+CH 2Ph+α-CH-Pro), 4.87 (br. s, 3H, N H 3 + ), 7.19-7.33 (m, 5H, Ph), 7.73 (br. s, 2H, CONH 2). Спектр ЯМР 13C (D2O, δ, м.д.): 177.18, 173.72, 172.31, 170.27, 137.73, 128.12 (2C), 126.86, 126.60 (2C), 59.83, 53.51, 47.18, 42.33, 34.60, 30.54, 30.21, 28.99, 25.94. 23.60.

Пример 6. H-β-Ala-Pro-DabNHBz диацетат (I)

Растворяют 8.1 г (0.0183 моль) VI в 150 мл воды при комнатной температуре. Добавляют 100 мл диоксана и 25 мл пиридина. Охлаждают полученный раствор до 5°C и при этой температуре прикапывают 14.1 г (0.0438 моль) диацетата иодбензола в 180 мл диоксана. Перемешивают реакционную массу 3 ч, не снимая охлаждения, и снова прикапывают 10.5 г (0.0327 моль) диацетата иодбензола в 180 мл диоксана. Продолжают перемешивание еще 2 ч (контроль по ТСХ). В реакционную массу присыпают 300 г льда и приливают 500 мл этилацетата. Отделяют водный слой и промывают его сначала 2 раза по 300 мл этилацетата и затем 300 мл смеси этилацетат-бутанол 4:1. Водный слой упаривают (конверсия 81% - ВЭЖХ) и хроматографируют на препаративной ВЭЖХ, после чего переводят продукт в диацетат. Получают 4.92 г (54.3%) маслообразного I. Содержание основного вещества 98.1% (ВЭЖХ). ТСХ: метанол/уксусная кислота 20/1 (алюминиевая пластинка, проявление нингидрином). Rf(VI)=0.35, Rf(I)=0.11. [ α ] D 24 = 81.3 (1% р-р, метиловый спирт). ESMS, m/z (I%): 269.2 [M-BzNH]+ (3.3), 376.2 [M+H]+ (100), 751.1 [2M+H]+ (33.2). Спектр ЯМР 1H (CD3OD, δ, м.д.): 1.94-2.12 (m, 4H, γ-CH 2-Pro+β-CH 2-DIBA), 2.18-2.29 (m, 2H, β-CH 2-Pro), 2.77 (t, 2H, α-CH 2-Ala), 3.05 (t, 2H, γ-CH 2-DIBA), 3.15 (t, 2H, β-CH 2-Ala), 3.54-3.68 (m, 2H, δ-CH 2-Pro), 4.38-4.43 (m, 3H, CH 2Ph+α-CH-Pro), 4.48-4.54 (m, 1H, α-CH-DIBA), 7.21-7.34 (m, 5H, Ph). Спектр ЯМР 13C (D2O, δ, м.д.): 177.93, 171.43, 170.26, 137.06, 128.16 (2C), 126.92, 126.59 (2C), 59.47, 50.92, 47.23, 42.43, 35.81, 34.61, 30.34, 29.04, 28.04. 23.65. ИК (KBr) 3060, 2212, 1961, 1651, 1557, 1410, 1341, 1276, 1203, 1181, 1137, 1049, 1015, 924, 888, 837, 800, 723, 701, 659, 621.

Как видно из вышеприведенного примера, описанный способ отличается простотой, отсутствием стадий постановки и снятия защитных групп и использует более доступные и дешевые реагенты и исходные продукты.

Способ получения диацетата трипептида H-β-Ala-Pro-DabNHBzl (I), основанный на 6-стадийном методе пептидного синтеза без использования стадий постановки и снятия защитных групп и включающий следующие стадии:
а) получают сначала N-(3-хлорпропионил)пролин (II) ацилированием пролина (Pro) в диоксане β-хлорпропионилхлоридом;
б) далее получают пентафторфениловый эфир соединения (III) реакцией соединения (II) и пентафторфенола в этилацетате в присутствии N,N′-дициклогексилкарбодиимида;
в) осуществляют конденсацию полученного пентафторфенилового эфира соединения (III) с монометиловым эфиром глутаминовой кислоты в диметилформамиде с получением соединения N-(β-хлорпропионил)-Pro-Glu-(δ-OMe)OH (IV);
г) проводят амидирование соединения (IV) бензиламином в присутствии 1-гидроксибензотриазола и N,N′-дициклогексилкарбодиимида с получением соединения N-(β-хлорпропионил)-Pro-Glu-(δ-OMe)NHBzl (V);
д) проводят одновременный аммонолиз соединения (V) и замещение хлора на аминогруппу с получением трипептида формулы (VI) β-Ala-Pro-Glu(δ-NH2)NHBzl;
е) осуществляют перегруппировку трипептида формулы (VI) по Гофману с использованием диацетата йодобензола и получают целевой продукт диацетат трипептида формулы (I).



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к соединениям, которые могут использоваться в качестве ингибиторов протеазы вируса гепатита C, фармацевтическим композициям, которые содержат указанные соединения, и способам их применения.

Изобретение относится к соединениям, которые могут использоваться в качестве ингибиторов протеазы вируса гепатита С, к фармацевтическим композициям, которые содержат указанные соединения, и способам их применения для лечения заболеваний, опосредованных протеазой вируса гепатита С.

Изобретение относится к пептидным альдегидам с тирозином в качестве C-концевого остатка, которые являются особенно эффективными для стабилизации протеаз типа субтилизина в жидких моющих средствах.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к применению олигопептида, выбранного из группы, состоящей из трипептида общей формулы X-Pro-Tyr (X-P-Y), в которой X может быть выбран из группы, состоящей из Ile (I), Val (V), Ala (A), Trp (W), Leu (L), Phe (F), Gly (G), Glu (E) и Asn (N), или пептидов, включающих указанный трипептид, в медицине для иммуномодуляции.

Изобретение относится к производным пептидов и пептидомиметикам в качестве ингибиторов трансглутаминаз, к способам их получения, фармацевтическим композициям, содержащим указанные соединения, а также к применению указанных ингибиторов трансглутаминазы, в частности, для лечения целиакии и заболеваний, зависимых от трансглутаминазы.

Изобретение относится к области молекулярной медицины и мишень-ориентированной доставки терапевтических средств. .

Изобретение относится к органической химии, конкретно к новым биологически активным пептидам, которые могут найти применение в фармакологии и медицине при создании новых лекарственных средств, обладающих цитопротекторной активностью.

Изобретение относится к производным 1-(1-адамантил)этиламина (ремантадина)общей формулы: где R - функциональная группа аминокислотного остатка (I-IV) или остаток липоевой кислоты (V): , которые обладают избирательной противовирусной активностью в отношении штаммов гриппа А, включая штаммы вируса, резистентные к действию ремантадина.

Изобретение относится к соединениям на основе пептидов, включающим в себя трехчленные циклы, содержащие гетероатом, которые эффективно и селективно ингибируют специфические активности N-концевых нуклеофильных (Ntn) гидролаз, связанных с протеасомой.

Изобретение относится к пролекарственным препаратам пептидов глюкагонового надсемейства, в которых пептид глюкагонового надсемейства модифицирован связыванием дипептида с пептидом глюкагонового надсемейства амидной связью.

Изобретение относится к фармацевтически приемлемым кристаллическим или аморфным солям D-изоглутамил-D-триптофана, способам их получения, фармацевтическим композициям, которые их содержат, и их применению для получения фармацевтических композиций для лечения различных состояний и/или заболеваний.

Изобретение относится к кормовым добавкам, содержащим дипептиды или их соли, при этом один аминокислотный остаток дипептида представляет собой DL-метионильный остаток, а другой аминокислотный остаток дипептида представляет собой аминокислоту в L-конфигурации, выбранную из группы, включающей лизин, треонин, триптофан, гистидин, валин, лейцин, изолейцин, фенилаланин, аргинин, цистеин и цистин.

Изобретение относится к соединениям, которые могут использоваться в качестве ингибиторов протеазы вируса гепатита C, фармацевтическим композициям, которые содержат указанные соединения, и способам их применения.

Изобретение относится к соединениям, которые могут использоваться в качестве ингибиторов протеазы вируса гепатита С, к фармацевтическим композициям, которые содержат указанные соединения, и способам их применения для лечения заболеваний, опосредованных протеазой вируса гепатита С.

Изобретение относится к соединениям формулы (I), его фармацевтически приемлемой соли, где каждая пунктирная линия (представленная как ) представляет собой необязательную двойную связь; Х представляет собой N или СН; R1a и R1b независимо представляют собой водород или С1-6-алкил; L представляет собой -O-; R2 представляет собой водород; R3 представляет собой водород или C1-6-алкил; R4 представляет собой хинолинил, замещенный одним, двумя или тремя заместителями, выбранными из С1-6-алкила, С1-6 -алкилокси, тиазолила или пиразолила, где указанные тиазолил или пиразолил замещены на любом атоме углерода C1-6 -алкилом; n равно 3, 4, 5 или 6; р равно 1 или 2.

Группа изобретений касается ингибитора секреции сидерофоров (SSI) и способа его выделения. Представленный способ получения SSI включает следующие этапы.
Наверх