Способ количественного определения содержания рутина в осине обыкновенной

Изобретение относится к фармации, а именно к фармацевтической химии, и может быть использовано для количественного определения биологически активных веществ - флавоноидов в осине обыкновенной. Способ количественного определения рутина в осине обыкновенной характеризуется измельчением образцов растительного материала, переносом 1 г (точная навеска) измельченного сырья в колбу со шлифом, добавлением экстрагента, присоединением колбы к обратному холодильнику, экстрагированием на кипящей водяной бане в течение 1-2 ч в три фазы с использованием растворителя в объеме 100 мл в соотношении 50:25:25 соответственно при первом, втором и третьем контакте фаз, а в качестве растворителя при экстрагировании используют этиловый спирт 70%, охлаждением, фильтрацией извлечения после каждой фазы экстракции, доведением экстракта растворителем до необходимого объема, перемешиванием, добавлением к извлечению спиртового раствора алюминия хлорида, определением оптической плотности растворов дискретно в диапазоне длин волн 402-408 нм относительно спиртового раствора алюминия хлорида в сравнении со стандартным раствором рутина с последующим расчетом процентного содержания рутина. 3 ил.

 

Изобретение относится к фармации, а именно к фармацевтической химии, и может быть использовано для количественного определения биологически активных веществ - флавоноидов в осине обыкновенной.

Фармакологические исследования экстракционных препаратов осины обыкновенной показали наличие антимикробной, гипотензивной и противовоспалительной активности, сочетающейся с низкой токсичностью. Многолетний опыт использования в народной медицине и современные данные фармакологических исследований открывают перспективы внедрения осины обыкновенной и экстракционных препаратов на ее основе в медицинскую практику.

Однако разработка и промышленный выпуск препаратов осины обыкновенной затруднен из-за возможной фальсификации и использования недоброкачественного сырья, отсутствия способов промежуточного технологического контроля и оценки качества конечных продуктов. Указанные трудности обусловлены отсутствием надежного способа количественного определения действующих веществ.

Анализ патентной и научной литературы показал: прототип способа определения действующих веществ в осине обыкновенной отсутствует. Об этом, в частности, свидетельствует отсутствие раздела определения действующих веществ в нормативно-технической документации на лекарственное растительное сырье осины обыкновенной (Государственная фармакопея СССР, XI издание, выпуск 2. М.: Медицина, 1990, с. 392).

Широкое распространение получили при определении флавоноидов различные варианты хроматографии.

Известен «Способ количественного определения рутина методом тонкослойной хроматографии» (RU 2469316 С1). Недостатком данного способа являются значительные трудности при количественной оценке хроматограмм.

Для идентификации и количественного определения флавоноидов, в том числе рутина, также широко применяется метод ВЭЖХ (Высочина Г.И., Шалдаева Т.М., Коцупий О.В., Храмова Е.П. Флавоноиды Мари белой (Chenopodium album L.), произрастающей в Сибири. - Химия растительного сырья, 2009. - №4. - С. 107-112; Кошечкина А.С. Разработка методов анализа флавонов как индикаторных компонентов лекарственного растительного сырья. Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук. М. - 2007. - 25 с.; Птицын А.В. Технология выделения флавоноидов винограда Vitis vinifera сорта «Изабелла» для косметики и изучение их свойств. Автореф. на соиск. уч. ст. канд. хим. н. М. 2007. - 26 с.), недостатком которого является использование дорогостоящего оборудования и стандартных образцов.

Также известен «Способ количественного определения флавоноидов в растительном сырье флуориметрическим методом» (RU 2475724 С2). Несмотря на высокую чувствительность данного метода, длительность анализа, а также высокая стоимость приборов существенно ограничивают его использование в биохимических исследованиях.

Известные способы количественного определения флавоноидов в растительных объектах (Ломбоева С.С., Танхаева Л.М., Олейников Д.Н. Методика количественного определения суммарного содержания флавоноидов в надземной части ортилии однобокой (Orthilia secunda (L.) House). - Химия растительного сырья. 2008. №2. С. 65-68; Лобанова А.А., Будаева В.В., Сакович Г.В. Исследование биологически активных флавоноидов в экстрактах из растительного сырья. - Химия растительного сырья. 2004. №1. С. 47-52; Зиэп Т.Т. Нго, Жохова Е.В. Разработка методики количественного определения суммарного содержания флавоноидов в траве пустырника спектрофотометрическим методом. - Химия растительного сырья. 2007. №4. С. 73-77) не являются унифицированными и разработаны только для сырья одного вида растений.

Использование этих способов для определения суммы флавоноидов в осине обыкновенной и экстракционных препаратах осины обыкновенной невозможно из-за отличия:

- в химическом составе растений;

- в консистенции и структуре растительного материала;

- в спектральных характеристиках;

- в последовательности выполнения аналитических операций;

- в используемых государственных стандартных образцах (ГСО).

Целью настоящего изобретения является разработка нового специфичного способа количественного определения суммы флавоноидов (в пересчете на рутин) для контроля качества лекарственного растительного сырья осины обыкновенной.

Технический результат - предлагаемый способ позволяет увеличить выход экстракта, уменьшить расход растворителя, сократить время процесса, снизить энергозатраты и упростить условия труда.

Указанный результат при осуществлении изобретения достигается тем, что способ количественного определения рутина в осине обыкновенной характеризуется измельчением образцов растительного материала, переносом точной навески в колбу со шлифом, добавлением экстрагента, присоединением колбы к обратному холодильнику, экстрагированием в три фазы на кипящей водяной бане, охлаждением, фильтрацией извлечения после каждой фазы экстракции, доведением экстракта растворителем до необходимого объема, перемешиванием, добавлением к извлечению спиртового раствора алюминия хлорида, определением оптической плотности растворов относительно спиртового раствора алюминия хлорида в сравнении со стандартным раствором рутина с последующим расчетом процентного содержания рутина, при этом измерение оптической плотности растворов осуществляют дискретно в диапазоне длин волн 402-408 нм, причем экстрагирование проводят в течение 1-2 часов в три фазы с использованием растворителя в объеме 100 мл в соотношении 50:25:25 соответственно при первом, втором и третьем контакте фаз, а в качестве растворителя при экстрагировании используют этиловый спирт 50-95%, для измерения оптической плотности готовят раствор, взяв аликвоту полученного экстракта в объеме 1 мл.

На фиг. 1 изображены спектры поглощения окрашенных комплексов раствора ГСО рутина с алюминия хлоридом, на фиг. 2 - зависимость содержания рутина от концентрации используемого при экстракции растворителя, на фиг. 3 - зависимость содержания рутина от длительности экстракции.

Способ осуществляется следующим образом.

В качестве растительного сырья используются образцы коры осины обыкновенной (Populus tremula L.), заготовленные преимущественно в фазу сокодвижения. Кору осины, предварительно высушенную в естественных условиях (в тени под навесами), измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм. 1 г (точная навеска) измельченного сырья переносят в колбу со шлифом вместимостью 100 мл, приливают 50 мл 70% этилового спирта, присоединяют обратный холодильник и нагревают на кипящей водяной бане в течение 30 мин. После охлаждения извлечение фильтруют в мерную колбу. Экстракцию повторяют дважды в тех же условиях с 25 мл 70% этилового спирта в течение 30 мин при втором и третьем контакте фаз. Объем объединенного извлечения доводят 70% этиловым спиртом до 100 мл (раствор А). 1 мл полученного раствора переносят в мерную колбу вместимостью 25 мл, приливают 1 мл 2% раствора алюминия хлористого в 95% спирте этиловом, 1 каплю 5% кислоты уксусной и доводят объем раствора 95% спиртом этиловым до метки (раствор В).

Определяют оптическую плотность раствора В через 40 мин на спектрофотометре при длине волны 402 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм.

Для приготовления раствора сравнения 1 мл раствора А переносят в мерную колбу вместимостью 25 мл, приливают 1 каплю 5% кислоты уксусной и доводят объем раствора 95% спиртом этиловым до метки. Параллельно определяют оптическую плотность раствора государственный стандарт (ГСО) рутина.

Суммарное содержание флавоноидов в пересчете на рутин и абсолютно сухое сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:

где D - оптическая плотность исследуемого раствора;

DS - оптическая плотность раствора ГСО рутина;

m - масса сырья, г;

mS - масса ГСО рутина, г;

KV - коэффициент разбавления исследуемого раствора (1250);

KVs - коэффициент разбавления раствора ГСО рутина (2500);

W - потеря в массе при высушивании сырья, %.

Приготовление раствора Государственного стандартного образца (ГСО) рутина. Около 0,05 г ГСО рутина, предварительно высушенного до постоянной массы при температуре 100-105°С, переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в 95% спирте этиловом и доводят объем раствора до метки тем же растворителем (раствор А').

1 мл раствора А' переносят в мерную колбу вместимостью 25 мл, приливают 2 мл 2% раствора алюминия хлористого в 95% спирте этиловом, 1 каплю 5% кислоты уксусной и доводят объем раствора 95% спиртом этиловым до метки.

Для приготовления раствора сравнения 1 мл раствора А' переносят в мерную колбу вместимостью 25 мл, приливают 1 каплю 5% кислоты уксусной и доводят объем раствора 95% спиртом этиловым до метки.

Для решения поставленной цели были решены следующие задачи:

- выбран доступный комплексообразующий реагент, позволяющий спектрально зафиксировать наличие флавоноидов в растениях и растительных препаратах путем образования устойчивого во времени комплексного соединения;

- определен метод спектрального обнаружения флавоноидов с комплексообразующим реагентом;

- выбрана аналитическая длина волны, позволяющая избирательно определять флавоноидные соединения (фиг. 1);

- подобран государственный стандартный образец для пересчета суммы флавоноидов;

- определены оптимальные условия извлечения флавоноидов из сырья (экстрагент, фиг. 2; соотношение сырья и экстрагента; время экстракции, фиг. 3);

- разработаны оптимальные условия количественного определения суммы флавоноидов в экстракционных препаратах осины обыкновенной (рабочая длина волны, навески, разведение).

Дифференциальная спектрофотометрия предусматривает использование в качестве контроля испытуемый раствор без реактивов, что позволяет исключить влияние окрашенных и сопутствующих веществ, а также веществ, не образующих комплексов с реактивами. Хлористый алюминий является дешевым и доступным реагентом.

Для определения метода спектрального обнаружения и аналитической длины волны были изучены УФ-спектры спиртовых извлечений лекарственного сырья осины обыкновенной и государственного стандартного образца (ГСО) рутина (ФС 42-2508-87).

Способ количественного определения рутина в осине обыкновенной характеризуется измельчением образцов растительного материала, переносом 1 г (точная навеска) измельченного сырья в колбу со шлифом, добавлением экстрагента, присоединением колбы к обратному холодильнику, экстрагированием в три фазы на кипящей водяной бане, охлаждением, фильтрацией извлечения после каждой фазы экстракции, доведением экстракта растворителем до необходимого объема, перемешиванием, добавлением к извлечению спиртового раствора алюминия хлорида, определением оптической плотности растворов относительно спиртового раствора алюминия хлорида в сравнении со стандартным раствором рутина с последующим расчетом процентного содержания рутина, при этом измерение оптической плотности растворов осуществляют дискретно в диапазоне длин волн 402-408 нм, причем экстрагирование проводят в течение 1-2 ч в три фазы с использованием растворителя в объеме 100 мл в соотношении 50:25:25 соответственно при первом, втором и третьем контакте фаз, а в качестве растворителя при экстрагировании используют этиловый спирт 70%, для измерения оптической плотности готовят раствор, взяв аликвоту полученного экстракта в объеме 1 мл.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к аналитической химии, а именно к методам определения нитрит-ионов, и может быть использовано при их определении в питьевых и минеральных водах.

Изобретение относится к способу мониторинга химических добавок во флюидах, не смешивающихся с водой, которые добывают в нефтегазовой промышленности. Более конкретно, изобретение относится к удобному способу мониторинга химических добавок в нефти, конденсате, экспортной нефти, тяжелой нефти, потоках углеводородов, дизельном топливе, смазочных материалах, парафинах, биотопливе, дизельном биотопливе, нефтепродуктах, других продуктах очистки, перегонки и переработки нефте- и газопродуктов, включая продукты, содержащие небольшие количества воды.

Изобретение относится к области определения времени нанесения штриха на целлюлозно-бумажный носитель и может быть использовано в следственной, судебно-экспертной, криминалистической и судебной практике, при проведении оперативно-розыскных мероприятий, а также при технической экспертизе определения подлинности и возраста рукописных текстов и документов.

Изобретение относится к пленкам для колориметрического датчика. .

Изобретение относится к области анализирующих устройств, предназначенных для сканирования индикаторной бумаги с образцом для тестирования. .

Изобретение относится к аналитической химии. .
Изобретение относится к области аналитической химии и может быть использовано для количественного определения платины в растворах. .

Изобретение относится к медицинской диагностике и позволяет производить анализ биологических жидкостей по изменениям их физических характеристик. .

Изобретение относится к областям фотометрии и может быть использовано для определения содержания билирубина в крови. .

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и касается разработки получения антимикробного пептида цекропина Р1 из экстракта трансгенных растений каланхоэ перистого.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к средству, обладающему гастропротекторным действием. Гастропротекторное средство, содержащее комплекс 4-х флавоноидов, выделенный из надземной части растения Lychnis chalcedonica L.

Изобретение относится к способу экстракции активных молекул из растительного субстрата. Способ экстракции активных молекул из растительного субстрата согласно изобретению включает стадию, на которой указанный субстрат приводят в контакт с экстракционной жидкостью, причем указанная экстракционная жидкость содержит: экстракционный газ, который находится в газообразном состоянии при температуре 23°С и давлении 1 атм (101,325 кПа), и экстракционный растворитель в жидком состоянии, содержащий или состоящий из уксусной кислоты самой по себе или в смеси с по меньшей мере одним из: воды и первичного алифатического спирта, имеющего формулу (V) R-OH, где R представляет собой С1-С10 алкильную группу, предпочтительно С1-С5, где указанный экстракционный газ выбран из группы, состоящей из гелия, неона, аргона, криптона, ксенона, диоксида углерода и азота или их смесей; где указанный экстракционный газ вводят в указанный экстракционный растворитель в концентрации, составляющей от 0,1 до 10 объемных % относительно 100 массовых частей экстракционного растворителя.

Изобретение относится к способу получения биологически активной добавки к пище из листьев и (или) цветков персика. Способ получения биологически активной добавки к пище включает подготовку сырья - листьев и/или цветков персика обыкновенного, которое заливают очищенной водой, проводят первичное экстрагирование, полученный экстракт отделяют от растительной массы, полученный в конце способа концентрат консервируют, при этом при подготовке сырья из него удаляют некондиционные части, измельчают, после 1-го экстрагирования повторно проводят 2 экстрагирования при тех же условиях с добавлением к растительной массе воды очищенной, полученные экстракты объединяют и фильтруют, объединенный экстракт концентрируют в условиях вакуума, полученный первичный концентрат охлаждают и подвергают очистке, концентрат декантируют и фильтруют или центрифугируют, отделяя взвесь от балластных веществ, проводят вторичное концентрирование, а для консервации используют кислоту сорбиновую или сорбат калия до содержания в экстракте не более 0,2%, при определенных условиях.

Изобретение относится к фармацевтической, пищевой промышленности, в частности к получению пищевых добавок, обогащенных эссенциальными микронутриентами - фитоэкдистероидами, для использования в функциональном питании, восстановительной медицине, гериатрии и спорте для повышения адаптационных возможностей организма в условиях стресса, повышенных физических и психических нагрузок, при нарушении углеводного и липидного обмена, профилактики и компенсации абдоминального ожирения, для улучшения памяти.

Изобретение относиться к фармацевтической промышленности, в частности к способу получения экстракта из лишайников рода Cladonia Hill ex P. Browne, смеси лишайниковых кислот и лихенинов, обладающего бактерицидными свойствами.
Изобретение относится к способу получения средства, обладающего антиаритмическим действием. Указанный способ предусматривает выделение технической суммы алкалоидов - технического продукта из растений рода Aconitum (борец) семейства Ranunculaceae (лютиковые) и его очистку, при которой выполняют растворение технического продукта в одном из одноатомных алифатических насыщенных спиртов из группы: метанол, этанол, затем добавляют к полученному раствору спирт из группы одноатомных алифатических насыщенных спиртов с количеством атомов углерода от 3 до 5 в количестве 4-20 об.% от полученного раствора, упаривают полученный раствор до полного удаления спирта из группы: метанол, этанол и проводят окончательную кристаллизацию целевого продукта в спирте из группы одноатомных алифатических насыщенных спиртов с количеством атомов углерода от 3 до 5, после чего проводят фильтрацию, промывку и сушку с получением целевого очищенного продукта.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности, а именно к способу получения биологически активного продукта из кожи марала. Способ получения биологически активного концентрата из кожи маралов, заключающийся в том, что кожу измельчают до состояния фарша и подвергают ферментативному гидролизу с последующей экстракцией под действием ультразвуковых колебаний, при этом ферментативный гидролиз проводят в присутствии ферментов пепсина и папаина, причем фермент пепсин вводится в процесс в начале экстрагирования смеси, а папаин - в середине временного периода процесса экстракции, после фильтрации осуществляют сушку экстракта при определенных условиях.

Изобретение относится к фармацевтической промышленности и касается способа получения гиперицина и псевдогиперицина из сырьевой фитомассы растений видов зверобой пятнистый и зверобой продырявленный.

Изобретение относится к средству, обладающему антимикробным, репаративным и ранозаживляющим действием. Указанное средство включает экстракт сухой из побегов рододендрона золотистого с содержанием суммы простых фенолов и фенологликозидов не менее 28%, полученный путем экстракции сырья с размером частиц 2-3 мм водой очищенной при соотношении сырья и экстрагента 1:10, время экстракции при первом контакте фаз 2 ч, втором - 1,5 ч, третьем - 1 ч, при перемешивании сырья и температуре 60±5°С.
Наверх