Способ получения микропобегов растений семейства betulaceae

Изобретение относится к биотехнологии. Изобретение представляет собой способ, включающий индукцию микропобегов непосредственно из апикальной недифференцированной ткани вегетативных почек экспланта на агаризованной среде, содержащей минеральную основу по Мурасиге-Скуга и дополнительно включающей 0,25-2,0 мг/л БАП, 20-30 г/л сахарозы, 6 г/л агара. Элонгацию и мультипликацию полученных микропобегов проводят с использованием жидкой питательной среды того же состава (за исключением агара) путем одновременного бессистемного размещения необходимого количества микропобегов в сосуде на поверхности перфорированной площадки, закрепленной выше уровня жидкой питательной среды. Затем в автоматическом режиме осуществляют циклическое чередование процессов экспозиции микропобегов в воздушной среде влажностью 80-90% и погружения их в жидкую питательную среду на 1-4 минуты 2-4 раза в сутки путем подъема ее уровня. При этом дополнительно проводят аэрацию воздуха внутри сосуда по 2-6 минут через равные промежутки времени от 10 до 16 раз в сутки в течение 16-часового фотопериода. Изобретение позволяет повысить количество микропобегов в одном сосуде более чем в 60 раз в течение 3-4 недель и увеличить в 5 раз общее их количество за год, снизить в 7 раз проявления хлороза, увеличить в 2,2 раза число боковых пазушных побегов. Получить до 90% жизнеспособных микропобегов. 3 табл.

 

Изобретение относится к биотехнологии и воспроизводству лесных древесных растений на искусственных питательных средах в стерильных условиях in vitro и может быть использовано в лесном хозяйстве для массового получения посадочного материала экономически ценных и декоративных форм древесных растений сем. Betulaceae.

Известен способ клонального микроразмножения гибридов карельской березы, по которому в качестве исходных эксплантов используют верхушечные и пазушные почки. Рост каллуса и формирование микропобегов проводят на основной агаризованной питательной среде Мурасиге-Скуга, содержащей в качестве фитогормонов 80-120 мг/л лизина, 0,05-0,15 мг/л кинетина, 0,6-1,0 мг/л 6-бензиламинопурина (БАП) и 0,05-0,08 мг/л α-нафтилуксусной кислоты (НУК). В последующем удлинение побегов осуществляют на агаризованной питательной среде с уменьшенной вдвое концентрацией макросолей по Мурасиге-Скуга и с добавлением 0,6-1,0 мг/л БАП и 0,3-0,5 мг/л индолилуксусной кислоты (ИУК) (авторское свидетельство СССР №1752284, МПК А01Н 4/00, опубл. 07.08.1992 г.).

Однако в указанном способе индукцию микропобегов осуществляют из каллуса, что, с одной стороны, повышает коэффициент размножения, а с другой при прохождении клетками стадии дедифференцировки в условиях in vitro не исключает процесс их полиплоидизации и анеуплоидизации. Все это приводит к сомаклональной изменчивости, в результате чего увеличивается вероятность получения генетически измененного клонового потомства. Для получения каллусной ткани используют дорогостоящие реактивы, например фитогормоны (лизин, НУК, ИУК, БАП, кинетин), при этом само присутствие этапа каллусообразования удлиняет процесс в целом. Использование большого количества стеклянных сосудов малого объема повышает трудозатраты и требует увеличения площади стеллажей. Поэтому полный цикл получения микропобегов является трудоемким, дорогостоящим и продолжительным.

Наиболее близким заявленному является способ получения растительного материала для размножения растений, по которому размножение осуществляют путем высадки стерильных черенков побегов растений в сосуд с агаризованной питательной средой, содержащей в качестве регулятора роста цитокинин или кинетин (таблица 1). После этого сосуд заливают жидкой питательной средой того же состава до полного погружения черенков и культивируют при 16-часовом фотопериоде при освещенности 10000 лк до появления боковых побегов. Твердая питательная среда обеспечивает побегам вертикальное положение (Патент SU 1590029, МПК A3 А01Н 3/00, опубл. 30.08.1990 г.).

Данный способ разработан для травянистых многолетних растений, имеющих высокую скорость роста, которую сложно соотнести с довольно низкой скоростью роста древесных растений. Способ не обеспечивает микропобегам оптимальные условия на этапе побегообразования, поскольку при длительном нахождении в жидкой среде они могут испытывать затяжную гипоксию (недостаток кислорода), вследствие которой возможно угнетение процессов фотосинтеза и формирования боковых пазушных побегов. Кроме того, как указывают сами авторы, у самых сильных побегов, находящихся выше уровня поверхности жидкой среды, т.е. в воздушной среде, листовых почек в пазухах листа образовывалось мало или вовсе не образовывалось. Недостатком способа является использование высокой концентрации агара (10000 мг/л), приводящей к его удорожанию. Применение комбинированной по консистенции питательной среды (агаризованной полутвердой одновременно с жидкой) усложняет сам процесс приготовления, увеличивает его продолжительность и трудозатраты, предусматривает использование дорогостоящих реактивов и снижает уровень асептики культивируемой ткани. Трудозатраты также повышаются из-за повторного культивирования черенков, полученных из средней и нижней частей побегов и использования для разлива питательной среды индивидуальных стеклянных колб небольшого объема (200 мл), для установки которых, кроме того, требуются дополнительные площади. Поэтому полный цикл получения микропобегов является трудоемким, дорогостоящим, длительным и, кроме того, не обеспечивающим необходимого их качества.

Задачей настоящего изобретения является разработка экономичного способа клонального микроразмножения растений семейства Betulaceae, позволяющего получать одновременно большое количество высококачественных микропобегов in vitro, сохраняющих уникальные признаки исходных генотипов, и способствующего ускоренному выращиванию посадочного материала экономически ценных и декоративных трудноразмножаемых древесных растений.

Техническим результатом изобретения является повышение эффективности способа за счет стимуляции формирования множественного числа боковых пазушных побегов (de novo) при одновременном развитии на каждом из них нескольких микропобегов (от 2 до 10 шт.) in vitro и усиления скорости их роста (длины), увеличения фотосинтетической деятельности формирующихся листьев, а также повышение жизнеспособности микропобегов, удешевление и снижение трудозатрат процесса получения микропобегов в культуре тканей, соответствующих исходному фенотипу.

Заявленный технический результат достигается тем, что в способе получения микропобегов растений сем. Betulaceae, включающем индукцию микропобегов на агаризованной питательной среде Мурасиге-Скуга in vitro, последующую их элонгацию и мультипликацию, согласно изобретению, индукцию микропобегов осуществляют непосредственно из апикальной недифференцированной ткани вегетативных почек экспланта, а элонгацию и мультипликацию полученных микропобегов проводят путем одновременного в одном сосуде необходимого количества микропобегов на поверхности перфорированной площадки, закрепленной выше уровня жидкой питательной среды, содержащей минеральную основу по Мурасиге-Скуга, дополнительно включающей 0,25-2,0 мг/л БАП, 20000-30000 мг/л сахарозы, и осуществляют в автоматическом режиме циклическое чередование процессов экспозиции микропобегов в воздушной среде влажностью 80-90% и погружения их в жидкую питательную среду на 1-4 минуты 2-4 раза в сутки путем подъема ее уровня, с дополнительной аэрацией воздуха внутри сосуда по 2-6 минут через равные промежутки времени от 10 до 16 раз в сутки в течение 16-часового фотопериода.

Предлагаемый способ получения микропобегов растений сем. Betulaceae реализуется следующим образом.

Берут верхушечные и боковые вегетативные почки у растений сем. Betulaceae с ауксибластов (молодые побеги текущего года), достигших длины от 1 до 3 см, стерилизуют с помощью антисептических и дезинфицирующих средств. Использование ауксибластов для получения эксплантов значительно упрощает процесс стерилизации, поскольку они, как правило, менее заражены разными видами микрофлоры. В стерильных условиях из них вычленяют апикальную недифференцированную ткань и размещают в небольших стеклянных сосудах, объемом 125 мл, на агаризованной питательной среде (по 15 мл в один сосуд), содержащей минеральную основу по Мурасиге-Скуга, куда дополнительно вносят 0,25-2,0 мг/л БАП, 25000-30000 мг/л сахарозы, 6000 мг/л агара (таблица 1). На этой среде в течение 2-3 недель индуцируют пазушные побеги. Использование минимального набора фитогормонов (только БАП) в питательной среде в процессе побегообразования является не только экономически выгодным, но также препятствует формированию каллуса и способствует сохранению гарантированных признаков исходного генотипа. Затем осуществляют процесс элонгации и мультипликации путем черенкования полученных микропобегов на сегменты с размещением их в стерильном сосуде, объемом 3,5 л, содержащем 0,5 л жидкой питательной среды того же состава, за исключением агара, для последующей индукции на них микропобегов de novo (таблица 1). Микропобеги в сосуде размещают свободно на поверхности перфорированной площадки, которая закреплена выше уровня жидкой питательной среды. Размещение микропобегов без их индивидуальной фиксации в общем сосуде значительно сокращает временные затраты и экономит площади рабочей поверхности, предназначенной для культивирования. Мультипликацию микропобегов повторяют в зависимости от потребностей в их количестве. Исключение агара из среды на побегообразование значительно удешевляет процесс получения микропобегов. Культивирование микропобегов проводят на стеллажах при температуре 23-27°С, 16-часовом фотопериоде и освещенности общей интенсивности от 3000 до 4500 лк в течение 3-5 недель.

Побегообразование осуществляют при циклическом чередовании процессов экспозиции микропобегов в воздушной среде, влажностью 80%, и погружения их в жидкую питательную среду на 1-4 минуты. Процесс повторяют 2-4 раза в сутки автоматически в соответствии с заданным интервалом времени. Погружение микропобегов обеспечивается путем подъема жидкой питательной среды до уровня, обеспечивающего их покрытие. При этом дополнительно проводят аэрацию воздуха внутри сосуда по 2-6 мину в автоматическом режиме через равные промежутки времени от 10 до 16 раз в сутки в течение 16-часового фотопериода. Заявляемый режим создает оптимальные условия для побегообразования, обеспечивающие индукцию пазушных побегов de novo и развитие листовой массы. Кроме того, наблюдается замедление процесса старения листьев, благодаря чему усиливается их аттрагирующая способность, направленная на поглощение необходимых веществ из питательной среды, а также общая способность клеток к синтетической деятельности. Экспериментальным путем выявлено, что поднятие уровня жидкой питательной среды на 1-4 минуты 2-4 раза в сутки с погружением в нее микропобегов достаточно, поскольку в этом случае поглощение необходимого количества питательных веществ ими активно осуществляется всей поверхностью. При этом тургор тканей не снижается, а гипоксия практически исключается. Многократная аэрация внутри сосуда оптимизирует условия газообмена и способствует обновлению воздушной среды, препятствуя накоплению в ней этилена и других газов, которые оказывают в основном тормозящее влияние на процессы роста.

Применение предлагаемого способа получения микропобегов растений позволяет существенно сократить использование дорогостоящих реактивов, например агара, что значительно удешевляет культивирование растений in vitro. Создание оптимальных условий формирования микропобегов за счет особого режима кратковременного погружения эксплантов в жидкую питательную среду и последующего длительного их экспонирования в воздушной среде с высокой влажностью обеспечивают ускоренное формирование новых микропобегов (de novo). Стимулирование побегообразования дает возможность ускорить процесс формирования пазушных побегов, увеличить биомассу микропобегов, а также усилить процесс фотосинтеза и замедлить старение (хлороз) листьев, что способствует повышению жизнеспособности микропобегов в целом.

Предложенный способ обеспечивает повышение эффективности клонального микроразмножения также за счет ускоренного массового формирования побегов путем применения одного сосуда вместо нескольких небольшого объема. Используется упрощенный состав среды (без добавления агара) и фотопериод: 16-часовой при освещенности 4500 лк (в прототипе в примерах указан постоянный фотопериод при освещенности 8000 лк), которые позволяют удешевить технологию за счет экономии средств на приобретение дорогостоящих реактивов и электроэнергии. Ускоренное развитие микропобегов происходит за счет дополнительной аэрации воздуха внутри сосуда и усиления процесса фотосинтеза. В прототипе данные по фотосинтезу не представлены.

Апробация способа проводилась в течение 4-х лет (2012-2015 гг.) на следующих видах сем. Betulaceae: карельская береза Betula pendula Roth var. carelica (Merclin) , далекарлийская береза В. pendula Roth var. dalecarlica Schneid. (L.f.), ольха мелкорезная Alnus incana f. angustissima Holmberg ex Hylander и др., которые относятся к экономически ценным или декоративным, но трудноукореняемым растениям. В каждом варианте использовалось от 158 до 382 исходных микропобегов в один сосуд.

Контролем служил вариант опыта, где процесс мультипликации осуществляли на полутвердой агаризованной питательной среде. Режимы способа получения микропобегов представлены в таблице 2. По окончании эксперимента визуально определяли наличие или отсутствия хлороза, количество вновь образованных пазушных побегов в расчете на один исходный микропобег, их длину за 4 недели культивирования, на основании которых делали заключение об их жизнеспособности. Полученные данные представлены в таблице 3. В прототипе аналогичные морфофизиологические показатели не приводятся.

Анализ данных таблицы 1 показал, что заявляемый способ позволяет повысить количество микропобегов в одном сосуде более чем в 60 раз в течение 3-4 недель и в 5 раз увеличить общее их количество за год по сравнению с прототипом. Из таблицы 3 следует, что предлагаемый способ позволяет снизить в 7 раз проявление хлороза, увеличить в 2,2 раза число боковых пазушных побегов (de novo), при одновременном развитии на каждом из них нескольких микропобегов, усилить в 1,8 раза скорость роста (длину) микропобегов за 4 недели культивирования и получить до 90% жизнеспособных микропобегов, что в 1,2 раза выше по сравнению с контролем.

Важным преимуществом предлагаемого способа по сравнению с известными является возможность получать одновременно массовое количество высококачественных микропобегов при размножении и выращивании хозяйственно ценных и декоративных представителей семейства Betulaceae при экономии средств и снижении трудозатрат, что позволяет широко использовать его в практике лесного хозяйства для массового выращивания посадочного материала, а также в научных целях.

Способ получения микропобегов растений сем. Betulaceae, включающий индукцию микропобегов на агаризованной питательной среде Мурасиге-Скуга in vitro, последующую их элонгацию и мультипликацию, отличающийся тем, что индукцию микропобегов осуществляют непосредственно из апикальной недифференцированной ткани вегетативных почек экспланта, а элонгацию и мультипликацию полученных микропобегов проводят путем одновременного размещения в одном сосуде необходимого количества микропобегов на поверхности перфорированной площадки, закрепленной выше уровня жидкой питательной среды, содержащей минеральную основу по Мурасиге-Скуга, дополнительно включающей 0,25-2,0 мг/л БАП, 20000-30000 мг/л сахарозы, и осуществляют в автоматическом режиме циклическое чередование процессов экспозиции микропобегов в воздушной среде влажностью 80-90% и погружения их в жидкую питательную среду на 1-4 минуты 2-4 раза в сутки путем подъема ее уровня, с дополнительной аэрацией воздуха внутри сосуда по 2-6 минут через равные промежутки времени от 10 до 16 раз в сутки в течение 16-часового фотопериода.



 

Похожие патенты:

Изобретение относится к области биохимии, в частности к способу борьбы с насекомыми, выбранными из группы, состоящей из Pseudoplusia includens, Anticarsia gemmatalis, Spodoptera frugiperda и Heliothis virescens, а также к способу борьбы с сорняками сельскохозяйственной культуры сои, который включает обработку сельскохозяйственной культуры сои гербицидом глюфосинатом.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к молекуле рекомбинантной ДНК, указывающей на присутствие трансгенного события, где показательный образец семени, содержащего указанное трансгенное событие, депонирован в ATCC как РТА-12669.

Изобретение относится к области сельскохозяйственной биотехнологии. Изобретение представляет собой способ получения трансгенных растений пшеницы методом биобаллистики, включающий в себя холодовой шок (низкотемпературную обработку растений-доноров), культивирование эксплантов перед трансформацией на среде для индукции каллусообразования, при этом среда содержит пиклорам, осмотическую обработку эксплантов перед трансформацией, при этом экспланты помещают на среду с высоким осмотическим давлением, чтобы вызвать плазмолиз, введение в клетки эксплантов чужеродной ДНК с использованием пушки PIG (particle inflow gun), пролиферацию трансформированных клеток без селективного отбора, регенерацию и селективный отбор трансгенных побегов, укоренение побегов на среде с селективным агентом при пониженной температуре, где для индукции каллусообразования у незрелых зародышей используют холодовой шок, где низкотемпературную обработку свежесобранных колосьев растений-доноров осуществляют при +4°C в течение 48 часов, для индукции каллусообразования у незрелых зародышей используют модифицированную питательную среду, содержащую 0,5 мг 2,4-D, 2 мг пиклорама, 40 г мальтозы, 0,5 г глютамина, 0,1 г гидролизата казеина, перед и после трансформации экспланты выдерживают на осмотической среде, содержащей 120 г/л мальтозы, при этом перед трансформацией в течение 4-6 часов, а после трансформации в течение 20-24 часов, после трансформации клетки экспланта проходят этап размножения (пролиферации) на питательной среде без селективного агента, укоренение побегов проводят на селективной среде и при пониженной температуре.

Изобретение относится к области биохимии, в частности, к применению последовательности нуклеиновой кислоты, кодирующей белок, для получения трансгенного растения, у которого стадия цветения подавлена, остановлена или задержана.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к выделенной конструкции нуклеиновой кислоты для борьбы с западным кукурузным жуком, также к молекуле РНК, кодируемой вышеуказанной конструкцией.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к генетически модифицированной клетке растения сои, продуцирующей масло, содержащее 0,36-8,00% ДГК от общего количества жирных кислот и 0,30-3,98% ДПК(n-6) от общего количества жирных кислот, а также к способу ее получения.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к трансгенной растительной клетке табака, трансгенному растению табака, растительному материалу табака для получения повышенного количества С2С16:0, С2С17:0 и С2С18:0 сложных эфиров сахарозы, а также к курительному изделию, содержащему вышеуказанный растительный материал или часть вышеуказанного растения.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к применению темных семян канолы для получения кормовой муки канолы, причем темные семена канолы выбраны из группы, состоящей из семян, депонированных в АТСС под номером PTA-11697, семян, депонированных в АТСС под номером PTA-11696, семян, депонированных в АТСС под номером PTA-11698, и семян, депонированных в АТСС под номером PTA-11699.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к способу получения трансформированного растения розы, имеющего повышенное содержание в лепестках дельфинидина по сравнению с нетрансформированным растением розы, включающему стадию трансформации разновидности садовой розы (Rosa hybrida) плазмидой, содержащей полинуклеотид, кодирующий белок, имеющий активность флавоноид 3',5'-гидроксилазы, и 35S промотор вируса мозаики цветной капусты, функционально связанный с указанным полинуклеотидом.

Изобретение относится к области биохимии, в частности к выделенному полинуклеотиду для борьбы с западным кукурузным жуком (WCR), вектору, клетке, растению, семени растения, его содержащим, а также к способу снижения популяции насекомого-вредителя WCR с его использованием.

Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности к биотехнологии. Способ включает высадку микрорастений на пластиковые поддоны, покрытые лутрасилом с предварительно выполненными в нем посадочными отверстиями, путем погружения корневой системы растений в водный антисептический раствор с последующим обеспечением проточной циркуляции воды в поддоне и верхнего мелкодисперсного увлажнения растений.

Изобретение относится к биотехнологии. Изобретение представляет собой способ микроклонального размножения картофеля, при котором выделяют апикальные этиолированные проростки (1-1,5 см), стерилизуют в 0,3%-ном растворе диацида в течение 3-5 минут с последующей трехкратной промывкой стерильной H2O, культивируют меристемы, получают оздоровленные растения, проводят микрочеренкование, черенки вносят в стеклянные банки с металлической крышкой.

Изобретение относится к сельскохозяйственной биотехнологии. Изобретение представляет собой питательную среду для ввода меристем винограда в условия in vitro, содержащую аммоний азотнокислый, калий азотнокислый, кальций азотнокислый, кальций хлористый, магний сернокислый, натрий фосфорнокислый, железо сернокислое, этилендиаминотетраацетат натрия, борную кислоту, марганец сернокислый, цинк сернокислый, калий йодистый, натрий молибденовокислый, медь сернокислую, кобальт хлористый, миоинозит, тиамин, пиридоксин, 6-бензиламинопурин, сахарозу, агар, воду при следующем соотношении компонентов, мг/л: аммоний азотнокислый 350-450; калий азотнокислый 1000-1200; кальций азотнокислый 400-500; кальций хлористый 50-70; магний сернокислый 300-350; натрий фосфорнокислый 150-200; железо сернокислое 27,8-30,0; этилендиаминотетраацетат натрия 37,3-40,0; борная кислота 6,0-6,4; марганец сернокислый 22,0-22,6; цинк сернокислый 8,0-9,2; калий йодистый 0,40-0,80; натрий молибденовокислый 0,2-0,3; медь сернокислая 0,02-0,03; кобальт хлористый 0,02-0,03; миоинозит 50-100; тиамин 0,2-0,5; пиридоксин 0,2-0,5; 6-бензиламинопурин 0,2-0,5; сахароза 20000-30000; агар 5000-6000; вода остальное до 1,0 л.
Изобретение относится к области биотехнологии и сельского хозяйства, в частности к растениеводству. В способе клональное размножение оздоровленных растений осуществляют путем черенкования.

Изобретение относится к области сельского хозяйства, в частности к растениеводству и питомниководству. Способ включает использование в качестве исходных эксплантов одно- и двухузловых сегментов весенних или летних побегов, их стерилизацию, выгонку пазушных побегов, мультипликацию и укоренение, которое осуществляется на питательной среде 1/2 WPM, перевод растений к нестерильным условиям и высаживание в грунт.

Изобретение относится к области биотехнологии растений. Изобретение представляет собой способ хранения микрорастений березы в условиях in vitro, включающий культивирование микропобегов на питательной среде MS без гормонов с повышенным содержанием аскорбиновой кислоты 2,0 мг/л, с добавлением агар-агара 6 г/л при хранении пробирочных растений при температуре +4…+7°С в темноте.

Изобретение относится к области биотехнологии растений. Способ включает культивирование оздоровленных растений картофеля in vitro путем микрочеренкования на питательную среду, содержащую макро- и микроэлементы по прописи Мурасиге-Скуга, Fe-хелат, агар-агар, витамины по Уайту, аскорбиновую кислоту и сахарозу, получение растений-регенерантов и получение микроклубней картофеля.

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ клонального микроразмножения растений сем.

Изобретение относится к области биотехнологии растений. Изобретение представляет собой способ повышения эффективности культивирования in vitro березы повислой, лимонника китайского, рододендрона и сирени, включающий размножение микропобегов на искусственных питательных средах в течение трех недель в сочетании с микрочеренкованием побегов, допуская на экспланте не более двух пазушных почек.

Изобретение относится к области биотехнологии. Изобретение представляет собой способ получения растений хризантемы килеватой (Chrysanthemum carinatum Schousb.) в условиях in vitro путем введения в культуру клеток семян с целью каллусообразования и последующей регенерации растений, заключающийся в том, что стерилизованные семена помещают на питательную среду Мурасиге-Скуга с добавлением 0,7% агар-агара, 1 мг/л 6-бензиламинопурина, 0,1-1 мг/л индолил-3-уксусной кислоты, доведенную до 1 л стерильной дистиллированной водой, культивируют в течение одного пассажа до появления каллуса, не более 26 суток, затем каллусы пересаживают на питательную среду Мурасиге-Скуга с половинной концентрацией всех компонентов и 0,7% агар-агара, добавляют 0,2-1 мг/л 6-бензиламинопурина и культивируют 2-4 пассажа до появления растений-регенерантов.
Изобретение относится к области биохимии, в частности к кукурузному продукту, содержащему семя кукурузы от растения кукурузы, несущего генотип коричневой центральной жилки 3 (bm3) в гомозиготном состоянии и генотип мучнистости-2 (fl2) в гомозиготном состоянии. Также раскрыты способы получения кукурузного продукта. Изобретение позволяет получать кукурузный продукт из растения кукурузы, несущего генотип коричневой центральной жилки 3 (bm3) в гомозиготном состоянии и генотип мучнистости-2 (fl2) в гомозиготном состоянии. 5 н. и 4 з.п. ф-лы, 2 табл., 1 пр.

Изобретение относится к биотехнологии. Изобретение представляет собой способ, включающий индукцию микропобегов непосредственно из апикальной недифференцированной ткани вегетативных почек экспланта на агаризованной среде, содержащей минеральную основу по Мурасиге-Скуга и дополнительно включающей 0,25-2,0 мгл БАП, 20-30 гл сахарозы, 6 гл агара. Элонгацию и мультипликацию полученных микропобегов проводят с использованием жидкой питательной среды того же состава путем одновременного бессистемного размещения необходимого количества микропобегов в сосуде на поверхности перфорированной площадки, закрепленной выше уровня жидкой питательной среды. Затем в автоматическом режиме осуществляют циклическое чередование процессов экспозиции микропобегов в воздушной среде влажностью 80-90 и погружения их в жидкую питательную среду на 1-4 минуты 2-4 раза в сутки путем подъема ее уровня. При этом дополнительно проводят аэрацию воздуха внутри сосуда по 2-6 минут через равные промежутки времени от 10 до 16 раз в сутки в течение 16-часового фотопериода. Изобретение позволяет повысить количество микропобегов в одном сосуде более чем в 60 раз в течение 3-4 недель и увеличить в 5 раз общее их количество за год, снизить в 7 раз проявления хлороза, увеличить в 2,2 раза число боковых пазушных побегов. Получить до 90 жизнеспособных микропобегов. 3 табл.

Наверх