Способ разделения белков шерсти овец

 

О П И С А-Н-И Е

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Советскик

Социапистическик

Республик

«н702029

К АВТОРСКОМУ СВИДЕТЕЛЬСТВУ (61) Дополнительное к авт. свид-ву (22) Заявлено 100577 (21) 2484191/23-04 (51)М. Кл.

С 07 G 7/00

С 07 G 7/06 с присоединением заявки М—

Государственный комитет

СССР по делам изобретений и открытий (23) Приоритет (5З) УАК 54З,865, (088, 8) Опубликовано 05.12-79. бюллетень М 45

Дата опубликования описания 0812.79 (72) Авторы изобретения

В.В, Гуменюк и И.A. Макар (71) Заявитель (54 ) СПОСОБ РАЗДЕЛЕНИЯ БЕЛКОВ ШЕРСТИ ОВЕЦ

Изобретейие относится к улучшенному способу разделения белков шерсти овец, который может найти применение в лабораторной практике при изучении химической структуры„ химического состава и качества шерсти овец.

Известен способ выделения из шерсти овец тирозин-содержащих бел» ков (1), который состоит в растворении шерсти в смеси 6 M мочевины и

0,2 М тиогликолята натрия при pH ll, алкилировании иодацетатом сульфгид" рильных групп, выделении,богатых тирозином белков в виде Б-карбоксиметилпроиэв одних фрак циониров анным осаждением и диализом. Однако этот метод позволяет выделять иэ шерсти овец только фракцию белков богатых. тирозином, к,тому же обработка шерсти2О тиогликолятом сопровождается длитель ной очисткой белков от мочевины с применением мелкопористых диализных мембран.

Наиболее близким к заявляемому 25 является способ разделения белков щерсти овец (2), включающий: окисление шерсти 1,6%-ной надуксусной кислотой в течение 48 ч при 25о,промывку и высушивание шерсти,последующее растворение окисленной шерсти в едкой щелочи (24 ч при 25o) отделение нерастворившейся части шерсти, представляющей собой бета-кератоэу, фильтрованием, определение содержания в фильтрате общего .белка и альфа-ке,ратозы, и, наконец, расчет содержания гамма-кератоэы как разницы между общим белком и альфа-кератозой.

Таким способом белки, выделенные из шерсти овец, были разделены на три группы: бета-кератозы, представляющие собой кутикулу и остатки клеточных оболочек шерстяного волокна; альфа-кератозы — белки высокого молекулярного веса с низким содержанием серы и гайма-кератоэы — низкомолекулярные белки с высоким содержанием серы. При этом лишь одна группа белков (бета-кератозы) может быть получена в чистом виде.

Однако этот способ позволяет разделить белки шерсти овец лишь на три группы, причем тирозин-содержащие белки присутствуют во всех трех фракцияк в виде примесей и препятствуют определению истинного содержания белка в каждой фракции.

702029

Таблица 1

Результаты разделения шерсти овец асканийской тонкоруной породы и австралийского мерипоса. Соотношение различных

r пп белков %

Шерсть елки, ерасторимые щелочи елки, гатые

Рой

Асканийская тонкоруная

5,2

14,6

56,6

23,6

Австралийск ий, меринос

5,4

55,7

l4 5

24,4

Цель настоящего изобретения — повышение селективности разделения белков шерсти овец.

Поставленная цель достигается описываемым способом разделения белков шерсти овец, заключающимся в том, 5 что осуществляют ОбрабoTKу шерсти

40-кратным объемом надмуравьиной кислоты в течение 25-35 мин при охлаждении с последующей нейтрализацией охлажденного надмуравьиного экстракта

20%-ым раствором едкого натра до

РН 6.0-7.0, последующим диализом против водопроводной воды через оберточный целлофан и удалением выпавших в осадок белков.

Шерсть, после отделения надмуравьинокислого экстракта, окисляют

1,6%-ой надуксусной кислотой при комнатной температуре в течение 48 ч, промывают дистиллированной водой,просушивают, растворяют в едкой щелочи (24 ч, комнатная температура), нерастворившиеся белки отделяют фильтров анием.

Отличительными признаками способа являются: обработка шерсти 40кратным объемом надмуравьиной кислоты в течение 25-35 мин при охлаждении с последующей нейтрализацией охлажденного надмуравьиного экстракта едким натром, диализом против водо- 30 проводной воды через оберточный целлофан и удалением выпавшИх в осадок белк ов .

Использование настоящего способа позволяет разделить белки шерсти 35 овец на 4 фракции, одна из которых представляет собой тирозинсодержащие белки, а остальные три — бета-.кератозы, альфа-кератозы - белки высокого молекулярного веса с низким содер- 40 жанием серы,и гамма-кератозы — низкомолекулярные белки с высоким содержанием серы. Последние три типа белков свободны от тирозин-богатых белков.

Пример, Шерсть заливают ох45 лажденной до О надмуравьиной кислотой (на единицу веса шерсти 40 частей надмуравьиной кислоты) и выдерживают 30 мин при Ос .

Надмуравьинокислый экстракт отделяют фильтрованием через стеклянный фильтр . Остаток шерсти на фильтре промывают небольшим количеством муравьиной кислоты, затем дистиллированной водой до нейтральной реакции.

Промывку муравьиной кислотой и надмуравьинокислый экстракт объединяют, охлаждают до 0 и медленно нейтрализуют Раствором едкого натра.

Нейтральный раствор диализуют через оберточный целлофан против дистиллированной воды в течение 12 ч.

Выпавшие в осадок белки центрифугируют и промывают дистиллированной водой.

Остаток шерсти, после обработки последней надмуравьиной кислотой помещают в колбу, заливают стократным объемом 1,6%-ой надуксусной кислоты, Плотно закрывают и окисление проводят при комнатной температуре в течение 48 ч при непрерывном встряхивании.

Окисленный остаток шерсти тщательно промывают на стеклянном. фильтре дистиллированной водой, затем заливают стократным объемом 0,02 М раствором едкого натра и растворяют при комнатной температуре, непрерывно встряхивая в течение 24 ч.

Нерастворившиеся белки отделяют фильтров анием. К фильтрату добавляют ледяную уксусную кислоту до конечной концентрации 5Ъ и оставляют на 24 ч в холодильнике. Выпавший осадок. (e ед-. ные серЬй белки) отделяют фильтрованием.

В фильтрате, представляющем собой рас тв ор б or атых серой б елк ов, шерс т и, содержание белка определяют по Кьельдалю или спектрофотометрически при

272 нм. Белки сушат лиофилиэацией, Результаты разделения белков шерсти овец асканийской тонкоруной породы и австралийского мериноса, а так же аминокислотный состав этих белков приведены в табл. 1-3.

/02029

Австралийского мериноса

Белки

Богатые тирозином

2,04

2,21

Нерастворимые в щелочи

2,38

2,51

1,82

Бедные серой

Богатые серой

1,81

7,22

7,3Б

Таблица 3

Аминокислотный состав белковых фракций шерсти IIo данным хроматографии на бумаге кислотных гидролизатов (В) Белки, богатые серой елк едн еро

Аминокйслоты

1. Фракции асканийской шерсти

Цистеиновая кислота 10,0 11,8 9,0

29,4

6,7

4,6

5,0

6,1

3,5

4,0

6,8

6,8

6,4 б 2

Аспарагиновая кислота, 34 0

32 7 7

32,2

42,0 глицин, серин

Глутаминоэая кислота, 14,9

17,0,15, 0

10,0 треонин

Алании

Тирозин

Валин, метионин

Фенилаланин

3,9

6,8

3,1

1,5

0,9

4,2

10,4 3,2

2,5

3,4

4,0

1,6

2,8

3,6

313

8,1

Лейцин, изолейцин

3 3

9,2

6,2

2, 30,3

Цистеиновая кислота

Лизин

4.2

7,1

8,8

5,2

4,6

2,5

Гистидин

5,2

7,2

9,4

5,2

Аргинин

Лизин

Гистидин

Аргинин

Таблица 2

Содержание серы в различных группах белков шерсти (Ъ) 8,4

Фракции австралийской шерсти

10,8 12,3,9,0

702029

Продолжение табл.3 спарагиновая кисло-, та," глицин, серин

40,2

36,8

33,6

32,8

Глутаминовая кислота, треонин

4,6

14,7

17,3

14,3

2,5

1 0

4,1

2,7

3,3

2,4

0 9

3,2

0,8

2,9

3,5

10,0

3,2

4,4

1,3

4,2

10/1

9,6

3,4

Формула изобретения

Составитель В. Волкова

РедакТор В. Смирнов ракредр.алферова: Ко екко Т,Скворцова

Заказ 7535/27 Тираж 51 3 Подписное

ЦНИИПИ Государственного кордитета СССР по делам изобретений и открытий.

113035 Москва Ж-35 Раушская наб., 4 5

Филиал ППП Па гент, г. Ужгород, ул. Проектная, 4

Алании

Тирозин

Валин, метионин

Фенилаланин ,Лейцин, иэолейцин

Способ разделения белков шерсти овец, включающий обработку шерсти карбоновыми надкислотами, растворе- ние в щелочи и фракционное осаждение, отличающийс я тем, что, с целью повышения селективности разделений, Й ;ущекствляют обработку шерсти 40-кратным объемом надмуравьи ной кислоты в течение 25-35 мин при охлаждении, с последующей нейтрализа"цией охлажденного наДмуравьиного

:экстракта 203-ик раствором едкого натра до рН 6,0-7,0, последующим .диалиэом против в одопроводной воды через оберточный целлофан и удалени 5 ем выпавших в осадок белков.

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1.Ргали.ег R.D.Â.,QiVespie Х-М-,ЬасЗаеТЯ

"Тчгоэ1пе — Нсп proteins ю Ке.ratihs, Coutp

3р Ионе апа РИчв об 1973 В-44,94Э.

2.DziatoSzwnsti Ь-, Macieje ska М,кМеtoQQ о пасгап а 2?Ocji кбгаъотоiнчсп иеЫч omczw,.сИев а апабч1л иа,1964,9, 447 (прототип) .