Противовирусное средство для профилактики инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота

Изобретение относится к области ветеринарии и фармацевтической промышленности, в частности к противовирусным средствам на основе мылкого амфифильного комплекса одноцепочечной высокополимерной РНК Saccharomyces cerevisiae, содержащей короткие двуспиральные участки с олеиновой кислотой. Может быть использовано для профилактики инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота (ИРТ КРС). 2 табл., 1 пр.

 

Изобретение относится к области ветеринарии и фармацевтической промышленности, в частности к противовирусным средствам на основе мылкого амфифильного комплекса одноцепочечной высокополимерной РНК Saccharomyces cerevisiae, содержащей короткие двуспиральные участки с олеиновой кислотой, и может быть использовано для профилактики инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота (ИРТ КРС).

Среди многообразия вирусных агентов, вызывающих патологию у крупного рогатого скота (КРС), инфекционный ринотрахеит (ИРТ) занимает особое место в связи с многообразием клинических проявлений и тяжестью течения вызываемой им болезни. Вирус ИРТ КРС регистрируется во многих регионах РФ и странах СНГ и причиняет значительный экономический ущерб мясному и молочному скотоводству [1]. Латентная и персистентная формы этой болезни осложняют проведение профилактических мероприятий, что приводит к неконтролируемому распространению возбудителя во внешней среде. В этом процессе немаловажную роль играют животные -вирусоносители [2].

Многие годы вирусные заболевания рассматривались неподверженными селективной противовирусной химиотерапии. Это было связано с тем, что репликативный цикл вируса слишком тесно связан с нормальным обменом веществ в клетках и любая попытка подавить репродукцию вируса была обречена на неудачу, поскольку могла также уничтожить или повредить неинфицированную клетку. По мере выяснения вирусоспецифических особенностей как мишеней для химиотерапевтической атаки и появления большого числа специфических антивирусных препаратов, становилось все более ясно, что селективная химиотерапия вирусных инфекций возможна и что репродукция вируса может быть подавлена без вредного влияния на хозяина.

В настоящее время известно 30 официально одобренных антивирусных препаратов [3]. Однако попытки использования большинства из них для профилактики и лечения ИРТ КРС не выходили за рамки лабораторных испытаний. Применение этих препаратов in vivo существенным образом сдерживалось вследствие большой их стоимости и трудностями, связанными со способами доставки.

Для профилактики и лечения заболеваний животных вирусной этиологии некоторыми исследователями использовались индукторы интерферона, например, дорогостоящий и сложный в производстве Ридостин [4]. Известно, что применение интерферон индуцирующих препаратов при вирусных заболеваниях и при иммунодефицитных состояниях дает положительные результаты, поскольку интерферон является одним из ключевых факторов активации механизмов неспецифической резистентности. Помимо этого, интерферон активизирует эффекторные функции иммунокомпетентных клеток, что приводит к нормализации иммунного статуса и повышению устойчивости организма к заболеваниям различной этиологии [5]. Эффективность применения препаратов интерферона и его индукторов во многом определяется чувствительностью к нему вирусов, вызывающих ту или иную патологию у животных. Однако литературные данные о чувствительности вируса ИРТ КРС к интерферону единичны и не дают полной характеристики его противовирусного влияния.

Целью настоящего изобретения является профилактика заболевания, вызванного вирусом ИРТ КРС, простым в производстве препаратом - индуктором интерферона с низкой себестоимостью.

Цель достигается тем, что в качестве противовирусного средства используется природный высокоэффективный индуктор интерферона, извлекаемый из сухих пекарских дрожжей с помощью олеиновой кислоты, или с помощью додецилсульфата натрия путем обработки выделенной РНК олеиновой кислотой - мылкий амфифильный комплекс одноцепочечной высокополимерной РНК Saccharomyces cerevisiae, содержащей короткие двуспиральные участки с олеиновой кислотой (предполагаемое рыночное название - Виталанг-2).

Поскольку его доклинические ветеринарные испытания прошли успешно, представлялось актуальным изучение его действия в отношении вируса ИРТ КРС на культуре клеток in vitro.

Пример осуществления предлагаемого способа

Препарат Виталанг-2

Виталанг-2 получали и стерилизовали по способу [6]. Растворяли в стерильном физиологическом растворе (ФР), встряхивая 15-30 мин в день проведения эксперимента.

Тест-вирус

В работе использовали Российский референтный цитопатогенный штамм ТК-А вируса ИРТ КРС. Характеристики штамма ТК-А даны в таблице 1. Активность тест-вирусной суспензии для модельных опытов составляла не менее 5,75 lgl0 ТЦД50/см3 (десятичный логарифм дозы, вызывающей 50% поражение клеток) для вируса ИРТ КРС.

Культура клеток

Культивирование и титрование вируса ИРТ КРС проводили в перевиваемой линии культуры клеток почки теленка (MDBK), которые выращивали во флаконах для клеточных культур (Nunc, Дания) в среде Игла MEM (производство ФГУП «Предприятие по производству бактерийных и вирусных препаратов Института полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П. Чумакова РАМН») с добавлением 5-10% эмбриональной сыворотки крови теленка (HyClone, США, лот №ASA28574), тестированной на наличие вируса ИРТ КРС и антител к нему. При выращивании культур клеток использовали 0,25% раствор трипсина, 0,01% раствор химотрипсина в 0,02% растворе Версена (производство ФГУП «Предприятие по производству бактерийных и вирусных препаратов Института полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М.П. Чумакова РАМН»).

Определение стерильности трех серий препарата Виталанг-2 проводили в соответствии с ГОСТ 28085-89 Препараты биологические. Метод бактериологического контроля стерильности.

Наработка вирусной суспензии и определение биоконцентрации вируса ИРТ КРС-ТК-А

Проводили 5 последовательных пассажей вируса в перевиваемой культуре клеток MDBK. Для этого во флакон объемом 25 см3 с сформированным монослоем культуры клеток вносили 0,5 см3 содержащей вирус суспензии после предварительного удаления из флакона питательной среды. После 1 ч контакта вируса с культурой клеток во флакон добавляли 20 мл питательной среды Игла MEM. Зараженные флаконы инкубировали при температуре 37±0,5°C с ежедневным просмотром состояния монослоя для выявления цитодеструктивных изменений действия вируса. После выявления таких изменений в более чем 85% клеток флаконы помещали в морозильную камеру при -20°C и однократно оттаивали, после чего проводили последующий пассаж вируса в перевиваемой культуре клеток. Для определения биоконцентрации вируса ИРТ КРС выполняли титрование вируссодержащей суспензии в 96-луночных культуральных планшетах с использованием двухсуточного монослоя клеток MDBK. Предварительно готовили 10-кратные разведения вируссодержащей суспензии на питательной среде Игла MEM от 10-1 до 10-7. Из каждого разведения вируса по 100 мкл вносили в четыре параллельных ряда по 7 лунок 96-луночного планшета. Инфицированные клетки инкубировали в течение 3-5 суток. Титр вируса оценивали в lg10ТЦД50/см3, рассчитывая по методу Рида и Менча [7].

Определение токсичности трех серий препарата Виталанг-2 in vitro проводили в соответствии с «Руководством по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» [8] с предварительным приготовлением десятикратных разведений препарата (от 10-1 до 10-7) в культуральной питательной среде и внесением их в культуры клеток, достигших монослоя (по 4 повтора на каждое разведение). Контакт разведений препарата с клетками осуществляли в течение 72 ч с ежедневной микроскопией для определения цитодеструктивного действия, которое отмечали по 4-крестовой системе по методу Финтера, где 100% деструкция клеток обозначается 4+, 25% - как 1+. Минимальная концентрация препарата, вызывающая цитотоксический эффект на 50% (++), рассматривалась как цитопатогенная доза (ТЦД50).

На основании полученных данных при определении токсичности препарата определяли максимально переносимую концентрацию препарата (МПК), которую вычисляли по формуле: МПК=ТЦД50/4.

Определение противовирусной активности препарата Виталанг-2 in vitro

Определение противовирусного (вирулицидного, профилактического и лечебного) действия препарата проводили методом титрования проб, собранных через 24 часа после заражения вирусом чувствительной к нему культуры клеток, выращенных в плоскодонных культуральных 96-луночных планшетах. В опытах использовали препарат в максимально переносимой концентрации 5 мг/см3.

Для определения лечебной активности препарат Виталанг-2 вносили в монослой используемой культуры клеток MDBK через 1 ч после контакта с тест-вирусом ТК-А в дозе, вызывающей 100% поражение клеток. В качестве контроля использовали клетки, не обработанные препаратом.

Для определения профилактической активности препарат вносили в монослой используемой культуры клеток MDBK за 1 ч до внесения тест-вируса ТК-А в той же дозе, что при определении лечебной активности препарата. В качестве контроля использовали клетки, не обработанные препаратом.

Для определения вирулицидной активности препарат вносили в монослой используемой культуры клеток MDBK одновременно с тест-вирусом ТК-А. В качестве контроля использовали клетки, зараженные только тест-вирусом.

Оценку противовирусной активности препарата Виталанг-2 в отношении вируса ИРТ КРС проводили по степени ингибирования размножения (редукции) тест-вируса. Для расчета вирусной редукции использовали формулу: R=(lg10A0)-(lg10An), где А0 - титр вируса/мл в исходном образце, An - титр вируса/мл в образце после обработки.

Препаратом, обладающим выраженным антивирусным эффектом, считали соединение, подавляющее размножение вируса в культуре клеток на 1,7-2,0 lg10 [9].

Результаты исследований

В результате проведенных нами исследований было установлено, что все три тестированные в настоящей работе серии препарата Виталанг-2, полученного по способу [6], являются стерильными и могут быть использованы для проведения дальнейших исследований в условиях in vitro без дополнительной ультрафильтрации.

Концентрация вирусной суспензии штамма ТК-А вируса ИРТ КРС составила 5,75±0,12 lg10ТЦД50/мл.

Установили, что максимальная нетоксичная концентрация препарата Виталанг-2 для данной культуры составляет 20 мг/см3. Все три тестированные нами серии препарата Виталанг-2 не отличались друг от друга по токсичности для перевиваемой культуры клеток MDBK. Максимальная переносимая концентрация препарата Виталанг-2 для этих культур клеток составила 5 мг/см3.

Результаты определения лечебной, профилактической и вирулицидной активности препарата Виталанг-2 представлены в таблице 2. Полученные результаты свидетельствуют о том, что препарат Виталанг-2 в максимально переносимой дозе оказывает профилактическое действие в отношении вируса ИРТ КРС. Уровень редукции вируса составил 1,91 lg10ТЦД50мг/см3.

Вывод

В условиях in vitro, на перевиваемой культуре клеток MDBK инфицированных штаммом ТК-А вируса ИРТ КРС, установлено, что препарат Виталанг-2 обладает выраженным ингибирующим действием в отношении этого вируса при профилактическом применении.

Работа выполнена при финансовой поддержке Министерства образования и науки Российской Федерации (Государственный контракт №16.512.11.2018 от 11.02.2011).

Источники информации

1. Юров К.П. Распространение инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи - болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота в различных регионах России / К.П. Юров, А.Ф. Шуляк, О.Г. Петрова, О.В. Майджи // Труды ВИЭВ. - 73. - 2003. - С. 15-22.

2. Андреев Е.В. Ассоциированное воздействие на организм вируса и условно-патогенных бактерий / Е.В. Андреев // Ветеринария. - 1984. - №6. - С. 25-27.

3. De Clercq Е. Molecular Targets for Antiviral Agents // Pharmacolgy And Experimental Therapeutics. - 2001. - Vol. 297. - P. 1-10.

4. Даниленко Е.Д. Индуктор интерферона ридостин. Результаты экспериментального изучения / Е.Д. Даниленко, В.И. Масычева // Применение ридостина для лечения вирусных и бактериальных инфекций и перспективы его использования при заболеваниях неинфекционной природы: Сб. мат.«Круглого стола» научной конференции. - Бердск, 2000. - С. 11-16.

5. Taylor-Papadimitriou J. Antiviral and antiproliferative effects of interferons in quiescent fibroblasts are dissociable / J. Taylor-Papadimitriou, F. Balkwill, N. Ebsworth, E. Rozengurt // Virolgy. 1985. - V. 147(2). - P. 405-412.

6. Ямковая T.B., Ямковой В.И., Панин Л.Е. Выделение и анализ биологической активности высокополимерной РНК из пекарских дрожжей // Бюл. СО РАМН. - 2012. - Т. 32. - №6. - с. 60-68.

7. Медицинская вирусология: Руководство // Под ред. Д.К. Львова. - М.: ООО «Медицинское информационное агентство», 2008. - 656 с.

8. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ // Под общ. ред. Р.У. Хабриева. - М.: Изд-во Медицина, 2005.

9. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств // Под общ. ред. А.Н. Миронова. - М.: Изд-во Медицина, 2005.

Применение в качестве противовирусного средства для профилактики инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота мылкой амфифильной одноцепочечной высокополимерной РНК Saccharomyces cerevisiae, содержащей короткие двуспиральные участки, извлекаемой из сухих пекарских дрожжей с помощью олеиновой кислоты или с помощью додецилсульфата натрия путем обработки выделенной РНК олеиновой кислотой.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для лечения диареи. На фоне обеспечения общепринятых известных условий кормления и содержания телятам в возрасте 1-5 дней в дозе 2 см3 один раз в сутки внутримышечно 2 раза с интервалом в 72 часа вводят препарат имактин.

Группа изобретений относится к области ветеринарии и предназначена для повышения сохранности молодняка и продуктивности животных. Заявлены варианты средства следующего состава.

Изобретение относится к ветеринарии, а именно к протозоологии, и может быть использовано при заболеваниях цыплят-бройлеров кокцидиозом. Для этого цыплятам-бройлерам назначают диклазурил с водой в дозе 2 мл на 1 л питьевой воды непрерывно в течение 48 часов в три этапа: в 9-10; 16-17 и 24-25-суточном возрасте.

Изобретение относится к области ветеринарии. Способ включает патогенетическую терапию и введение препаратов с гепатопротекторным действием.

Изобретение относится к медицине, а именно к пульмонологии, фтизиатрии и торакальной хирургии, и может быть использовано для лечения больных с плевральным выпотом различной этиологии.

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для лечения мастита у коров в сухостойный период. Заявленный препарат содержит апрамицин, ксантановую смолу, диоксидин, глицерин и дистиллированную воду при следующем соотношении компонентов, мас.

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для терапии дисфункции молочной железы у коров. Заявленный препарат содержит диоксидин, ксантановую смолу, лактам тетраметилендиэтилентетрамина, дистиллированную воду, преднизолон при следующем соотношении компонентов, мас.

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для лечения болезней бактериальной этиологии у сельскохозяйственных животных и птиц. Заявленная композиция содержит соединение из группы фторхинолонов, апрамицина сульфат и вспомогательные вещества.

Изобретение относится к области сельского хозяйства и предназначено для повышение эффективности выращивания нетелей. Способ включает ежедневное выпаивание телятам препарата мицеллат углекислого кальция «Алексанат Зоо».

Изобретение относится к способу получения нанокапсул антибиотиков в альгинате натрия. Указанный способ характеризуется тем, что в суспензию альгината натрия в бутаноле и препарата Е472с добавляют порошок антибиотика, затем добавляют ацетонитрил, полученную суспензию нанокапсул отфильтровывают и сушат.

Изобретение относится к области медицины и представляет собой покрытие для медицинского устройства, ингибирующее агрессивную форму заживления, содержащее, по меньшей мере, одну нитрокарбоновую кислоту.
Изобретение относится к детскому питанию. Предложен способ изменения состава жирных кислот в мембранах клеток мозга, выбранного из группы, состоящей из: i) увеличения текучести мембран клеток мозга, ii) увеличения содержания PUFA в мембранах клеток мозга, iii) увеличения содержания LC-PUFA в мембранах клеток мозга, iv) уменьшения соотношения n6/n3 LC-PUFA в мембранах клеток мозга, v) уменьшения соотношения n6/n3 PUFA в мембранах клеток мозга, vi) увеличения содержания n3 PUFA в мембранах клеток мозга, vii) увеличения содержания n3 LC-PUFA в мембранах клеток мозга и viii) увеличения содержания DHA в мембранах клеток мозга у субъекта-человека путем введения питательной композиции, содержащей 10-50 мас.% растительных липидов на сухую массу композиции и липидные шарики с ядром, включающим указанные растительные липиды.
Изобретение относится к питанию, в частности к детскому питанию. Предложен способ изменения состава жирных кислот в мембранах клеток мозга, выбранного из группы, состоящей из i) увеличения текучести мембран клеток мозга, ii) увеличения содержания PUFA в мембранах клеток мозга, iii) увеличения содержания LC-PUFA в мембранах клеток мозга, iv) уменьшения соотношения n6/n3 LC-PUFA в мембранах клеток мозга, v) уменьшения соотношения n6/n3 PUFA в мембранах клеток мозга, vi) увеличения содержания n3 PUFA в мембранах клеток мозга, vii) увеличения содержания n3 LC-PUFA в мембранах клеток мозга и viii) увеличения содержания DHA в мембранах клеток мозга человека-субъекта, путем введения питательной композиции, содержащей a) 10-50% масс.

Изобретение относится к композициям местного применения для предотвращения и лечения глазных патологий, в особенности воспалительных кератитов и конъюнктивитов и синдрома сухого глаза, содержащим в качестве активных ингредиентов полиненасыщенные жирные кислоты типа омега-3 и омега-6 и, конкретно, ЕРА (эйкозапентаеновую кислоту), DHA (докозагексаеновую кислоту) и GLA (γ-линоленовую кислоту), смешанные с ацетатом витамина Е и объединенные в стабильную композицию в гидрогеле, то есть в дисперсную форму в водном растворе, содержащем один или более гелеобразующих полимеров.

Изобретение относится к области молекулярной биологии, молекулярной генетики и биотехнологии и может быть использовано в медицине, а также в сельском хозяйстве и в промышленной биотехнологии для разработки принципиально нового подхода в противолейкозной терапии с помощью низкомолекулярных соединений, направленных против специфических молекулярных мишеней, к которым относятся молекулы субъединиц потенциалзависимых калиевых каналов семейства Kv.

Изобретение относится к новым соединениям формулы I: цис-COOR-XCH-(СН2)a-СН=СН-(СН2)b-СН3, в которой (а) и (b) могут принимать любое значение от 0 до 14, (X) выбирают из: ОН, NH2, СН3, F, F3C, HS, O-СН3, PO4(СН2-СН3)2 и СН3СОО, и (R) представляет собой натрий (Na), применяемым для профилактики и/или терапевтического лечения ожирения, гипертензии и/или рака.

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и может быть использовано с целью коррекции тромбофилических нарушений гемостаза во время беременности.
Изобретение относится к медицине, в частности к офтальмологии, и предназначено для комплексного лечения больных с первичной открытоугольной глаукомой и заболеваниями глазной поверхности.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к средству для лечения или предупреждения устойчивой к нейраминидазе ротавирусной инфекции у субъекта.
Настоящее изобретение относится к распадающейся во рту композиции, не имеющей неприятного аромата, запаха или вкуса и предназначенной для регулирования уровня липидов в крови, предотвращения или снижения риска развития атеросклеротических изменений, расстройств или заболеваний.

Изобретение относится к биотехнологии. Предложен способ получения жирных кислот фармакологического и пищевого назначения и их производных общей формулы (I): Осуществляют подачу газа, включающего CO2, в реактор, содержащий по меньшей мере один вид фотосинтезирующих микроводорослей, способных к фотосинтезу с продуцированием биомассы, содержащей соединения (I). Удаляют из реактора от 5 до 100% культуры с последующим ее разделением на твердую фракцию, содержащую биомассу, и фракцию жидкой фазы, содержащую карбонаты и/или бикарбонаты. Экстрагируют соединения (I) из биомассы. Концентрируют и, при необходимости, очищают полученные соединения (I). Карбонаты и бикарбонаты отделяют от жидкой фракции. Затем жидкую фракцию возвращают по меньшей мере частично в реактор. Изобретение позволяет устранить потерю CO2, барботированного в систему, и повысить его поглощение водорослями. 23 з.п. ф-лы, 3 пр.

Изобретение относится к области ветеринарии и фармацевтической промышленности, в частности к противовирусным средствам на основе мылкого амфифильного комплекса одноцепочечной высокополимерной РНК Saccharomyces cerevisiae, содержащей короткие двуспиральные участки с олеиновой кислотой. Может быть использовано для профилактики инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота. 2 табл., 1 пр.

Наверх