Способ изготовления гистологических препаратов


 

G01N1/28 - Исследование или анализ материалов путем определения их химических или физических свойств (разделение материалов вообще B01D,B01J,B03,B07; аппараты, полностью охватываемые каким-либо подклассом, см. в соответствующем подклассе, например B01L; измерение или испытание с помощью ферментов или микроорганизмов C12M,C12Q; исследование грунта основания на стройплощадке E02D 1/00;мониторинговые или диагностические устройства для оборудования для обработки выхлопных газов F01N 11/00; определение изменений влажности при компенсационных измерениях других переменных величин или для коррекции показаний приборов при изменении влажности, см. G01D или соответствующий подкласс, относящийся к измеряемой величине; испытание

Владельцы патента RU 2613175:

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Чувашский государственный университет имени И.Н. Ульянова" (RU)

Изобретение относится к области медицины и биологии, а именно к гистологии, и к гистологической технике и может быть использовано в практике патоморфологических лабораторий лечебных учреждений и морфологических кафедр высших учебных заведений медицинского и биологического профиля.

Изобретение решает задачу создания ускоренного способа изготовления гистологических препаратов, которые можно было бы длительное время хранить в условиях лабораторий и многократно использовать для изучения. Это достигается тем, что для обезвоживания и фиксации биологического материала используют ацетон в присутствии обезвоженного хлорида кальция, взятого в количестве 10-12% от массы биологического материала. В качестве пластин для закрепления гистологических срезов используют пластины из ламинационных пленок, а защитную среду создают путем закатки гистологических срезов между пластинами из ламинационных пленок с полимерным клеем, предназначенными для холодного ламинирования. 3 пр.

 

Изобретение относится к области медицины и биологии, а именно к гистологии, и к гистологической технике и может быть использовано в практике патоморфологических лабораторий лечебных учреждений и морфологических кафедр высших учебных заведений медицинского и биологического профиля.

Известен способ изготовления гистологических препаратов (Роскин Г.И. Микроскопическая техника. Изд-во «Наука», М., 1952, 447 с., Семченко В.В., Барашкова С.А., Ноздрин В.П., Артемьев В.Н. Гистологическая техника - 3-е изд. - Омск - Орел, 2006. - 290 с.), который включает фиксацию биологического материала в растворе 10-12% кислого или нейтрального забуференного формалина, промывку в проточной воде в течение 24 часов с последующим его проведением через спирты восходящей концентрации (50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 96% и абсолютном спирте), пропитку в растворах ароматических углеводов, затем в смеси хлороформа и парафина при 37°С. Затем биологический материал парафинируют и на парафиновом микротоме изготавливают срезы толщиной 5-7 мкм, которые монтируют на предметные стекла. Затем срезы на стеклах депарафинируют в 2-х порциях ксилола, проводят через спирты нисходящей концентрации (100%, 96%, 70% этанол), промывают дистиллированной водой, окрашивают, просветляют в двух порциях ксилола и заключают в полистирол или биомаунт. Основным недостатком известного способа является длительность изготовления гистологического препарата, который может составлять от нескольких дней до нескольких недель, а также использование большого количества химических растворителей.

Известен способ изготовления гистологических препаратов с использованием неионизирующего излучения бытовой микроволновой печи (патент RU №2104513, МПК G01N 1/28, G01N 33/483, приоритет от 06.03.1995 г., опубликовано 10.02.1998, который позволяет сократить время изготовления гистологических препаратов до 1 часа 20 минут. Существенным недостатком известного способа является специфичность липидно-белковых комплексов к термическим изменениям, что, в свою очередь, ведет к экзотермическим реакциям на макромолекулярном уровне, денатурации и деструкции белков, и, как следствие, деформации самой ткани на клеточном уровне.

Известен способ изготовления гистологических препаратов, при котором обезвоживание производят путем четырехкратной выдержки гистологических образцов в ацетоне [Р. Лилли. Патогистологическая техника и практическая гистохимия. - М.: Мир, 1969, с. 69]. Обезвоживание в ацетоне происходит быстро: при использовании на каждой стадии свежего ацетона достаточного выдержать образец в каждой порции растворителя по 20 мин. Однако использование свежего растворителя на каждой стадии дорого. Поэтому свежий ацетон используют только для четвертой стадии, сдвигая сосуды на одну позицию; четырежды использованный ацетон очищают перегонкой. При обезвоживании по такой схеме образцы выдерживают в каждой порции по 40 мин. Гистологические препараты, изготовляемые по данной методике, нуждаются в постоянном контроле и сопровождаются перемещением среза из жидкой среды в воздушную, что, как известно, приводит к нежелательной деформации тканей.

Известен способ изготовления гистологических препаратов, в соответствии с которым для заключения и длительного хранения окрашенных гистологических препаратов применяют 19-21%-ный раствор пенопласта в ксилоле, стабилизированный добавлением диметилфталата из расчета 1:100. После нанесения капли раствора на подготовленный срез и высыхания он оказывается заключенным в прозрачный и устойчивый при хранении материал в виде пленки (патент RU №2117273, приоритет от 28.09.1994 г., МПК G01N 1/28, опубликовано 10.08.1998). Одним из недостатков известного способа является то, что полученная пленка не является прочной по отношению к повреждающим агентам. Использование такой пленки приемлемо для хранения базы экспресс-диагностики, но не для частого использования в качестве учебного материала.

Известен способ изготовления гистологических препаратов, в соответствии с которым для заключения и длительного хранения окрашенных гистологических препаратов на предметное стекло с окрашенным срезом наносят каплю состава (патент RU №2499988, приоритет от 17.07.2012, МПК G01N 1/28, опубликовано 27.11.2013 г.) полученного растворением пенополиуретана (ППУ) и дибутилфталата в ксилоле так, чтобы она полностью покрыла срез. Затем накрывают покровным стеклом. После полного высыхания препарата, которое наступает через 16 минут, препарат готов к микрокопированию. Одним из недостатков известного способа является использование хрупких покровных стекол для монтировки срезов, которые, как правило, разрушаются вследствие длительного использования и неосторожного обращения при световой микроскопии, что особенно неудобно в работе морфологических кафедр высших учебных заведений медицинского и биологического профиля.

Задачей изобретения является создание ускоренного способа изготовления гистологических препаратов, которые можно было бы длительное время хранить в условиях лабораторий и многократно использовать для изучения.

Техническим результатом является проведение обезвоживания и фиксации биологического материала в среде органического растворителя в один этап и последующее заключение гистологического среза в пластины из ламинационных пленок.

Это достигается тем, что для обезвоживания и фиксации биологического материала используют ацетон в присутствии обезвоженного хлорида кальция, взятого в количестве 10-12% от массы биологического материала. В качестве пластин для закрепления гистологических срезов используют пластины из ламинационных пленок, а защитную среду создают путем закатки гистологических срезов между пластинами из ламинационных пленок с полимерным клеем, предназначенными для холодного ламинирования.

В соответствии с заявленным изобретением способ изготовления гистологических препаратов включает обезвоживание и фиксацию биологического материала в среде органического растворителя, а именно ацетона в присутствии обезвоженного хлорида кальция, взятого в количестве 10-12% от массы биологического материала, в течение 1-2 часов при комнатной температуре, последующее парафинирование и приготовление из него срезов, которые закрепляют на пластинах, затем размягчают в воде и депарафинируют в ксилоле, окрашивают известными реагентами. Отличительным является то, что гистологический срез сначала натягивают на полимерную пластину из пленки для холодного ламинирования, выполненную в виде пакета, состоящую их двух одинаковых пластин, спаянных по краю короткой стороны, внутренние поверхности которых покрыты полимерным клеем. Подготовленный гистологический срез накрывают второй пластиной и осуществляют проводку через ламинатор. Пленки для ламинирования представляют собой композитный материал, состоящий их трех слоев: полиэстровой основы (PET), полиэтилена (РЕ) и этилена винилацетата (EVA). Пленки для холодного ламинирования покрыты специальным клеем, который активируется при низких температурах от 37°С

Среднее время изготовления гистологических препаратов заявленным способом составляет от 1,5 до 8 часов. Осуществление обезвоживания и фиксации в среде ацетона в присутствии обезвоженного хлорида кальция в один этап позволяет не только ускорить данный процесс, но и значительно сэкономить расход органического растворителя, который может быть после регенерации использован повторно. Количество добавляемого в ацетон хлорида кальция было подобрано эмпирическим путем. В лабораторных условиях изготовлены гистологические препараты из различных типов тканей и органов (щитовидной железы, печени, сердца, легкого, мозга и др.).

Пример 1

Выполнено взятие биологического материала - кусочка миокарда - методом аутопсии массой 50 г. Кусочек биологического материала выдерживают в суспензии ацетона, взятого соответственно объему кассеты и 5 г обезвоженного хлорида кальция в течение одного часа, после чего извлекают из ацетона, производят заливку в парафин и нарезку парафинового блока на микротоме. Полученные срезы расправляют на теплой воде и монтируют на полимерной пластинке из пленки для ламинирования. Затем осуществляется последовательная проводка через следующие жидкости: ксилол (в течение одной минуты), холодная вода (в течение 2 минут), гематоксилин (в течение 4 минут), холодная вода (в течение 4 минут), эозин (в течение 2 минут), теплая вода (в течение 2 минут). Окрашенные срезы накрывают второй полимерной пластинкой и пропускают через ламинатор, после чего гистологический препарат можно исследовать с помощью микроскопа. При изготовлении гистологических препаратов использовались ламинатор PingDa PD230-1 и пленка для ламинирования Lamir 54×86 125 мкм А8.

Пример 2

Выполнено взятие биологического материала - паренхимы печени - методом аутопсии массой 30 г. Далее материал выдерживают в суспензии ацетона и 3,6 г хлорида кальция массой в течение одного часа, после чего производят заливку в парафин и нарезку парафинового блока на микротоме. Аналогично примеру 1 срезы расправляют на теплой воде и монтируют на полимерной пластине из пленки для ламинирования. После осуществляется последовательная проводка через следующие жидкости: ксилол (в течение одной минуты), холодная вода (в течение 2 минут), гематоксилин (в течение 4 минут), холодная вода (в течение 4 минут), эозин (в течение 2 минут), теплая вода (в течение 2 минут). Окрашенные срезы накрывают второй полимерной пластиной из пленки для ламинирования, пропускают через ламинатор, после чего препарат можно исследовать с помощью микроскопа. При изготовлении гистологических препаратов использовались ламинатор PingDa PD230-1 и пленка для ламинирования Lamir 54×86 125 мкм А8.

Пример 3

Выполнено взятие кусочка биологического материала - кости массой 35 г - и помещение его в ацетон с 4,2 г безводного хлорида кальция. Далее материал выдерживают в суспензии в течение одного часа, по истечении которого производят заливку в парафин и нарезку парафинового блока на микротоме. Полученные срезы расправляют на теплой воде и монтируют на полимерной пластинке из пленки для ламинирования. Затем осуществляется последовательная проводка через следующие жидкости: ксилол (в течение одной минуты), холодная вода (в течение 2 минут), гематоксилин (в течение 4 минут), холодная вода (в течение 4 минут), эозин (в течение 2 минут), теплая вода (в течение 2 минут). Окрашенные срезы накрывают второй полимерной пластинкой для ламинирования и пропускают через ламинатор, после чего исследуют с помощью микроскопа. При изготовлении гистологических препаратов использовались ламинатор PingDa PD230-1 и пленка для ламинирования Lamir 54×86 125 мкм А8.

Использование заявленного способа изготовления гистологических препаратов позволяет получить тонкие гибкие небьющиеся гистологические препараты высокого качества. Между полимерными листками можно вкладывать маркировочную табличку, что создает дополнительные удобства для хранения изготовленных препаратов и использования их в учебном процессе морфологических кафедр высших учебных заведений медицинского и биологического профиля. Заявленный способ существенно сокращает время изготовления гистологических препаратов и не требует сложного оборудования, поэтому может успешно применяться при экспресс-диагностике в практике патоморфологических лабораторий лечебных учреждений.

Способ изготовления гистологических препаратов, включающий обезвоживание и фиксацию биологического материала в среде органического растворителя, парафинирование и приготовление из него срезов, которые закрепляют на оптически прозрачных пластинах, затем размягчают в воде и депарафинируют в ксилоле, окрашивают известными реагентами и заключают в защитную среду, отличающийся тем, что обезвоживание и фиксацию биологического материала производят в среде ацетона в присутствии обезвоженного хлорида кальция, взятого в количестве 10-12% от массы биологического материала, в качестве пластин для закрепления гистологических срезов используют пластины из ламинационных пленок, а защитную среду создают путем закатки гистологических срезов между пластинами из ламинационных пленок с полимерным клеем, предназначенными для холодного ламинирования.



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к медицине, а именно к оториноларингологии, и может быть использовано для диагностики хронического тонзиллита у детей. Для этого в слюне пациента до начала лечения определяют уровень интерлейкина ИЛ-6 и при его значении ИЛ-6≥9,02 пг/мл диагностируют хронический тонзиллит.
Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано в прогнозировании течения опухолевого процесса при раке ободочной кишки без отдаленных метастазов для индивидуализации и выбора оптимальной тактики лечения.

Изобретение относится к области медицины, в частности к токсикологическим исследованиям и может быть использовано для определения формальдегида в моче. Для этого в пробу мочи объемом 1 см3 добавляют 0,1 см3 0,1% водного раствора пентафторбензилгидроксиламина (ПФБГА).

Изобретение относится к области медицины, а именно к диагностическим способам в хирургии, сердечно-сосудистой хирургии. Определяют следующие показатели: возраст пациента (ВЗР), уровень окклюзионно-стенотического поражения конечности (Ур), уровень триглицеридов (ТГ), уровень липопротеинов низкой плотности (ЛПНП), полиморфизм генов рецептора к ангиотензину II второго типа (AGTR2:1675) и эндотелиальной синтазе оксида азота (NOS3:894).

Изобретение относится к области медицины, а именно к оториноларингологии. Для прогнозирования абсцесса при остром тонзиллите проводят определение балльного индекса по результатам суммирования баллов.

Изобретение относится к области молекулярной биологии и диагностической медицины. Описан способ определения последовательностей экзонов генов BRCA1 и BRCA2.

Изобретение относится к медицине, а именно к пульмонологии, кардиологии и токсикологии, и может быть использовано для диагностики морфофункциональных нарушений миокарда у детей старше 5 лет с бронхолегочными заболеваниями, ассоциированными с воздействием бензола, толуола, фенола, формальдегида.

Изобретение относится к медицине, а именно к акушерству, гинекологии и эндокринологии. Проводят клиническое обследование пациентки, включающее измерение окружности талии.

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для диагностики скрытого эндометрита у свиноматок. В цервикально-маточной слизи свиноматок через две недели после опороса определяют показатель активности фермента гамма-глутамилтрансферазы и при выявлении показателя ее активности, составляющего 60 Е/л и более, диагностируют скрытый эндометрит.

Изобретение относится к области медицины, в частности к стоматологии, и предназначено для получения точных количественных данных о видовом составе микроорганизмов пародонтальных карманов.

Группа изобретений относится к получению водного конденсата из воздуха и способу концентрирования примесей из воздуха, которые могут быть использованы для высокочувствительного определения примесей в воздухе при проведении экологических исследований.

Изобретение относится к области измерительной техники, а именно в химической и нефтехимической отраслях промышленности на любых предприятиях и заводах, где вязкость изготовляемых ими продуктов является основным показателем качества.

Изобретение относится к медицине, а именно к лабораторной диагностике, и может использоваться для автоматического подсчета количества ретикулоцитов на анализаторах мазков крови.

Изобретение относится к запорной арматуре, применяющейся для газообразных сред, и может быть использовано, в частности, в пробоотборных емкостях. Клапан газоплотный содержит основание 1, корпус 2, по меньшей мере четыре уплотнительных кольца 5, 6, 7 и 8 из полимерного упругого материала и шпиндель 3 с золотником 3а.

Группа изобретений относится к технологии прокачки различных сред по трубопроводу и технике отбора проб жидкости из трубопровода и может найти применение в нефтехимической промышленности, где требуется точность определения параметров потока в трубопроводе.

Группа изобретений относится к устройствам для разделения фракций с более низкой и более высокой плотностями пробы текучей среды, а именно к вариантам механического разделителя и к вариантам узла разделения для обеспечения разделения пробы текучей среды на первую и вторую фазы, включающего такой механический разделитель.

Группа изобретений относится к области техники, связанной с использованием раствора(ов) на основе полимеров в подземных пластах месторождений, в частности в методах повышения нефтеотдачи пласта.

Изобретение относится к оборудованию для растворения поляризованного материала образца, а именно динамической поляризации ядер. Зонд растворения содержит удлиненный трубчатый внешний кожух, первый и второй удлиненные трубопроводы и сужающий элемент.

Изобретение относится к области лабораторных исследований процессов смешения различных сыпучих материалов в химической промышленности, в промышленном производстве строительных материалов и в других отраслях промышленности.

Группа изобретений относится к способам измерения объемной или массовой доли жидкости и примесей в газовом потоке, а также к отбору пробы для определения гранулометрического состава механических примесей.

Изобретение относится к области способов исследования материалов путем получения корней стружек при резании с последующим их изучением. Сущность: осуществляют установку и закрепление образца на столе устройства, задание маятнику начальной энергии путем оснащения грузом некоторой массы и поворота маятника вокруг оси качания в исходное положение, позиционирование образца смещением предметного стола относительно траектории качательного движения маятника. На маятнике закрепляют режущий элемент, а останов лезвия режущего элемента в материале образца обеспечивают варьированием массы груза и угла поворота маятника. Технический результат: расширение области применения устройства маятникового скрайбирования. 3 ил.
Наверх