Способ окраски и дифференцировки микроорганизмов



Способ окраски и дифференцировки микроорганизмов
Способ окраски и дифференцировки микроорганизмов
Способ окраски и дифференцировки микроорганизмов
G01N1/30 - Исследование или анализ материалов путем определения их химических или физических свойств (разделение материалов вообще B01D,B01J,B03,B07; аппараты, полностью охватываемые каким-либо подклассом, см. в соответствующем подклассе, например B01L; измерение или испытание с помощью ферментов или микроорганизмов C12M,C12Q; исследование грунта основания на стройплощадке E02D 1/00;мониторинговые или диагностические устройства для оборудования для обработки выхлопных газов F01N 11/00; определение изменений влажности при компенсационных измерениях других переменных величин или для коррекции показаний приборов при изменении влажности, см. G01D или соответствующий подкласс, относящийся к измеряемой величине; испытание

Владельцы патента RU 2647474:

федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "Курский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации (RU)

Изобретение относится к области микробиологии, а именно к способам окраски и дифференцировки микроорганизмов. Предложен способ окраски и дифференцировки микроорганизмов, при котором в качестве основного красителя используют 4-дневную настойку плодов черноплодной рябины на 90% этиловом спирте с добавлением 2-2.5 г медного купороса на 40 мл раствора, для докрашивания применяют 1% раствор эозина, при этом бактериологические мазки, фиксированные над пламенем спиртовки, окрашивают новым красителем на основе экстракта плодов черноплодной рябины в течение 4,5-5 мин, смывают 2 раза 96% спиртом, наносят 96% спирт на 20 с, промывают водой и окрашивают 1% эозином в течение 1 мин, затем промывают водой и высушивают фильтровальной бумагой. Изобретение обеспечивает повышение диагностической ценности и сокращение стоимости бактериоскопического исследования мазков с грамположительными и грамотрицательными микроорганизмами. 3 пр., 6 ил.

 

Изобретение относится к микробиологии и может быть использовано для окраски бактерий и дифференцировки грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов при микроскопическом методе исследования.

Прототипом предлагаемого изобретения является способ окраски грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов по методу Грама (после фиксации бактериологического мазка над пламенем спиртовки через фрагмент фильтровальной бумаги наносят основной краситель генциановый фиолетовый на 1-2 мин, затем раствор Люголя на 1-2 мин, обесцвечивание осуществляется путем дифференцировки в 96% этиловом спирте в течение 30-60 с, после промывания водой производится докрашивание водным фуксином в течение 1-2 мин) [Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии. Под ред. Л.Б. Борисова. М., 1979. С. 32]. Указанный способ широко применяется для бактериоскопии в диагностике инфекционных заболеваний и на практических занятиях по микробиологии в медицинских вузах. Метод основан на различиях окраски бактерий (грамположительные - фиолетовые, грамотрицательные - красные) вследствие отличий в химическом составе их клеточной стенки. Недостатком является высокая стоимость и ограниченная доступность используемых импортных красителей, таких как генциановый фиолетовый, кристаллический фиолетовый и др.

Техническим результатом настоящего изобретения является повышение диагностической ценности и сокращение стоимости бактериоскопического исследования мазков с грамположительными и грамотрицательными микроорганизмами за счет использования нового красителя на основе спиртового экстракта плодов черноплодной рябины.

Указанный технический результат достигается благодаря использованию нового альтернативного способа окраски бактерий с применением растительного красителя на основе 4-дневной настойки плодов черноплодной рябины на 90% этиловом спирте, к которой добавляют 2-2,5 г медного купороса на 40 мл раствора. Бактериологические мазки фиксируют над пламенем спиртовки, наносят новый краситель на основе экстракта плодов черноплодной рябины на 4,5-5 мин, смывают 2 раза 96% спиртом, наносят 96% спирт на 20 с, промывают водой и наносят 1% эозин на 1 мин, затем промывают водой, высушивают фильтровальной бумагой и изучают под микроскопом с объективом х90 и иммерсионным маслом. Грамположительные бактерии при этом окрашиваются в синий или сине-фиолетовый цвет, грамотрицательные - в розовый или красный.

Изобретение поясняется чертежами.

Фиг. 1. Окраска стафилококков (Staphylococcus albus). Ув. х1000.

Фиг. 2. Окраска бацилл (В. cereus). Ув. х1000.

Фиг. 3. Окраска бацилл (В. subtilis). Ув. х1000.

Фиг. 4. Окраска кишечных палочек (Е. coli). Ув. х1000.

Фиг. 5. Окраска смеси музейных культур стафилококка (Staphylococcus albus) и кишечной палочки (Е. coli). Ув. х1000.

Фиг. 6. Окраска смеси музейных культур В. cereus и Е. coli. Ув. х1000.

Способ осуществляется следующим образом. Свежие или размороженные плоды черноплодной рябины разминают, сливают образовавшийся сок и заливают 90% этиловым спиртом в соотношении 1,25-1,3:1. Настаивание производится в защищенном от света месте в темной посуде при комнатной температуре в течение 4 дней, затем настой отжимают через 4-5-слойную марлю и получают густой темно-красный непрозрачный раствор. К 40 мл фильтрата добавляют 2-2,5 г медного купороса, размешивают, после чего он готов к употреблению в течение 1,5 месяцев. Бактериологические мазки фиксируют над пламенем спиртовки, наносят новый краситель на основе экстракта плодов черноплодной рябины на 4,5-5 мин, смывают 2 раза 96% спиртом, наносят 96% спирт на 20 с, промывают водой и наносят 1% эозин на 1 мин, затем промывают водой, высушивают фильтровальной бумагой и изучают под микроскопом с объективом х90 и иммерсионным маслом.

Пример 1 конкретного выполнения. На фиксированные мазки музейных культур стафилококка (Staphylococcus albus), бацилл (В. cereus, В. subtilis) и кишечной палочки (Е. coli) наносят новый краситель на основе спиртового экстракта плодов черноплодной рябины, содержащего медный купорос, на 4,5 мин, смывают 2 раза 96% спиртом, наносят 96% спирт на 20 с, промывают водой и наносят 1% эозин на 1 мин, затем промывают водой, высушивают фильтровальной бумагой. Результат: стафилококки (фиг. 1) и В. cereus (фиг. 2) окрашиваются в темно-синий цвет, В. subtilis (фиг. 3) - в сине-фиолетовый, кишечные палочки - в красный (фиг. 4).

Пример 2. На фиксированный мазок из смеси музейных культур стафилококка (Staphylococcus albus) и кишечной палочки (Е. coli) наносят новый краситель на основе спиртового экстракта плодов черноплодной рябины, содержащего медный купорос, на 4,5 мин, смывают 2 раза 96% спиртом, наносят 96% спирт на 20 с, промывают водой и наносят 1% эозин на 1 мин, затем промывают водой, высушивают фильтровальной бумагой. Результат: стафилококки окрашиваются в темно-синий цвет, кишечные палочки - в красный (фиг. 5).

Пример 3. На фиксированный мазок из смеси музейных культур В. cereus и Е. coli наносят новый краситель на основе спиртового экстракта плодов черноплодной рябины, содержащего медный купорос, на 4,5 мин, смывают 2 раза 96% спиртом, наносят 96% спирт на 20 с, промывают водой и наносят 1% эозин на 1 мин, затем промывают водой и высушивают фильтровальной бумагой. Результат: бациллы В. cereus окрашиваются в сине-фиолетовый цвет, кишечные палочки - в красный (фиг. 6).

Таким образом, проведенные исследования демонстрируют, что предложенный нами новый способ окраски бактерий является эффективным и экономичным и позволяет дифференцировать грамположительные и грамотрицательные микроорганизмы.

Способ окраски и дифференцировки микроорганизмов, отличающийся тем, что в качестве основного красителя используют 4-дневную настойку плодов черноплодной рябины на 90% этиловом спирте с добавлением 2-2.5 г медного купороса на 40 мл раствора, не используют йодистые растворы, а для докрашивания применяют 1% раствор эозина, при этом бактериологические мазки, фиксированные над пламенем спиртовки, окрашивают новым красителем на основе экстракта плодов черноплодной рябины в течение 4,5-5 мин, смывают 2 раза 96% спиртом, наносят 96% спирт на 20 с, промывают водой и окрашивают 1% эозином в течение 1 мин, затем промывают водой и высушивают фильтровальной бумагой.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области медицины, а именно к эндокринологии и онкологии, и может быть использовано для дифференциальной диагностики новообразований в щитовидной железе.

Изобретение относится к измерительной технике и касается дистанционного способа обнаружения участков растительности в стрессовом состоянии путем лазерного возбуждения флуоресценции хлорофилла растения и регистрации интенсивности флуоресценции.

Изобретение относится к способу определения типа пробы пластового флюида. Техническим результатом является повышение точности определения характеристик пластовых флюидов.

Изобретение относится к обнаружению текучей среды в теле человека, в частности к обнаружению гидравлической текучей среды и жидкого топлива внутри тела человека. Способ обнаружения проникновения текучей среды в пациента включает этапы обеспечения емкости для хранения текучей среды, обеспечения текучей среды для использования в машинном оборудовании и ее добавления в указанную емкость; и обеспечения флуоресцентного красителя и его добавления в текучую среду с обеспечением флуоресценции текучей среды в присутствии голубого или ультрафиолетового света.

Группа изобретений относится к области детектирования молекулы-мишени в образце. Устройство для детектирования молекулы-мишени в образце содержит контейнер для образцов для количественного определения молекулы-мишени в образце; по меньшей мере одну первую частицу, функционализированную первой связывающей молекулой, способной к специфическому связыванию с молекулой-мишенью; поверхностную структуру, содержащую вторую связывающую молекулу, где поверхностная структура покрывает плоскую поверхность или присутствует на по меньшей мере одной второй частице.

Изобретение относится к устройствам виброакустического мониторинга внешних воздействий на трубопровод. Заявленное волоконно-оптическое устройство мониторинга трубопроводов содержит два объединенных в одну систему независимых рефлектометра, каждый из которых подключен к разным оптическим волокнам волоконно-оптической линии, при этом рефлектометр содержит лазерный источник непрерывного излучения, соединенный с модулятором интенсивности оптического излучения, циркулятор, один из выходов которого соединен с волоконно-оптической линией, первый и второй эрбиевые усилители, формирователь прямоугольных электрических импульсов, фотоприемник, выполненный в виде балансного детектора с дифференциальным усилителем, волоконно-оптический интерферометр Маха-Цендера, причем рефлектометр содержит фазовый модулятор, генератор тактовых импульсов, генератор прямоугольных электрических импульсов, при этом вход управления модулятора интенсивности оптического излучения соединен с выходом генератора прямоугольных электрических импульсов, который соединен с генератором тактовых импульсов, также модулятор интенсивности оптического излучения соединен с волоконно-оптическим интерферометром Маха-Цендера, имеющим разность плеч ΔL=Vg⋅Δt, где Vg - групповая скорость излучения в оптическом волокне, Δt - время задержки волоконно-оптического интерферометра Маха-Цендера, при этом волоконно-оптический интерферометр Маха-Цендера соединен с первым эрбиевым усилителем, на одном из плеч волоконно-оптического интерферометра Маха-Цендера установлен фазовый модулятор, причем вход фазового модулятора соединен с выходом формирователя прямоугольных электрических импульсов, соединенного с генератором тактовых импульсов, выход первого эрбиевого усилителя соединен с входом циркулятора, второй выход которого соединен со вторым эрбиевым усилителем, при этом второй эрбиевый усилитель также соединен с фотоприемником, выход которого соединен с входом устройства обработки сигнала.

Изобретение относится к аналитическим измерениям. Способ классификации образца в одном из классов осуществляется на основании спектральных данных, причем спектральные данные содержат спектр комбинационного рассеяния, ближний инфракрасный спектр, ИК-Фурье спектр, масс-спектр MALDI или времяпролетный масс-спектр MALDI.

Изобретение относится к устройству для качественной и/или количественной регистрации частиц в жидкости. Устройство для качественной и/или количественной регистрации частиц в жидкости содержит источник (1) света, оптический датчик (2) и размещенный между ними держатель (4) пробы для приема исследуемой жидкости.

Изобретение относится к области физики, в частности к аналитическому приборостроению и может быть использовано в газоанализаторах, применяемых на установках извлечения серы.

Изобретение относится к области аналитической химии и может быть использовано для определения интегральной антиоксидантной активности (АОА) растительного сырья и продуктов питания на его основе.

Изобретение относится к области медицины, в частности к онкологии, и предназначено для диагностики метастазов рака толстой кишки. Из тканевых проб толстой кишки выделяют тотальную ДНК.

Изобретение относится к способам количественного определения биологически активных веществ в растительном сырье и получаемых на его основе продуктах питания, а именно к способу определения содержания витамина К1 в продуктах растительного происхождения, и может быть использовано в химической, фармацевтической и пищевой отраслях, медицине, в том числе гигиене питания.

Изобретение относится к области экспериментальной медицины и биологии, в частности к гистологическим исследованиям, и предназначено для микроскопических исследований полутонких срезов органов и тканей, залитых в смесь эпона и аралдита.

Изобретение относится к области промысловой геологии и может быть использовано в процессе добычи углеводородов из подземных геологических формаций. В данном документе описан способ измерения вязкости неньютоновской жидкости для поточного измерения и управления процессом.

Изобретение относится к пробоотборным системам и предназначено для отбора проб с поверхности почвы и различных поверхностей производственных помещений. Устройство содержит корпус с тангенциальным заборным патрубком и эжекторной трубкой, циклон, выходной патрубок и отверстие для слива в корпусе.

Изобретение относится к технике измерения обводненности скважинной нефти, то есть оценки доли нефти и воды в добываемой пластовой жидкости. Техническим результатом является отсечение пробы в трубке.

Изобретение относится к области медицины, в частности к акушерству, гинекологии, репродуктологии и иммунологии, и предназначено для прогнозирования результативности программы экстракорпорального оплодотворения (ЭКО).

Изобретение относится к области медико-биологических исследований, а именно к способам заполнения ингаляционной камеры аэрозолем при исследовании ингаляционной токсичности веществ.

Изобретение относится к области медицины, в частности к акушерству и гинекологии. Предложен способ выявления наследственной предрасположенности к развитию задержки роста плода у курящих женщин.

Изобретение относится к области спортивной медицины и предназначено для определения наследственной предрасположенности человека к спортивной деятельности. Осуществляют забор биологического материала, выделение ДНК, генотипирование по локусам ACE, PPPARGC1A, PPARGC1B, PPARG2, PPARA, PPARD, VDR, CALCR, VEGFA, GNB3, NOS3, AGT 704, AGT 521, IL6.
Изобретение относится к области медицины. Предложен способ неинвазивной диагностики состояния и организации внутриклеточного хроматина в GV-ооците млекопитающих. Осуществляют захват оптическим микропинцетом ядрышкоподобного тельца в зародышевом пузырьке ооцита, находящегося в начальной стадии развития. Проводят смещение и деформацию ядрышкоподобного тельца внутри клетки. В случае смещения центра ядрышкоподобного тельца ооцит относят к NSN типу. В случае деформации тельца либо полном отсутствии эффекта ооцит относят к SN типу. Изобретение обеспечивает повышение быстродействия и точности определения состояния и организации внутриклеточного хроматина в GV-ооцитах млекопитающих. 1 пр.

Изобретение относится к области микробиологии, а именно к способам окраски и дифференцировки микроорганизмов. Предложен способ окраски и дифференцировки микроорганизмов, при котором в качестве основного красителя используют 4-дневную настойку плодов черноплодной рябины на 90 этиловом спирте с добавлением 2-2.5 г медного купороса на 40 мл раствора, для докрашивания применяют 1 раствор эозина, при этом бактериологические мазки, фиксированные над пламенем спиртовки, окрашивают новым красителем на основе экстракта плодов черноплодной рябины в течение 4,5-5 мин, смывают 2 раза 96 спиртом, наносят 96 спирт на 20 с, промывают водой и окрашивают 1 эозином в течение 1 мин, затем промывают водой и высушивают фильтровальной бумагой. Изобретение обеспечивает повышение диагностической ценности и сокращение стоимости бактериоскопического исследования мазков с грамположительными и грамотрицательными микроорганизмами. 3 пр., 6 ил.

Наверх