Средство для консервации заднего послойного трансплантата донорской роговицы



Средство для консервации заднего послойного трансплантата донорской роговицы
Средство для консервации заднего послойного трансплантата донорской роговицы
Средство для консервации заднего послойного трансплантата донорской роговицы
A01N1/02 - Консервирование тел людей или животных, или растений или их частей; биоциды, например дезинфектанты, пестициды, гербициды (препараты для медицинских,стоматологических или гигиенических целей A61K; способы или устройства для дезинфекции или стерилизации вообще, или для дезодорации воздуха A61L); репелленты или аттрактанты (приманки A01M 31/06; лекарственные препараты A61K); регуляторы роста растений (соединения вообще C01,C07,C08; удобрения C05; вещества, улучшающие или стабилизирующие состояние почвы C09K 17/00)

Владельцы патента RU 2676311:

Федеральное государственное автономное учреждение "Межотраслевой научно-технический комплекс "Микрохирургия глаза" имени академика С.Н. Федорова" Министерства здравоохранения Российской Федерации (RU)

Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии. Средство для консервации донорской роговицы в режиме гипотермической консервации в качестве исходных компонентов содержит среду 199, среду Хэма F-10, хондроитин-сульфат, декстран-40, Гентамицин-сульфат, амфотерицин В, препарат Фосфоглив и среду Дюльбекко-Игла. Предлагаемое средство для консервации донорской роговицы обеспечивает повышение жизнеспособности трансплантата путем восстановления клеточных и внутриклеточных мембран, пролонгирование сроков консервации за счет сохранения плотности эндотелиальных клеток в режиме гипотермической, при температуре 4-8°С, консервации донорской роговицы.

 

Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии, и может быть использовано для повышения жизнеспособности трансплантата роговицы и пролонгирования сроков консервации для задней послойной кератопластики.

Ближайшим аналогом является средство для консервации донорских роговиц глаза (Патент РФ №2450515), содержащее: среду 199, среду Хэма F-10, хондроитин-сульфат, декстран-40, гентамицин-сульфат, амфотеррицин В и среду Дюльбекко-Игла, дополнительно содержит препарат NeyDIL №37 St. III (Р/У ЛРС-008827/08-061108) при следующем соотношение компонентов, мас. %: Среда 199 25,0, Среда Хэма F-10 25,0, Хондроитин-сульфат А 0,5, Декстран-40 5,0, Гентамицин-сульфат 0,00014, Амфотерицин В 0,00015, NeyDIL №37 St. III 0,00015, Среда Дюльбекко-Игла остальное.

Недостатком этой среды является то, что использованные регуляторные пептиды NeyDIL №37 St. III не восстанавливают липидный слой клеток роговицы, не уменьшают внутриклеточный некроз эндотелия и кератоцитов.

Задачей изобретения является создание многокомпонентного средства для повышения жизнеспособности трансплантата роговицы и пролонгирования сроков консервации, как для сквозной, так и для задней послойной кератопластики.

Техническим результатом является повышение жизнеспособности трансплантата путем восстановления клеточных и внутриклеточных мембран, пролонгирование сроков консервации за счет сохранения плотности эндотелиальных клеток в режиме гипотермической (при температуре 4-8°C) консервации донорской роговицы.

Технический результат достигается тем, что данное средство для консервации донорской роговицы, в режиме гипотермической консервации, содержащее среду 199, среду Хэма F-10, хондроитин-сульфат, декстран-40, Гентамицин-сульфат, амфотерицин В и среду Дюльбекко-Игла, дополнительно содержит препарат Фосфоглив при следующем соотношении компонентов, мас. %:

Среда 199 25,0
Среда Хэма F-10 25,0
Хондроитин-сульфат А 0,5
Декстран-40 6,0-7,0
Гентамицин-сульфат 0,00014
Амфотерицин В 0,00015
Фосфоглив 0,025-0,05
Среда Дюльбекко-Игла остальное

При этом среда 199 имеет следующий состав, мг/л: Л-аланин 25; Л-аргинина хлорид 70; аспарагиновая кислота 30; Л-цистеина хлорид - 0,0987; Л-цистина двунатриевая соль; Л глютаминовая кислота 66,82; Л-глютамин 100; глютатион 0,05; глицин 50; Л гистидина хлорид одноводный 21,88; Л гидрооксипролин 10; Л-изолейцин 20; Л-лейцин 60; Л лизина хлорид 70; Л-метионин 15; Л-фенилаланин 25; Л-пролин 40; Л-серин 25; Л-треонин 30; Л-триптофан 10; Л-тирозина двунатриевая соль - 49,72; Л-валин 25; Л-аскорбиновая кислота 0,05; биотин 0,01; кальциферол 0,1; Д-кальция пантотенат 0,01; холина хлорид 0,5; фолиевая кислота - 0,01; и-инозитол 0,05; менафтона натрия бисульфат трехводный 0,019; никотиновая кислота 0,025; никотинамид 0,025; пара-амино-бензойная кислота 0,05; пиридоксальхлорид 0,025; пиридоксинхлорид 0,025; рибофлавин 0,01; тиамина хлорид 0,01; Д-Л-токоферола фосфата двунатриевая соль 0,01; витамина А-ацетат 0,1147; кальция хлорид двухводный 185,5; железа нитрат девятиводный 0,01; калия хлорид 400; калия дегидроортофосфат 60; магния сульфат семиводный 200; натрия хлорид 8000; натрия гидроортофосфат 47,5; аденина сульфат 10; 5-АМФ 0,2; АТФ двунатриевая соль 10; холестерол 0,2; 2-дезоксирибоза 0,5; Д-глюкоза 1000; гуанина хлорид - 0,3; гипоксантин 0,3; Д-рибоза 0,5; натрия ацетата 36,71; натриевая соль фенола красного 17; тимин 0,3; твин 80-5; урацил 0,3; ксантин 0,3.

Среда Хэма F-10 имеет следующий состав, мг/л: Л-аланин 8,91; Л-аргинина хлорид 210,7; Л-аспарагин 1-водный - 15,01; Л-аспарагиновая кислота 13,31; Л-цистеина хлорид 31,53; Л-глютаминовая кислота 14,71; Л-глютамин 146,2; глицин 7,51; Л-гистидина хлорид одноводный 20,96; Л-изолейцин 2,62; Л-лейцин 13,12; Л-лизин 29,3; Л-метионин 4,48; Л-фенилаланин 4,96; Л-пролин 11,51; Л-серин 10,5; Л-треонин 3,57; Л-триптофан 0,61; Л-тирозина натриевая соль 2,25; Л-валин 3,51; биотин 0,024; Д-кальция пантотенат 0,715; хлорид холина 0,698; фолиевая кислота 1,32; и-инозитол 0,541; никотинамид 0,611; пиридоксин-хлорид 0,206; рибофлавин 0,376; тиамина хлорид 1,012; витамин В12 1,36; кальция хлорид двухводный 44,1; сульфат меди пятиводный 0,0025; сульфат железа семиводный 0,8346; хлорид калия - 285; калия дегидрофосфат 83; магния сульфат семиводный 152,7; натрия хлорид 7400; натрия гидроортофосфат 156,2; цинка сульфат семиводный 0,0288; Д-глюкоза 1100; гипоксантин 4,08; липоевая кислота 0,206; натриевая соль фенола красного 12; натрия пируват 110; тимидин 0,727.

Среда Дюльбекко-Игла имеет следующий состав, мг/л: Л-аргинин 84; Л-цистина двунатриевая соль 56,78; Л-глютамин 584; глицин 30; Л-гистидина хлорид одноводный 42; Л-изолейцин 104,8; Л-лейцин 104,8; Л-лизина хлорид 146,2; Л-метионин 30; Л-фенилаланин - 66; Л-серии 42; Л-треонин 95,2; Л-триптофан 16; Л-тирозина двунатриевая соль 89,5; Л-валин 93,6; Д кальция пантотенат 4; холина хлорид 4; фолиевая кислота 4; и-инозитол 7; никотинамид 4; пиридоксаль-хлорид 4; рибофлавин 0,4; тиамина хлорид 4; кальция хлорид двухводный 264,9; нитрат железа девятиводный 0,1; калия хлорид 400; магния сульфат семиводный 200; натрия хлорид 6400; натрия бикарбонат 3700; натрия дигидроортофосфат двухводный 141,3; Д-глюкоза 4500; натриевая соль фенола красного 15; натрия пируват 110.

Фосфоглив (рег. №: Р N002528/02), содержит фосфолипиды (липоид С100) 500 мг, натрия глицирризинат (тринатриевая соль глицирризиновой кислоты) 200 мг; Вспомогательное вещество: мальтоза - 1800 мг.

Выбор сред объяснялся уязвимостью эндотелиальных клеток, относящихся к глиальной ткани. Наиболее оптимальным является выбор трех сред - среда 199, среда Хэма F-10 и среда Дюльбекко-Игла, в заявленных соотношениях, имитирующих аминокислотный и метаболический состав водянистой влаги передней камеры интактного глаза.

Хондроитин-сульфат А относится к цитопротекторам - вискоэластикам, обладая соответствующим знаком и электронным зарядом, он образует поверхностную защитную пленку на клетках эндотелиального пласта роговицы. Тем самым предотвращается механическое повреждение и десквамация клеток эндотелия роговицы в процессе гипотермической консервации донорского материала.

Декстран с молекулярной массой 40000 D относится к высокомолекулярным онкотическим компонентам среды и, таким образом, подобранный в заявленной концентрации, создает в среде онкотическое давление равное 320 мосм/л, при котором предотвращается процесс набухания клеток и коллоидного вещества стромы донорской роговицы в процессе длительной гипотермической консервации.

Для предотвращения роста патогенной микрофлоры добавлены: гентамицин-сульфат, оказывающий бактерицидное действие в отношении широкого спектра грамотрицательных и грамположительных микроорганизмов, и амфотерицин В, обладающий фунгицидным и фунгистатическим действиями.

Фосфоглив - комбинированное средство. Препарат оказывает мембраностабилизирующее действие и способен восстанавливать клеточные и внутриклеточные мембраны, их структуру и функции при повреждении, оказывать цитопротекторный эффект, нормализовать белковый и липидный обмены. Дополнительно обладает антиоксидантной и противовирусной активностью.

Заявленное средство для консервации донорской роговицы благодаря входящим в его состав компонентам в обозначенных концентрациях восстанавливает клеточные мембраны (мембрановостанавливающее действие) и обладает мембранопротективным действием.

В результате этого создаются условия для повышения жизнеспособности трансплантата роговицы и пролонгирования сроков консервации донорской роговицы для задней послойной кератопластики.

Это подтверждает морфометрическое и ультраструктурное исследование 32 роговиц от 16 доноров, полученных из Глазного банка МНТК «Микрохирургия глаза» им. С.Н. Федорова. Были сформированы три группы: опытная и две контрольные, при этом роговицы из опытной группы (правые) (n=16) от каждого донора подвергались консервации в заявленном средстве, а парные роговицы (левые) составляли контрольные группы: группа I - (n=8) помещалась в средство для консервации роговицы, полученное по патенту №2450515, остальные - группа II (n=8) - в среду, полученную по патенту №2069951. Все роговицы подвергались гипотермической консервации при 4-8°C в течение одних (n=4), двух (n=4), шести (n=4) и девяти (n=4) суток. Для оценки состояния мембран клетки и ее органелл использовалась трансмиссионная электронная микроскопия на электронном микроскопе (JEM 1200 EX II, Япония). Подсчет плотности эндотелиальных клеток проводился с помощью кератоанализатора для Глазных банков (модель 98, «Canon», Япония). Оценка на некроз проводилась с помощью окраски йодидом пропидия, с использованием конфокального лазерного сканирующего биологического микроскопа (FLUOVIEW FV10i, OLYMPUS Corporation, Япония).

При трансмиссионной микроскопии эндотелиальных клеток донорских роговиц разница между опытной и контрольными группами была отмечена уже на первые сутки эксперимента: в опытной группе наблюдалось уплотнение не только наружных клеточных, но и внутриклеточных мембран, с усилением эффекта на вторые сутки и сохранением его до шести суток консервации. В образцах опытной группы на девятые сутки были обнаружены участки начального повреждения внутриклеточных, в частности митохондриальных мембран эндотелиальных клеток донорских роговиц. На Фигуре 1 и 2 представлена трансмиссионная электронная микроскопия ультраструктуры эндотелиальных клеток роговиц на девятые сутки гипотермической консервации опытной группы при увеличении 10000х и 20000х, соответственно.

При этом в контрольных группах наблюдалось постепенное истончение и повреждение клеточных мембран, начиная с первых суток, выявлены грубые ультраструктурные изменения с паренхиматозной дегенерацией, то есть осаждением клеточных белков в матриксе цитоплазмы эндотелиальной клетки роговицы, что является проявлением необратимых клеточных процессов. На фигуре 3 и 4 представлена трансмиссионная электронная микроскопия эндотелиальной клетки роговицы образца из контрольной группы II на девятые сутки консервации при увеличении 10000х и 20000х, соответственно.

При оценке морфометрических характеристик выявлено, что за 9 суток консервации потеря плотности эндотелиальных клеток донорских роговиц в опытной группе составила - 2,7%, в контрольной группе I - 5,1%, а контрольной группе II - 7,2%. На фигуре 5 представлена динамика изменения плотности эндотелиальных клеток в группах сравнения.

При анализе потери эндотелиальных клеток в связи с развитием некроза обнаружено, что количество поврежденных клеток увеличивалось постепенно. К девяти суткам консервации в опытной группе достигало - 3,1%, в контрольной группе I - 6,4%, а в контрольной группе II - 9,8%. На фигуре 6 представлена динамика потери эндотелиальных клеток донорских роговиц в связи с развитием некроза в опытной и контрольных группах на 1, 2, 6 и 9 сутки консервации.

Средство для консервации роговицы получают следующим образом: в условиях ламинарной комнаты в химически чистую и стерильную мерную колбу сливают вместе две среды: 25 мл среды 199 и 25 мл среды Хэма F-10. Далее последовательно вносят 0,00014 г гентамицин-сульфата, 0,00015 амфотерицина В. Состав разделяют на две равные части по 25 мл и растворяют в первой части 6-7 г декстрана-40, а во второй части 0,5 г хондроитин-сульфата А путем медленного нанесения сухого вещества на поверхность жидкой смеси. После внесения указанных компонентов растворы оставляют до полного набухания на 80-120 минут, после чего полностью растворяют. Затем оба раствора сливают вновь вместе в мерную колбу, и добавляют среду Дюльбекко-Игла до метки 100 мл. Затем средство подвергают префильтрации через фильтр «Миллипор» с диаметром пор 0,45 мкм, средство без добавления Фосфоглива разливают во флаконы, с одновременной «Глубинной стерилизацией» через систему миллипоровых фильтров с диаметром пор 0,22 мкм. Флаконы укупориваются стерильными крышками и помещаются в холодильник для хранения при температуре 4-8°C. Фосфоглив вносят непосредстенно перед использованием в соотношении 0,025-0,05 мас. %.

Использование предлагаемого средства для хранения донорской роговицы в Глазном банке ФГАУ МНТК «Микрохирургия глаза» позволило повысить жизнеспособность трансплантата роговицы путем восстановления клеточных и внутриклеточных мембран и пролонгировать сроки консервации за счет сохранения плотности эндотелиальных клеток, как для сквозной, так и для послойной кератопластики.

Средство для консервации заднего послойного трансплантата донорской роговицы, содержащее среду 199, среду Хэма F-10, хондроитин-сульфат, декстран-40, Гентамицин-сульфат, амфотерицин В и среду Дюльбекко-Игла, отличающееся тем, что оно дополнительно содержит препарат Фосфоглив при следующем соотношении исходных компонентов, мас. %:

Среда 199 25,0
Среда Хэма F-10 25,0
Хондроитин-сульфат А 0,5
Декстран-40 6,0-7,0

Гентамицин-сульфат 0,00014

Амфотерицин В 0,00015
Фосфоглив 0,025-0,05
Среда Дюльбекко-Игла остальное



 

Похожие патенты:
Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии. Средство для консервации донорской роговицы в режиме органотипической консервации содержит на 100 мл: среда 199 - 25,0 мл, среда Хэма F-10 - 25,0 мл, хондроитин-сульфат А – 0,5 г, декстран-40 - 5,0 г, гентамицин-сульфат - 0,00014 г, амфотерицин В - 0,00015 г, среда Дюльбекко-Игла - остальное до 100 мл и препарат Полудан – 1000 ЕД на 100 мл.

Изобретение относится к криоконсервации биологических объектов. Предложенный способ подбора условий для криоконсервации биологических объектов в вязких средах с использованием гидратообразующих газов предусматривает внесение исследуемых криопротекторов в среду для криоконсервации, при этом: а) на первом этапе измеряют вязкость контрольного раствора одного или более криопротекторов, дополнительно содержащего наночастицы при его охлаждении в рабочем диапазоне температур от +20˚С до целевой температуры, выбранной в интервале от -10 до -130°С; б) на втором этапе измеряют вязкость раствора криопротектора или композиции криопротекторов, дополнительно содержащего наночастицы с пониженной концентрацией на 5-45% под давлением гидратообразующего газа в процессе охлаждении раствора; в) если значение вязкости криопротектора или композиции криопротекторов с пониженной концентрацией не достигает вязкости контрольного раствора вплоть до целевой температуры, то сниженную концентрацию криопротектора или композиции криопротекторов необходимо повышать и снова проводить измерение согласно пункту б); г) если же в интервале до целевой температуры значение вязкости криопротектора или композиции криопротекторов с пониженной концентрацией достигает значения параметра вязкости в контрольном растворе, то проводится третий этап.

Изобретение относится к медицине, в частности к хранению биологических образцов. Устройство для криоконсервации в закрытой системе для витрификации биологических образцов содержит удлиненный корпус, усеченный конус, проходящий от первого конца удлиненного корпуса, наконечник для сбора образцов, проходящий от указанного конуса в направлении, противоположном удлиненному корпусу, и удлиненный колпачок для герметичного закрытия биологического образца удлиненной полой камерой.
Изобретение относится к области медицины, а именно к патологической анатомии человека, и может быть использовано для визуализации металлических стентов в коронарных артериях.

Изобретение относится к сельскому хозяйству. Амидное соединение представлено общей формулой (I) в которой каждая из A1, A2 и A3 представляет собой атом азота или CH группу, R1 представляет собой алкильную группу, каждый из R2 и R4 представляет собой галогеналкильную группу, R3 представляет собой алкильную группу, а m равен 0, 1 или 2, или его соль.

Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к способу сохранения клеток млекопитающего в течение длительного периода времени с использованием раствора для трансплантации клеток, содержащего 2,0-6,0% (масс./об.) трегалозы, либо соли указанной трегалозы, и 4,0-7,0% (масс./об.) декстрана, либо соли декстрана.

Группа изобретений относится к биотехнологии, а именно к консервации клеток. Предложены раствор для консервации клеток и способ его получения, способ консервации клеток, способ изготовления фиксированных клеток и способ анализа клеток.

Изобретение относится к области биотехнологии и может быть использовано для получения композиций, содержащих адгезивные плацентарные клетки. Способ включает: (а) контактирование адгезивных плацентарных клеток с раствором, включающим декстран и сывороточный альбумин человека (HSA), для получения раствора, содержащего клетки; (b) фильтрацию раствора, содержащего клетки, через 70 мкм – 100 мкм фильтр; (с) разбавление раствора, содержащего клетки, раствором, содержащим 5,5% декстрана 40, 10% HSA и 5% ДМСО, до содержания не более примерно 10±3х106 клеток/мл; (d) криоконсервацию клеток; (е) оттаивание клеток и (f) разбавление раствора, содержащего клетки, раствором для регенерации клеток, содержащим 5,5% декстрана 40 и 10% HSA.

Изобретение относится к области медицины, а именно к офтальмологии и трансплантологии. Для получения органной культуры трабекулярной сети из кадаверного глаза человека проводят выполнение кругового разреза склеры и сосудистой оболочки, отделение переднего полюса глаза (ПСГ), удаление хрусталика, и разделение ПСГ на части.

Изобретение относится к области медицины, в частности к консервации и хранению биологических объектов. Способ консервации тромбоцитарной массы в газопроницаемом пакете включает: по меньшей мере частичное насыщение тромбоцитарной массы ксеноном под давлением, составляющим по меньшей мере 1,1 бар (0,11 МПа), при этом тромбоцитарная масса имеет температуру, составляющую по меньшей мере около 15°С; выдерживание тромбоцитарной массы в присутствии указанной газовой композиции в течение по меньшей мере 0,001 ч для достижения желаемого насыщения газообразным ксеноном; охлаждение до температуры хранения, которая составляет от 0,01 до 15°С.

Изобретение относится к медицине, а именно к офтальмологии. Средство для консервации донорской роговицы в режиме гипотермической консервации в качестве исходных компонентов содержит среду 199, среду Хэма F-10, хондроитин-сульфат, декстран-40, Гентамицин-сульфат, амфотерицин В, препарат Фосфоглив и среду Дюльбекко-Игла. Предлагаемое средство для консервации донорской роговицы обеспечивает повышение жизнеспособности трансплантата путем восстановления клеточных и внутриклеточных мембран, пролонгирование сроков консервации за счет сохранения плотности эндотелиальных клеток в режиме гипотермической, при температуре 4-8°С, консервации донорской роговицы.

Наверх