Вакцина для профилактики сибирской язвы и некробактериоза животных и способ получения её

Авторы патента:

Мельник Николай Васильевич (RU)

Гринь Светлана Анатольевна (RU)

Литенкова Ирина Юрьевна (RU)

Самуйленко Анатолий Яковлевич (RU)

Макарова Лариса Ивановна (RU)

Барсуков Юрий Иванович (RU)

Левкович Николай Григорьевич (RU)

Винокуров Иван Егорович (RU)

Трифан Валерий Никандрович (RU)

Мельник Роман Николаевич (RU)

A61K39/116 - поливалентные бактериальные антигены

Владельцы патента RU 2590598:

Федеральное государственное бюджетное научное учреждение "Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности" /ФГБНУ ВНИТИБП/ (RU)

Изобретение относится к области биотехнологии и микробиологии. Описана вакцина для профилактики сибирской язвы и некробактериоза животных. Вакцина содержит инактивированный формалином лейкоцидин-экзотоксин, адсорбированный на гидроокиси алюминия, а также суспензию живых спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ в физиологическом растворе. Вакцина также включает глицерин, сапонин и натриевую соль сукцината хитозана при определенных соотношениях компонентов. Кроме того, описан способ получения такой вакцины. Описанная вакцина обладает повышенной эффективностью за счет увеличения сроков иммунитета животных в вакцине против сибирской язвы и некробактериоза, Изобретение может быть использовано в ветеринарии. 2 н.п. ф-лы, 4 табл., 3 пр.

Изобретение относится к области ветеринарии и биотехнологии и касается получения вакцины для профилактики сибирской язвы и некробактериоза животных.

Известна вакцина для профилактики некробактериоза рогатого скота, содержащая в равных объемных соотношениях инактивированные формалином эндотоксин и экзотоксин, полученные из местных эпизоотических культур возбудителя некробактериоза, и адъювант на основе минерального масла и ланолина (Патент RU 1816348, A61K 39/00, 1995).

Однако известная вакцина не достаточно иммуногенна, так как требует двукратного введения и обеспечивает иммунитет только против некробактериоза в течение 3,5-4 мес. Кроме того, при получении вакцины осуществляют предварительный подбор местных штаммов для каждого конкретного хозяйства, что невозможно при промышленном производстве.

Известна вакцина для профилактики сибирской язвы и некробактериоза животных и способ получения ее, содержащая инактивированный формалином лейкоцидин-экзотоксин, полученный из производственного штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, представляющий собой высокоочищенный белок с молекулярной массой 18-20 кДа и адсорбированный на гидроокиси алюминия, а также суспензию живых спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ в физиологическом растворе, глицерин и сапонин (Патент RU 2524430, МПК А61К 39/116, A61K 39/07, опубл. 27.07.2014, Бюл. №21).

Однако известная вакцина не обеспечивает создание достаточного иммунитета против сибирской язвы и некробактериоза.

Задачей изобретения является повышение эффективности вакцины против сибирской язвы и некробактериоза за счет увеличения сроков иммунитета животных и снижения реактогенности вакцины.

Технический результат изобретения достигается в вакцине против сибирской язвы и некробактериоза, содержащей инактивированный формалином лейкоцидин-экзотоксин, полученный из производственного штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, представляющий собой высокоочищенный белок с молекулярной массой 18-20 кДа и адсорбированный на гидроокиси алюминия, а также суспензию живых спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ в физиологическом растворе, глицерин и сапонин, причем инактивированный формалином лейкоцидин-экзотоксин, полученный из производственного штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, представляет собой высокоочищенный белок с молекулярной массой 18-20 кДа с содержанием 1,5-2,0 млрд. клеток Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ в 1 см³, адсорбированный на гидроокиси алюминия, и дополнительно содержит натриевую соль сукцината хитозана при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Технический результат изобретения достигается также в способе получения вакцины против сибирской язвы и некробактериоза путем культивирования штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, инактивирования его формалином, отделения бактериальной массы от культуральной жидкости центрифугированием, выделением из культуральной жидкости экзотоксина-лейкоцидина, его очистки и концентрирование ультрафильтрацией на полых волокнах и адсорбцией на гидроокиси алюминия в гликолевом буфере, добавлением суспензии живых спор сибириязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ и сапонина, причем перед адсорбцией на гидроокиси алюминия к экзотоксину добавляют 1-10% инактивированной бактериальной массы штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ с содержанием 1,5-2,0 млрд. клеток в 1 см³, после чего последовательно добавляют натриевую соль сукцината хитозана и сапонин, а глицерин добавляют сразу после добавления сапонина.

Ассоциированную вакцину вводят однократно крупному рогатому скоту, овцам, козам, свиньям и северным оленям внутрикожно при помощи безыгольного инъектора в объеме 0,2-0,4 см³.

Вакцину против сибирской язвы и некробактериоза готовят следующим образом.

Пример 1. Для получения некробактериозного антигена - лейкоцидин-экзотоксина берут производственный штамм Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, культивируют, инактивируют формалином в конечной концентрации 0,4%, отделяют бакмассу от культуральной жидкости центрифугированием, из культуральной жидкости выделяют экзотоксин, подвергают его высокой очистке ультрафильтрацией на полых волокнах с размером пор 13-17 кДа и концентрируют до содержания белка (по Лоури) 5,5-7,0 мг % с молекулярной массой 18-20 кДа. Далее к полученному антигену - экзотоксину-лейкоцидину добавляют 1-10% инактивированной бактериальной массы штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ с содержанием 1,5 млрд. клеток в 1 см³, затем сорбируют на 12% гидроокисью алюминия в гликолевом буфере с pH 8,4, взятой в конечной концентрации 1,8%. После сорбции антигена на гидрате окиси алюминия проверяют нейтрализацию остаточного количества формалина. Далее к полученному антигену - экзотоксину-лейкоцидину добавляют инактивированную бактериальную массу штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ до содержания Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ 1,5 млрд. клеток в 1 см³, затем сорбируют на 12% гидроокисью алюминия в гликолевом буфере с pH 8,4, взятой в конечной концентрации 1,0%. После сорбции антигена на гидрате окиси алюминия проверяют нейтрализацию остаточного количества формалина. К 77,55 г смеси инактивированного формалином экзотоксина-лейкоцидина и инактивированной бактериальной массы штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ добавляют 1,2 г суспензии живых спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ с исходной концентрацией спор 2,5×10⁷ в 1 см³ физиологического раствора, а затем последовательно добавляют натриевую соль сукцината хитозана, сапонин и глицерин, взятых в конечной концентрации 1,0, 0,25 и 20,0%, соответственно, получая состав 1 при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Вакцину эмульгируют в гомогенизаторе при 3500 об/мин в течение 15 мин.

Полученная вакцина представляет собой однородную эмульсию белого цвета.

Пример 2. Для получения некробактериозного антигена - лейкоцидин-экзотоксина берут производственный штамм Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, культивируют, инактивируют формалином в конечной концентрации 0,4%, отделяют бакмассу от культуральной жидкости центрифугированием, из культуральной жидкости выделяют экзотоксин, подвергают его высокой очистке ультрафильтрацией на полых волокнах с размером пор 13-17 кДа и концентрируют до содержания белка (по Лоури) 5,5-7,0 мг % с молекулярной массой 18-20 кДа. Далее к полученному антигену - экзотоксину-лейкоцидину добавляют 1-10% инактивированной бактериальной массы штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ с содержанием 2,0 млрд. клеток в 1 см³, затем сорбируют на 15% гидроокисью алюминия в гликолевом буфере с pH 8,6, взятой в конечной концентрации 3,0%. После сорбции антигена на гидрате окиси алюминия проверяют нейтрализацию остаточного количества формалина. Далее к полученному антигену - экзотоксину-лейкоцидину добавляют инактивированную бактериальной массы штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ до содержания Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ 2,0 млрд. клеток в 1 см³, затем сорбируют на 15% гидроокисью алюминия в гликолевом буфере с pH 8,6, взятой в конечной концентрации 2,0%. После сорбции антигена на гидрате окиси алюминия проверяют нейтрализацию остаточного количества формалина. К 63,25 г смеси инактивированного формалином экзотоксина-лейкоцидина и инактивированной бактериальной массы штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, добавляют 1,0 г суспензии живых спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ с исходной концентрацией спор 3,0×10⁷ в 1 см³ физиологического раствора, а затем последовательно добавляют натриевую соль сукцината хитозана, сапонин и глицерин, взятых в конечной концентрации 5,0, 0,75 и 30,0%, соответственно, получая состав 2 при следующем соотношении компонентов, мас.%:

Вакцину эмульгируют в гомогенизаторе при 3500 об/мин в течение 15 мин.

Полученная вакцина представляет собой однородную эмульсию белого цвета.

Пример 3. Полученные по примерам 1-2 составы 1-2 применяют для профилактических и вынужденных прививок клинически здоровых животных однократно. Молодняк, не достигший 3-месячного возраста, прививать ассоциированной вакциной не разрешается. Вакцину вводят внутрикожно с помощью безыгольного инъектора в бесшерстный участок тела крупному рогатому скоту и свиньям по 0,4 см³ (2 раза по 0,2 см³) овцам, козам и северным оленям по 0,2 см³.

Устойчивость к заражению сибирской язвой и некробактериозом сохраняется до 1,5 года, что в 1,5 раза длительней, чем известная вакцина (полученная по прототипу) - что подтверждают данные таблицы.

Кроме того, реактогенность в группе контрольных животных, получавших вакцину, полученную по прототипу, составила 5,2±1,6 см², в то время как в опытных группах она была равна 0.

Таким образом, вакцина против некробактериоза является высокоэффективным препаратом, способным более длительно защитить животных от некробактериоза (более двух лет) и снизить реактогенность с 3,6-6,8 см до 0 см.

Предлагаемая ассоциированная вакцина против сибирской язвы и некробактериоза создает длительный иммунитет у привитых животных, при этом по иммуногенности она превосходит известную вакцину против сибирской язвы и некробактериоза. Вакцина безвредна и авирулентна для лабораторных и сельскохозяйственных животных.

1. Вакцина против сибирской язвы и некробактериоза, содержащая инактивированный формалином лейкоцидин-экзотоксин, полученный из производственного штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, представляющий собой высокоочищенный белок с молекулярной массой 18-20 кДа и адсорбированный на гидроокиси алюминия, а также суспензию живых спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ в физиологическом растворе, глицерин и сапонин, отличающаяся тем, что инактивированный формалином лейкоцидин-экзотоксин, полученный из производственного штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, представляет собой высокоочищенный белок с молекулярной массой 18-20 кДа с содержанием 1,5-2,0 млрд. клеток Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ в 1 см³, адсорбированный на гидроокиси алюминия, и дополнительно содержит натриевую соль сукцината хитозана при следующем соотношении компонентов, мас.%:

2. Способ получения вакцины против сибирской язвы и некробактериоза путем культивирования штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, инактивирования его формалином, отделения бактериальной массы от культуральной жидкости центрифугированием, выделением из культуральной жидкости экзотоксина-лейкоцидина, его очистки и концентрирования ультрафильтрацией на полых волокнах и адсорбцией на гидроокиси алюминия в гликолевом буфере, добавлением суспензии живых спор сибириязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ, сапонина и глицерина, отличающийся тем, что к экзотоксину-лейкоцидину добавляют инактивированную бактериальную массу штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ с содержанием 1,5-2,0 млрд. клеток Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ в 1 см³, а после добавления в реакционную смесь суспензии живых спор сибириязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ последовательно добавляют натриевую соль сукцината хитозана и сапонин, а глицерин добавляют сразу после добавления сапонина.

Изобретение относится к области ветеринарной медицины и касается вакцины, ассоциированной против эшерихиоза, стрептококкоза и стафилококкоза крупного рогатого скота.

Химерный белок боррелии, нуклеиновая кислота, кодирующая такой белок, экспрессирующая кассета, вектор, способ и набор для диагностики лайм-боррелиоза, вакцина для профилактики боррелиоза // 2549698

Представленная группа изобретений касается слитых белков, нуклеиновых кислот, кодирующих такие белки, экспрессирующей кассеты, обеспечивающей экспрессию нуклеиновой кислоты, вектора, включающего такую кассету, способа диагностики in vitro-боррелиоза, набора для такой диагностики, в которых используют упомянутые белки, а также вакцинной композиции для профилактики боррелиоза, включающей такие белки.

Химерный белок, используемый для диагностики лайм-боррелиоза. // 2546246

Изобретения относятся к химерным белкам, нуклеиновой кислоте, кодирующей такой белок, экспрессирующей кассете, обеспечивающей экспрессию нуклеиновой кислоты, вектора, включающего экспрессирующую кассету, способу диагностики и набора для диагностики.

Препарат для лечения некробактериоза крупного рогатого скота // 2539105

Изобретение относится к биотехнологии и ветеринарии. Препарат для лечения некробактериоза крупного рогатого скота содержит поливалентный анатоксин против клостридиозов овец, культуральную жидкость штамма Escherichia coli А-5 с содержанием микробных клеток 7,0·108-1·109 КОЕ/мл и культуральную жидкость штамма Escherichia coli Б-5 с содержанием микробных клеток 7,0·108-1·109 КОЕ/мл в соотношении 1:1:1.

Способ изготовления вакцины, ассоциированной против эшерихиоза, стрептококкоза и стафилококкоза крупного рогатого скота // 2538158

Изобретение относится к ветеринарной медицине и касается способа изготовления вакцины, ассоциированной против эшерихиоза, стрептококкоза и стафилококкоза крупного рогатого скота.

Вакцина для профилактики сибирской язвы и некробактериоза животных и способ получения ее // 2524430

Изобретение касается вакцины для профилактики сибирской язвы и некробактериоза животных и способа ее получения. Представленная вакцина содержит инактивированный формалином лейкоцидин - экзотоксин, полученный из производственного штамма Fusobacterium necrophorum "0-1" ВИЭВ, 1-10% инактивированной бактериальной массы из указанного штамма с содержанием 7,0-7,7 млрд клеток в 1 см3, глицерин и смесь минерального масла «Маркол-52» и эмульгатора, взятых в весовых соотношениях 1:(0,9-1,1), а также суспензию живых спор сибиреязвенного вакцинного штамма 55-ВНИИВВиМ в физиологическом растворе и адъювант.

Иммуногенная композиция для применения в вакцинации против стафилококков // 2521501

Изобретение относится к области иммунологии, молекулярной биологии и генетической инженерии. Предложена иммуногенная композиция, содержащая смесь стафилококковых белков, и включающая стафилококковый белок, связывающий внеклеточный компонент, и стафилококковый транспортный белок, или стафилококковый белок, связывающий внеклеточный компонент, и стафилококковый регулятор вирулентности или токсин, или стафилококковый транспортный белок и стафилококковый регулятор вирулентности или токсин.

Вакцина ассоциированная против сальмонеллеза, эшерихиоза и вирусной геморрагической болезни кроликов // 2510839

Изобретение относится к области ветеринарной медицины и касается вакцины ассоциированной против сальмонеллеза, эшерихиоза и вирусной геморрагической болезни кроликов.

Композиции, включающие антигены neisseria meningitidis из серогрупп в и с, и дополнительный антиген // 2508122

Изобретение раскрывает иммуногенную композицию, имеющую иммуногенную активность в отношении Neisseria meningitidis из серогрупп В и С, содержащую (а) олигосахарид N. meningitidis серогруппы С (Nmc), (в) протеолипосомные везикулы наружной мембраны N.meningitidis серогруппы В (NmB) и (с) белок NmB, содержащий аминокислотную последовательность, приведенную в описании, или иммуногенный фрагмент указанной последовательности, или последовательность по меньшей мере на 80% идентичной указанной последовательности.

Способ изготовления вакцины ассоциированной против сальмонеллеза, эшерихиоза и вирусной геморрагической болезни кроликов // 2496518

Изобретение относится к области ветеринарной медицины и касается способа изготовления вакцины ассоциированной против сальмонеллеза, эшерихиоза и вирусной геморрагической болезни кроликов.

Комбинированная вакцина для профилактики коклюша, дифтерии, столбняка // 2596919

Изобретение относится к области медицины и касается комбинированной вакцины для профилактики коклюша, дифтерии и столбняка. Представленная вакцина содержит коклюшный компонент, дифтерийный и столбнячный анатоксины, адсорбированные на алюминия гидроксиде. В качестве коклюшного компонента используется вакцина коклюшная бесклеточная очищенная, при следующем соотношении ингредиентов в одной дозе (0,5 мл): Вакцина коклюшная бесклеточная очищенная 30-45 мкг Дифтерийный анатоксин 2,5-5 Lf Столбнячный анатоксин 2,5-5 Lf Алюминия гидроксид (в пересчете на алюминий Al3+) от 0,3 до 0,55 мг Охарактеризованная вакцина не является реактогенной, полностью соответствует требованиям, предъявляемым Всемирной Организацией Здравоохранения к препаратам такого класса, и может быть использована для бустерной вакцинации. 2 табл.

Комбинированная вакцина для профилактики коклюша, дифтерии, столбняка, гепатита в и инфекции, вызываемой haemophilus influenzae тип в // 2626532

Изобретение относится к медицине, а именно к комбинированным вакцинам, содержащим в одном препарате несколько антигенов. Представленная комбинированная вакцина содержит в своем составе следующие компоненты: коклюшный, в качестве которого используется вакцина коклюшная бесклеточная очищенная 60-70 мкг, дифтерийный анатоксин - 15-20 Lf, столбнячный анатоксин 5-7,5 Lf, рекомбинантный поверхностный антиген вируса гепатита В (HBsAg) 5-10 мкг, вакцину Haemophilus influenzae тип b конъюгированную (Hib) 8-12 мкг, алюминия гидроксид (в пересчете на алюминий Al3+) от 0,3 до 0,55 мг. Охарактеризованная вакцина является высокоиммуногенным, нетоксичным препаратом, позволяющим одновременно проводить иммунизацию против коклюша, дифтерии, столбняка, гепатита В и инфекции, вызываемой Haemophilus influenzae тип b. Использование изобретения позволяет расширить арсенал средств для вакцинации детей в соответствии с Национальным календарем профилактических прививок России. 4 табл., 1 пр.

Иммуногенная композиция // 2634405

Изобретения касаются иммуногенной композиции (варианты) и способа получения композиции (варианты). Представленные композиции содержат конъюгаты капсулярных сахаридов Neisseria meningitides серогрупп А, С, Y, W135 и X со столбнячными анатоксинами или CRM197. Причем каждый из сахаридов N.meningitidis имеет белок-носитель, с которым он конъюгируется через гетеро- или гомо-бифункциональный линкер с помощью 1-циано-4-пирролидинопиридиния тетрафторбората (СРРТ), применяемого в качестве реагента цианилирования. Изобретения могут быть использованы для защиты человеческого организма-хозяина от заболевании, вызванного инфекцией Neisseria meningitidis. 7 н. и 15 з.п. ф-лы, 11 ил., 16 табл., 5 пр.