Способ получения пептидов или их уксуснокислых солей

 

Сеоэ Советсмих

Социалистических

Республик

К ПАТЕНТУ (61) Дополнительный к патенту— (22) Заявлено 29;1277 (21) 2560052/.23-04

2 (5» М. л.

С 07 С 103/52//

A 61 К 37/02 (23) Приоритет — (32) 30 12. 76

Государственный комитет

СССР по делам изобретений и открытий (33) 8HP (31) R 1-608

Опубликовано 051079. Бюллетень № 37 (53) У@К 547-964 ° 4 °.. 07 (088. 8) Дата опубликования .описания 10.10. 79

Иностранцы

Лайош Кишфалуди, Иштван Шен, Винце Варро, Ласло Варга и Йожеф Нафради (ВНР) (72) Авторы изобретения

Иностранное предприятие Рихтер Гедеон Ведьесети Дьяр РТ (ВНР) (71) Заявитель (54 ) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПЕПТИДОВ ИЛИ ИХ

УКСУСНОКИСЛЫХ СОЛЕЙ

Л-Т -В-A „фен -NH, ри

Н вЂ” Трп-В-Асп-Фен NHY, 1

Изобретение относится к .способу получения новых пептидов, обладающих биологической активностью, которые могут найти применение в медицине.

В синтезе пептидов при конденсации пептидных фрагментов широко используют метод активированных эфиров (1) .

Цель изобретения — получение новых пептидов, обладающих интересными фармакологическими свойствами.

Поставленная цель достигается способом получения пептйдов общей формулы где. A — Н-О-Гли, ВОС-О-Гли, BOC D-O-Ала, ВОС-L-О Ала, ВОС-1Ъ-О-Ала;

 — метионил, лейцил, норлейцил, норвалил, 2-аминодеканоил;

Y — водород или О-Гли-ОН, или их уксуснокислых солей, заключающимся в том, что тетрапептиды общей форму ты где В и Y имвыт указанные выше значе2 ния, подвергают взаимодействию с соединениями общей формулы

5 где A — - как указано выше;

x — пентафтор- или пентахлорфеноксигруппа, с последующим выделением целевого продукта в свободном виде или в виде уксуснокислой соли.

Исходные тетрапептиды получают известным образом путем конденсации фрагментов, путем постепенного удлинения цепи с помощью способов, использующих азидЫ, смешанйые ангидриды, дициклогексилкарбодиимид .(ЩГКД) и сложные активные эфиры, или с помощью прочих известных способов активации.

Не участвующие в реакции функциональные группы в случае необходимости защищают, в особенности группы, удаляемые путем гидролиза, ацидолиэа или каталитического гидрирования.

Карбоксильную группу можно, наПример, защитить путем зтерификаций с бенэиловым спиртом, трет-бутанолом или и-хлорбензиловым спиртом. Для защиты аминоокси- и аминогрупп могут применяться следующие группы формил, то80 эил, тритил (трифенилметил), трифтор691082

4 (8:2), (312) ацетил, о-,нитросульфенил, фталил, ределения температуры плавления по

O-хлоркарбобензокси,предпочтительно Tottoli (Buchi) . Ирн ТСХ используют карбобензокси и трет-.бутилоксикарбо- пластины из силикагеля и злюируют нил. Атом азота в индольном .скелете смесью растворителей . триптофана защищают при необходимос« . 51-хлороформ-метанол (95: 5), ти формильной группой. g N2-хлороформ-метанол (9: 1), Благодаря соответствующей комбина- N3-хлороформ=н-гексанции защитных групп Можно достичь ce-,—.Óêñóñíàÿ кислота (8: 1: 1), лективнаго или одновременного их уда- N4-этилацетат- (пиридинлейия с использованием известных Me- . . -уксусная кислста-вода, тодов, например гидролиэа, ацидоли за,:Щ 20: 6: 1) . (9.: 1) ° каталитйческого гидрировани я. .:: .: И5-этилацетат- (пиридинЧаще всего для введения защищенной .. -уксусная кислота-вода, (аминоокси)-ацильной группы на амино-, . 20:6:1) кбнце используют метод пентагалоидфе-, . ..N6-этилацетат"(пиридинниловых эфиров активный сложный. эфир 15 -уксусная кислота-вода, вводят во взаимодействие с- тетрапеп- - 20:6- U.. .: :. . . (7:3), тйдамидом H òðn-В-Ac@-NH-У, им«акающим N7-этилацетат-(пиридинконцевую карбоксильную группу.-:::.. . : -Уксусная. кислота-вода, Для получения исходных тетрапеп- .. . 20:6:1) тидов, "в-которых Y " - вь (ород,"исходят, : ; N8-этилацетат-.(пиридин"из соединения .общей формулы Е. -. Фен-оН -уксусная кислота-вода, (Š— защитная группа), из которого " . 20:6:1) " . . (1- 1) получают известным образом соЕдинЕние . N9-этилацетат-(йиридинобщей формулы Е -Фен-ЫН, :и после уда- :. "Уксусная кислота-вода, ления защитной группы:цосгепенно с по- 20«6:1).: : - . (2:3)или мощью защищенных И-оксисукцинимидных 25 .. М1О-этилацетат-(пиридин(О-сук) и пентагалойдфениловцх эфиров . --Уксусная кйслота-вода,. амйиокислот достраивают:до тетрапептид- 20.:6. -1) ;:::: .. " .(85:5). аМида H-Трп-В-Асп-Фен-:ЯН .- . : Зля проявления беРут раствор нин-.

Для получения исходных тетрапЕтид- гиДрнна.Пластины после нанесения на них амидов, в которых Y — О+СН -СООН, ис- 30 вещества. высушивают 5 мин при 105 «:, ходят из Н-Фен-О-Гли-ОН, получаемого ... помещают в атмосферу газообразного йутем ацилирования (амийоокси)-уксус- . хлора и после аэрирования обрабатывают ной кислоты с йомощью смешанного ан- смесью о-толуидин-KJ. гкдрида или сложного эфира оощей фор-. : . Для колоночной хроматографии примулы е — Фен-ОЯ, и из полученного про 3$ меняют силикагель с (размер частиц дукта удаляют защитную группу о«эработ- 62-20 ммк) . кой бромйстым водородом в уксусйой кислоте..: .. :: . . Пример .1. 1«- (БенэилоксикарI исходных вОО-ееп-ин и нОс- Фен- бонил) -1-.феиипаланинамид, -o-Гли--ОЙ ВОс — защитную группу уда- 40 к раствору 12,0 г (40 ммоль) е— ляют мягкой кислотной обработкой про- -Фен-ОН в 80 ил безводного тетрагиддукта.: . " . Рофурана (ТГФ) добавляют 5,60 мя

Защитную (-карбоксильную группу : (40 смоль) триэтиламюна,охлаждают аспарагиновой кислоты в дипептиде, до -10 С и при этой температуре дотрипептиде или тетрапептиде удаляют бавляют 3,80"мя (40 ммоль) этилового селективно или вместе с защищающей .эфира хлоругольной кислотй перемеаминогруппу группой путем"ацидолиза, . щйвают 10 мин при -10 C и при -10 С в случае, когда х-ОЯ, путем катали- . в теченйе 1 ч пропускают газообразтического гидрогенолиэа, ., ный аммиак. Bh «."ледукщий день смесь при использовании метода пентагало- упаривают в вакууме досуха и кристалидфейиловых эфиров обычно применяют Лический остаток растирают с 40 мл пентахлорФеноп (НО-ПХф) и пентаФтор-, водя при 40-50 С..Сырой продукт .

:«ренол (но-НФФ) . -: - (8,84 г) пере«крйсталлизовывают из целевые продукты очищают nyTeM „, 7-KpaTHoro количества этанола. полукристаллизации осаждения, колоночной: чают 6, 55 r 55%) Е-Ф н-NH>, т. пл.. хроматрграйии на силикагеле или ионооб- -1. 165-.166 С, В 0,75; менной хроматогра«рии с помощью карбь- L -Фенилаланин-амид-гидробромид ксиметилцеллюлозы.. К раСтвору 6,55 r (22 ммоль) ЕПатентуемые соединенйя получают в -Фен-NH< в 13 мл уксусной кислоты довиде свободных кислот или солей. бавляют 30 мл 5 н.раствора бромистого

Соли с органическими или неоргани. 9) водорода в уксусной кислоте, переме ческимй кислотамй известными метода- шивают 5 мин, оставляют на 1 ч, разми или при очистке могут быть превра- бавляют безводным эфиром н фильтруют. щены во внутренние соли. . Сырой нродукт растворяют в 240 мл температуру плавления :соединений этанола, осветляют и осаждают 740 мл бпределяют с помощью Прибора для оп- Я эфира. ПолуЧают 4,90 r (91В) белого, 691082 кристаллического, хроматографически однородного Н-Фен-NH HBr, т. пл. 249250 С, Н 0,50, В гйдробромида 0,35.

N-(Бейзилоксикарбонил)-L-аспарагил— p (трет-бутиловый эфир)-Б-фенилаланин- амид 5

К суспензии 9,45 г (38,5 ммоль)

H-Фен-NH HBr в 100 мл безводного

ТГФ добавляют 5,40 мл (38,5 ммоль) триэтиламина, прибавляют l б, 2 г (38, 5 ммоль) Z-Асп- (O-трет-бутил) -О-Сук. Через сутки смесь упаривают..

Остаток. растворяют в 500 ил этилацетата и трижды встряхивают с 10%-ным раствором лимонной кислоты и трижды с 5Ъ-ным раствором бикарбоната натрия. Затем раствор осветляют при нагревании с активированным углем и су- шат над сульфатом натрия.

Фильтруют, концентрируют в вакууме, остаток растворяют в 200 мп этилацетата и после кристаллизации полу- чают 15,17 г (84%) хроматографйчески однородного 2-Асп-(О-трет-бутил)-Фен-NH» т. пл. 160161 С, R 070 °

L-Аспарагил-В-(трет-бутиловый сложный .эфир)-Х- фенилаланин-амид 25

15,17 г (32,3 ммоль) Е-Асп-(О-трет-бутил).-Фен-НН растворяют.в 1,0 л метанола и в присутствии 2,0 г палладия на активированном угле восстанавливают при перемешивании, пРопуская 30 водород. Спустя 2 ч фильтруют, фильтрат упаривают в вакууме. Твердый .остаток растирают с диизопропиловым эфиром, оставляют на ночь .на холоду и фильтруют. Получают 10, 40 г 35 (95,8%) Н-Асп-(О-трет-бутил).-Фен-ИНд, т. пл. при 121,0-.121,5; Rf 0,35

N-(трет-бутилоксикарбонил)-Ь-метионил-L-аспарагил- р †(трет-бутиловый сложный эфир)-1 -фенилаланин-амид-. . 40

10,4 г (31 ммоль). H-Асп-(O-трет-бутил)-Фен-NH и 11,1 r (32 ммоль)

BOC-Мет-О-Сук растворяют в 100 мп хлороформа, на следующий день трижды промывают водой при встряхивании. Органическую фазу отделяют, высушивают и упаривают в вакууме. Гелеобразный остаток растирают с эфиром, оставляют на холоду и фильтруют..

Получают 14, 5 г (82, 7%) сырого про; дукта, т. пл. 148-149 С, который раст воряют в 40 мп метанола, осветляют активиров@нным углем, осаждают 40 мл эфира и получают 12,80 г (73%) ВОС-Мет-Асп-(О-трет-бутил)-Фен-ИН т. пл. l51-152 С; й+ 0,65. 55

L-Метионил-L-àñïàpàãèë-Х-фенилаланин-амид-гидрохлорид.

Раствор 12,50 r (22,1 ммоль) ВОС-Мет-Асц-(О-трет-бутил)-Фен-NH в

25 мл уксусной кислоты охлаждают и Q) смешивают с 30 мп, 7,4 н.солянокисло- . го этилацетата. Через 5 мин смесь мутнеет и выделяется масло.

Через 10 мин после выделения мас.ла разбавляют эфиром и фильтруют.

Осадок (10,24 г) раствоРяют в 40 мп метанола, добавляют 200 мп этилацетата, гелеобразный продукт оставляют на холоду на ночь, отфильтровывают„ и. получают 9,0 г (91%) Н-Иет-.Acg-фен-NH g HCI, т. пл. 187-189 С; Н О,:27 °

N-(трет-Бутилоксикарбонил)-L-триатофил-L-метионил-L- àñïарагил=L-фенИЛ-. алании-амид.

К суспензии 9,0 r(20,, 1 ммоль)

H-Жет-Асп †Ф-ИН HCI и 8,42 г (21 ммоль) ВиС-Трп-О-Сук в 150 мл диметилформамида (ДМФА) добавляют

2,.83 мл (20,1 ммоль) триэтиламина, перемешивают в. течение ночи и выпи- . вают в смесь из 1,0 л ледяной воды и 3,75 мл уксусной кислоты. Суспензию оставляют стоять до полного таяния льда и фильтруют. Гелеобразный осадок тщательно промывают водой, затем эфиром.и получают 13, 3 r (95%) сырого продукта, т. пл.- 203-204 С, который дважды перекристаллизовывают из 30-кратного количества 80%-ного водного этанола при осветлении. Получают 9,67 г (69%) BUC-Трп-Иет-Асп-Фен — ИН, т. пл. 212-214 С (разл.)

В 0,45.

L-Триптофил-L-метионил-L-аспарагил-L-Фенилаланинамид-моногидрат

9,23 г (13,2 ыиоль) ВОС-Трп-Мет—

-Асп-Фен-НН при 0 С и перемешивании вносят в,смесь 32 мл трифторуксусной кислоты, 8 мл воды и 4 мп аййэола, в течение 2 ч пропускают азот, разбавляют 270 мл эфира, фильтруют, осадок промывают эфиром и высушивают s эксикатбре, растворяют в

60 мл метанола и осаждают трифторацетат 240 мл эфира. Трифторацетат растворяют в смеси 340 мл воды и

29 мп 1 н.едкого .натра, добавляют

13,2 мл уксусной кислоты. Осадок отфильтровывают и промывают.

Получают б, 70 г (82,4%) Н-Трп--Иет-

-Асп-Фен-ИН Н О,т. пл; 235-238 Cj.

R 0,35.

Вычислено, В: С 56,6; Н 6,2;

N 13,7

Cz>.H> N+G

N 13,6

Пентахлорфениловый эфир трет-бутйлоксикарбониламиноокснуксусной кислоты

Раствор 8,0 г (41,8 ммоль) ВОС-О-Гли-vH и 11,1 г (42,0 ммоль)

НО-ЛХФ в 160 мл безводного диоксана охлаждают до 5 С и смешивают с

8,6 r (42.,0 ммоль) ДЦГКД, оставляют при комнатной. температуре- на ночь, дйциклогексилмочевину отфильтровывают, фильтрат упаривают в вакууме и остаток перекристаллизовывают иэ смеси диоксанэтанол. Получают 19,7 г (74,3%) ВОС-О-Гли-ОЛАФ, т. пл. 167

168 Су Нз 0,7.

691082

8 Вычислено, %: С 35,52; Н 2,75 Вычислено, Ъ: С 37,07; Н 3,11; N 3,18у СХ 40,33, С.Е 39,08, С1з > СХ ИО (439,510) . C«e«CI ИОу

Наидено, %: С 36,37; Н 2,90; . найдено, Ъ: С 37,22; Н 3,07;

N 3,31 CI 40,12,. : . . CI 39,27. .(трет-Бутилоксикарбониламиноокси) 2-(трет-Бутилоксикарбониламиноок5

-ацетил" Ь-триптофил-Ь"мети онил-L-@g» си ) -L-пропи онил- L- три пт офил- L-мети:парагил-L-фенилаланйн«аьщд.:..: " онил-L-аспарагил-?-фенилаланин-амид.

1, 79 г (3, 0 ммоль) Н-Трп-.Мет-Асп- Смесь, содержащую О, 70 г

"Фен-ин H+o и 1,18 г (3,3 ммоля) (1,22 ммоль) rf-Tpn-Яет-Асп-Фен-ин х

ВОС-О-Гли-О-ПХФ в. 30 мл ДМФА выдер- щ х Н О и 0,59 r (1 30 ммоль) BOC-.L. живают 4 ч, упаривают в вакууме, ге- . сО-Ала-ОПХФ в 50 мл ДМФА и 0,35 мл леобразный остаток растирают- с этил- .(2„5 ммоль) триэтиламина оставляют цетатом. 2,11 r (91%) продукта, 1 . на ночь и затем упаривают в вакууме. т-,пл. 178-184 С, растворяют в 20 мл, Гелеобразный остаток смешивают с этил.метанола, осветлйвт, осаждают водой 1 ацетатом, отфильтровывают осадок и .получают 1,50 г (64,8%) кристалли- (0,69 г), смешивают с 15 мл этилацеЧЕСКОГО белого ВОС-0-Гли-Трп-Мет-. Асп- тата, нагревают до кипения и фильтру".Фен-NHg т. пл. 193-194 C; B". 0,40) ют. осадок {0,5 r) растворяют в не(с4р -16,2 (с 1,О, дмФА).. :. . . :значительном колйчестве смеси раствоВычислено, Ъ- С"56 ;1у "М 6 1; рителей Р 6, пропускают через колон8 4,16. -; . ну, заполненную 40 г силикагеля и

С ьН4,, N O« S (769,85).:. элюйруют смесью Растворителей М 5. найдено, Ъ: С 56,4; Н 6,3; Из чистйх фракций получают 0,30 г

S 4, 07." : — - " " хроматографически однородного BOC-L-"

П р и и е р 2, : †: " ", =.О-Ала-Трп-Мет -Асп-Фен-NH>, т ° пл. (Аминоокси)«ацетил-Ь-.триптофил-L- 25 199 С ; В 0,15; В 0,3.

-метионил-L-аспарагил-Ь-фенилаланин- Вычислено, %: С 56,69; Н 6,30;, -.амид.;:: .:::-:-:::... -;: .: N 12,21.

1,0 г (1,3 ммоль) ВОС-О-- Гли=Трп- СЭ7 84> N>O

-Мет-Асп--Фен NHq при перемешивании Найдено, %: С 56,50; H 6,29; вносят" в смесь 4. мл трифторуксусйой 30 . . N 12,34. ки сл оты, 1 мл воды и 0,5 мл анизола, Пример 4. пропускают азот в течение 2 ч, .Раз- N- (Бензилоксикарбонил)-1-лейцилбавляют 40 мл" эфира, осадок (1,02 г -I-аспарагил-ф-{трет-бутиловый сложтрифторацетата) растворяют в смеси ный эфир)-? -фенилаланинамид.

34 мл воды и 2,9 мл 1 н.едкого натра, 35 5,0 г (14,9 ммоль) Н-Асп-(О-третсвободный амид осажцают, добавляя -бутил)-Фен-NH» смешивают с 5,5 r

1,.32 мй" уксусной, кислоты. Осадок от- (15,2 ммоль) Е-Лей-О"с ук в 50 мл хлофильтровывают, тщательно промывают . Роформа. Раствор постепенно превраша- " водой и высушивают в эксикаторе. По- . ется в гель. Гель разбавляют хлорофорлучают 0,6 г (69В) Н-О-Гли-Тьйп-Мет- g0 мом и перемешивают в течение ночи.

-Асп-Фен- ИН, т. пл. 183-184 С УпариваЮт в вакууме, остаток растиран 0.5й (с )> -31,6 (с = 1, О," ДИФА). ют с водой и отфильтровывают. сырой

Вычислено, Ъз C 55,59; Í 5,87; продукт (8,6 г, т. пл. 170 C) ïåðåЯ 14,60> S 4,79 кристаллйзовыйают из .45 мл этанола, Ñ -„Í oN O S (669,763). ПолУчают 7,26 г (83,5%) Z-Лей-Аспнайдено, Ъ: C 55,41; Н 5,93; 45 ;(-о- -трет-бутил)-Фен-йй, т.пл. 180N 14,41 Б 4,71. 181 С, Ну 0,61 (gjy = -36,8 (с = 1,0, пентахлорфениловый эфир. 2-(трет этанол).

-бутилоксикарбоииламиноокси)-(-про- . ВыЧйслено, Ъ: С 63,90; Н 7,27; йионовой кислоты..-: .;: .: . И 9, 62

С 04 N407 (582, 68)

РаствЬр 4,10 r (20 ммоль) BOC- 0-О- .. Найдено, % . С 63,70; Н 7,41;

-Ала-ОН и 5,32 г (20 ммоль) НО-Пхф в : N 9,73. .20 мл ЦМФА охлаждают до 0 С, смешива- ХЛейцил-Ь-аспарагил-р-(трет-бутиют с 4,12 r (20 ммоль) ДЦГКД, переме- . I)os слофный эФир) "L-фенилаланиншивают "30 мин при 0 С и вмцерживают 55 в течейке ночи. при комнатной теьжера« . 6,76 г (11,6. ммоль) z-лей Acn-(отуре. дицйклогексилмочевину отфи тьт» -трет-бутил)-Фен-ИНд растворяют в ровывают, фильтрат упаривают в ваку- ЗОО мл Метанола И восстанавливают воуме, остаток обрабатывают безводным докладом при"перемешивании в присутст;эфиром, отфильтровывают осадок @) вии 1,0 г палладия на активированном (6,25 г), перекристаллизовывают ь угле. СпустИ 90 мин катализатор отэтанола и получают 5,80 г (63%) Филвтровывают, фильтрат упаривают, Вср-?Мз-Ала-бПХФ,, . пл. 122-124 С геНеобразнйй остаток выделяют с помой 0,85; fo{)< " «68,87 (с 1,0, ди- Жью н-гексана и получают 5,2 г (99,5Ъ) оксан). Н-Лей-Асп- (О-трет-бутил) -Фен-.щ»

69 1082 его з смеси растворителей М 5, вносят в колонну, заполненную 80 г силикагеля, и элюируют смесью растворителей 9 10. Из чистых фракций получают О, 58 г ВОС-О-Гли-Трп-Лей-Асп-Фен"NH «т. пл. 187 С (разл. ); Rg 0,7 )

R < 0,15; (с()1, = -24,9 (с = 0 5, ДМФА) .

Вычислено, %: С 59,11; Н 6,57;

N 13,04.

C3q Н49 Ф3 О,о (75 1, 85)

Найдено, Ъ: С 59,28; H 6,40;

N 12, 75.

Пример 5.

Ь-Лейцил-L-аспарагил-L-фенилаланин-амид-гидрохлорид.

6,91 г (15,4 ммоль) Н-Лей-Асп-(О-трет-бутил)-Фен-МН вносят в 50 мл солянокислой уксусной кислоты. Спустя

45 мин разбавляют безводным эфиром, оставляют стоять на холоду непродолжительное время И фильтруют. Осадок тщательно промывают безводным эфиром.

Получают 6,20 г (94%) Н-Лей-Асп-Фен-NHg . HCI В1 О, 2, который используют без дальнейшей очистки.

N-(трет-Бутилоксикарбонил)-Ь-триптофил — L-лейцил-Ь-аспарагил-L-фенилалан и н- амид.

6,2 г (14,5 ммоль) Я-Лей-Асп-Фен-NH HCI и 6,42 г (16,0 ммоль) ВОС-Трп-О-Сук в 70 мл ДИФА в присутствии

2,24 мл (16,0 ммоль) триэтиламина выдерживают 4 ч, выпаривают в вакууме, остаток растирают с водой и отфильтровывают. 10,6 г сырого продукта дважды кипятят со смесью метанол-этилацета т и отфильтровывают . Получают

7, 1 г (72, 1% ) ВОС-Трп-Лей — Асп-Фен-ИН,т. пл. 218-221 С (разл. ); Ry 0,4, и используют без дальнейшей очистки.

Ь-Триптофил-Ь-лейцил-Ь-аспарагил-L-фенилаланин-амид.

7,1 г (10,5 ммоль) BOC-Трп-Лей-Асп @ed-NH вносят в 60 мл солянокислого диоксана. Спустя 3 мин смесь становится прозрачной. Спустя еще

10 мин раствор разбавляют безводным эфиром, выделяющийся маслянистый продукт отверждают и отфильтровывают.

Полученный. гидрохлорид (6,96 г) растворяют при нагревании в 150 мл воды.

При охлаждении добавляют твердый би-карбонат натрия до рН 7, фильтруют и осадок промывают тщательно водой. Получают 5,05 г (83,1%) хроматографически однородного Н-Трп-Лей-Асп-Фен-NH« T. . 228-230 C (pa3a).

Пентахлорфениловый эфир 2-(трет-бутилоксикарбониламиноокси)-D-пропиЬновой кислоты.

К охлажденному до 0 С раствору

4,10 г (20 ммоль) BOC-D-О-Ала-ОН и

5, 32 г (20 ммоль) Но-Пхф в 20 мл ДМФА добавляют 4, 12 г (20 ммоль) ДЦГКД, перемешивают 30 мин при 0 С и оставляют на ночь при комнатной температуре. ДицикЛогексилмочевину отфильтроРаствор 1,0 r (1,82 ммоль) Н-Трп-Лей-Асп-Фен-NH и 0,88 г (2,0 ммоль)

ВоС-О-Гли-ОПХФ в 10 мл дМФА смешивают с 0,27 мл (1,82 ммоль) триэтиламина, оставляют на ночь, упаривают в вакууме, остаток растирают с эфиром, суспензию оставляют на холоду и фильт-Я) руют. Получают 1,42 r сырого продукта, т. пл. 102-120 С (разл.), к которому добавляют 10-кратное количество этилацетата, кипятят и фильтруют горячим.

Получают 1,06 г вещества, растворяют 65

R< 0,1, который используют без дальнейшей очистки.

N-(трет-бутилоксикарбонил)-Ь-триптофил-L-лейцил-L-аспарагил-Р-(трет-бутиловый сложный эфир)-L-фенилаланин-амид. 5

Раствор 5,2 r (11,5 ммоль) И-Лей-Асгг-(O-трет-бутил)-Фен-NH< и 4,82 г (12,0 ммоль) ВОС-Трп-О ук в 100 мл

ДИФА оставляют на ночь, упаривают в вакууме, остаток растирают с водой, фильтруют, осадок (8,95 г) перекристаллизовывают из 70 мл 70%-ного этанола при осветлении и получают 7,19 r (84,5%) ВОС-Трп-Лей-Асп-(О-трет-бу-. тил)-Фен †N. т. пл. 176-177 С; R

0,65. После перекристаллизации из

10-кратного объема 80%-ного этанола т. пл. 180-182 С; (с(.)р = -35,3 (с=

=1,0, ДИФА).

Вычислено, Ъ: С 63,74: Н 7,41 20

И 11,44, Найдено, Ъ: С 63,62; Н 7,62;

N 11,17.

L-.T èïTîôèë-L-лейцил-L-аспарагил— L-фенилаланинамид. б, 59 г (9,0 ммоль) BOC — Трп — Лей25

-Асп- (О-трет-бутил) -Фен-NH вносят в смесь 60 мл трифторуксусной кислоты и б мл анизола, перемешивают 2 ч при комнатной температуре и разбавляют безводным эфиром. Полученный после фильтрования мазеподобный остаток вы- сушивают в эксикаторе над едким натром и пятиокисью фосфора, растирают с водой и выделяют 5,61 г трифторацетата, т. пл. 178-186 С (разл. ), который растворяют при нагревании в воде, содержащей немного этанола. При охлаждении поддерживают рН 7 с помощью

1 н.едкого натра. Осадок отфильтровывают, промывают водой и этанолом, 40

4, 0 г сырого продукта растворяют в

30 мл ДЫФА и осаждают 60 мл метанола.

Получают 2,28 г хроматографически однородного н-Трп-Лей-Асп-Фен-МНд, т. пл. 227-.230 С (разл.); В 0,55.

Вычислено, Ъ: С 62,26; Н 6,62;

N 14,52, Сэо Нзв1 ьОь (578, 67) .

Найдено, Ъ: С 62,02; Н 6,80;

N 14,38. 50

2-(трет-Бутилоксикарбониламиноокси)-ацетил-L-триптофил-L-лейцил-L-аспарагил-Ь-фенилаланин-амид.

691082

12 вывают, Фильтрат упаривают в вакууме, кристаллический остаток обрабатывают безводным эфиром, фильтруют, осадок (6,25 г) перекристаллизовывают из этанола. Получают 5,80 r (64%) BOCD-O-Ала..-0ПХФ, т. пл. 123-124 С; (И-)е = — +68,95О (с = 1,0, диоксан). R q 0,85 (А) р = +68,95 (с = 1,0, диоксан).

Вычислено, %: С 37,10; Н 3,10;

СХ 39,10.

С1 Н14 С15 НО5 (45 3 r 5 37),:

Найдено, %: С 37, 16; Н 3, 29;

CI 39,01.

2-D-(трет-Бутилоксикарбониламиноокси)-пропионил-Ь-лейцил-L-аспарагил"У -Фенилалани н-амид.

1, 74 г (3, О ммоль ) Н-Трп-Лей-Асн-Фен-NH вводят во взаимодействие с

1,50 г (3,3 ммоль) ВОС-0-О-Ала-ОПХФ в 20 мл ДМФА в присутствии 0,42 мл (3,0 ммоль) триэтиламина - :На-следующий день смесь упаривают в вакууме, остаток растирают с эфиром. Продукт растворяют в незначительном количестве смеси растворителей 9 5 и вносят колонйу, заполненную 100 г силикаеля. Элюируют смесью растворителей

М 5, выделенный из чистых фракций кристаллйческий остаток перекристаллизовывают из 50 мл 80%--ного зтанола.

Получают 1,07 r (46,7%) ВОС-D-O Ала-Трп-.Лей-Асп-Фен-ИНq, т, разл. 210 С; 0,15.„ ) 0,40; (,), = -6,0 {с

=1,0, ДМФА).

Вычислено, %: С 59,59; Н 6,71;

N 12,80, С е Нл NqOao (765 Найдено, %г С 59,37; Н б, 90у.

И 13,10.

Пример б.

2-N- (трет-Бутилоксикарбонил) - (L-Фенйлаланиламиноокси)-уксусная кислота.

6,97 r .(40,5 ммоль) гидробромида аминоуксусной:кислоты вводят во вза-. имодействие с 14,68 .г (40,5 ммоль)

ВОС-Фен-О-,Сук в 100 мл ДМФА в прйсутствии 6,3 мл (45 ммоль) триэтиламина.

На следующий день смесь выпаривают в вакууме, остающееся масло растворяют в 100 мл хлороформа и трижды встряхивают е 1 н.соляной кислотой. Oprаническую фазу высушивают и выпаривают в вакууме. Маслянистый остаток отверждают диизолропиловым эфиром,растворяют в этилацетате и осаждают дииэопропиловым эфиром. Получают 9,60 г (74%) ВОС-Фен-О-Гли-ОН, т. пл. 136137 С; В 0,4; (д.) = 17,8 (с " 1 0 этанол).

Вычислено, %: С 56,80) Н 6,55;

N 8,28.

С 1 Н N О6 (338, 36) °

Найдено, %: С 56,59; Н 6,41

N 8,42.

Смешанный N-(трет-бутиловый)-с{; †(N-оксисукцинимидный) эфир N-(трет

-бутилоксикарбонил) -L-аспарагиновой кислоты.

11,45 г (39,7 ммоль) маслянистого

ВОС-Асп-(О-трет-бутил)-OH и 4,6 г (40 ммоль) N-оксисукцинимида растворяют в 100 мл безводного диоксана, охлаждают и смешивают с 8,25 г

{40 ммоль) ДЦГКД, перемешивают в течение ночи при комнатной температуре, дициклогексилмочевину отфильтровывают и фильтрат упаривают. К остатку добавляют смесь гексан-диизопропиловый эфир, осадок (13,8 г,т. пл. 98- °

102 С) отфильтровывают, перекристаллиэовывают из 3-кратного количества избпропанола и получают 12,1 r (78,3%) белых крйсталлов Вос Aсп-{О-трет-бутил) -u-Сук, т. пл. 103-105 С; . (с ) =

= -25, 6 (c = 1, О, диоксан) .

Вычислено, %: С 52,84; Н 6,78;>

С 7 Н ьИ Ов (386,39) . г айдено, %: С 52,97; Н 6,00;

N 7,21.

2-(L-Фенилаланиламиноокси)-уксус- .ная кислота-гидрохлорид.

25 к раствору 5,8 г (17,1 ммоль) ВОС.Фен-О-Гли-ОН в 10 мл этилацетата дЬбавляют 60 мп 4 н.солянокислого зтилацетата,. перемешивают 4 ч и растворитель сливают с маслообразного вещест30 ва, которое отверждают свежеперегнанным этилацетатом. Получают 4, 53 r (96,6%) Н--Фен-О-Гли-ОН HCI. Продукт гигроскопичен и хроматографически однороден. т пл 75-80 С ВЕ 0,2.

35 2- (N-трЕт-бутилоксикарбоНил) -L-аспарагил-ф- (трет-бутиловый сложный эфир)-(L-фенилаланиламиноокси)-уксусная кйслота. ".

К раствору 7,0 г (25,5 ммоль) Н40 Фен-O-Гли-Он HCI в 150.Мл ДМФА до. бавляют 7,15 мл (51. ммоль) триэтилаМича, вносят. 9, 30 r (2.4 мйоль) ВОС-Асп- (о-трет-бутил) -О-Сук. После полного растворения смесь оставляют на

45 ночь, затем упаривают в вакууме маслянистый остаток растворяют в хло. роформе," раствор встряхивают трижды с 1 н. соляной кислотой и водой, затем высувжвают и выпаривают в вакууме. Остаток отверждают диизопропило. вам" эфиром. 10,35 г сырого продукта дважды переоааждают из смеси эфир н-гексан. Получают 8,63 г (70,7%)

BUC-Асп-(О-трет-бутил)-Фен-0-Гли-ОН, т ° пл .. 83-85ОС (разл.); R 0,45;

53 (сЦ 0 = "30,6 . (с = 1,36, этанол). хроматограмаа показывает налич} е незначительного количества примесей..

2-(L-Аспарагил L-фенилаланиламиноокси)-уксусная кислота — гидрохлорид. щ 8, 50 г (1 6, 7 ммоль) BOC-Асп- (О-трет-бутил) -Фен-О;-Гли-OH при перемешивании растворяют в 70 мл (350 ммоль) 5 н.солянокислого этил. ацетата. Спустя 5 мин из раствора на65 чинает выделяться кристаллический

13

69108?

14 гидрохлорид. Через 75 мин суспен зию ют ?, 17 г (58, 8%) BOC-Трп-Мет Аспч о фильтруют, осадок промывают этилаце- -Фен-v-Гли-UH, R+ О, 3 () = — 19, 9 татом и получают 6, 22 г (95, 8%) крис- (с = О, 75, ДМФА), Продукт содержит таллического Н-Асп-Фен-О-Гли-ОН - HCI, небольшое количество примесей. т. пл. 160-163 С; Rf9 0,25. о

2- (Ь-Триптофил-L-метионил-L-acna2- (N- (трет-ьутилоксикарбонил) -Ь- 5 рагил-Ь-фенилаланиламиноокси) -уксус-метионил-L-аспарагил-L-фенилаланил- ная кислота. аминоокси)-уксусная кислота. 2,17 г (2,81 ммоль) ВОС-Трп-МетК раствору 6,1 r (15,6 ммоль) .H- -Acn-Фен-О-Гли-ОН при перемешивании

-Асп-Фен-О-Гли-оН . HCI в 50 мл ДМФА вносят в смесь 8 мл трифторуксусной добавляют 6,55 мл (46,8 ммоль) три- to кислоты, 2 мл воды и 1 мл анизола, этиламина, затем 6,38 г (15,6 ммоль) в течение 2 ч пропускают азот, разВоС-Мет-О-Сук. После полного раство- бавляют 60 мл эфира, продукт отфильрения смесь выдерживают в течение но- тровывают и "высушивают в эксикаторе. чи при комнатной температуре, упари- Получают 2,0 г трифторацетата, раст.вают в вакууме и маслянистый остаток 15 воряют их в 8 мл 2 н.едкого натра и отверждают диизрпропиловым эфиром. подкисляют 10%-ной соляной кислотой

Осадок (6,3 r, 69%) растворяют в не- до РН 4. Осадок отфильтровывают и значительном количестве смеси раство- промывают водой. Получают 1,34 г .Рителей Р 7 и вносят в колонну, запол- (71%) Н Трп-Мет-Асп-фен-О-Гли-ОН, ненную 110 г силикагеля. Элюируют-cMe- Rf 0,1. Продукт аморфный. Хроматограмсью растворителей Р 7 со скоростью 0 ма показывает,.что продукт слегка за8-10 мл/ч. Чистые фракции собирают и грязнен. упаривают в вакууме. Полученное мас-. 3 — Бромпропйоновая кислота. лянистое вещество отверждают диизо- К раствору 44,0 г (0,49 ммоль) pJпропиловым эфиром, продукт (4,4 r) . -аланина и 200 r (1,68 моль) бромирастворяют в 15 мл метанола и осажда- 25 да калия в 1,0 л 2,5 н.серной кислоют 10-кратным количеством .безводного ты при комнатной температуре, порцияэфира. получают 3, 26 г (35, 7%) аморф- ми добавляют 42, 4 r (О, 76 моль) ннного, хроматографйчески однородного трита натрия, перемешивают при комBUC-йет-Асп-Фен-О-Гли-ОН, Rg 0,30; .натной температуре в течение 2 ч и (сЧр = -37,2 (с = 1,0, этанол). 30 дважды встряхивают с 200 мл эфира.

Вычислейо, %.,г :С 51,36; Н 6,21 Эфирйый раствор промывают трижды воN 9,58; S 5,48. дой и после высушивания выпаривают в

C>+H>

2- (Ь-Метионил-L-аспарагил-L-фе- (24%) 3-бромпропионовой кислоты, нилаланиламиноокси) -уксусная кислота- т. пл. 59-60 с. гидрохлорид.. -: Дициклогексиламинная соль 3- {третО, 50 r (0,85 ммоль) ВОС-Мет-Асп- - -бутилоксикарбониламиноокси) -пропио-Фен-и-Гли-Оа обрабатывают в течение 40 новой кислоты.

1 ч 5 мл солянокислого .этилацетата, 7, 7 г (О, 30 r-атом) натрия раствоФильтруют, осадок тщательно промыва- Ряют в 450 мл эфира, добавляют 26,6 г, ют этилацетатом и высушивают в эксика- ° (pi 20.ìîëü) N- (трет-бутилоксикарботоре. Получают 0,41 г (91%) H-Мет-Acr йил) -гидроксиламина в 165 w этанола щренОГлиОН . HCI R 0 .(j5 R f p 2 . 4 - и 28 ° 7 г (О, 188 мОль) 3-бромпропионоПродукт аморфный, хроматограмма пока- вой кислоты в 165 мл этанола, перемезывает наличие незначйтельного коли- шиваЮт .при 50-55 С в течение двух чества. примесей. дней., упаривают в вакууме.и остаток

2«N- (трет-Вутилоксикарбонил) - 1 - РаствоРяют в 350 mi воды. Водный ðà-трипфтофил-L-метйонил-z-аспарагил- створ экстрагируют зтилацетатом (3 х (1,фенилалаииламиноокси)«уксусная . . х 100 ил)>подкисляют po pH 3 лимонной

50 л,а . кислотой, BacMeafbT хлоРиДом натриЯ и . экстрагируют этилацетатом (5 х 100 мл) .

K суспензии 3,0 r (4,79 мюль) Обырдиненные этилацетатйые фазы триH-Иет — АсП-Фен-О-Гли-ОН - HCI в 50 мл жды проьйвают водой, высушивают и выДМФА при перемешивании добавляют 55 паривают в вакууме. K маслянистому

14 мл (10 ммоль) триэтиламина и 2,35г остатку (27,25 r) в 100 мл н-гексана (5,0 ммоль) Вос-трп-ОпФФ, выдерживают порциями добавляют 23,3 мл (118 ммоль)

90 мин и упаривают в вакууме. - дициклогексиламина при постоянном охОстаток растворяют в этилацетате, лаждении, оставляют на холоду, осавстряхивают трижды с 1 н.соляной кис- 60 док отфильтровывают, промывают эфилотой, затем с водой. Органическую - ром. 44,93 г подучейного сырого профазу высушивают, осветляют и концент- дукта, т. пл. 128-135 С, Растворяют рируют в вакууме до объема 10 мл. До- в 50 мп метанола, осветляют и осаждабавляют безводный эфир, оставляют ют 200 мл эфира. Получают 25,0 г стоять на холоду и фильтруют. Получа- 65 (34%) соли ВОС-Р-О-Ала-OH - дициклогек15

)6

691082 силамин, т. пл. 148-149 C; R < О, 5 Пример 7.

R - О, 25. Из маточного раствора выде- 2- (2- (трет-Бутилоксикарбониламиноляют еще 9,3 r (12,8%) продукта, окси ) — ацетил- L-три птофил- L-метиони лт. пл. 144-145 С. -L-аспарагил-L-фенилаланиламиноокси)Вычислено, Ъг С 62,14; Н 9,9; -уксусная кислота.

N 7,25.

С о Hy8N (386,52) . К раст вору О, 34 r Н-Трп-Мет-Ас пНайдено, Ъ: С 61,99; Н 10,02; -Фен-0-Гли-ОН в 10 мл ДМФА добавляют

N 7,09. О, 1 4 мл (1 ммоль) триэтиламина и

Пентафторфениловый эфир 3- (трет- О, 28 г (0,.6 ммоль) BÎC-О-Гли-ОПХФ.

-бутилоксикарбониламиноокси) -пропио- )ð Спустя 3 ч упаривают в вакууме и основой кислоты, таток отверждают эфиром. 0,43 r сыро1, 10 г (2,85 ммоль) соли BOC-p-О- го продукта растворяют в небольшом ко-Ала-0н. дициклогексамин обрабатыва- личестве смеси растворителей Р 6 и ют 40 мл эфира и 3 мл 2 н.серной кис- вносят в колонну с 20 r силикагеля, лоты. Эфирную фазу отделяют, встря- <5 элюируя смесью растворителей 9 6 со хивают еще раз с серной кислотой, скоростью 10 мл/ч. Чистые фракции объединенные водные фазы, содержащие объединяют и. упаривают в вакууме. IIoсерную кислоту, экстрагируют эфиром. лучают 0,15 г (31%) BOC-0-Гли †ТрпЭфирные фазы объединяют, высушивают -Мет-Асп-Феи †-Гли-ОН, Rf 0,4. Прои упаоивают в вакууМе: .Пелуча)от дукт аморфный, 0,.34 г маслянистого вещества, кото- Вычислено, %: С 54,08; Н 5,85; оое вместе с 0,31 г (1,8 ммоль) HO- N 11,61 °

ПФФ растворяют в 10 мл безводного ди- C @H<>N О„S (845,98) . оксана. При 5 С к ьаствору добавляют Найдейо, Ъ: C 53,95; Н 5,97;

О, 37 г (1,8 ммэль) ДЦГКД, перемйаива- . N 11,70. ют 90 мин при комнатной температуре, 25 Пример 8. дициклогексилмочевину бтфильтровывают, 2-(2-Р-(трет-Бутилоксикарбониламифильтрат упаривают в вакууме. Остаток ноокси) †:пропиьнил-L-.триптофил-L-метирастворяют в н-гексане, трижды встря-. онил-Ь-аспарагил-L-фенилаланиламинохивают раствор с 5Ъ-ным раствором би- окси)-уксусная кислота.

-карбоната натрия, высушивают и упа- 30 К раствору 0,23 г (0,60 ммоль) ривают в вакууме. Маслянистый оста- BOC- D.-O-Ала-ОПХФ и 0,34 r (0,50 ммоль! ток отверждают н-пентаном. Получают Н-Трп-Мет-Acr(Ôåí-0 — Гли-ОН в 10 мл

0,33 r (55%) BOC-О-Ала-ОПФФ, т. пл. ДМФА добавляют 0,14 мл (1,0 ммоль)

58-59 С; R> 0,65, триэтиламина. Спустя 3 ч упаривают

Вычислено, %: С 45,29; H 3,80; 35 в вакууме, остаток растирают с эфиN 3,77 ром и отфильтровывают. 0,41 г сырого

С Н Р5 НОб (371, 27) . продукта растворяют в небольшом колиНайдено, Ъ: С 45,43; Н 3,65; честве смеси растворителей Ф7,вносят

N 3,90. в колонну, заполненную 40 r силикаге2-(3-(трет-Бутилоксикарбониламино- 4р ля и элюируют смесью растворителей окси)-пропионил-L-триптофил-L-метио- 9 7 со скоростью 10 мл/ч. Чистые нил-L-аспарагил-.L-фенилаланиламино- фракции упаривают,в вакууме, остаток окси)-уксусная кислота. выделяют с помощью безводного эфира.

К раствору 0,32 г (0,.48 ммоль) Получают 0, ll r (25,6%) BOC-D-О-АлаН-Трп-Мет-Асп-Фен-О-Гли-ОН и О, 2 3 r -Tpn-Мет -Асп-фен-Î-Гли-ОН, R f 0 у 25 ° (0,.60 ммоль) ВОС-(3-О-Ала-ОПФФ в 10 мп Продукт аморфный, ДМФА добавляют О 14 мл (lфО ммоль) Вычислено, % С 54,60; Н 5 99; триэтиламина. Спустя 3,5 ч упаривают N 11,43. в вакууме, остаток отверждают эфиром. С,Ни Н,О„S (857,94) .

0,31 г сырого продукта растворяют в Найдено, %г С 54,41; Н 5 87; незначительном количестве смеси раст- N 11,32. ворителей 9 6 и вносят в колонну, за Пример 9. полненную 20 г силикагеля. Элюируют 2- (2-Ь- (трет-Бутилоксикарбониламисмесью растворителей Р 6 со скоростью ноойси)-пропионил-L-триптофил-Ь-мети5 мл/ч. Чистые фракции упаривают в онил-L-аспарагил-L-Фенилаланиламиновакууме. и остаток выделяют с помощью 55 окси)-уксусная кислота. безводного эфира, Получают 0,14 r Из BÎC-L-O-Ала-ОПХФ, как в приме(344) BOC-) -О--Ала-Трп-Мет-Асп-Фен-0- ре 8, получают 0 38 г сырого продукта, -ГЛИ-ОН, Вбу 0,1; R f О, 3. Продукт После хрматографирования вццеляют хроматографически однородный и аморф- 0,13 г однородного ВОС-L-0 Ала-Трпный. о -Мет-Асп-фен-0-Гли-OH, R y 0,25, Вычислено, В: С 54,0 Н 5,99; Вычислено, Ъг С 54 60; Н 5 99;

N ll,45 и 11,43.

C39Н54 N О,э S . (857,94) . С эН61 йт О э 8 (857, 94) .

Найдено, %: С 54, 40; Н 6, 10; Найдено, %: С 54,47; Н 6,04;

N 11 27 ° N 11у41.

17

691082

Пример 10 ° ВОС- Урп-О»Сук в присутствии 0,88 мп

Пентафторфениловый эфир N-трет-.бу- (6,3 ммоль) триэтиламина растворяют тилоксикарбонил-L-норлейцнна. s 40 мл ДМФА, перемешивают в течение

10,0 г (24,3 ммоль) соли ВОС-Нор- ночи и упаривают в вакууме, Маслянислей-ОН дициклогексиламин в смеси- тыЯ остаток отверждают водой, содер"

75 мл эфиРа И 25 мл 2 н.серной кисло 5 жаЦей небольшое количество уксусной ты встряхивают до полного растворения кислоты,:фильтруют при охлаждении и эфирную фазу встряхивают сначала с проммвают осадок водой, затем эФиром.

25 мл 2 .н. серной кислоты, затем с Получают 1,92 г (89,7%) ВОС- Г ПЯор водой,. упаривают в вакууме, маслооб- лей-.Асп-Фен-КН, т. разл. 196 С; разный остаток (5,44 r) и 4,42 r () R j 0,50; (() = -28,8 (c = 1,0, (24 ммоль) НО-ПФФ растворяют в 30 мл ДМФА), Продукт перерабатывают без этнлацетата, охлаждают до 0 С и сме - : дальнейшей очистки. шивают с 4,63 г (22,5 ммоль) ДЦГКД. L- Триптофил-1-норлейщил-L-аспараСуспензию оставляют на l ч на холоду гил-L-фенилаланин-амид-гидрохлорид. н ф ьтруйт Ф ьтрат упаривают в ва- 15 Раствор 1 85 г (2.73 ь) Воскууме, остаток растворяют в 50 мя <рп-Норлей-Асп-Фен NH< в 50 мл 8 н.. н-гексана и экстрагируют 5%-нищ раст- . солянокислого диоксана выдерживают вором бикарбоната натрия (5 х 20 мл), 1 ч и упаривай)т в вакууме,.гелеобраззатем водой (2 х 20 мп). органическую ный остаток после разбавления ацетофазу высушивают и упаривают в Вакууме. нси отфильтровывают и получают

Иаслообразный остаток при охлаждении 2О 1,17 г (69,7%) й-Трп-Корлей Асп-Фен-. застывает. Получают 8, 12 г {91%) ВОС- -КН - НСХ, т. Разя. 235 С; Щ ) ——

НоРлей-ОПФФ, т. пл. 55-57 С; Н 0.,80; = "28,4 (с = 1,0, ДИФА) .

0,85; (d) = -26,8 (с = 1,0, дй- 2-D- (трет-Бутнлоксикарбониламинооксан) . - окси) -пропионил-L- триптофил-L-норлейВычислено, %: С 51, 39; Н 5,07; . 25 цил-Ь-acпаpагил-L-фенилаланин-амид.

F 23,91. 1,0 г (1,62 ввйэль) Н-Трп-НорлейС17 НдоРзй04 (397,35) . : -Асп-Фен-ИН ° HCI в 10 мл ДИФА в при-

Найдено, %: С 51,51; Н 4,68; . сутствии 0,68 мя (4,86 ммоль) триf 24;06.. этиламина и 0,74 г (1,62 ммоль) BOCN-,трет-Бутилоксикарбонил-L-Норлей- 30 -0-О-Ала-ОПХФ оставляют на ночь, упацил-1-аспарагил- - (трет-бутылочный Ривают в вакууме,. гелеобразиый остасложный эфир)-Кфенилаланин-амид.. ток после разбавления эфиром отфильт. К раствору 1,68 г (5,0 ммоль):: Ровывают и промывают эфиром, затем

Н- Асп-(О-трет--бутил)-Фен-ИН и 2,2 г.. водой. 1,36 г сырого продукта хрома(5,5 ыаоль) ВОС-Норлей-ОПФФ в 10 мл 35 тографируют на силикагеле, элюируя

ДЬЙА добавляют 0,70 мл (5,0 ммоль). смесью растворителей Р 10. Чистые тРиэтиламина, спустя 3 ч упаривают в фракции упаривают в вакууме. твердый вакууме и твердый остаток отфильтро- ::остаток после разбавления 50%-ным водвывают при охлаждении после разбавле-. : ным зтаиолом отфильтровывают. Полуния эфиром. Получают 2,23 r (81,8%), чают 0,25 г ВОС-Э-О-Ала-Трп-НорлейВОС-Норлей-Асп-(О-трет-бутил)-Фей-.:. - асП-Феи-%4, т. пл. 217-218 С (разл) 1

ЙН т. л. 164-165 С. После пере- R j 0 30; R " 0,1.5; ()ъ = +4,3 кристаллизацией из этилацетата т. пл.; (C "- 1°, 0 ° ДмФА) °

165-167 C; Rg О, 70; (Ц = -,2, 2 Вычислено, %: С 59, 59; Н 6, 71; (с 1,0, ДЙФА) . - ...: . И 12,80.

Вычислено, %- с 61,29; и 8,08; сззн н О„о (765

N 10,24,, Найдейо, %: С 59,40; Н 6,55;

С а 6<4N+O (548,66) . . - N 12,83.

Найдено„%: С 6134; Н 770;, . П р и и е р 11.

Й 10,40., : - Пентафторфениловый эфйр Ы-трет.ЕЯОРЛЕйциЛ-L-аСПараГИП-Ь-фЕНИЛ-. О -БутИЛОКСИКа бОНИЛ-Б-НОРВаЛИИа алании-амид-гипрохлория, . .. 8,0 г (20 ммаль соли ВОС-Норвал1, 90 г (3,47 ммоль) ВоС-Норлей-Асп- оН дициклогексиламин при встряхива-(О-трет-бутил)- Фен-нн растворяют в ййи растворяют в смеси 60 мя эфира и

15 мл 4 н.солянокислой уксусной кис- 20 мл 2 н.серной кислоты. Эфирную фалоты, через 1 ч упаривают в вакууме Я зу отделяют, промывают.20 мл ?, й.серн твердый остаток после разбавления . ной кислоты и водой, высушивают и упаэфиром отфильтровывают. Получаю.р . . Ривают в вакууме. Остаюшееся масло

1.48 r. (98%) Н-Норлей-Асп-Фен-НН HCI вместе с 3,70 г (20 ммоль) НО-ПФФ рат рйзл- 195 С; НК О. 357 (1)з - -15,4 створ т в 35 этилацетатау при о . й. <. 1 (с i* 1,0, дМФА). . ф) 0 С добавляют 3,92 г (19 ммоль) дЦГКД, N-трет-Бутилоксикарбонил-L-трипто- . " выдеРживают 1 ч, фильтруют, фильтрат фил-Хнорлейцил-L-аспарагил-L-фенил- упаривают в вакууме и маслянистый осаланин-амид. таток растворяют в 50 ил н-гексана.

1,35 г (3,15 ммоль) H-Норлей-Асп» Раствор промывают 5%-ным раствором би-.

-Фен NHg HCI и 1,26 r (3,15 ммоль) у ..карбоната натрия (5 х 20 мя) и Водой

19

Ф

691082 (2 х 20 мл), упаринают н вакууме, умЕ, твердый остаток после разбавлемасдообраэный остаток кристаллизуют .. ния эфиром отфильтровывают и получапри охлаждении и получают 6,21 г (81Ъ) an 1,67 г (98Ъ) H-Трп-Нарвал-Асп-C>evo о. T

BOC-НоРвал-0ПФФ, .т, пл. 60-62 C;, -ИН - HCI, т. пл. 202 C; R Х 0,25;

Rg 0,70; (с(l Х = -32, 3 (c = 1,0, ди-" (с() р = -30,0 (с = 1,0, ДМФА) . оксан).: . : . . 5 2-D-(трет-Бутилоксикарбониламино ВычиСлено, Ъ: С 50,14; Н 4,73; окси)-пропионил-L-триптофил-L-норваР 24,78. — . лил-Ь-аспарагил-L-фенилаланин-амид

С„6H„8F+NO4 (383,32) .. ".1,55 г (2,52 ммоль) Н-Трп-НорналНайдено, Ъ: С 50, 06," Н 4, б 4; -Асп-Фен-ИН < .HC I н 20 мл ДМФА в

F 24, 63.,- o присутствии 1, 06 мл (7, 56 ммоль} триЯ-трет-Бутилоксикарбонил-L-нарва- . этиламина и 1,14 г (2,52 ммоль) ВОСлил-L-аспарагил- -(трет-бутилоный . -D-0-Àëà-ОПХФ выдерживают в течение сложный эфир)-L-фенилаланин-амид. ночи, упаривают в вакууме, разбавляРаствор 1,68 г (5,0 ммоль) Н-Асп- ют водой, отфильтровывают, осадок (5

-(Î-трет-бутил)-Фен-NHz в 10 мл ДМФА .. (2, 36 г}, хроматографируют его на кон присутствии 0, 70 мп (5 ммоль) три- лонне с силикагелем, элюируя смесью этиламина и 2,12 г (5,5. ммоль) BOC- растворителей 9 10, и получают 0,82 r ..Нарвал-ОПФФ выдерживают 4 ч, ныпари- (4 3, 4 Ъ ) BOC-0-О-Ала-Трп-Нарва -Аспвают в вакууме и маслообразный оста- -Фен NHz, т. пл. 220-221 С; R< 0,20; ток отверждают -эфиром;:Псн учают 2,3 г В. 0,30; (d.) = +13,7 (с = 1,0, 5 (86,2Ъ) ВОС-Нарвал-Асп-(О-трет-бутил)- ДМФА).

-ФенМЙ2, т. пл. 169-179 С1 Ry 065;: Вычислено, Ъ:. С 59,11; Н 657; (о() 11 = -41,6 (с " 1,0, метанол)".:: . " N 13,04;

Вычислено, Ъ: C 60,65; Н 7,93; Сз„Н4 Е О,а (751,85) .

N 10,48. Найдено, Ъ: С 59,57; Н 6,70;

С и N О (534,64) .: . 25 . N 13,21.

27 42 4

Найдено, Ъ: С 60,60; Н, 7,77;

N 10,33. : .. Пентафторфениловый эфир 2-Х вЂ” (третL-Норвалил-L-аспарагил-Х-фeнилaла- -бутилоксикарбониламино) -деканоной ни н- амйд-гидрохл орид. ки слоты, 1, 90 г (3, 55 ммоль) ВОС-Норлей-Асп-30 5, 25 г (14, 7 ммоль) BÎC-Адек-ОН и

-(О-трет- бутил)-Фен-NHz в течение 1 ч 2,94 г (16,0 ммоль) HO-ПФФ растнаряобрабатывают 10 мл 4 н.солянокислой . ют н 40 мл этилацетата, добавляют уксусной кислотй, упаривают и твердый 2,99 r (14,5 ммоль) ДЦГКД при О С, остаток после разбавления эфиром от- перемешивают 1 ч при комнатной темпе- . фйльтранынают. Получают 1,45 г (98,3Ъ)35 ратуре, затем 1 ч при 0 С. ДициклоН-Нарвал-Асп-Cep--NHZ HCI, т. разл. " гексилМочевину отфильтровывают и филь204 С ; R 0,15;. (d.) = -15,0 (с " трат упаривают в вакууме. Маслообраз1,0, ДМФА). ный остаток растворяют в 40 мл н-гек1 г !. Q,.

N-трет-Бутилоксикарбонил-I-трипто- саиа, обрабатывают сначала 5Ъ-ным фил-Х-норвалил-L-аснарагил-L-фенилала-уо растворам бикарбоната натрия (5 х х 20 мл), затем водой (2 х 20 мл) .

Раствор 1„24 r (3,0 ммоль) Н-Нарвал- ОРганическую Фазу высушивают и упаАсп- Фен — NHz - НСХ в 15 мл ДМФА в при- ривают н вакууме. Маслянистый остаток сутствии 0,84 ммл (6,0 ммоль) триэтил- кристаллизуют при охлаждении. Получаамййа и 1,20 г. (3,0 ммоль) BOC-Трп-0- ют 5,82 г (87,5Ъ) ВОС-Х-Адек-ОПФФ, -Сук оставляют на ночь и упаривают н т. пл. 45-46 C R 0,85, (l вакууме, осТаток атверждают водой. (с = 1, О, диоксан) .

Отфильтровывают бсадок, тщательно Вычислено, Ъ: С 55, 63; Н 6,22; промывают водой, 2,0 r сырого продук- . F 20,95 та перекристаллизовывают из 80Ъ-ного, С Н 8Г ИО (434,45) . этанола (30 мл) и получают 1,47 г Найдено, Ъ: С 55,56; H 5,96;

5О (7 3, 9 Ъ ) BOC-Трп -Нарвал-Асп -Фен-ЫН, .... 2, 8

F 20 89. т. пл. 207-208 С; R1 О., 35; (d) = 2-L- (трет-Бутилоксикарбониламино) q

-43,4 (с = 1, О, ДМФА) . -деканаил-L-аспарагил-р- (трет-бутилоВычислено, Ъ: С 61,43: Н 6,67; вый сложный эфир) -Х-фенилаланин-амид.

N 12,64.. 55 1,0 r (3,0 ммоль) Н-Асп-(О-третС Н N O (664 77), . -бутил)-Фен-ЯН в 10 мл ДМФА в присутНайдено, Ъ: С 61, 37; Н .6,80; Стнии О, 42 мл (2, О ммоль) триэтилами3 41 6 8

12,57. на вводят "во взаимодействие с 1,36 r х-триптофил-L-норвалил-L-аспарагил- (3,0 ммоль) ВОс-L-Адек-ОпФФ. через

-Х-фенилаланин-амид-гидрохлорид. Щ 90 мин упаривают в вакууме, Остаток

1, 80 г (2, 72 ммоль) ВОС-Трп-Нор- отверждают эфиром, .отфильтровывают вал Асп-Фен-Йн в присутствии 0,98 мл прн Охлаждении и получают 1,65 (14 ммоль) меркаптоэтанола абрабаты- (90,8Ъ) BÎC-L-Адек Асп-(О-трет-бутил)— нают 20 мл 4 н.солянокислоГо диокса- -Фен NH@, т. пл. 142-143 C; R< 0,70;

Ва. Спустя 15 мин упаринают в ваку- g5 И)р = -32,4 (с = 1,0, .дМФА) .

691082

Вычислено, %s С 63,55> Н 8,67>

К 9 27.

C52 H52 М40 (604 77)

Найдено, %: С 63 34 l Н 8 70

N 9,26.

2-Ь-Аминодеканоил-L-аспарагил-L-Фенилаланий-амид-гидрахлорид . . 1,45 r (2,39 ммоль) ВОС-L-Адек-Асп-(о-трет-бутил) -Фен-ИН обрабатывают 15 мп 4 н.солянокислой уксусной кислоты. Через. 1 ч упаривают в вакууме, разбавляют эфиром, фильтруют и получают.l,03 r (38,9%) H-Ь-Адек-Асп-Фен-МНa HCI: т. пл. 180181 C; Rg 0,35; (с() = -21,1 (с =

1,0, ДИФА) .

Щ-трет.-Бутилоксикарбонил-N««А -Формил-L-триптофнл-2-Еамснодеканоил-L-аспарагил-L-фенилаланин- амид.

К раствору 0,90 r {1,86 ммаль)

Н-.Ь-Адек-Асп-Фен-ЙН НСХ и 0,93 Г (1,36 ммсль} ВОС-Трп-(фор)-ОПФФ в .

15 мл ДМФА добавляют 0,52 мл (72 мМоль) триэтиламина, оставляют на ночь, упаривают s вакууме и остаток отверждают водой. ФильтруЮт, осадок проиыэают водой и эфиром. Получают 1,20 r 25 (87,5%) ВОС-Трп- (фор)-L-.дядек Асп-Фен-ЯН, т. пл. 204 .С.(разл.)j Rf 0,45; (сЦD = -29 -,l, (с и 1,0. ДИФА)

Вычислено, %s С 62,97у H 7,-14;

C4o НЮ,яЬОя (762,88)

Найдено, %: С 62,71; H.-7,141

М ll 06.

L-Тринто@ил-2-L-амин оде каноия-Ь-аспарагил-Ь-фенилаланнн-амид-гидро- 35 хлорид.

1,05 г (1,37 ммоль) ВОС--Трп-.(фор)—

-L-Адек-Асп-Фен-ВН в присутствии

0,49 мл (7,0 ммоль) меркаптоэтаиола обрабатывают 10 мл 4 н.солянокислого диоксана, через 15 мин вжаривают в вакууме, остаток после разбавления эфиром отфильтровывают и получают .0,91 г (99%) H-Трп-Ь-Адек-..Асп-фен ЯН, т. Пл. 240 С {разл.) 1 R О, 40 (аЦ

-25,6 (c = 1,0, ДЙФА). (трет-БутйлоксйкарбонилаМиноокси) †.

-aUeTan-L-триптофил-2-L-аминодеканоил-L-аспарагил-Т;Фенилаланин-амид.

Раствор 0,85 г (1,22 ммоль) Н-Трп-&-Адек-Асп-.Фен-ИН HCI в .10:мл ДИФА 5(). в присутствии 0,51 мл (3,.66 моль) триэтиламина вводят во взаимодействие с

0,54 г (1,22 ммоль) НОС -О-Гли-ОПФФ.

На следующий день упаривают в вакууме. остаток отверждают водой, от- 55 фильтровывают и промывают водой и эфиром. 0,95 г сырого продукта очищают на крлонне с силикагелем, злюируя смесью растворителей 9 10, Элюат" упаривают и получают 0,43 r ВОС О-Гли.- g)

-Трп-L-Адек Асп-Фен-NH T. an. 216217 С (разл); R< 033 R 025 (A) = -18,7 (с 1,0, ДИФА).

Вычислено, %: С 60, 95 > Н 7 111

N 12, 13. -..65

С р HyyN O

Найдено, %: С 60,92 Н 7,07; .

И 12,09.

Пример 13. .Пентафторфениловый эфир 2-D- (трет-бутилоксикарбониламино) -дека«оной кислоты.

Аналогично примеру 12 получают

BQC-D-Адек-ОПФФ. Выход 75,0% т. пл. .45-46 С; R< 0 85, (dÖ 1» ..+18,1 (с = 1,0, диоксан) .

2-D- (трет-Бутилоксикарбониламино)-аминодеканоил-L-аспарагил-р- (трет-бутиловый эфир) -фенилаланин-амид.

1, 20 г (3, 37 ммоль) Н-Асп-(О-трет -бутил)-Фен-КН g в 10 мл ДМФА -в присутствии 0,49 мл (3,5 ююль.) триэтил- амина вводят во взаимодействие с

1, 49 г (3, 5 ммоль) SOC-О-Адек-ОПФФ.

На следуюаМй день смесь упаривают в вакууме и остаток после разбавления диизопропиловым эфиром отфильтровывают. Получают 1,26 r (61,8%) ВОС-0-Адек-Асп-(O-трет-бутил)-Фен NH т. пл. 168-170 C;. Rf. О 80 (Л В =

-36,9o (c е 1,0, ДМФА)Вычйслено, %| С 63,55; Н 8,67; и 9, 27.

Сз Н И4 О (604, 77) .

Найдей,о, %: С 63,70; Н 8,80;

М 9,52. 2-D- Ажнодек аноил-L-ас пар а гил-Ь-gesananasaH-амид- гидрохлорид ..

1,10 г (1;82 ммоль) BOC-О-Адек-Асп -. (О-трет-бутил)-Фен-ИН обрабатывают 12 мл 4 н солянокислой уксусной кислоты. Через 1 ч упаривают в вакууме и твердый остаток после разбавления эфиром отфильтровывают. Получают, 0,87 г (99%) Н-D-Адек-Асп-Cia-МЯ

"НС1 т. . an. 198-200 С1 И 0,50; (аЧ 1 = -76,1 (с = 1,0., ДИФА) .

N-трет-Бутилоксикарбойил-L -триптофил-2-D-аминодеканоил-L-аспарагил-L-фенилаланин-амид.

0,80 г (1,65 ммоль) Н-9-Адек Асп-Фен NH в 10 мп ДИФА в присутствии

О, 70 мл (5,0 юдоль) триэтиламина вво- .. дят во взаимодействие с 0,80 r (1, 70 ммоль) ВОС-Трп-ОПФФ. ffa следующий день упаривают в вакууме, остаток при.охлаждении отверждают эфиром, отФильтровывают и промывают сначала эфиром, затем слабо подкисленной уксусной кислотой, водой и, наконец, чистой водой. Получают 1,03: г (83,8%)

ВОС-Трп D-Адек-Асп-Фен-NHq, т. пл.

196 С (разл.); R - 0,50; (А) = -55,6 (с = 1. О е ДИФА) °

L-Тридтофил-2-D-ами нодеканоил-L-аспарагил-L-фенилаланин-амид-гидроклорид.

О, 90 г (1, 22 ммоль) ВОС-Фрп-0-Адек-Асп-Фен-ЫН в присутствии 0,43 мп (6, 1 моль) меркадтоэтанола обрабатывают 10 мл 4 н.соляиокислого диоксана. Спустя 10 мин упаривают в вакууме и получают 0,75 г (91,4%) Н-Трп691082

Вычислено, %: С 60, 95 Н 7, 11;

N12,,13.

С41 Н 001<, (808, 01) °

Найдейо, %: С 60,71; Н 7, 20;

N 12 12 °

Составитель В. Волкова

Редактор T.Øaðãàíoâà Техред М.Келемеш Корректор Г.Решетник

Эаказ 5819/57 Тираж 513 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб.,д.4/5

Филиал ППП Патент, r.Óæãîðoä, ул.Проектная,4

-D-Адек-Асп-Жен-НН НСХ, т. пл. 205-, 207 С (разл.); R 0 45 (с1) = -23,1 (c = 1,0, ДМФА) . (трет-Бутилоксикарбониламиноокси)—

-ацетил-L-триптофил-2-D-аминодеканоил-L-аспарагил-L -фенилаланинамйд.

0,69 r (1,02 ммоль) Н Tpn-D-Адек-Acn åH-NHy, HCI в 10 мл ДМФА в присутствии 0,42 мл (3,0 ммоль) триэтиламина вводят во. взаимодействие с

0,45 r (1,10 ммоль) ВОС-О-Гли-ОПХФ.

На следующий день выпаривают в вакууме, оста ок отверждают водой, отфильтровывают, промывают сначала эфиром, затем водой. 0,63 г продукта хроматографирУют на колонне, элюируя,смесью растворителей 9 10., Получают

0 45 г ВОС-О-Гли-Трп-2-D-Адек-ÀñïI о ,-Фен-МН р т. пл, 162-165 C . (разл.)

R О, 60 Pf 0,40 " (е() =--17;6 (c с 1, О, ДМФА) .

Формула изобретения

Способ получения пептидов общей формулы

А-Трп-В-Асп-Фен-NHY, где А. — Н-v-Гли, ВОС-О-Гли; B0C-D-О-Ала, ВОС-?-О-Ала, В0С-р-О-Ала;

 — метионил, лейцил, норлейцил, норвалил, 2-аминодеканоил; У вЂ” водород или О-Гли-ОН, или их уксуснокислых солей, о т л и ч а ю щ и A.с я тем, что тетрапептиды общей формулы

Н-Трп-В-Асп Фен-NHY, где В и У имеют укаэанные выше значения, подвергают взаимодействию с,соединениями общей формулы

А — Х, где A — как указано выше;

x — пентафтор- или пентахлорфеноксигруппа, с последующим выделением целевого продукта: в свободном виде 0 или в виде уксуснокислой соли.

Источйики информации, принятые во внимание при экспертизе

1. О. Nyeki, Т. Szirtesg Т. Shou.

Die Verwendung. von PentafIuorphenyIe?5 stern bei Peptidsynthesen, Justus

Iiebigs arina1en der Chemic, 1973, Hefti S. 1421.