Противовирусное средство для профилактики инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота



Противовирусное средство для профилактики инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота
Противовирусное средство для профилактики инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота

 


Владельцы патента RU 2571935:

Общество с ограниченной ответственностью "ВИТАЛАНГ" (RU)

Изобретение относится к области ветеринарии и фармацевтической промышленности, в частности к противовирусным средствам на основе мылкого амфифильного комплекса одноцепочечной высокополимерной РНК Saccharomyces cerevisiae, содержащей короткие двуспиральные участки с олеиновой кислотой. Может быть использовано для профилактики инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота (ИРТ КРС). 2 табл., 1 пр.

 

Изобретение относится к области ветеринарии и фармацевтической промышленности, в частности к противовирусным средствам на основе мылкого амфифильного комплекса одноцепочечной высокополимерной РНК Saccharomyces cerevisiae, содержащей короткие двуспиральные участки с олеиновой кислотой, и может быть использовано для профилактики инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота (ИРТ КРС).

Среди многообразия вирусных агентов, вызывающих патологию у крупного рогатого скота (КРС), инфекционный ринотрахеит (ИРТ) занимает особое место в связи с многообразием клинических проявлений и тяжестью течения вызываемой им болезни. Вирус ИРТ КРС регистрируется во многих регионах РФ и странах СНГ и причиняет значительный экономический ущерб мясному и молочному скотоводству [1]. Латентная и персистентная формы этой болезни осложняют проведение профилактических мероприятий, что приводит к неконтролируемому распространению возбудителя во внешней среде. В этом процессе немаловажную роль играют животные -вирусоносители [2].

Многие годы вирусные заболевания рассматривались неподверженными селективной противовирусной химиотерапии. Это было связано с тем, что репликативный цикл вируса слишком тесно связан с нормальным обменом веществ в клетках и любая попытка подавить репродукцию вируса была обречена на неудачу, поскольку могла также уничтожить или повредить неинфицированную клетку. По мере выяснения вирусоспецифических особенностей как мишеней для химиотерапевтической атаки и появления большого числа специфических антивирусных препаратов, становилось все более ясно, что селективная химиотерапия вирусных инфекций возможна и что репродукция вируса может быть подавлена без вредного влияния на хозяина.

В настоящее время известно 30 официально одобренных антивирусных препаратов [3]. Однако попытки использования большинства из них для профилактики и лечения ИРТ КРС не выходили за рамки лабораторных испытаний. Применение этих препаратов in vivo существенным образом сдерживалось вследствие большой их стоимости и трудностями, связанными со способами доставки.

Для профилактики и лечения заболеваний животных вирусной этиологии некоторыми исследователями использовались индукторы интерферона, например, дорогостоящий и сложный в производстве Ридостин [4]. Известно, что применение интерферон индуцирующих препаратов при вирусных заболеваниях и при иммунодефицитных состояниях дает положительные результаты, поскольку интерферон является одним из ключевых факторов активации механизмов неспецифической резистентности. Помимо этого, интерферон активизирует эффекторные функции иммунокомпетентных клеток, что приводит к нормализации иммунного статуса и повышению устойчивости организма к заболеваниям различной этиологии [5]. Эффективность применения препаратов интерферона и его индукторов во многом определяется чувствительностью к нему вирусов, вызывающих ту или иную патологию у животных. Однако литературные данные о чувствительности вируса ИРТ КРС к интерферону единичны и не дают полной характеристики его противовирусного влияния.

Целью настоящего изобретения является профилактика заболевания, вызванного вирусом ИРТ КРС, простым в производстве препаратом - индуктором интерферона с низкой себестоимостью.

Цель достигается тем, что в качестве противовирусного средства используется природный высокоэффективный индуктор интерферона, извлекаемый из сухих пекарских дрожжей с помощью олеиновой кислоты, или с помощью додецилсульфата натрия путем обработки выделенной РНК олеиновой кислотой - мылкий амфифильный комплекс одноцепочечной высокополимерной РНК Saccharomyces cerevisiae, содержащей короткие двуспиральные участки с олеиновой кислотой (предполагаемое рыночное название - Виталанг-2).

Поскольку его доклинические ветеринарные испытания прошли успешно, представлялось актуальным изучение его действия в отношении вируса ИРТ КРС на культуре клеток in vitro.

Пример осуществления предлагаемого способа

Препарат Виталанг-2

Виталанг-2 получали и стерилизовали по способу [6]. Растворяли в стерильном физиологическом растворе (ФР), встряхивая 15-30 мин в день проведения эксперимента.

Тест-вирус

В работе использовали Российский референтный цитопатогенный штамм ТК-А вируса ИРТ КРС. Характеристики штамма ТК-А даны в таблице 1. Активность тест-вирусной суспензии для модельных опытов составляла не менее 5,75 lgl0 ТЦД50/см3 (десятичный логарифм дозы, вызывающей 50% поражение клеток) для вируса ИРТ КРС.

Культура клеток

Культивирование и титрование вируса ИРТ КРС проводили в перевиваемой линии культуры клеток почки теленка (MDBK), которые выращивали во флаконах для клеточных культур (Nunc, Дания) в среде Игла MEM (производство ФГУП «Предприятие по производству бактерийных и вирусных препаратов Института полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П. Чумакова РАМН») с добавлением 5-10% эмбриональной сыворотки крови теленка (HyClone, США, лот №ASA28574), тестированной на наличие вируса ИРТ КРС и антител к нему. При выращивании культур клеток использовали 0,25% раствор трипсина, 0,01% раствор химотрипсина в 0,02% растворе Версена (производство ФГУП «Предприятие по производству бактерийных и вирусных препаратов Института полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П. Чумакова РАМН»).

Определение стерильности трех серий препарата Виталанг-2 проводили в соответствии с ГОСТ 28085-89 Препараты биологические. Метод бактериологического контроля стерильности.

Наработка вирусной суспензии и определение биоконцентрации вируса ИРТ КРС-ТК-А

Проводили 5 последовательных пассажей вируса в перевиваемой культуре клеток MDBK. Для этого во флакон объемом 25 см3 с сформированным монослоем культуры клеток вносили 0,5 см3 содержащей вирус суспензии после предварительного удаления из флакона питательной среды. После 1 ч контакта вируса с культурой клеток во флакон добавляли 20 мл питательной среды Игла MEM. Зараженные флаконы инкубировали при температуре 37±0,5°C с ежедневным просмотром состояния монослоя для выявления цитодеструктивных изменений действия вируса. После выявления таких изменений в более чем 85% клеток флаконы помещали в морозильную камеру при -20°C и однократно оттаивали, после чего проводили последующий пассаж вируса в перевиваемой культуре клеток. Для определения биоконцентрации вируса ИРТ КРС выполняли титрование вируссодержащей суспензии в 96-луночных культуральных планшетах с использованием двухсуточного монослоя клеток MDBK. Предварительно готовили 10-кратные разведения вируссодержащей суспензии на питательной среде Игла MEM от 10-1 до 10-7. Из каждого разведения вируса по 100 мкл вносили в четыре параллельных ряда по 7 лунок 96-луночного планшета. Инфицированные клетки инкубировали в течение 3-5 суток. Титр вируса оценивали в lg10ТЦД50/см3, рассчитывая по методу Рида и Менча [7].

Определение токсичности трех серий препарата Виталанг-2 in vitro проводили в соответствии с «Руководством по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» [8] с предварительным приготовлением десятикратных разведений препарата (от 10-1 до 10-7) в культуральной питательной среде и внесением их в культуры клеток, достигших монослоя (по 4 повтора на каждое разведение). Контакт разведений препарата с клетками осуществляли в течение 72 ч с ежедневной микроскопией для определения цитодеструктивного действия, которое отмечали по 4-крестовой системе по методу Финтера, где 100% деструкция клеток обозначается 4+, 25% - как 1+. Минимальная концентрация препарата, вызывающая цитотоксический эффект на 50% (++), рассматривалась как цитопатогенная доза (ТЦД50).

На основании полученных данных при определении токсичности препарата определяли максимально переносимую концентрацию препарата (МПК), которую вычисляли по формуле: МПК=ТЦД50/4.

Определение противовирусной активности препарата Виталанг-2 in vitro

Определение противовирусного (вирулицидного, профилактического и лечебного) действия препарата проводили методом титрования проб, собранных через 24 часа после заражения вирусом чувствительной к нему культуры клеток, выращенных в плоскодонных культуральных 96-луночных планшетах. В опытах использовали препарат в максимально переносимой концентрации 5 мг/см3.

Для определения лечебной активности препарат Виталанг-2 вносили в монослой используемой культуры клеток MDBK через 1 ч после контакта с тест-вирусом ТК-А в дозе, вызывающей 100% поражение клеток. В качестве контроля использовали клетки, не обработанные препаратом.

Для определения профилактической активности препарат вносили в монослой используемой культуры клеток MDBK за 1 ч до внесения тест-вируса ТК-А в той же дозе, что при определении лечебной активности препарата. В качестве контроля использовали клетки, не обработанные препаратом.

Для определения вирулицидной активности препарат вносили в монослой используемой культуры клеток MDBK одновременно с тест-вирусом ТК-А. В качестве контроля использовали клетки, зараженные только тест-вирусом.

Оценку противовирусной активности препарата Виталанг-2 в отношении вируса ИРТ КРС проводили по степени ингибирования размножения (редукции) тест-вируса. Для расчета вирусной редукции использовали формулу: R=(lg10A0)-(lg10An), где А0 - титр вируса/мл в исходном образце, An - титр вируса/мл в образце после обработки.

Препаратом, обладающим выраженным антивирусным эффектом, считали соединение, подавляющее размножение вируса в культуре клеток на 1,7-2,0 lg10 [9].

Результаты исследований

В результате проведенных нами исследований было установлено, что все три тестированные в настоящей работе серии препарата Виталанг-2, полученного по способу [6], являются стерильными и могут быть использованы для проведения дальнейших исследований в условиях in vitro без дополнительной ультрафильтрации.

Концентрация вирусной суспензии штамма ТК-А вируса ИРТ КРС составила 5,75±0,12 lg10ТЦД50/мл.

Установили, что максимальная нетоксичная концентрация препарата Виталанг-2 для данной культуры составляет 20 мг/см3. Все три тестированные нами серии препарата Виталанг-2 не отличались друг от друга по токсичности для перевиваемой культуры клеток MDBK. Максимальная переносимая концентрация препарата Виталанг-2 для этих культур клеток составила 5 мг/см3.

Результаты определения лечебной, профилактической и вирулицидной активности препарата Виталанг-2 представлены в таблице 2. Полученные результаты свидетельствуют о том, что препарат Виталанг-2 в максимально переносимой дозе оказывает профилактическое действие в отношении вируса ИРТ КРС. Уровень редукции вируса составил 1,91 lg10ТЦД50мг/см3.

Вывод

В условиях in vitro, на перевиваемой культуре клеток MDBK инфицированных штаммом ТК-А вируса ИРТ КРС, установлено, что препарат Виталанг-2 обладает выраженным ингибирующим действием в отношении этого вируса при профилактическом применении.

Работа выполнена при финансовой поддержке Министерства образования и науки Российской Федерации (Государственный контракт №16.512.11.2018 от 11.02.2011).

Источники информации

1. Юров К.П. Распространение инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи - болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота в различных регионах России / К.П. Юров, А.Ф. Шуляк, О.Г. Петрова, О.В. Майджи // Труды ВИЭВ. - 73. - 2003. - С. 15-22.

2. Андреев Е.В. Ассоциированное воздействие на организм вируса и условно-патогенных бактерий / Е.В. Андреев // Ветеринария. - 1984. - №6. - С. 25-27.

3. De Clercq Е. Molecular Targets for Antiviral Agents // Pharmacolgy And Experimental Therapeutics. - 2001. - Vol. 297. - P. 1-10.

4. Даниленко Е.Д. Индуктор интерферона ридостин. Результаты экспериментального изучения / Е.Д. Даниленко, В.И. Масычева // Применение ридостина для лечения вирусных и бактериальных инфекций и перспективы его использования при заболеваниях неинфекционной природы: Сб. мат.«Круглого стола» научной конференции. - Бердск, 2000. - С. 11-16.

5. Taylor-Papadimitriou J. Antiviral and antiproliferative effects of interferons in quiescent fibroblasts are dissociable / J. Taylor-Papadimitriou, F. Balkwill, N. Ebsworth, E. Rozengurt // Virolgy. 1985. - V. 147(2). - P. 405-412.

6. Ямковая T.B., Ямковой В.И., Панин Л.Е. Выделение и анализ биологической активности высокополимерной РНК из пекарских дрожжей // Бюл. СО РАМН. - 2012. - Т. 32. - №6. - с. 60-68.

7. Медицинская вирусология: Руководство // Под ред. Д.К. Львова. - М.: ООО «Медицинское информационное агентство», 2008. - 656 с.

8. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ // Под общ. ред. Р.У. Хабриева. - М.: Изд-во Медицина, 2005.

9. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств // Под общ. ред. А.Н. Миронова. - М.: Изд-во Медицина, 2005.

Применение в качестве противовирусного средства для профилактики инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота мылкой амфифильной одноцепочечной высокополимерной РНК Saccharomyces cerevisiae, содержащей короткие двуспиральные участки, извлекаемой из сухих пекарских дрожжей с помощью олеиновой кислоты или с помощью додецилсульфата натрия путем обработки выделенной РНК олеиновой кислотой.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для лечения диареи. На фоне обеспечения общепринятых известных условий кормления и содержания телятам в возрасте 1-5 дней в дозе 2 см3 один раз в сутки внутримышечно 2 раза с интервалом в 72 часа вводят препарат имактин.

Группа изобретений относится к области ветеринарии и предназначена для повышения сохранности молодняка и продуктивности животных. Заявлены варианты средства следующего состава.

Изобретение относится к ветеринарии, а именно к протозоологии, и может быть использовано при заболеваниях цыплят-бройлеров кокцидиозом. Для этого цыплятам-бройлерам назначают диклазурил с водой в дозе 2 мл на 1 л питьевой воды непрерывно в течение 48 часов в три этапа: в 9-10; 16-17 и 24-25-суточном возрасте.

Изобретение относится к области ветеринарии. Способ включает патогенетическую терапию и введение препаратов с гепатопротекторным действием.

Изобретение относится к медицине, а именно к пульмонологии, фтизиатрии и торакальной хирургии, и может быть использовано для лечения больных с плевральным выпотом различной этиологии.

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для лечения мастита у коров в сухостойный период. Заявленный препарат содержит апрамицин, ксантановую смолу, диоксидин, глицерин и дистиллированную воду при следующем соотношении компонентов, мас.

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для терапии дисфункции молочной железы у коров. Заявленный препарат содержит диоксидин, ксантановую смолу, лактам тетраметилендиэтилентетрамина, дистиллированную воду, преднизолон при следующем соотношении компонентов, мас.

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для лечения болезней бактериальной этиологии у сельскохозяйственных животных и птиц. Заявленная композиция содержит соединение из группы фторхинолонов, апрамицина сульфат и вспомогательные вещества.

Изобретение относится к области сельского хозяйства и предназначено для повышение эффективности выращивания нетелей. Способ включает ежедневное выпаивание телятам препарата мицеллат углекислого кальция «Алексанат Зоо».

Изобретение относится к способу получения нанокапсул антибиотиков в альгинате натрия. Указанный способ характеризуется тем, что в суспензию альгината натрия в бутаноле и препарата Е472с добавляют порошок антибиотика, затем добавляют ацетонитрил, полученную суспензию нанокапсул отфильтровывают и сушат.

Изобретение относится к области медицины и представляет собой покрытие для медицинского устройства, ингибирующее агрессивную форму заживления, содержащее, по меньшей мере, одну нитрокарбоновую кислоту.
Изобретение относится к детскому питанию. Предложен способ изменения состава жирных кислот в мембранах клеток мозга, выбранного из группы, состоящей из: i) увеличения текучести мембран клеток мозга, ii) увеличения содержания PUFA в мембранах клеток мозга, iii) увеличения содержания LC-PUFA в мембранах клеток мозга, iv) уменьшения соотношения n6/n3 LC-PUFA в мембранах клеток мозга, v) уменьшения соотношения n6/n3 PUFA в мембранах клеток мозга, vi) увеличения содержания n3 PUFA в мембранах клеток мозга, vii) увеличения содержания n3 LC-PUFA в мембранах клеток мозга и viii) увеличения содержания DHA в мембранах клеток мозга у субъекта-человека путем введения питательной композиции, содержащей 10-50 мас.% растительных липидов на сухую массу композиции и липидные шарики с ядром, включающим указанные растительные липиды.
Изобретение относится к питанию, в частности к детскому питанию. Предложен способ изменения состава жирных кислот в мембранах клеток мозга, выбранного из группы, состоящей из i) увеличения текучести мембран клеток мозга, ii) увеличения содержания PUFA в мембранах клеток мозга, iii) увеличения содержания LC-PUFA в мембранах клеток мозга, iv) уменьшения соотношения n6/n3 LC-PUFA в мембранах клеток мозга, v) уменьшения соотношения n6/n3 PUFA в мембранах клеток мозга, vi) увеличения содержания n3 PUFA в мембранах клеток мозга, vii) увеличения содержания n3 LC-PUFA в мембранах клеток мозга и viii) увеличения содержания DHA в мембранах клеток мозга человека-субъекта, путем введения питательной композиции, содержащей a) 10-50% масс.

Изобретение относится к композициям местного применения для предотвращения и лечения глазных патологий, в особенности воспалительных кератитов и конъюнктивитов и синдрома сухого глаза, содержащим в качестве активных ингредиентов полиненасыщенные жирные кислоты типа омега-3 и омега-6 и, конкретно, ЕРА (эйкозапентаеновую кислоту), DHA (докозагексаеновую кислоту) и GLA (γ-линоленовую кислоту), смешанные с ацетатом витамина Е и объединенные в стабильную композицию в гидрогеле, то есть в дисперсную форму в водном растворе, содержащем один или более гелеобразующих полимеров.

Изобретение относится к области молекулярной биологии, молекулярной генетики и биотехнологии и может быть использовано в медицине, а также в сельском хозяйстве и в промышленной биотехнологии для разработки принципиально нового подхода в противолейкозной терапии с помощью низкомолекулярных соединений, направленных против специфических молекулярных мишеней, к которым относятся молекулы субъединиц потенциалзависимых калиевых каналов семейства Kv.

Изобретение относится к новым соединениям формулы I: цис-COOR-XCH-(СН2)a-СН=СН-(СН2)b-СН3, в которой (а) и (b) могут принимать любое значение от 0 до 14, (X) выбирают из: ОН, NH2, СН3, F, F3C, HS, O-СН3, PO4(СН2-СН3)2 и СН3СОО, и (R) представляет собой натрий (Na), применяемым для профилактики и/или терапевтического лечения ожирения, гипертензии и/или рака.

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и может быть использовано с целью коррекции тромбофилических нарушений гемостаза во время беременности.
Изобретение относится к медицине, в частности к офтальмологии, и предназначено для комплексного лечения больных с первичной открытоугольной глаукомой и заболеваниями глазной поверхности.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к средству для лечения или предупреждения устойчивой к нейраминидазе ротавирусной инфекции у субъекта.
Настоящее изобретение относится к распадающейся во рту композиции, не имеющей неприятного аромата, запаха или вкуса и предназначенной для регулирования уровня липидов в крови, предотвращения или снижения риска развития атеросклеротических изменений, расстройств или заболеваний.

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ получения жирных кислот фармакологического и пищевого назначения и их производных общей формулы (I): Осуществляют подачу газа, включающего CO2, в реактор, содержащий по меньшей мере один вид фотосинтезирующих микроводорослей, способных к фотосинтезу с продуцированием биомассы, содержащей соединения (I). Удаляют из реактора от 5 до 100% культуры с последующим ее разделением на твердую фракцию, содержащую биомассу, и фракцию жидкой фазы, содержащую карбонаты и/или бикарбонаты. Экстрагируют соединения (I) из биомассы. Концентрируют и, при необходимости, очищают полученные соединения (I). Карбонаты и бикарбонаты отделяют от жидкой фракции. Затем жидкую фракцию возвращают по меньшей мере частично в реактор. Изобретение позволяет устранить потерю CO2, барботированного в систему, и повысить его поглощение водорослями. 23 з.п. ф-лы, 3 пр.
Наверх