Способ адоптивной иммунотерапии злокачественных опухолей


 


Владельцы патента RU 2613884:

Николаенко Андрей Николаевич (RU)

Изобретение относится к медицине, а именно к онкологии, и может быть использовано для повышения цитотоксической активности лимфоцитов in vitro. Для этого проводят контактирование культуры опухолевых клеток с выделенными из периферической крови натуральными киллерами и Т-цитотоксическими клетками с помощью реагентов CD 8 Micro Beads, human и CD 56 Micro Beads, human. Насыщают их дейтерием путем инкубирования и культивирования в присутствии интерлейкина-2 в концентрации 10000 МЕ/мл и концентрации тяжелой воды 7,7% при температуре 37°С в течение 72 часов. Использование данного способа позволяет повысить цитотоксическую активность лимфоцитов, ответственных за противоопухолевый иммунитет, путем насыщения дейтерием, что приводит к выделению более стабильных агентов окисления в противоопухолевом ответе.

 

Изобретение относится к области медицины, в частности онкологии, и может быть использовано для лечения онкологических больных.

Проблема лечения злокачественных опухолей по сей день остается актуальной для современной медицины. Особенно это касается лекарственного системного воздействия - химиотерапии. Внедрение высокотоксичных и дорогостоящих режимов химиотерапии не привело к значительному улучшению отдаленных результатов. Анализ публикаций последних 20 лет показывает, что химиотерапия достигла предела эффективности, а ее интенсификация не коррелирует с лучшей выживаемостью. Поэтому последние десятилетия наблюдается новый всплеск повышенного интереса к иммунотерапии злокачественных опухолей. Дело в том, что основную роль в противоопухолевой защите организма играет определенная группа лимфоцитов, называемых натуральными киллерами (убийцами). Натуральные киллеры, в отличие от других лимфоцитов, способны эффективно лизировать опухолевые клетки, однако их численность не велика, всего 10-15% всех лимфоцитов крови, что не позволяет им справиться с опухолевой массой. Чтобы увеличить количество лимфоцитов-киллеров используются методы так называемой адоптивной (adoptive- привнесенный) иммунотерапии. Все это открывает путь к применению совершенно новых классов лекарственных препаратов - адоптивной (привнесенной) иммунотерапии. С этой целью для проведения первого этапа клинических испытаний in vivo активно разрабатываются экспериментальные препараты с принципиально новым механизмом действия, эффективным и безопасным для организма в целом.

Известен «Способ получения активированных лейкоцитов для адъювантной адоптивной иммунотерапии злокачественных новообразований» по патенту №2414915 с приоритетом от 12.03.2009 г., опубл. 20.09.2010 г. Для осуществления указанного способа выделяют лейкоциты из стабилизированной гепарином периферической крови посредством смешивания с полиглюкином в течение 30 мин, культивируют их в среде RPMI или DMEM с 2-10% сыворотки пациента (или АВ сыворотки крови). Затем к среде добавляют Г-КСФ в конечной концентрации 500-5000 МЕ/мл и лейкоциты культивируют в течение 48-72 ч в условиях СО2-инкубатора. Использование способа позволяет упростить выделение лимфоцитов из крови и использовать полученные активированные лейкоциты для лечения онкологических больных и профилактики гнойно-септических осложнений после расширенных операций и химиолучевой терапии.

Но данный метод не позволяет активировать иммунокомпетентные клетки, ответственные непосредственно за противоопухолевый иммунитет.

Самым близким к заявляемому изобретению по своей технической сущности является (EN) Способ одновременной стимуляции и усиления V alphaiNKT клеток и CDCDNK клеток.

(EN) Способ одновременной стимуляции и усиления V alphaiNKT клеток и CDCDNK клеток. Предложен способ для одновременной стимуляции и усиления V alphaiNKT клеток и CDCDNK клеток. Способ содержит этапы: мононуклеарные клетки периферической крови (РВМС) выделяют из периферической крови; концентрацию РВМС доводят до 2×10/мл посредством бессывороточной среды, содержащей аутологичную плазму; добавляют Анти-CD антитела, GalCer, IL-2, IL-18, IL-21, затем смесь переносят в колбы для культивирования культуры; Анти-CD3 антитело вводят в клеточную суспензию на 24 часа; бессывороточную среду, содержащую интерлейкин-2, IL-18, IL-21, вводят каждые два дня в условия роста клеток; ячейки регулируют концентрацию 1,5×10/мл и после непрерывного культивирования в течение 14-21 суток, большие количества высокочистого V alphaiNKT клеток и CDCDNK клеток могут быть получены одновременно. Общее количество клеток может достичь эффективного значения, требуемого для клинической адоптивной иммунотерапии злокачественной опухоли. Способ одновременной и эффективной амплификации V alphaiNKT клеток и CDCDNK клеток является простым, удобным и эффективным.

Но данный способ не позволяет достичь дейтеризации NK-клеток и Т-цитотоксических клеток, то есть насыщения дейтерием, и в конечном итоге не приводит к выделению более стабильных агентов окисления в противоопухолевом ответе.

Предлагаемое изобретение направлено на получение следующего технического результата: обеспечить высокую противоопухолевую эффективность при персонифицированном подходе к лечению каждого больного, при этом обеспечить отсутствие токсичности.

Поставленная задача решается за счет того, что способ повышения цитотоксической активности лимфоцитов на культуре опухолевых клеток in vitro включает контактирование опухолевых клеток с выделенными из периферической крови натуральными киллерами и Т-цитотоксическими клетками с помощью реагентов CD 8 Micro Beads, human и CD 56 Micro Beads, human, насыщение их дейтерием путем инкубирования и культивирования в присутствии интерлейкина-2 в концентрации 10000 МЕ/мл и концентрации тяжелой воды 7,7% при температуре 37°С в течение 72 часов.

Высокая противоопухолевая эффективность предлагаемого способа достигается посредством нового механизма действия, а именно за счет выделения более стабильных агентов окисления. Персонифицированный подход к лечению достигается за счет введения в организм больного собственных активированных иммунных клеток, а эффект отсутствия токсичности достигается за счет применения химических веществ, безопасных для человеческого организма.

Цитотоксическую активность лимфоцитов определяли на NK-чувствительной линии клеток эритробластного лейкоза человека К-562. В основной группе инкубировались насыщенные дейтерием натуральные киллеры и Т-цитотоксические клетки, в группе контроля инкубировались лимфакин-активированные киллеры (ЛАК). ЛАК-клетки посредством иммуномагнитного сепаратора выделялись из периферической крови ресуспендировались в полной культуральной среде (среда RPMI 1640, 10% эмбриональной телячьей сыворотки, глютамин, гентамицин) в концентрации 1×106 в 1 мл среды. Затем добавлялся ИЛ-2 в концентрации 10000 МЕ/мл. Клетки инкубировали при 4,5% СО2 и 37°С в течение 3 суток. В контрольной и основной группе опухолевые клетки инкубировались в культуральной среде в плоскодонных 96-луночных микропланшетах в течение 16 часов. Затем в лунки добавлялся витальный краситель МТТ и по оптической плотности, измеряемой на мультискане МСС-340, рассчитывался процент лизиса опухолевых клеток (процент цитотоксичности). При этом максимальная киллерная активность в основной группе составила 77-86%, в группе контроля - 55-62% (р<0,01). С целью отслеживания накопления/разложения окислительных агентов после дегрануляции NK-клеток иммунная реакция в основной и контрольной группе была исследована на инфракрасном Фурье-спектрофотометре Tensor 27 Bruker optics, оснащенном приставкой нарушенного полного внутреннего отражения в реальном масштабе времени. В результате был сделан вывод, что в основной группе дейтерированные окислительные агенты более устойчивы к разложению опухолевыми клетками, чем в группе контроля.

Совокупность признаков нова и позволяет активировать иммунокомпетентные клетки, ответственные непосредственно за противоопухолевый иммунитет, при этом позволяет достичь дейтеризации NK-клеток и Т-цитотоксических клеток, то есть насыщения дейтерием, что приводит к выделению более стабильных агентов окисления в противоопухолевом ответе.

Способ повышения цитотоксической активности лимфоцитов на культуре опухолевых клеток in vitro, включающий контактирование опухолевых клеток с выделенными из периферической крови натуральными киллерами и Т-цитотоксическими клетками с помощью реагентов CD 8 Micro Beads, human и CD 56 Micro Beads, human, насыщение их дейтерием путем инкубирования и культивирования в присутствии интерлейкина-2 в концентрации 10000 МЕ/мл и концентрации тяжелой воды 7,7% при температуре 37°С в течение 72 часов.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине, а именно к эндокринной хирургии, и может быть использовано для альтернативного лечения инсулин-продуцирующей доброкачественной опухоли поджелудочной железы.

Изобретение относится к фармацевтической композиции на основе соединения палладия. Указанная композиция содержит ацидокомплекс палладия формулы: (С5Н12NO)2[PdCI4] в концентрации 0,2% в 0,9% водном растворе хлорида натрия.

Желатиновая капсула избирательного разрушения сосудов в опухолях относится к области фармацевтики и медицины, в частности онкологии, и касается новых препаратов, механизм действия которых заключается в том, что они разрушают уже существующие сосуды внутри опухоли, предотвращая тем самым доступ крови и кислорода, жизненно необходимые для выживания солидных опухолей размером более 1 мм.

Изобретение относится к медицине и фармацевтической химии, в частности оно касается лекарственного препарата на основе наночастиц фталоцианина, который может быть использован при лечении злокачественных новообразований методом импульсной лазерной абляции наночастиц.

Изобретение относится к соединению формулы I или его фармацевтически приемлемой соли, где R1 - это водород или (С1-С10)алкильная группа; R2 - это Н, галоген, СООН, (С1-С6)алкил, необязательно замещенный группой -NR10R11, ОН или (С1-С4)алкокси, необязательно замещенным ОН; (С1-С6)алкокси, необязательно замещенный ОН, (С1-С4)алкокси или группой -NR12R13; группа -OR14, где R14 означает 5- или 6-членный гетероциклоалкил, содержащий 1 или 2 атома азота; группа -CONR15R16, где R15 и R16 каждый независимо друг от друга означает Н или (С1-С4)алкил, необязательно замещенный (С1-С4)алкокси или 5- или 6-членным гетероциклоалкилом, содержащим 1 или 2 гетероатома, выбираемых из О и N; группа -NR17R18, где R17 означает Н или (С1-С4)алкил и R18 означает Н, (C1-С4)алкил, необязательно замещенный (С1-С4)алкокси, или 5- или 6-членный гетероарил, содержащий 1-3 гетероатома, выбираемых из О, S и N; группа -NR19COR20, где R19 означает Н и R20 означает (С1-С4)алкил, необязательно замещенный амино, (С1-С4)алкиламино или ди(С1-С4)алкиламино или 5- или 6-членным гетероциклоалкилом, содержащим 1 или 2 атома азота, указанный гетероциклоалкил является необязательно замещенным 1-3 (С1-С4)алкилами; или 5- или 6-членный гетероциклоалкил или гетероарил, содержащий 1 или 2 атома азота, указанный гетероциклоалкил или гетероарил является необязательно замещенным оксогруппой; R3 - это водород, галоген, циано, (С1-С10)алкильная группа или (С1-С10)алкокси группа, CF3; Q представляет собой О или S; W представляет собой N или CR21; X представляет собой N или CR25, где R25 - это Н; CN; (С1-С4)алкил; или группу -СОО(С1-С4)алкил; и А означает 5- или 6-членный гетероциклоалкил или гетероарил, содержащий 1-3 атома азота, указанный гетероциклоалкил или гетероарил является необязательно замещенным 1-3 заместителями, выбираемыми из оксогруппы; галогена; (С1-С4)алкила, необязательно замещенного амино, (С1-С4)алкиламино, ди(С1-С4)алкиламино или 5- или 6-членным гетероциклоалкилом, содержащим 1 или 2 атома азота.

Изобретение относится к области органической химии, а именно к новому 2-пиридил-замещенному производному имидазола формулы (I), где R1 представляет собой фенил, пиридил или тиенил, конденсированный со структурным фрагментом, который вместе с двумя членами кольца указанного фенила, пиридила или тиенила образует 5-6-членное ароматическое или неароматические насыщенное кольцо, где указанное кольцо необязательно содержит до двух гетероатомов, независимо выбранных из О, N и S, и конденсированное фенильное кольцо необязательно замещено одной группой, независимо выбранной из галогена, -O-C1-6алкила, -C1-6алкила, -О-(СН2)q-NR4R5, или 5-членного гетероарила, содержащего до двух гетероатомов, независимо выбранных из N; или R1 представляет собой фенил, замещенный одной или более группами, независимо выбранными из галогена, -O-C1-6алкила, -S-C1-6алкила, -C1-6алкила, -С1галогеналкила, -CN, -(СН2)p-NR4R5, -(СН2)p-NHCOR4, -(CH2)p-NHCO2R4; -(CH2)p-NHSO2R4 или N-связанного 6-членного гетероцикла, где указанный гетероцикл содержит два гетероатома, независимо выбранных из О, N, и необязательно замещен C1-6алкилом; R2 представляет собой -C1-6алкил; R3 представляет собой Н, -(СН2)p-NR4R5, -(CH2)p-CN, -(СН2)p-CO2R4, -(СН2)p-CONR4R5, -(СН2)p-OR4, -(СН2)p-NHCOR4; R4 и R5 независимо представляют собой Н или -C1-6алкил; p обозначает целое число в интервале от 0 до 1; q обозначает 2; n обозначает целое число в интервале от 1 до 2; X представляет собой NR7; и R7 представляет собой Н или -CO-C1-6алкил.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к противоопухолевым вакцинам на основе эпитопных пептидов MPHOSPH1, и может быть использовано в медицине. Получают пептид состоящий из аминокислотной последовательности SEQ ID NO: 120.

Настоящее изобретение относится к области генной терапии для лечения заболеваний глаз, конкретно к применению векторов для условной экспрессии одного или более терапевтического белка под контролем системы модуляции генной экспрессии в присутствии активирующего лиганда при производстве лекарственного средства, и может быть использовано в медицине.

Изобретение относится к диспиропирролидиновому производному, представленному общей формулой (1), где кольцо А представляет собой спиросоединенное 4-6-членное насыщенное углеводородное кольцо, которое может содержать один или несколько заместителей, кольцо В представляет собой бензольное кольцо, которое может содержать один или несколько заместителей, или пиридиновое кольцо, которое может содержать один или несколько заместителей, R1 представляет собой арильную группу, которая может содержать один или несколько заместителей, или гетероарильную группу, которая может содержать один или несколько заместителей, R2 представляет собой атом водорода; иR3 представляет собой группу, представленную общими формулами (2), (3) или (4), которое ингибирует взаимодействие между белком Mdm2 и белком p53 и обладает противоопухолевой активностью.

Изобретение относится к применению соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли, или любой из его стереоизомерных форм, или их смесей для лечения патологического состояния, опосредованного Rac1 клеточными белками.

Изобретение относится к медицине, а именно к дерматологии, и может быть использовано для лечения угревой болезни. Для этого в стерильную тиогликолевую среду проводят посев суспензии В.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к способам лечения амиотрофического бокового склероза, что может быть использовано в медицине. Пациенту вводят клетки, полученные из ткани пуповины, способные к самообновлению и размножению, обладающие потенциалом к дифференцированию в клетку нейронного фенотипа.

Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для лечения субклинического мастита у коров в период сухостоя. Способ включает использование пробиотика Ветом-3 на основе Bacillus amyloliquefaciens ВКПМ В-10642 (DSM 24614).

В качестве сырья используют панцирь плоского морского ежа Scaphechinus mirabilis - отходы при производстве эхинохрома А, и/или панцирь и иглы промыслового морского ежа Strongylocentrotus nudus - отходы при производстве спинохромов А и Е.
Изобретение относится к области ветеринарии и предназначено для лечения болезней бактериальной этиологии у сельскохозяйственных животных и птиц. Способ включает введение животным и птице антибиотика широкого спектра действия Ципровентор совместно с бесклеточными пробиотиками Бацинил или Лактимет.

Изобретение относится к области фармакологии, а именно к способу получения пептидного биопрепарата ноотропного действия. Способ получения пептидного биопрепарата ноотропного действия заключается в гомогенизации личинок трутневого расплода в охлажденном изотоническом растворе NaCl, кипячении гомогената личинок трутневого расплода с целью денатурации белков, удалении осадка с помощью бумажного фильтра и очистки с использованием мембраны на ультрафильтрационной установке Vivaflow 50/200, позволяющей выделить пептиды массой до 5 кДа.

Изобретение относится к микробиологии и биотехнологии. Штамм Lactobacillus paracasei 1 обладает высокой антагонистической активностью, высоким уровнем кислотообразования, повышенными адгезивными свойствами, устойчивостью к ряду антибиотических препаратов и высокой скоростью накопления биомассы.

Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложен штамм Lactobacillus paracasei MCC1849, обладающий высокой стимулирующей продуцирование IL-12 активностью.

Изобретение относится к медицине, а именно к применению препарата «Винфар» в качестве средства для стимуляции репаративного остеогенеза при лечении открытых переломов костей конечностей с помощью интрамедуллярного остеосинтеза.
Изобретение относится к медицине, а именно к терапевтической стоматологии. Предлагаемый способ лечения хронического воспаления при воспалительных заболеваниях пародонта включает инъекционное введение обогащенной тромбоцитами плазмы в зубодесневой сосочек, маргинальную часть десны и в область переходной складки, при этом указанное инъекционное введение проводят по 0,1-0,5 мл на мм2 - 1 раз в неделю, курсом 2-3 процедуры, и дополнительно проводят введение плацентарного препарата «Лаеннек» в зубодесневой сосочек, маргинальную часть десны и в область переходной складки по 0,1-0,2 мл на мм2 по 1 инъекции с интервалом в 2 дня, курсом 5-10 инъекций.
Изобретение относится к медицине, а именно к кардиохирургии. Проводят сочетанное воздействие на миокард, включающее лазерное воздействие и интрамиокардиальное введение аутологичных стволовых клеток костного мозга (АСККМ). В зоне или зонах ишемии миокарда выполняют сквозные каналы в стенке левого желудочка диаметром 0,3-1,0 мм с частотой один канал на 1 см2 стенки левого желудочка. Каждый канал перпендикулярен наружной поверхности стенки левого желудочка в области формирования канала. Для формирования каналов используют воздействие СO2 лазера мощностью 800-1000 Вт с длительностью импульса 20-50 мс. Продолжительность импульса выбирают достаточную для формирования канала за один импульс в пределах рефрактерного периода сердечного цикла. Затем вокруг каждого канала на всем его протяжении, используя один вкол, вводят до 200 мкл раствора, содержащего 3-8 млн АСККМ. Иглу проводят в бессосудистой зоне на расстоянии 1-2 мм от наружной стенки канала. Введение АСККМ производят при извлечении иглы. Способ позволяет снизить травматичность вмешательства при сохранении его эффективности путем уменьшения числа проколов миокарда, снижения объема вводимой жидкости при введении АСККМ, а также использования одного импульса для формирования сквозного канала в миокарде; осуществить профилактику интраоперационных осложнений и наведенной аритмии из-за ударного воздействия лазерного импульса путем формирования каналов в миокарде в пределах рефрактерного периода сердечного цикла. 1 пр.
Наверх