Способ получения питательной среды для выявления возбудителя некробактериоза животных



Способ получения питательной среды для выявления возбудителя некробактериоза животных
Способ получения питательной среды для выявления возбудителя некробактериоза животных
Способ получения питательной среды для выявления возбудителя некробактериоза животных
Способ получения питательной среды для выявления возбудителя некробактериоза животных
Способ получения питательной среды для выявления возбудителя некробактериоза животных
Способ получения питательной среды для выявления возбудителя некробактериоза животных
Способ получения питательной среды для выявления возбудителя некробактериоза животных
Способ получения питательной среды для выявления возбудителя некробактериоза животных
Способ получения питательной среды для выявления возбудителя некробактериоза животных
Способ получения питательной среды для выявления возбудителя некробактериоза животных
Способ получения питательной среды для выявления возбудителя некробактериоза животных
Способ получения питательной среды для выявления возбудителя некробактериоза животных
Способ получения питательной среды для выявления возбудителя некробактериоза животных
Способ получения питательной среды для выявления возбудителя некробактериоза животных

 


Владельцы патента RU 2631795:

Гайнутдинова Елена Павловна (RU)
Харитонов Михаил Васильевич (RU)
Гараев Айрат Рашитович (RU)
Гайнутдинов Тимур Рафкатович (RU)

Изобретение относится к ветеринарной микробиологии. Способ получения питательной среды для выявления возбудителя некробактериоза животных предусматривает получение фильтрата культур стафиококка путем выращивания культур стафилокока на мясопептонном агаре с последующим культивированием в термостате при 37оС в течение 8-10 дней. Проводят инактивацию культуры стафилококка на водяной бане при температуре 90-95оС в течение 30 мин. Центрифугируют в течение 20 мин с последующим отделением надосадочной жидкости и дополнительной фильтрацией через фильтр Зейтца. Изобретение позволяет сократить сроки культивирования посевного материала и повысить чувствительность бактериологического исследования. 25 ил., 4 табл., 5 пр.

 

Изобретение относится к области ветеринарной микробиологии, в частности, к способам получения новых питательных сред для ускоренного выделения возбудителя некробактериоза - F. necrophorum при бактериологических исследованиях.

Среди инфекционных заболеваний, с поражением дистальных частей конечностей, в частности некробактериоз, остается одной из важнейших проблем в патологии крупного рогатого скота, который получил еще большее распространение в связи с завозом импортного поголовья, не приспособленного к местным условиям содержания и кормления. Особенно ощутимый экономический ущерб терпят от этой болезни хозяйства молочного направления.

При несоблюдении зооветеринарных параметров содержания и кормления животных, предрасполагающими факторами в возникновении болезни являются снижение естественной резистентности организма и мацерация кожного покрова дистальных частей конечностей.

После внедрения в организм через поврежденный кожный покров микробы F. necrophorum в местах первичной локализации обуславливают появления болезненного воспалительного отека подкожной клетчатки.

Исходным моментом в профилактике и лечении некробактериоза является постановка точного диагноза. Кроме эпизоотологических данных и клинических признаков болезни, в диагностике некробактериоза чрезвычайно важно получить чистую культуру из пораженных органов, что, однако, удается с трудом.

В ветеринарной практике для бактериологического исследования используют различные питательные среды.

Известно применение печеночного бульона, мозговой среды, свернутой сыворотки крови, мясопептонного агара с кровью, полужидкого агара с добавлением 2%-го сахара (В.А. Балабанов. Некробактериоз животных. М., 1971; Лабораторные исследования в ветеринарии, под редакцией Б.И. Антонова М., 1986.). Недостатком указанных питательных сред является низкая чувствительность их в отношении F. necrophorum и длительный срок культивирования, который наступает только на 3-8 сутки.

Известна питательная среда для выделения возбудителя некробактериоза - Китта-Тароцци («Анаэробные организмы», материал из Википедии - свободной энциклопедии - ru.rn.wikipedia.org). Однако применение этой среды позволяет инкубировать посевы не ранее трех - пяти суток, просматривая их при этом ежедневно.

Известна также питательная среда для выявления возбудителя некробактериоза, содержащая питательную среду 199, сыворотку крови крупного рогатого скота и 40%-ный раствор глюкозы при следующем соотношении компонентов, мас. %: питательная среда 199-85,0, сыворотка крови 10,0, 40%-й раствор глюкозы 5,0 (Патент №2569456, МПК C12N 1/20, C12R 1/01, опубл. 27.11.2015 г., БН №33).

Хотя данная питательная среда и обладает высокой чувствительностью по сравнению с другими питательными средами (первичный рост возбудителя в анаэробных условиях происходит через 4 часа после посева, а в аэробных условиях через 2 часа), однако чувствительность ее недостаточна для выявления возбудителя некробактериоза у больных животных.

Технический результат, на достижения которого направлено заявляемое изобретение, состоит в повышении чувствительности бактериологического исследования и сокращении сроков культивирования посевного материала.

Для достижения этого технического результата в предлагаемом способе культивирование возбудителя некробактериоза осуществляют в фильтрате культур стафилококка, который получают путем высева в жидкую питательную среду суточных культур стафилококка, а в качестве питательной среды для выращивания культур стафилококка используют мясопептонный бульон, затем их культивируют в термостате при температуре 37°С в течение 8-10 дней, инактивируют в водяной бане при температуре 90-95°С в течение 30 мин, центрифугируют при 1000 об/мин в течение 20 мин, а полученную надосадочную жидкость дополнительно фильтруют через фильтр Зейтца и используют как питательную среду для выявления возбудителя некробактериоза.

Такое выращивание возбудителя некробактериоза в фильтрате культур стафилококка позволяет повысить чувствительность бактериологического исследования и сократить сроки культивирования посевного материала в 8 раз.

Питательная среда для выращивания стафилококков на мясопептонном агаре (МПА) при температуре 35-40°С известна (allvet.ru>knowledge_base/microbiology/…). Известен и фильтрат культур стафилококков (http://lekmed.ru/info/arhivy/mikrobiologicheskih-issledovaniy-38.html), однако для выявления и культивирования возбудителя некробактериоза животных он никогда ранее не использовался, кроме того внесены значительные изменения в сам способ получения фильтрата культур стафилококка.

Пример 1. В качестве питательной среды для выявления возбудителя некробактериоза использовали предварительно полученный следующим образом фильтрат культур стафилококка. В жидкую питательную среду высевали культуры стафилококка, культивировали в термостате при 37°С в течение 8-10 дней. Полученную в мясопептонном бульоне культуры стафилококка инактивировали в водяной бане при температуре 90-95°С в течение 30 мин, подвергали центрифугированию при 1000 об/мин в течение 20 мин. Затем полученную надосадочную жидкость отделяли и фильтровали через фильтр Зейтца (рис. 1-а, б, в) и использовали в дальнейшем как питательную среду для выявления возбудителя некробактериоза.

Полученный фильтрат прозрачный, соломенно-желтоватого цвета, стерильный, не дает осадка при хранении, рН 7,96-7,99.

Химический состав культуральной жидкости стафилококков включает ферменты, глюкозу, общий белок, мочевину, альбумины, щелочную фосфатазу, креатинин, железо, кальций, фосфор, сероактивный белок, гамма-глобулины.

Количественное соотношение указанных веществ в питательной среде:

Аланинаминотрансфераза 2,7 ммоль /л
Аспартатаминотрансфераза 1,2 ммоль /л
Креатинин 125,0 ммоль/л
Мочевина 7,6 ммоль/л
Общий белок 0,5 г/л
Глюкоза 0,3 ммоль/л
Щелочная фосфатаза 20,9 ммоль/л
Холестерин 0,1 ммоль/л
Амилаза 0,8 г/л
Общий билирубин 0,5 ммоль/л
Альбумины 0,5 г/л
Гамма-глобулины 1,6 г/л
Кальций 0,1 ммоль/л
Фосфор 23,3 мг/л
Железо 11,5 ммоль/л
Сероактивный белок 1,0 мг/л

Полученный фильтрат культур стафилококка был испытан как питательная среда в Республиканской лаборатории РТ с использованием для культивирования культур F. necrophorum, производственные штаммы, выделенные нами в ООО АФ «Татарстан» Высокогорского района и ООО АФ «Южный» Нурлатского района РТ в 2014 г. (Патент №2569456), а также на посевах из патологического материала, полученного от больных коров с поражением дистальных частей конечностей.

Пример 2. Бактериальные суспензии F. necrophorum из производственных штаммов ООО АФ «Татарстан» Высокогорского района и ООО АФ «Южный» Нурлатского района с содержанием 500000 микробных тел по стандарту мутности готовили на физиологическом растворе и высевали в 10 пробирок с содержанием предлагаемой питательной среды с наслоением вазелинового масла и в 10 пробирки без масла. Перед применением пробирки со средами регенерировали в водяной бане в течение 30 мин при температуре 55°С. После высева пробирки помещали в термостат при температуре 37°С с установлением визуального наблюдения через каждый час до 14 часов, а затем через 36, 56, 84 часов после высева культур. Результаты исследования представлены в таблице 1 и рисунках 2 - а, б, в, г, д, е; 3 - а, б, в, г, д, е; 4 - а, б, в, г, д, е; 5 - а, б, в, г, д, е.

,

Как видно из таблицы 1, первичный рост музейных штаммов F. necrophorum начинает появляться в первые же 15 минут после посева (рис. 2а, 4а) с последующим усилением роста в виде образования пузырьков газа и помутнения среды (рис. 2 - б, в, г, д, е; 4 - б, в, г, д, е).

В аэробных условиях рост возбудителя несколько усиливается, чем в анаэробных условиях (рис. 3 - а, б, в, г, д, е; 5 - а, б, в, г, д, е).

Рост вышеуказанных штаммов в условиях Республиканской лаборатории определяли по результатам оптической плотности с помощью прибора фотоэлектроколориметра (ФЭК - 56 М).

Пример 3. В четыре стерильные пробирки вносили по 10 мл испытуемой питательной среды и засевали возбудителем некробактериоза производственными штаммами, выделенными в ООО АФ «Татарстан» Высокогорского района и в ООО АФ «Южный» Нурлатского районов РТ. В целях создания анаэробных условий в две из них наслаивали вазелиновое масло и помещали в термостат при температуре 37°С.

Результаты исследования по определению оптической плотности засеянных культур представлены в таблице 2 и рисунках 6 (а, б, в, г); 7 (а, б, в, г); 8 (а, б, в, г); 9 (а, б, в, г).

Как видно из таблицы 2, рост культуры некробактериоза начинается уже в первые минуты, культура некробактериоза лучше растет с добавлением вазелинового масла.

Однако в отличие от музейных штаммов, возбудитель, выделенный из патологического материала, полученного от больных животных, обладает свойством более медленного роста при посевах на питательные среды и обладает более высокой вирулентностью.

Пример 4. Крестьянское фермерское хозяйство (КФХ) «Козлов М.И.» Ново Шешминского района Республики Татарстан. Всего на ферме 1337 голов крупного рогатого скота черно-пестрой породы. Из всего поголовья 400 голов коров, 258 - нетели, 305 - телок, быки производители – 6, остальное - поголовье молодняка разного возраста. При клиническом осмотре было обнаружено 75 коров, 12 нетелей с различной степенью хроматы.

Патологический материал в количестве 12 проб получен от коров и нетелей с поражением дистальных частей конечностей.

Посевной материал после предпосевной обработки засевали в шесть пробирок с содержанием испытуемой питательной среды. В три пробирки в целях создания анаэробных условий наслаивали вазелиновое масло. Все шесть пробирок поместили в термостат при температуре 37°С и установили наблюдения в тех же параметрах, что описано в примерах 1 и 2.

Результаты исследования представлены в таблице 3, рисунках 10 - а, б и 11 - а, б.

Как видно из таблицы 3, сроки появления первичного роста возбудителя из патологического материала в аэробных и анаэробных условиях происходит через 1 час (рис. 10 а, б; 11 а, б).

Пример 5. ООО «Сот Иле» филиал «Новая Шешма» Ново Шешминского Республики Татарстан в трех отделениях: Азеево, Чертушкино, Тубылгытау общее поголовье 3599 голов крупного рогатого скота черно-пестрой породы.

В отделении ООО «Сот Иле» филиал «Новая Шешма» Азеево содержится всего 1268 голов крупного рогатого скота, из них 648 голов коровы, 43 - нетели, 5 - быки производители, остальное - поголовье молодняка разного возраста. При клиническом осмотре было обнаружено 116 коров и 5 нетелей с различной степенью хроматы, отобрали материал в количестве 5 проб.

В отделении ООО «Сот Иле» филиал «Новая Шешма» Чертушкино находится 656 голов крупного рогатого скота, в том числе 209 коров, 51 - нетель, 6 - быков производителей. При клиническом осмотре всего поголовья выявлены 63 коров и 9 нетелей с различной степенью хроматы, отобрано 2 пробы.

В отделении ООО «Сот Иле» филиал «Новая Шешма» Тубылгытау всего 1675 голов крупного рогатого скота, из всего поголовья 730 коров, 63 - нетели, 5 - быков производителей остальное - поголовье молодняка разного возраста. При клиническом осмотре всего поголовья выявлены 150 коров и 12 нетелей с различной степенью хроматы, патологический материал в количестве 15 проб получен от коров и нетелей.

Посевной материал, доставленный из хозяйства в транспортной питательной среде, после соответствующей предпосевной обработки засевали в шесть пробирок с содержанием испытуемой питательной среды. В целях создания анаэробных условий в три пробирки наслаивали вазелиновое масло и помещали в термостат при температуре 37°С.

Результаты исследования представлены в таблице 4, рисунках 12-а, б и 13-а, б.

Как видно из таблицы 4, сроки появления первичного роста возбудителя из патологического материала в аэробных и анаэробных условиях происходит в первые минуты после посева, микроскопия - через 4 часа (рис. 12 а, б), а в аэробных условиях - через 3 часа (рис. 13 а, б).

Таким образом, предлагаемый способ получения питательной среды для выявления возбудителя некробактериоза в восемь раз повышает чувствительность бактериологического исследования и сокращает в среднем более чем в пять раз сроки культивирования посевного материала. Предлагаемый способ может быть использован как экспресс-метод диагностики возбудителя некробактериоза.

Способ получения питательной среды для выявления возбудителя некробактериоза животных, заключающийся в том, что культивирование возбудителя некробактериоза животных осуществляют в фильтрате культур стафилококка, который получают путем высева в жидкую питательную среду суточных культур стафилококка, а в качестве питательной среды для выращивания культур стафилококка используют мясопептонный бульон, затем их культивируют в термостате при температуре 37°С в течение 8-10 дней, инактивируют в водяной бане при температуре 90-95°С в течение 30 мин, центрифугируют при 1000 об/мин в течение 20 мин, а полученную надосадочную жидкость отделяют, дополнительно фильтруют через фильтр Зейтца и используют как питательную среду для выявления возбудителя некробактериоза.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к получению каркасных материалов на основе белковых конструкций, и может быть использовано в медицине. На основе минимального рекомбинантного эластомерного мотива (триболин-1, Trib-1mut) белка резилина насекомых Tribolium castaneum (триболин-2, Trib-2mut) рекомбинантным путем получена белковая конструкция, которую используют в способах агрегации с целью формирования основы сетки биоматрикса.

Изобретение относится к области биохимии, генной инженерии и биотехнологии, в частности к выделенному полипептиду, вызывающему образование нейтрализующих антител к токсинам Clostridium difficile.

Изобретение относится к биотехнологии. Штамм актиномицета Streptomyces globisporus К-35/15, обладающий энтомоцидными и акарицидными свойствами, депонирован в Ведомственной Коллекции Полезных Микроорганизмов сельскохозяйственного назначения ФГБНУ ВНИИСХМ под регистрационным номером RCAM 04205 и может быть использован для защиты растений от вредных насекомых - фитофагов, в том числе колорадского жука, паутинных клещей, тлей.

Группа изобретений относится к биотехнологии, медицинской и пищевой промышленности. Предложены питательные композиции для стимулирования мукозальной иммунной системы, способ изготовления и их применения.

Группа изобретений относится к области биохимии. Предложен штамм бактерий Escherichia coli BL21 DE3 pClcRFP для детекции ионов меди, биосенсор и способ детекции ионов меди в анализируемой жидкой среде.

Изобретение относится к биотехнологии, а именно к экологическим препаратам, обеспечивающим очистку почвы и водной поверхности, загрязненных нефтью и нефтепродуктами.

Изобретения относятся к биотехнологии. Предложены композиция, способ улучшения окружающей среды на птицеферме, способ снижения образования аммиака и ингибирования ферментов уреазы, способ снижения уровня патогенных бактерий, способ уничтожения вредителей в подстилке для птицы, способ предотвращения пододерматита у птиц.
Группа изобретений относится к пищевой промышленности. Микроинкапсулированный бактериальный консорциум для деградации глютена содержит Lactobacillus plantarum АТСС 8014, Lactobacillus sanfranciscensis АТСС 27652 и Lactobacillus brevis АТСС 14869, инкапсулирующие агенты, пребиотики, выбранные из группы, включающей полидекстрозу, инулин и сироп агавы, и трегалозу в комбинации с протеолитическим ферментом бактериального происхождения и протеолитическим ферментом грибкового происхождения, которые обычно используют для выпечек.

Изобретение относится к медицинской микробиологии. Предложен способ оценки чувствительности биопленок холерных вибрионов к антибактериальным препаратам, включающий получение биопленки на стекляных цилиндрах.

Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для получения препарата для стимуляции роста растений. Штамм бактерий Bacillus megaterium 2-06-TS1 депонирован во Всероссийской Коллекции Промышленных Микроорганизмов ФГУПГосНИИГенетика под регистрационным номером ВКПМ В-12402.

Группа изобретений относится к культуральной среде и способу для скрининга метициллин-резистентных Staphylococcus aureus (MRSA) в культуральной среде. Культуральная среда содержит комбинацию цефалоспоринов, выбранную из группы, состоящей из цефотетана (СТТ) и цефтриаксона (CRO); цефотетана (СТТ) и цефподоксима (CPD); цефсулодина (CFS) и цефтриаксона (CRO); цефсулодина (CFS) и цефепима (FEP); и цефотетана (СТТ) и цефтиофура (XLN).

Изобретение относится к области клинической микробиологии. Исследуемую культуру стафилококков выращивают в условиях постоянного встряхивания, в качестве контроля используют смесь бульона и культуры без лизоцима, проводят двукратное измерение оптической плотности опытных и контрольных лунок через 2 и 4 часа инкубации и об уровне антилизоцимной активности судят по степени выраженности признака у определенного штамма стафилококков, которую рассчитывают по формуле: где K - коэффициент антилизоцимной активности стафилококков; VК - объем бульонной культуры исследуемого штамма; VЛ - объем раствора лизоцима исходной концентрации; CЛ - концентрация лизоцима; MО4 - среднее значение оптической плотности опытных лунок с бульонной культурой исследуемого штамма с лизоцимом через 4 часа инкубации, ед.

Изобретение относится к области биохимии и клинической микробиологии. Проводят выращивание золотистого стафилококка Staphylococcus aureus на питательной среде, содержащей желточно-солевой агар.
Изобретение относится к медицине, а именно к микробиологии, и может быть использовано для определения адгезии золотистого стафилококка. Для этого исследуют чистую культуру золотистого стафилококка в концентрации 1 млрд/мл.
Изобретение относится к области микробиологии. .
Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано в медицинской бактериологии для количественной оценки адгезивных свойств стафилококков, выделенных от человека и объектов окружающей среды при его бактериологической идентификации, для характеристики его вирулентных свойств in vitro по уровню адгезии к биополимерным молекулам.
Изобретение относится к биотехнологии и может быть использовано для ускоренной индикации и дифференциации энтеробактерий. .

Изобретение относится к области биохимии, генной инженерии и биотехнологии, в частности к выделенному полипептиду, вызывающему образование нейтрализующих антител к токсинам Clostridium difficile.
Наверх