Способ получения аминокислот

 

О П И С А Н И Е 353955

ИЗОБРЕТЕН ИЯ

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ

Солта Советских

Социалистических

Республик

Зависимое от явт. cn!Iдет(льет!33 ¹

М. Кл. С 12d 13/06

Заявлено 18.II I.1971 (№ 16)34058/28-13) с присоединением 33:1131(?I №

Комитат по делам яаобретеииЯ и открытиЯ цри Совете Министров

СССР

Гj ()1!Op!1 T(IT

Опубликовано 09.Х.1972. В!оллстсн! № 30

Дата опубликования описания 9.Х1.1972 о ЛК 663.18(088.8) Авторы изобретения

У. Э. Виестур, Е. Jl Рубан, Т, К. Аоолиня, Г. Р. Межиня и M. E. Бекер

Заявитель Институт микробиологии им. А. Кирхенштейна АН Латвийской CCP

СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ АМИНОКИСЛОТ среду следующего сос( (85 0 (47 2о/о сахара) 10

0,1

0,05

0,1

1 л

Изобретение относится к микробиолоп?чсской промышленности.

Известен способ получения аминокислот, например L-триптофана, путем глубинного культивирования продуцснтов при аэря!?ии на питательной среде, содсржящей источники углерода, азота н биологически яктивныс !?сщества, в две стадии с последующим отделени(.i)l биомассы оТ культ)iрально?1 жидкости и выделением в конце второи стадии аминокислоты.

Цель изобретения — получение аминокислот при полном освобождении микробных клеток от культуральной среды.

Это достигается тем, что осуществляют отбор всей культуральной среды многократно после накопления требуемого количества биомассы и замену ее свежей средой, содержащей трансформирусмое вещество.

Для улучшения проницаемости оболочек клеток после отбора культуральной среды биомассу oj)P363TI>l?3310T j)acTBQP?ITcлсм, няп()имс>l) аистовом.

В процессе выращивания воздух подают вначале нри нои>!щенном давлении, преимущественно равном 6 атм, а затем при пониженном, прея м) ществснно равном 0,00 j атм.

Способ получения аминокислот, например

L-трипт0фана, ведут в две стадии.

В первой cTядни производят максимально(.. на! оплсни(6110)lace! l, 3 130 131 0P011 — (11?0c??l?Tc:3

1-тринтофана. В лабораторном колонном фср)1011Tcpc к) Л1>тивнj)0133 íè?1 прод) цент 1 - 1 ри115 тофаня-Ca?)dida I?tijii 295-!.

Готовят питательную тява, г:

Мел асса

Фосфат калия

Д В ) 3 3 М С 111(Н H Ы и

Сульфат мапшя

X.10ристь и кальций

Мочсвиня

Водя до

Мслассу и мочевину стсрилизу?от отдельно в тсчснпс 20 лшн. при 0,75 атл1, а минераль20 ную среду — 30 мин при 1 атм; рИ среды устанавливают 7,5 — 8,2.

CaI)dida utijis 295-1 помещают в колбы круговой качалки для размножения культуры.

Максимальное накопление биомассы проводят

25 в простсрилизова?п?ых ферментерях с питательной средой для осуществления глубшшого культивирования, Количество зясевного материала составляет не менее 8о?о абсолютно сухой биомассы от концентрации 11(рерабаты30 ваемого сахара, 1 !

353955

Предмет изобретения

Составитель М, Ларин»

Техред А, Камышникова

Корректор Л. Царькова

Редактор А. Бер

Заказ 3700/8 Изд. № 1493 Тираж 406 Подписное

ЦНИИПИ Комитета по делам изобретений и открытий при Совете Министров СССР

Москва, К-35, Раушскан наб., 4/5

Типографии, пр. Сапунова, 2

Температура ферментации 28 — 30 С, рн

7,5 — 8,0. Интенсивность аэрации не менее

120 лег 02/л мин (сульфнтный метод).

Культивирование ведут при двух попеременно меняющихся режимах аэрации — прн повышенном давлении воздуха, преимущественно равном 6 ат,11, и прн пониженном давлении до 0,001 атл1. 1(сриод изменений режимов

15 сек.

После раз» ножен и51 необходи »1ОГО коли 1ества биомассы (не менее 18 г/л абсолютно сухого вещества дрожжей) концентрация ес повышается путем фильтрации до 120 — 150 г/л, после чего вводят 5%-ный спиртовой раствор аптраНИЛОВОЙ КИСЛОТЬ! (>1Е1>ЕЗ Ка>Кдвlе 3 ЧаС), 10%-ный раствор сахара (через каждые

24 час) и 5%-ный раствор мочевины (для поддержагп1я оптимального рН).

В течеьн1е процесса трансформации поддерживается К„= 60 — 10 мг/л мин, температура

30 С, рН 7,5 — 8,2. Через 96 — 120 час осу1цествляют отбор культуральной жидкости, содер>кащей 5 — 6 г/л L-триптофана, после чего в ферментер добавляют новую питательную среду, содержащую синтезируемос вещсство.

Биосинтез осуществляется по принципу противотока, контактируя свежую питательную среду со старой биомассой и наоборот. 1 летки Candida utilis 295-t способны трансформировать антраниловую кислоту в течение 3 — 4 циклов возобновления среды.

С целью улучшения проницаемости оболочек клеток после отбора культуральной среды биомассу обрабатыва1от одним из растворителей, например ацетоном, при непреpl>IBIIoil аэрации, а затем подают новую питательную среду, содержащую сннтезнруемое вещество.

Предлагаемый способ позволяет увеличить выход L-триптофана до 25% от его общего выхода.

1. Способ получения аминокислот, например

L-триптофана, путем глубинного культивиро10 B»IIII51 продуциру1ощих их микроорганизмов при аэрации на питательной среде, содержащей источники углерода, азота и биологически активные вещества, в две стадии, на первой нз которых производят максимальное накопле15 ние биомассы, а на второй — синтез аминокислот с последующим отделением биомассы от культуральной жидкости и выделением на второй стадии аминокислот, отличаюшийся тем, что, с целью возможности получения

20 аминокислот при полном освобо>кдении микробных клеток от культуральной среды, в период накопления требуемого количества биомассы на первой стадии осуществляют многократно отбор всей культуральной среды и за25 мену ес свежей средой, содер>кащей трансформирусмое вещество.

2. Способ по п, 1, отличагощийся тем, что, с целью улучшения проницаемости оболочек клеток, после отбора культуральной среды

30 биомассу обрабатывают растворителем, напри»ер ацетоном.

3. Способ по и. 1, отличаюи1ийся тем, что рс>ким аэрации изменяют в процессе культивирования, подавая воздух вначале под повы35 ше1пным давлением, преимущественно равным

6 ат,11, а затем — — при пониженном, преимущественно равном 0,001 ат1и