Противоопухолевое средство



Противоопухолевое средство
Противоопухолевое средство
Противоопухолевое средство
Противоопухолевое средство

 


Владельцы патента RU 2575572:

Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Российский онкологический научный центр имени Н.Н. Блохина" (ФГБНУ "РОНЦ им. Н.Н. Блохина") (RU)

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к противоопухолевому средству. Противоопухолевое средство, представляющее собой рекомбинантный циклофилин А человека в виде раствора в фосфатном буфере, является продуцентом штамма Escherichia coli (BL21(DE3)Gold/pETCYPopti, депонированного во Всероссийской Коллекции промышленных микроорганизмов ФГУП ГосНИИ Генетика, регистрационный номер В-11983 от 18 июля 2014 г. Вышеописанное средство обладает выраженной противоопухолевой активностью в отношении аденокарциномы молочной железы Са755, рака шейки матки (РШМ 5), меланомы В16 и карциномы легкого Льюиса (LLC). 4 табл.

 

Изобретение относится к области медицины, а именно к онкологии, и касается средств, обладающих противоопухолевым действием.

Циклофилин А (ЦфА) - белок с молекулярной массой 18 кД, находится во всех тканях млекопитающих, располагаясь как в цитозоле, так и в ядре клетки, участвует в процессах внутриклеточного транспорта белков, регуляции клеточной пролиферации и проведении сигнала от рецептора в Т-лимфоцитах (Ping Wang and Joseph Heitman. The cyclophilins. Genome Biology 2005, 6: 226; Fischer G, Bang H, Mech C. Determination of enzymatic catalysis for the cis-trans-isomerization of peptide binding in proline-containing peptides. Biomed. Biochim. Acta. 1984; 43(10):1101-1111; Colgan J, Asmal M, Yu B, Luban J. Cyclophilin Α-deficient mice are resistant to immunosuppression by cyclosporine. Journal of immunology. 2005; 174(10):6030-6038). ЦфА усиливает миграцию стволовых клеток и предшественников из костного мозга на периферию, что позволяет рассматривать данный белок как фактор регенерации (Khromykh LM, Kulikova NL, Anfalova TV, et al. Cyclophilin A produced by thymocytes regulates the migration of murine bone marrow cells. Cell Immunol. 2007; 249(1):46-53). ЦфА участвует в контроле баланса между Т-хелперами первого и второго типов (Colgan, J., Asmal, Μ., Neagu, Μ., Yu, В., Schneidkraut, J., Lee, Y., Sokolskaja, E., Andreotti, Α., Luban, J. Cyclophilin A regulates TCR signal strength in CD4+ Τ cells via a proline-directed conformational switch in Itk. Immunity 2004, 21, 189-201). Указанное свойство ЦфА может препятствовать возникновению иммунного ответа по альтернативному пути, что часто имеет место при опухолевых процессах (Santoni Μ, Massari F, Amantini С, и др. Emerging role of tumor-associated macrophages as therapeutic targets in patients with metastatic renal cell carcinoma. Cancer Immunol Immunother. 2013; 62(12):1757-1768).

Известен один из цитокинов - фактор некроза опухолей (ФНО), обладающий противоопухолевым действием. ФНО обладает цитостатическим и цитолитическим эффектом в отношении ряда опухолей (Soma G, Mizuno D. Exogenous and endogenous tumour necrosis factor therapy. Cancer Surv. 1989; 8(4):837-852).

Недостатки ФНО: низкий терапевтический эффект (Lejeune F.J., Ruegg С. Recombinant human tumor necrosis factor: an efficient agent for cancer treatment // Bull. Cancer. 2006. Vol. 93 (8). P. 90-100. Pilati P., Rossi C.R., Mocellin S. Strategies to enhance the anticancer potential of TNF // Front Biosci. 2008; Vol. 13; P. 3181-3193).

Задачей заявляемого изобретения является создание нового средства, обладающего противоопухолевым действием.

Поставленная задача решается тем, что предложено средство, представляющее собой рекомбинантный циклофилин А человека (рчЦфА) в виде раствора в фосфатном буфере и являющееся продуцентом штамма Escherichia coli (BL21(DE3)Gold/pETCYPopti, депонированного во Всероссийской Коллекции промышленных микроорганизмов ФГУП ГосНИИ Генетика, регистрационный номер В-11983 от 18 июля 2014 года. РчЦфА является аналогом природного цитокина ЦфА, имеет более 95% чистоты, не проявляет видовой специфичности. Уровень эндотоксина в растворе не превышает уровня, допустимого для проведения доклинических испытаний.

Технический результат

Заявляемое средство обладает противоопухолевой активностью.

Исследование противоопухолевой активности заявляемого средства.

Для исследования противоопухолевой активности заявляемого средства были использованы штаммы перевиваемых опухолей: аденокарциномы молочной железы Са755; рака шейки матки (РШМ-5); меланомы В16; карциномы легкого Льюиса (LLC), полученных из банка опухолевых штаммов ФГБНУ ′′РОНЦ им. Н.Н. Блохина′′ и поддерживающихся на мышах соответствующих линий in vivo.

Для прививки опухолей были использованы самки линий мышей в возрасте от 1,5 до 2 мес с начальной массой от 18 до 21 г.

Для прививки аденокарциномы молочной железы Са755 использовали самок мышей гибридов первого поколения линии BDF1(DBA/2×C57BL/6j); для прививки клеток рака шейки матки РШМ-5 были использованы мыши линии СВА; для прививки клеток эпидермальной карциномы легкого Льюиса (LLC) и меланомы В16 были использованы мыши линии C57BL/6j.

В исследованиях использованы опухолевые клетки после 2-4 пассажей in vivo. Прививку опухолевых клеток проводили мышам подкожно в правую подмышечную область по 50 мг опухолевой взвеси с содержанием 5×106 клеток в среде 199 в разведении 1:10. Мышам линии C57BL/6 прививали 300×103 клеток меланомы В16 в среде 199 в том же разведении.

Группы формировали методом рандомизации по массе тела по 7 мышей в опытных и по 10 мышей в контрольных группах. РчЦфА применяли в дозе 100 мкг/мышь (5 мг/кг) в фосфатном буфере в объеме 0,2 мл подкожно и вводили через 24 часа после прививки опухоли. Мышам контрольных групп вводили только фосфатный буфер в том же объеме и в том же режиме, что и в опытных группах.

РчЦфА применяли в двух режимах: 1) ежедневно в течение 7 дней после прививки опухоли и 2) ежедневно в течение 7 дней до и 7 дней после прививки опухоли.

Эффективность рчЦфА оценивали по показателям торможения роста опухолей (ТРО) и увеличению продолжительности жизни (УПЖ) мышей.

ТРО вычисляли по формуле:

ТРО%=(Vk-Vo)/Vk×100,

где Vk и Vo - средний объем опухолей (мм3) в контрольной и опытной группах соответственно.

Объем опухоли определяли после окончания введения заявляемого средства каждые 4 дня.

УПЖ% мышей в опытных группах по сравнению с контрольными группами вычисляли по формуле:

УПЖ% - (СПЖо-СПЖк)/СПЖк×100,

где СПЖо и СПЖк - средняя продолжительность жизни (сутки) в опытных и контрольных группах мышей соответственно.

Эффективность заявляемого средства оценивали в зависимости от величины опухоли и продолжительности жизни мышей опытных групп по сравнению с мышами контрольных групп. Эффективными считали дозы заявляемого средства, при которых ТРО составляло от 50% до 70% в течение 7 дней после окончания введения заявляемого средства или УПЖ мышей более и равное 25%.

Изобретение иллюстрируется табл.1-4.

В табл. 1 представлена противоопухолевая активность рчЦфА у мышей с аденокарциномой молочной железы Са755.

В табл. 2 показана противоопухолевая активность рчЦфА у мышей при раке шейки матки РШМ 5.

В табл. 3 представлена противоопухолевая активность рчЦфА у мышей с меланомой В16.

В табл.4 приведена противоопухолевая активность рчЦфА у мышей с эпидермальной карциномой легкого Льюиса.

При оценке противоопухолевой активности рчЦфА у мышей с аденокарциномой молочной железы Са755 показано, что при введении заявляемого средства в ежедневном режиме 7 дней после прививки отмечено торможение роста опухоли, но достоверных различий с мышами контрольной группы не выявлено. При применении режима введения рчЦфА в течение 7 дней до и 7 дней после прививки опухоли у мышей опытной группы ТРО достоверно различалось от мышей контрольной группы и сохранялось до 21 дня. При этом не было различий в продолжительности жизни опытных и контрольных мышей (табл. 1).

При изучении противоопухолевой активности рчЦфА у мышей при раке шейки матки в режиме 7 дней после прививки опухоли показано, что ТРО составило 52% на 33 день после прививки, а УПЖ было на 30% выше по сравнению с контрольной группой. При введении рчЦфА в режиме 7 дней до и 7 дней после прививки опухоли выявлены достоверные различия с контрольной группой: ТРО составило 50% к 24 дню. При этом отсутствовали достоверные различия в продолжительности жизни опытных и контрольных мышей (табл. 2).

При оценке противоопухолевой активности рчЦфА у мышей с меланомой В16 в режиме 7 дней после прививки опухоли показано, что ТРО у мышей опытной группы соответствовало 59,3% к 31 дню. УПЖ опытных мышей было выше на 35,2% по сравнению с мышами контрольной группы. При введении рчЦфА в режиме 7 дней до и 7 дней после прививки меланомы у мышей опытной группы ТРО к 33 дню составило 72,3%, а УПЖ у мышей опытной группы было на 30,4% выше, чем у мышей контрольной группы (табл. 3).

При изучении противоопухолевой активности рчЦфА у мышей с эпидермальной карциномой легкого Льюиса в режиме 7 дней после прививки опухоли и у мышей, получавших рчЦфА в режиме 7 дней до и 7 дней после прививки опухоли, достоверный уровень ТРО сохранялся до 26 и 22 дней и составил 50,0% и 52,8% соответственно. При этом УПЖ не выявлено (Табл. 4).

Таким образом, показана противоопухолевая активность рчЦфА на изучаемых опухолях у мышей. Для аденокарциномы молочной железы Са755 и рака шейки матки (РШМ 5) наибольшая эффективность выявлена при введении рчЦфА в режиме 7 дней после прививки опухоли; для меланомы В16 и карциномы легкого Льюиса (LLC) противоопухолевый эффект не зависел от режима введения рчЦфА.

Противоопухолевое средство, представляющее собой рекомбинантный циклофилин A человека в виде раствора в фосфатном буфере и являющееся продуцентом штамма Escherichia coli (BL21(DE3)Gold/pETCYPopti, депонированного во Всероссийской Коллекции промышленных микроорганизмов ФГУП ГосНИИ Генетика, регистрационный номер B-11983 от 18 июля 2014 г.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к соединению структурной формулы I, которое может быть использовано для предотвращения, лечения или уменьшения интенсивности симптомов заболевания или состояния, восприимчивого к стимуляции высвобождения IL-8 кератиноцитов, восприимчивого к стимуляции окислительного взрыва нейтрофилов или восприимчивого к индуцированию некроза.

Изобретение относится к соединению структурной формулы I, которое может быть использовано для предотвращения, лечения или уменьшения интенсивности симптомов заболевания или состояния, восприимчивого к стимуляции окислительного взрыва нейтрофилов, восприимчивого к стимуляции высвобождения IL-8 кератиноцитов или восприимчивого к индуцированию некроза.

Изобретение относится к новым соединениям общей формулы (I), которые обладают Btk-селективной ингибирующей активностью (ингибиторы тирозинкиназы Брутона). При этом соединения проявляют метаболическую устойчивость и не обладают гепатотоксичностью, то есть являются безопасными терапевтическими средствами для лечения заболеваний, в которых задействованы В-клетки или мастоциты.

Изобретение относится к арил-замещенным карбоксамидным производным формулы (I) или их фармацевтически приемлемым солям, где в формуле (I) R представляет собой водород; R1 независимо выбран из группы, состоящей из: (1) водорода, (2) галогена, (3) гидроксила, (4) -On-C1-6 алкила, где алкил является незамещенным или замещен одним или несколькими заместителями, независимо выбранными из R7, (5) -On-гетероциклической группы, выбранной из пиперидинила, пирролидинила, тетрагидропиранила, тетрагидрофуранила и оксетанила; n имеет значение 0 или 1, когда n имеет значение 0, вместо On присутствует химическая связь; р имеет значение 1 или 2; когда р имеет значение два, R1 могут быть одинаковыми или отличными друг от друга; R2 представляет собой C1-6 алкил, который является незамещенным или замещенным одним или несколькими заместителями, независимо выбранными из R7; или R2 вместе с R1 образует С3-С6 циклоалкил; X представляет собой 1,2-С3 циклоалкилен; W, Y и Z независимо выбраны из атома азота и атома углерода; по меньшей мере, один из W, Y и Z представляет собой азот и W, Y и Z, в одно и то же время, не являются углеродом; R3, R4, R5 и R6 являются такими, как указано в формуле изобретения; Ar означает арил, который представляет собой моно- или би-карбоциклическое или моно- или би-гетероциклическое кольцо, содержащее 0-3 гетероатома, выбранных из О, N и S, включая фенил, фурил, оксазолил, тиазолил, имидозолил, пиридил, пиперидинил, пиримидинил, изооксазолил, триазолил, тетрагидронафтил, бензофуранил, бензотиофенил, индолил, бензоимидазолил, хинолил, изохинолил, хиноксалинил, пиразоло [1,5-а] пиридил, тиено [3,2-b] пирролил, где арил необязательно замещен 1-3 заместителями, указанными в формуле изобретения.

Изобретение относится к биотехнологии, в частности к получению противоопухолевых лекарственных средств для генной терапии, и может быть использовано в медицине. Получают лекарственное противоопухолевое средство, содержащее генную конструкцию в форме плазмидной ДНК, включающей гены тимидинкиназы вируса простого герпеса (HSVtk) и гранулоцитарно-макрофагального колониестимулирующего фактора (GM-CSF), заключенную в полимерный носитель - сополимер полиэтиленгликоль-полиэтиленимин-тat пептид (ПЭГ-ПЭИ-ТАТ).

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к синтетическим пептидам с иммуностимулирующими свойствами, и может быть использовано в медицине. Синтезирован ряд пептидов, отличающихся по химической структуре от известных биологически активных пептидов Аллоферонов и Аллостатинов.

Группа изобретений относится к области фармакологии и медицины и касается композиции, представляющей собой липосому в среде, имеющую внутреннее пространство, отделенное от среды мембраной, включающей один или несколько липидов, причем внутреннее пространство липосомы содержит катионный антинеопластический терапевтическоий агент, а также полиол или сахар, полианионизированный с помощью, по меньшей мере, двух сильноанионных функциональных групп, причем сахар представляет собой моносахарид или дисахарид, в которой катионный агент и полианионизированный полиол или полианионизированный сахар имеют форму кислоты или соли, а также содержатся внутри липосомы, где композиция представляет собой лекарственную форму для парентерального введения, а также касается способа инкапсулирования катионного антинеопластического терапевтического агента в липосому.

Изобретение относится к области органической химии, а именно к производным тиено[2,3-с]хинолин-4-она общей формулы I или к их фармацевтически приемлемым солям, где R1 выбран из группы, состоящей из водорода, галогена, С1-С6алкила, С2-С6алкенила и С2-С6алкинила; R2 выбран из группы, состоящей из водорода и галогена; R3 выбран из группы, состоящей из водорода, гидроксила, C1-C6алкокси, циано, -OCOR103, где R103 представляет собой C1-C6 алкил, и -OCOOR104, где R104 представляет собой C1-C6 алкил; и R4 выбирают из группы, состоящей из С2-С6алкенила, С6-С10 арила, инданила, гетероарила и 3-8-членного гетероциклоалкила, и R4 необязательно замещен заместителем А; где заместитель А независимо выбран из группы, состоящей из гидроксила; галогена; C1-C6 алкила, необязательно замещенного заместителем В; С3-С6циклоалкила, необязательно замещенного циано или C1-C6алкилом, замещенным -NR31R32, где R31 и R32 представляют собой водород; -NR21R22, где каждый R21 и R22 независимо представляет собой водород; С1-С6алкил; -SO2NR23R24, где каждый R23 и R24 независимо представляет собой водород; С1-С6алкил, необязательно замещенный галогеном; -NHSO2(C1-C6алкила); 6-членного гетероциклоалкила, выбранного из пиперазинила или пиперидинила, замещенного -NR39R40, в котором каждый R39 и R40 независимо представляет собой водород, C1-C6алкил или C1-C6алкилсульфонил; -COR12, где R12 представляет собой С1-С6алкил; где заместитель В независимо выбран из группы, состоящей из гидроксила; циано; С3-5циклоалкила; 5-6-членного гетероциклоалкила, выбранного из пирролидинила или пиперидинила, необязательно замещенного гидроксилом, амино, С1-С6аминоалкилом или С1-С6алкилом, замещенным С2-С4алкилоксикарбониламино; -NR51R52, где каждый R51 и R52 независимо представляет собой водород; С1-С6алкил, C1-C6 алкилсульфонил или С5циклоалкил; -SO2NR106R107, где R106 и R107 представляют собой водород; где R5 представляет собой водород; и где представляет собой структуру -S-CR7=CR6-, где R6 представляет собой водород; где R7 выбран из группы, состоящей из водорода; галогена; C1-C6 алкила.

Изобретение относится к хлорину, имеющему формулу 1, 2, 3 или 4, который может применяться в фотодинамической терапии: где В представляет собой R1 независимо представляет собой незамещенную алкильную группу, состоящую из 4-15 атомов углерода; R2 независимо представляет собой -ОН заместитель в мета-положении фенильного кольца, -СООН в пара-положении фенильного кольца или -СООСН3 в пара-положении фенильного кольца.
Изобретение относится к фотохимиотерапии и фотодинамической терапии, а именно к применению фармацевтически приемлемой соли амфифильного фотосенсибилизирующего средства в способе фотохимической интернализации, где указанная соль обладает водорастворимостью по меньшей мере 30 мг/мл и выбрана из диэтаноламиновой соли TPCS2a, этаноламиновой соли TPCS2a, триэтаноламиновой соли TPCS2a, диэтаноламиновой соли TPPS2a, этаноламиновой соли TPPS2a и триэтаноламиновой соли TPPS2a.

Группа изобретений относится к области биохимии. Предложено выделенное моноклональное антитело, которое связывается с белком РВР2а или РВР5.

Изобретение относится к ветеринарии и может быть использовано для защиты птиц от болезни Ньюкастла. Способ включает введение in ovo во время последней четверти периода инкубации эффективной иммунизирующей дозы иммуногенной композиции непосредственно в эмбрион.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к антителу или его функциональному фрагменту, направленным против эпитопа стафилококка золотистого, а также к их применению для обнаружения стафилококка золотистого.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к способу анализа еx-vivo, будет ли больной раком субъект отвечать терапевтически на способ лечения. Для этого от пациента получают биологический образец, выбранный из группы, состоящей из образца общей крови, плазмы или сыворотки.
Изобретение относится к области ветеринарии к диагностике инфекционных болезней, а именно бруцеллеза. Способ изготовления бруцеллезной диагностической сыворотки включает однократное введение смеси антигена (100 млрд м.к.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к химерным или гибридным белкам для индуцирования иммунного ответа против Р. gingivalis.
Изобретение относится к ветеринарии, а именно к ветеринарной эпизоотологии и иммунологии. Способ заключается в следующем.

Изобретение относится к новому токсину. .

Изобретение относится к полипептидам, содержащим последовательность -X-Y- или -Y-X-, в которой -X- представляет собой аминокислотную последовательность, определенную выше, а -Y- не является определенной выше последовательностью, т.е.
Изобретение относится к медицине, в частности хирургической стоматологии и челюстно-лицевой хирургии, и может быть использовано при лечении лучевой сиалоаденопатии.
Наверх