Способ выявления нервных структур в тканях


 


Владельцы патента RU 2595849:

Гоман Максим Викторович (RU)
Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Ставропольский государственный медицинский университет" Министерства Здравоохранения Российской Федерации (ГБОУ ВПО СтГМУ Минздрава России) (RU)

Изобретение относится к области медицины, а именно к способу выявления нервных структур в тканях. Сущность изобретения состоит в том, что исследуемый материал первоначально перфузируют через сосуды 5% раствором глюкозы с помещением на 10-15 мин в 1-2% раствор диметилсульфоксида на дистиллированной воде с дальнейшей промывкой сосудистого русла 5% раствором глюкозы, введением в сосуды 2% раствора Co(NO3)2 на 15-20 мин и промывкой 1-2 мин 5% раствором глюкозы, далее помещением для пропитывания в смесь из 10% Na2S и 70% этилового спирта на 1-8 ч, в зависимости от структуры и массы материала, с последующей промывкой в дистиллированной воде до исчезновения запаха сероводорода, фиксацией 3-е суток в 10% нейтральном формалине и доокрашиванием полученных гистологических срезов в 0,15% галлоцианине, причем исследуемые на микропрепарате нервные волокна, особенно безмякотные, - интенсивно черные на светлом фоне, а ядра клеток и их цитоплазма - слегка синие. Использование заявленного способа позволяет повысить эффективность выявления нервных структур в тканях.1 пр.

 

Изобретение относится к области медицины, в частности стоматологии, и может быть использовано для выявления нервных структур в зубочелюстной системе на нейрохимическом уровне.

В распоряжении нейроморфологов имеется широкий выбор методик для выявления нервных структур в тканях. Использование рекомендуемых прописей и условий на практике часто не позволяет получить желаемого результата.

Наиболее часто в нейрогистологической практике применяется методика Е.И. Рассказовой [Рассказова Е.И. Методы импрегнации нейроплазмы разных периферических нервных волокон и окончаний / Е.И. Рассказова // Вопросы психиатрии. В кн. Научные работы института психиатрии. М., Медицина, - 1956. - С. 349-353].

Сущность проведения нейрогистологической реакции по Расказовой Е.И. заключается в следующем:

A) объект исследования фиксируют на 7-10 суток в 12% растворе нейтрального формалина;

Б) режут на замораживающем микротоме;

B) промывают в проточной воде 2 ч;

Г) промывают срезы в дистиллированной воде 2 ч;

Д) помещают срезы на 30 мин в 60° спирт, после чего промывают в двух порциях дистиллированной воды;

Е) помещают срезы на 1 ч в 20% раствор AgNO3 в термостате при t=37°. Затем промывают в течение 3-5 мин в дистиллированной воде;

Ж) проводят срезы в 1% растворе кислого формалина, приготовленного на водопроводной воде, затем просушивают срезы на фильтровальной бумаге;

З) помещают срезы на 2-3 мин в аммиачное серебро с последующей проводкой в 0,5% кислого формалина на водопроводной воде при комнатной температуре;

И) помещают срезы в аммиачную воду (1:1) на 3-5 мин;

К) проводят через спирты, заключают в бальзам классическим способом.

Способом Е.И. Рассказовой нервные элементы выявляются не всегда и это частично объясняется биохимической индивидуальностью органов и тканей в различные периоды онтогенетического развития.

По выявлению нервных структур в тканевых образованиях различных органов является способ Ю.Н. Майбороды [Способ выявления нервных волокон и сосудов микроциркуляторного русла / Майборода Ю.Н. авт. свид. №1171690 от 08.04.1985].

Способ осуществляется следующим образом:

A) кусочки органа размером 1,0-1,5 см3 фиксируют в течение 14 дней в 12% растворе нейтрального формалина (Ph=7,2-7,4), который сменяют 2-3 раза за весь период фиксации;

Б) после фиксации материал промывают сначала в проточной, а затем в дистиллированной воде - 2-3 ч соответственно;

B) приготавливают на замораживающем микротоме гистологические срезы в количестве 8-10, помещают на 10-15 мин в 1-5% раствор диметилсульфоксида на дистиллированной воде;

Г) из среды диметилсульфоксида, предварительно осушенные фильтровальной бумагой, переносят на 15-30 мин в 5% раствор AgNO3;

Д) срезы проводят через ряд ванночек с 0,5-1% раствором кислого формалина (Ph=6,0-6,3) на смеси отстоявшейся водопроводной и кипяченой воды в соотношении 1:2;

Е) переносят срезы на 1-2 мин в раствор аммиачного серебра, в котором аммиака должно быть на 1-2 капли больше с целью подавления окрашивания элементов стромы;

Ж) из аммиачного серебра срезы помещают в 0,25-0,5% раствора нейтрального формалина на водопроводной воде комнатной температуры до приобретения ими соломенного оттенка;

З) фиксацию окрашенных срезов осуществляют в аммиачной воде из расчета 1 часть 25% аммиачного спирта и 4 части дистиллированной воды в течение 1 ч. Затем срезы промывают в дистиллированной воде 12 ч со сменой воды 2-3 раза;

И) обезвоживание в спиртах, карбоксилоле, ксилоле, заключение в бальзам производится общеизвестным способом.

Этот способ весьма трудоемкий, не дает полной информации о топографии нервного аппарата - нервных окончаний и, особенно, нейронов ганглиев парасимпатического отдела вегетативной нервной системы, их связей и требует проведения дополнительной окраски стромы. Кроме того, применяя методики импрегнации на основе AgNO3, невозможно судить о биохимических процессах в изучаемых объектах.

Наиболее близким из способов выявления нервных элементов является метод с азотнокислым кобальтом по Де Фано [Пирс Э. Гистохимия. Теоретическая и прикладная. М. 1962; Лойд З., Госсрау Р., Шиблер Т. Гистохимия ферментов. Лабораторные методы. М., «Мир», - 1982].

Суть метода заключается в следующем:

а) кусочки толщиной 3-4 мм фиксируют в смеси следующего состава: Со(NO3)2 - 1 г, дистиллированной воды 100 см3, кислого формалина 15 см3. Продолжительность фиксации 6-8 ч для молодых и 12-24 ч для взрослых тканей. Комнатная температура;

б) фиксированный материал быстро ополаскивают и помещают в 1,5% раствор азотнокислого серебра (AgNO3), в темноте, при комнатной температуре на 24-48 ч, в зависимости от величины кусочков;

в) далее, после быстрого ополаскивания в дистиллированной воде кусочки материала переносят на 8-24 ч для восстановления в смесь: гидрохинона 1-2 г, нейтрального формалина 15 см3, воды 100 см3, сульфида натрия (безводный!) 0,1-0,5 г (количество сульфида натрия достаточное, чтобы в ванне сразу появилась желтоватая окраска). Раствор готовят перед самым употреблением;

г) далее исследуемый материал быстро ополаскивают водой, заливают в парафин или целлоидин.

Однако проведение метода Де Фано является малоинформативным, так как неспецифичность окраски нервных структур и окружающих их соединительно-тканных и клеточных образований, приводит к наслаиванию ионов Ag+ на основные компоненты ткани.

Задачей изобретения является повышение эффективности выявления нервных элементов, информативности биохимических процессов и экономичности.

Поставленная задача достигается первоначальной перфузией исследуемого материала в 5% растворе глюкозы, выдержкой в растворе диметилсульфоксида на дистиллированной воде, промывкой в 5% растворе глюкозы сосудистого русла и заполнение его раствором 2% Со(NO3)2, последующей промывкой 5% раствором глюкозы и дальнейшим погружением исследуемого материала в смесь 10% Na2S с 70% этиловым спиртом от 1 до 8 ч, промывкой до исчезновения запаха сероводорода, фиксацией трое суток в 10% нейтральном формалине с последующим докрашиванием гистологических срезов в 0,15% галлоцианине до 24 ч.

Способ осуществляют следующим образом:

A) сначала перфузируют кусочки исследуемого материала через сосуды 5% раствором глюкозы, чтобы смыть кровь;

Б) на 10-15 мин исследуемый материал помещают в 1-2% раствор диметилсульфоксида на дистиллированной воде с последующей промывкой сосудистого русла 5% раствором глюкозы шприцом;

B) далее шприцом вводят в сосуды 2% раствор Со(NO3)2 на 15-20 мин;

Г) промывают 5% раствором глюкозы в течение 1-2 мин;

Д) помещают объект исследования в смесь следующего состава: 10% Na2S и 70% этиловый спирт от 1 до 8 ч (время определяют эмперическим путем в зависимости от структуры и массы органа);

Е) промывают в дистиллированной воде до исчезновения запаха сероводорода;

Ж) фиксируют в 10% нейтральном формалине 3 суток;

З) приготавливают на замораживающем микротоме гистологические срезы и докрашивают в 0,15% галлоцианина. Время окрашивания варьирует от 16 до 24 ч;

И) проводят традиционную проводку через реактивы, заключение в бальзам по стандартной методике.

Результат: нервные волокна (особенно безмякотные) - интенсивно черные на светлом фоне. Ядра клеток и их цитоплазма слегка синие.

Количество выявляемых нервных структур на единицу площади среза составляет 11,1±0,09, по сравнению с методом Де Фано - 4,9±0,07 (p<0,05).

Использование предлагаемого технического решения позволяет более полно выявить интраорганные компоненты нервных структур в различных по своей морфохимической природе органах и тканях. Присутствие отрицательного заряда на биологических субстратах способствует удержанию возле них положительно заряженного иона Со++ в нейроплазме нервных волокон за счет электростатической связи между Со++ и диметилсульфоксидом. Благодаря диметилсульфоксиду концентрация Со++ в нервных проводниках становится более высокой, что способствует повышению чувствительности (катионизации) соединений кобальта в предлагаемом способе.

Способ более экономичен - не требует использования AgNO3, время проведения анализа сокращается на сутки.

Способ выявления нервных структур в тканях, включающий фиксацию в формалине, приготовление гистологических срезов, отличающийся тем, что исследуемый материал первоначально перфузируют через сосуды 5% раствором глюкозы с помещением на 10-15 мин в 1-2% раствор диметилсульфоксида на дистиллированной воде с дальнейшей промывкой сосудистого русла 5% раствором глюкозы, введением в сосуды 2% раствора Co(NO3)2 на 15-20 мин и промывкой 1-2 мин 5% раствором глюкозы, далее помещением для пропитывания в смесь из 10% Na2S и 70% этилового спирта на 1-8 ч, в зависимости от структуры и массы материала, с последующей промывкой в дистиллированной воде до исчезновения запаха сероводорода, фиксацией трое суток в 10% нейтральном формалине и доокрашиванием полученных гистологических срезов в 0,15% галлоцианине, причем исследуемые на микропрепарате нервные волокна, особенно безмякотные, - интенсивно черные на светлом фоне, а ядра клеток и их цитоплазма - слегка синие.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области медицины, а именно гепатологии, и касается способа прогнозирования эффективности проведения гепатотропной терапии у больных неалкогольной жировой болезнью печения (НАЖБП).

Изобретение относится к медицине, кардиологии. У обследуемых учитывают наличие или отсутствие артериальной гипертонии, сахарного диабета, отягощенной наследственности по ишемической болезни сердца, конституционно-морфологический тип по Рису-Айзенку и Теннеру.

Изобретение относится к медицине, экологии, токсикологии и может быть использовано для дифференциальной диагностики у детей дисметаболической нефропатии, ассоциированной с токсическим действием кадмия, хрома, свинца и фенола техногенного происхождения и дисметаболической нефропатии нетоксической природы.
Изобретение относится к области медицины, а именно к способу прогнозирования течения апластической анемии после спленэктомии по индексу соотношения масс CD4+ и CD8+Т-лимфоцитов.

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству и гинекологии, и может быть использовано для индивидуального прогнозирования антенатальной гибели плода у беременных и выбора рациональной акушерской тактики в зависимости от результатов прогноза.
Изобретение относится к ветеринарии и предназначено для взятия крови у шиншилл. Шиншиллу фиксируют на животе с запрокинутой назад головой.

Изобретение относится к области измерений для диагностических целей. Блок датчиков для проведения диагностических измерений, размещенных на поверхности тела, включает основание, содержащее выемку, в которой закреплен пьезоэлемент датчика давления.

Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, и касается способа прогнозирования развития сердечно-сосудистых осложнений после острого инфаркта миокарда с подъемом сегмента ST без тревожно-депрессивных расстройств.

Изобретение относится к медицине, а именно, к онкологии, и может быть использованго для комбинированного лечения немелкоклеточного рака легкого (НМРЛ) IB - III стадии.

Изобретение относится к медицине и представляет собой способ оценки литогенности желчи, включающий определение в желчи у обследуемого (i) показателей холестерина (ХС, ммоль/л) в сравнении со средними значениями, принятыми за норму (k), отличающийся тем, что в желчи определяют комплекс общих липидов (ОЛ, г/л), суммарную антиокислительную активность (АОА) электрохимическим методом (в нА·с), максимум вспышки хемилюминесценции (МВХЛ, в усл.

Изобретение относится к микроэкологии и иммунологии и может использоваться для интегральной оценки состояния здоровья человека при прогнозировании инфекционного заболевания. Сущность способа оценки состояния здоровья человека состоит в том, что при прогнозировании течения инфекционного заболевания оценивают показатели микробиотопа слизистых открытых полостей и определяют на их основе степень нарушения микробиотопа слизистых полостей как показатель степени нарушения микробиоценоза биотопа слизистых открытых полостей, в зависимости от полученного результата судят о состоянии здоровья человека и прогнозируют течение инфекционного заболевания. 3 ил., 15 табл., 4 пр.

Изобретение относится к медицинской диагностике и представляет собой способ определения степени нарушения функции почек при почечной недостаточности, заключающийся в том, что утром после завтрака принимают 1 таблетку препарата «Золотой конек», запивая 100 мл воды, и через три часа по степени изменения окраски мочи определяют нарушение функции почек: в норме цвет мочи насыщенный ярко-зеленый, при почечной недостаточности - бледно-зеленый; повторное определение выполняют через шесть часов после приема таблетки: в норме моча становится бледно-зеленого цвета, при почечной недостаточности - зеленого цвета; заключительное определение выполняют через девять часов после приема таблетки: в норме цвет мочи соломенно-желтый, при почечной недостаточности цвет - бледно-зеленый. Использование способа позволяет упростить способ диагностики нарушения функции почек. 1 табл., 1 пр.
Изобретение относится к медицине, а именно к кардиологии, и может быть использовано для прогнозирования индивидуальной приверженности больных с артериальной гипертензией к лечению физическими нагрузками. Способ включает определение уровень сосудистого эндотелиального фактора роста - VEGF в сыворотке венозной крови утром натощак. При этом если уровень VEGF не превышает 200 мг/мл, прогнозируют низкую среднесрочную приверженность к регулярным физическим нагрузкам. Использование изобретения позволяет своевременно спрогнозировать неудовлетворительную толерантность к физическим упражнениям, что способствует адекватному выбору терапевтических мероприятий с учетом индивидуальных особенностей каждого пациента. 4 пр.
Изобретение относится к экологии и может быть использовано для неинвазивной прижизненной оценки физиологического состояния рыб по изменению цвета кожных покровов. Для этого фотографируют один из функциональных элементов организма рыбы при естественном освещении, получают цветное изображение этого органа (плавник) и проводят определение цветовых координат в выбранной цветовой модели пространства L*a*b. Преобразуют полученное изображение, применяя цветовой профиль, сгенерированный для данных условий освещения с помощью цветовой шкалы X-rite ColorCheker Passport и сохраняют его в формате TIFF 16 бит на канал. В пространстве L*a*b производят измерение цветовых координат, усредненных по всей поверхности плавника в канале *а, полученные значения сравнивают со значениями нормы, определенными для данного вида рыбы, сезона, местности. При этом значения, превышающие показатели нормы, указывают на болезненное состояние исследуемого животного, перенесение им стресса. Изобретение позволяет проводить неинвазивный прижизненный мониторинг состояния рыб. 1 пр.

Группа изобретений относится к области определения концентрации глюкозы в крови. Способ определения концентрации глюкозы в крови включает в себя этапы, на которых: вставляют тест-полоску в разъем порта для полоски измерительного прибора; запускают процедуру тестирования после нанесения образца; прикладывают первое напряжение в течение первого промежутка времени; переключают с первого напряжения на второе напряжение, отличное от первого напряжения; изменяют второе напряжение на третье напряжение, отличное от первого или второго напряжений; измеряют первое выходное значение тока в течение промежутка времени для переключения с первого напряжения на второе напряжение, но до полного перехода на второе напряжение; измеряют второе выходное значение тока после изменения со второго напряжения на третье напряжение; оценивают установившееся выходное значение тока после установки третьего напряжения; рассчитывают концентрацию глюкозы в крови на основе первого, второго и установившегося выходного значения тока без температурной компенсации концентрации глюкозы. Также раскрывается вариант способа определения концентрации глюкозы в крови и варианты систем для измерения глюкозы в крови. Группа изобретений обеспечивает определение концентрации глюкозы в крови без температурной компенсации. 4 н. и 5 з.п. ф-лы, 11 ил., 1 табл., 1 пр.

Группа изобретений относится к обнаружению аналитов в биологических жидкостях. Способ определения электрической емкости электрохимической биосенсорной испытательной камеры тест-полоски содержит этапы, на которых: пробу текучей среды помещают в электрохимическую испытательную камеру; к электрохимической испытательной камере прикладывают осциллирующий сигнал предварительно заданной частоты; определяют фазовый угол между выходным сигналом и осциллирующим сигналом от электрохимической испытательной камеры; измеряют амплитуду выходного сигнала от электрохимической испытательной камеры с подтверждением первого временного интервала выборки для измерения выходного сигнала на основании предварительно заданной скорости выборки на цикл выходного сигнала с предварительно заданной частотой и получением выборки выходного сигнала от камеры со вторым временным интервалом выборки, отличным от первого временного интервала выборки, так что амплитуда каждого выбранного выходного сигнала измеряется по истечении каждого второго временного интервала выборки вместо первого временного интервала; преобразуют измеренную амплитуду в комплексный импеданс электрохимической испытательной камеры на основе осциллирующего сигнала, фазового угла и электрического сопротивления между испытательной камерой и разъемами; и определяют электрическую емкость электрохимической испытательной камеры на основе комплексного импеданса и предварительно заданной частоты электрохимической испытательной камеры с оценкой выходного сигнала для определения продолжительности временного интервала между каждым пошаговым изменением выходного сигнала и установкой первого временного интервала выборки, который по существу равен продолжительности по времени. Также представлены способ и система для оценки состояния электрохимической тест-полоски. Достигается повышение точности и эффективности анализа. 3 н. и 26 з.п. ф-лы, 11 ил., 1 табл.

Группа изобретений относится к медицине, а именно к трансплантологии и сердечно-сосудистой хирургии, и может быть использована для прогнозирования риска кальцификации биологических протезов клапанов сердца. При сроке эксплуатации протеза менее 4 лет у пациента определяют пол, возраст, значение сывороточной концентрации щелочной фосфатазы, уровня костного изофермента щелочной фосфатазы, длительность функционирования биологического протеза в годах. Вероятный риск (Р) кальцификации определяют по формуле. При Р, равном 0-0,5, прогнозируют низкий риск кальцификации. При Р от 0,5 до 0,6 - риск средний. При значениях Р 0,6-1,0 вероятен высокий риск кальцификации импланта. При сроке эксплуатации протеза от 4 до 8 лет определяют значение сывороточного остеокальцина пациента, уровня паратиреоидного гормона, содержание фосфора в сыворотке крови. Вероятный риск (Р) кальцификации определяют по формуле. Низкий риск кальцификации прогнозируют при значениях Р от 0 до 0,3. Средний риск прогнозируют при Р 0,3-0,5. К группе высокого риска относят пациентов со значениями Р 0,5-1. При сроке эксплуатации протеза более 8 лет определяют содержание фосфора в сыворотке крови, значение кальций-фосфорного отношения, уровень костного изофермента щелочной фосфотазы. Вероятный риск (Р) кальцификации определяют по формуле, а низкий риск прогнозируют при Р 0-0,4. Средний риск при Р 0,4-0,6. Высокий риск кальцификации при Р от 0,6 до 1,0. Группа изобретений позволяет точно провести прогнозирование риска кальцификации биологических протезов клапанов сердца за счет оценки наиболее значимых показателей. 3 н.п. ф-лы, 2 табл., 3 пр.

Изобретение относится к медицине и предназначено для оценки белоксинтезирующей функции печени. Проводят определение вечером перед сном и утром натощак в плазме крови содержание общего белка, гематокрита, объема циркулирующей крови и мочевины, после чего рассчитывают коэффициент (К) по формуле где К - коэффициент состояния белоксинтезирующей функции печени; Мутром - содержание мочевины в плазме крови утром; ОБутром - содержание общего белка в плазме крови утром; ОЦКутром - объем циркулирующей крови утром; Htутром - гематокрит в %, отражающий удельный вес форменных элементов в крови утром; Мвечером - содержание мочевины в плазме крови вечером; ОБвечером - содержание общего белка в плазме крови вечером; ОЦКвечером - объем циркулирующей крови вечером; Htвечером - гематокрит в %, отражающий удельный вес форменных элементов в крови вечером. Оценивая состояние белоксинтезирующей функции печени у мужчин, считают ее сниженной при K>0,75, а у женщин при K>0,80. Способ позволяет повысить достоверность оценки состояния белоксинтезирующей функции печени. 1 пр.
Изобретение относится к медицине и предназначено для дифференциальной диагностики сальмонеллезного и алкогольного гастроэнтерита. Проводят определение содержания общего холестерина в крови и при его значениях ниже 6,5 ммоль/л диагностируют сальмонеллезный гастроэнтерит, а при значениях выше 7,5 ммоль/л - алкогольный гастроэнтерит. Способ позволяет повысить точность дифференциальной диагностики сальмонеллезного и алкогольного гастроэнтерита. 5 пр.
Изобретение относится к медицине и предназначено для дифференциальной диагностики сальмонеллезного и алкогольного гастроэнтерита. Проводят определение в сыворотке крови содержания иммуноглобулина M, при его значениях ниже 140 мг% диагностируют алкогольный гастроэнтерит, а при значениях выше 160 мг% - сальмонеллезный гастроэнтерит. Способ позволяет повысить точность дифференциальной диагностики сальмонеллезного и алкогольного гастроэнтерита. 5 пр.
Наверх