Способ получения пептидов

 

ОПИСАНИЕ

ИЗОБРЕТЕНИЯ

Союз Советскнк

Соцнаннстнческнх

Республик

К ПАТЕНТУ ((>>) Дополнительный к патенту (22) Заявлено 260977 (21) 2526421/23-04 (51) й. Кл. (23) Приоритет (32) 27 ° 09 ° 76

20.06.77

807849 (:« >) США

С 07 С 103/52//

A 61 К 37/02

Гоеударстееииый комитет

СССР по делам изобретений и открытий (53) УЛК 547 ° 964. . 4.07 (088. 8) Опубликовано 300780.Бюллетень >ЧЪ 28

Лата опубликования описания 300780 (72) Авторы изобретения

Иностранцы

Эдвард Ли Смитвик-младший (США), Роберт Теодор Шуман (США) и Роберт Куртис Артур Фредериксон (Канада) Иностранная фирма

"Эли Лилли энд Компани" (США) (7l) Заявитель (54 ) СПОСОБ ПОЛУЧЕНИЯ ПЕПТИДОВ ИЛИ ИХ СОЛЕ>> (Ц 0" (0) 0

0 R 0

II Ii I и м- сн — с -н-сн-с-тщ-сн-с-м- сн- с - 2-сн- Т, 1- I 15 1 ! сН з

CHà

ОН

0СН где R = R = 8 — водород;

2 3

R Сз -С4 — алкил;

Изобретение относится к способу получения пептидов или их солей новых соединений, обладающих биологической активностью, которые могут найти применение в медицине.

В пептидной химии широко используют метод получения пептидов путем деСлокирования соответствующих защищенных пептидов в безводной кислой среде (11.

R -- R = R т — независимо водород или метил, М= — СН1$СНз > — SCHgCHy > — CH(CHg)g

Цель предлагаемого изобретения— получение новых пептидов, обладающих фармакологическими свойствами, с использованием известных методов пептидной химии.

Поставленная цель достигается описываемым способом получения нептидов общей формулы

z =- — с — нн

2>

Н

0 или их солей, заключающийся в том, что в соединении формулы tl

753358 где Й вЂ” й,е1-ире тгбутилоксикарбонил ;

R -R, Z u W имеют указанные т выше значения, отщепляют защитные группы в безводной кислой среде.

Процесс предпочтительно проводят в трифторуксусной или ледяной уксусной кислоте с газообразным хлористым водородом или в 98%-ной муравьиной кислоте.

Пример 1. Приготовление хлоргидрата L-тирозил-0-аланилглицил-L-фенилаланил-Ф- L-метиониламида.

А. Бензил-D-алинат-и-толуолсульфонат. К смеси 100 мл бензилового спир— та и 200 мл бенэола, содержащего

55,1 г (0,29 моль) моногидрата и-То луолсульфокислоты добавляют 25 r (0,281 моль) 0-аланина. Смесь доводят до кипения с обратным холодильником и воду удаляют с помощью прибора Дина-Старка. Смесь нагревают 15 ч, затем охлаждают до комнатной температуры и разбавляют эфиром.Образовавшийся осадок собирают и перекристаллизовывают из смеси метанола и эфира. Получают 55,3 r (56%) целевого соединения, т.пл. 112-115 С. о

Найдено,Ъ: С 58,19; H 6,06; и 3,82.

С Н1 ИО S ° (351, 42)

Вйчислено,Ъ: С 58,10;Н 6,02; и 3,99.

Б. Бензил N -пъра бутилоксикарбонил-О-бензил- -тирозил-D-алинат.

К 200 мл безводного N,N-диметилформамида добавляют 35,1 г (0,1 моль) продукта части. А, Полученную смесь охлаждают при перемешивании до О С и добавляют 11,2 г (0,1 моль) диаэабкциклооктана. Перемешивание продол0 жают еще в течение 10 мин при О С и добавляют 37,1 r (0,1 моль) и

- mpem-бутилоксикарбонил-О-бензил-L-тирозина, затем 13,5 г (0,1 моль)

1-оксибенэотриазола и 20,6 г (0, 1 моль) й,й-дициклогексилкарбодимида.

Полученную смесь перемешивают

3 ч при О С, затем при комнатной температуре 24 ч. Вновь охлаждают до 0©С и суспензию фильтруют, фильтрат концентрируют в вакууме.

Остаток растворяют в этилацетате и тщательно промывают раствором бикарбоната натрия, водой, 0,75 N холодной лимонной кислотой и вновь водой. Органический слой отделяют, высушивают над сульфатом магния, фильтруют и фильтрат концентрируют в вакууме. Остаток растворяют в горячем этаноле. При охлаждении из раствора выпадают кристаллы, после перекристаллиэации которых из этанола получают 41,5 г (80%) чистого целевого соединения т.пл. 121-123 С.

Найдено,Ъ: С 68,99, Н 6,75;

20 N 5,17.

С,Н„И, О, (520 63)

Вычйслено,Ъ: С 69,21, Н 6,97;

И 5,38.

В. И -а Рев-Бутилоксикарбонил-О25 -бензил-L-тИрозил-0-аланин.

К смеси 200 мл тетрагидрофурана и 20 мл воды добавляют 31,2 г (0,06 моль) продукта части Б.Раствор охлаждают до ОоС и к нему медленно добавляют 13,2 мл (1,1 эквив.)

5N раствора гндроокиси натрия.

При перемешивании смесь медленно нагревают до комнатной температуры.

Через 5ч смесь распределяют между водой и эфиром. Водный слой отделяют, охлаждают и устанавливают рН 2 при добавлении лимонной кислоты. Затем продукт экстрагируют этилацетатом.

Экстракт промывают водой, сушат над сульфатом магния, фильтруют и раз4О бавляют эфиром. Образовавшийся осадок отфильтровывают, получают 17,7 r (67%) целевого соединения;т.пл. 160162оС

Найдено,%: С 64,73; H 6,70;

45 и 6,20.

С Н И 06 (442,51) °

Вычйслейо, Ъ: С 65, 14; Н 6, 83;

И 6,63.

Г. Бензил N -ape -бутилоксикарбо50 HHII-0- eH3HII-L-THpo3HJI-0-аланилглицинат.

Смесь из 70 мл безводного диметилформамида, 6,74 r (0,02 моль) соли бензилглицината и и-толуолсульфокислоты охлаждают до О С и добаво ляют 2,24 г (0,020 моль) диазабициклооктана. Смесь перемешивают несколько минут и добавляют к ней

8,84 г (0,.020 моль) продукта части В, а затем 2,7 г (0,020 моль) фЯ 1-оксибенэотриаэола н 4,12 (0,020 моль) дициклогексилкарбодиимида. Реакционную смесь перемешивают 2 ч при ОоС, а затем 24 ч при комнатной температуре. Суспензию ф5 охлая(дают до О С, фильтрУют и фильт753358

5 а

65 рат концентрируют в вакууме. Остаток растворяют в этилацетате. Промывают последовательно 1N раствором бикарбоната натрия, водой, холодной

0,75N лимонной кислотой и водой.

Органическую фазу отделяют, высушивают над сульфатом магния, фильтруют и фильтрат концентрируют в вакууме.

Остаток кристаллизуют из этанола, получают 10,8 г (92Ъ) чистого целевого соединения, т.пл. 145-147 С.

Найдено,Ъ: С 67,32; Н 6,83;

N 6,91.

СзьНз 44з От (589, 69) .

Вычислено, Ъ: С 67, 22; Н 6, 67;

i4 1, 13.

Qh

Д. N -mp -Áóòèëîêñèêàðáîíèë-L-тирозил-0 -аланилглицин.

К 60 мл диметилформамида добавляют 10,5 г (0,018 моль) продукта, полученного как описано в части Г, затем 2,5 г 5Ъ-ного палладия на угле в виде суспензии в диметилформамиде.

Полученную смесь продувают азотом, водород вводят по трубке при атмосферном давлении и комнатной температуре. Через 3,5 ч подачу водорода прекращают и фильтрованием удаляют катализатор. Фильтрат концентрируют в вакууме. При обработке остатка эфиром получают 5,4 г (75Ъ) целевого соединения в виде аморфного твердого вещества.

Найдено,Ъ: С 70,08, Н 5,82;

М 6,16.

СЫН2ВИ 0> (446,65).

Вычислено, -.: 69, 94; Н 5, 87; и 6,27.

0 ф

Е. N -mpe -Бутилоксикарбонил-Ы

-метил-L-метиониламид.

QL

Дициклогексиламиновую соль И вЂ” ре -бутилоксикарбонил- -метионина (17,2 r, 0,04 моль) распределяют между этилацетатом и холодной

0,75 И лимонной кислотой. Органическую фазу отделяют, промывают водой, сушат над сульфатом магния, фильтруют и концентрируют в вакууме до маслообразного остатка. Остаток растворяют в смеси 80 мл безводного тетрагидрофурана и 10 мл диметилформамида и добавляют 0,5 r 18-кроун-б-эфира.

Суспензию гидрида калия (эквивалент О, 12 моль) при перемешивании добавляют по каплям к полученной холодной смеси в течение 30 мин.

Затем вводят йодистый метил (2,49 мл;

0,04 моль) и смесь перемешивают 24 ч при комнатной температуре. Охлалщенную реакционную смесь подкисляют

0 75 N лимонной кислотой до рП 3 и распределяют между водой и эфиром.

Эфирный слой промывают несколько раз водой и экстрагируют 1 и раствором бикарбоната натрия. Водные экстракты объединяют, подкисляют до рН 2 и экстрагируют этилацетатом. Экстракт сушат над сульфатом магния, фильтруют и упаривают в вакууме. Получают 8,4 r продукта, имеющего спектр ЯИР,соответствукщий желаемому й-метилированному продукту: Ю 2,92, К вЂ” СН ., Ф 2,11, S-СНъ, б -1,6, С(СН )з .

Масло (8,4 г примерно 0,034 моль) растворяют в 60 мл диметилформамида.

Раствор охлаждают до 0 С и добавляют

4,69 r (0,035 моль) оксибензотиазопа и 7,0 г (0,034 моль) дициклогексилкарбодимида. Смесь перемешивают 2 и при 0 С и барботируют через нее безо водный аммиак в течение 45 мин.Затем реакционную смесь фильтруют и фильтрат концентрируют в вакууме. Остаток вводят в колонку с силикагелем (0,076-0,252 мм) размерами 3 х 50 см.

Для злюирования используют хлороформ, смесь (9,75:0,25) хлороформа и метанола. Фракции, полученные при хроматографировании объединяют на основе результатов анализа хроматографией в тонком слое и концентрируют в вакууме, получают после двойной перекристаллизации (из смеси эфира и петролейного эфира) целевой продукт (4,1 г), т.пл. 75-78 С.

ЯМР: б 2; 80, N-СНз, б 2, 10, S-СНЪ, (y 1,48, С(СН ), Я -29,5 (С = 0,5, хлороформ).

Найдено,Ъ: С 50,59; Н 8,24;

N 10,87, С4 Н Н .S0З (262 37

Вйчислено, Ъ: С 50, 36; Н 8, 45;

N 10, 68.

Ж. N --rnpem-Бутилоксикарбонил-L 9

-фенилаланил-N -метил- -метиониламид.

Через смесь из 20 мл ледяной уксусной кислоты, 2 мп анизола, 2 мл триэтилсилана и 3,6 r (0,0144 моль) продукта, полученного в условиях,описанных в части Е, барботируют безводный хлористый водород в течение

30 мин. Затем смесь разбавляют эфиром. Образовавшийся осадок отфильтровывают, сушат (2,9 г) и вновь растворяют в 40 мл диметилформамида.

Раствор охлаждают до 0 С и добавляют к нему 2,9 мл (0,0146 моль) дициклогексиламина, а затем 1,97 г (0,0146 моль) оксибензотиаэола, 3,87 r (0,0146 моль) N - гпрее-бутилоксикарбонил-1-фенилаланина и 3,0 г (0,0146 моль) дициклогексилакарбодиимида. Полученную смесь перемешивают 2 ч при 0ОС, а затем 24 при комнатной температуре. Вновь охлаждают до 0 С, фильтруют, фильтрат коно центрируют в вакууме. Остаток растворяют в этилацетате и раствор пгомывают последовательно 1 и раствором бикарбоната натрия, водой, 0,75 М лимонной кислотой и водой. Этилацетатный раствор сушат над сульфатом магния, упаривают в вакууме, получают масло, которое не кристаллизуется иэ петролейного эфира. Остаток вводят в колонку (Зх50 см), заполненную си753358

40 ликагелем и продукт элюируют хлороформом, смесью хлороформа и метанола (9,8 : 0,2). Из фракций, объединенных в соответствии с результатом анализа методом хроматографии в тонком слое, после упарива- 5 ния получают остаток, который после перекристаллизации из смеси эфира и петролейного эфира дает 3,1 г (52,5Ъ) целевого соединения, т.пл. 99-103 С. !

О

Найдено,%: С 59,74", Н 7,47;

М. 10,45.

С ©НЗ М 04 Ь (409,55).

Вычислено,%: С 58,65, Н 7,63;

N 10,26.

3. М â€” mpem-Бутилоксикарбонил-L-тироэил-0-аланилглицил-L-фенилаланил-й -метил-L-метиониламид.

К смеси 20 мл ледяной уксусной кислоты, 3 мл анизола и 3 мл триэтилсилана добавляют 2,2 r (5,37 моль) продукта, полученного в условиях, списанных в части Ж.

Через смесь пропускают в течение

30 мин безводный хлористый водород.

Затем добавляют эфир, выпавший оса- 25 док отфильтровывают и сушат в вакууме.

Твердое вещество (1,75 г,5 моль) растворяют в 30 мл без водного диметилформамида и смесь охлаждают до

О С. Хлористоводородную соль нейтра- 30 лиэуют при добавлении 0,99 мл (5 . моль) дициклогексиламина.Через

5 мин вводят 2,05 г (5 моль) продукта,полученного в условиях,описанных в части Д, а затем 0,68 г 35 (5 моль). оксибензотиазола и 1,03 r (5 моль) дициклогексилкарбодиимида.

Смесь перемешивают 24 ч при 4 С.

Полученный нерастворимый продукт отфильтровывают и фильтрат упаривают в вакууме. Остаток растворяют в этилацетате, раствор промывают последовательно 1 N, водным раствором бикарбоната натрия, холодной

0,75 М лимонной KHcJIoToA H водой.

Раствор сушат над сульфатом магния, вносят в колонку (Зх50 см) с силикагелем и продукт элюируют хлороформом, а затем смесью хлороформа и метанола (9:1). Фракции объединяют, анализируют методом хроматографии в тонком слое, упаривают, получают две порции сырого продукта весом

0,80 и 1,2 г. Первую порцию дополнительно чистят хроматографией в тонком слое силикагеля (хлороформ- 55 метанол 9:1) и получают 0,62 r целевого соединения в виде аморфного твердого вещества.

Найдено,Ъ: С 58,48; Н 6,64;

М 11,97. 60

СРН4ЬМ6 08 S (700, 86 ).

Вычислено,Ъ: С 58,27, Н 6,90, М 11,99.

Анализ аминокислоты: Найдено Т у r

099, А(а 100, GK у 100; Phe 100. 65

Вторую порцию продукта дважды хроматографируют тем же методом и получают 0,74 r целевого продукта, имевшего приведенный элементарный анализ и анализ айинокислоты.

И. Хлоргидрат L-тирозил-0-аланилглицил-L-фенилаланил -М -метил-Lм

-метиониламида.

К 5 мл ледяной уксусной кислоты, содержавшей 0,2 мл анизола, добавляют 0,72 г (1,03 моль) целевого соединения части 3; Через смесь в течение 20 мин пропускают безводный хлористый водород, смесь сушат лиофилизацией, получают 0,74 г целевого соединения, R 0,3.

Аналитический образец продукта сушат в вакууме при температуре 100 С.

Найдено,Ъ: С 54,36, Н 6,19;

N 13,00.

C+q

Вычислено, Ъ: С 54, 56; Н 6, 49;

N 13,19.

Анализ аминокислоты: Найдено Ty r

1,01; АВа 0,99; Ы у 1,00; Phe 1,00.

Пример 2. Приготовление моноацетата полуторного хлоргидрата

L--тирозил-0-лейцилглицил-L-фенилаланил-N -метил-L-метиониламида. (А

A. Бензил-0-лейцинат-и-толилсульфонат.

Соедине ние получают в условиях, описанных в части A примера 1,для приготовления производного 0-алината.

Выход 73Ъ; т. пл. 155-156 С.

Найдено, Ъ: С 61,17; Н 6,68;

М 3,81.

С Нт N5S (393,50)

Вычислено, Ъ: С 61, 05; H 6, 92;

iN 3,56.

Б. Бензил-М вЂ .тре -бутилоксикарбонил-О-бензил-L-тирозил-0-лейцинат.

К 50 мл диметилформамида добавляют 7,86 г (0,020 моль) продукта, полученного в условиях, описанных в части A. Смесь охлаждают до ООС и добавляют 2,24 г (0,020 моль)

ОАВСО. Смесь перемешивают 5 минут и добавляют7,42 r (0,020 моль)M -mPem-бутилоксикарбонил-О-бензил-L-тирозина, а затем 2,7 г (0,020 моль) оксибензотиазола и 4,12 г (0,02 моль) дициклогексилкарбодиимида. Смесь перемешивают 2 ч при ООС и 24 ч при комнатной температуре. Затем смесь вновь охлаждают до О С,получено ную суспензию фильтруют и фильтрат концентрируют в вакууме. Полученный остаток растворяют в этилацетате, раствор промывают последовательно

1 М раствором бикарбоната натрия,водой,холодной 0,75 N лимонной кислотой и водой. Органическую фазу сушат над сульфатом магния, фильтруют и фильтрат концентрируют в вакууме.

Остаток кристаллизуют из горячего этанола и получают 9,0 г (78Ъ) целевого соединения, т.пл. 100-103 С.

753358

10.ния, т..пл. 189-190 С. ,Найдено,%: С 58 79; Н 7,48;

М 9,39.

С Нз и 07 (4 51, 5 2 ) ..

Вычислено, %: С 58, 52; Н 7, 37, 20 М 9,31.

Е. N< -mpem-Бутилоксикарбонил— L-тирозил — D-лейцилглицил-L-фенилаланил-N -метил-L-метиониламид.

К 10 мл безводного диметилформамида добавляют 0,692 г (0,002 моль) солянокислой соли L-фенилаланил-N -метилметиониламида (приготовлен0 ной, как описано в части 3 примера

1) и 0,903 r (0,002 моль) продукта, приготовление которого описано в части Д. Полученную смесь охлаждают до ООС и добавляют О;28 мл (0,002 моль) тризтиламина и через

10 мин 0,27 r (0,002 моль) оксибензотиазола и 0,412 г (0,002 моль) дициклогексилкарбодиимида. Смесь перемешивают 2 ч при ООС и 24 ч при 4оС. Полученный осадок отфильтровывают и фильтрат концентрируют в вакууме до образования .остатка,который растворяют в этилацетате.

Раствор промывают последовательно

1 N водным. раствором бикарбоната натрия, водой, холодной 0,75 и лимонной кислотой и водой. Органическую фазу отделяют, сушат над сульфатом магния, фильтруют и фильтрат концентрируют в вакууме. Хроматографируют в тонком слое и с пластинки продукт элюируют смесью хлороформа и метанола (9,25:0,75). Из каждой пластинки вырезают основную УФ-положительную полосу и продукт элюируют с силикагелем смесью хлороформа и метанола. После удаления рас ворителя в вакууме получают 1,2 r (81%) целевого соединения в виде аморфного твердого вещества,)ck) в -31,5О (C = 0,5, метанол) .

Найдено,%: С 59,88, Н 7,06; ,. N 11,15.

Зт H 54 Nà Оз 5 (742, 93), вычислено,%: С 59,88, Н 7,06;N 11 15.

Г. Бензил-N -п ре -Бутилоксикарбонил-О-бензил-L-тирозил-О-лейцилгли- 35 цинат.

К смеси 3,37 г (0,010 моль) соли бензиглицината и и-толуолсульфокислоты и 1,12 г (0,010 моль) ABCO в

25 мл безводного диметилформамида 40 добавляют 4,84 г (0,010 моль) соединения,полученного в условиях, описанных в части В. Смесь охлаждают до О C и добавляют к ней 1,35 г (О, 010 моль) оксибензотиазола и

2,06 r (0,010 моль) дициклогексилкарбодиимида. Полученную смесь перемешивают 2 ч при О С и 24 ч при комнатной температуре. После охлаждения до ОоС смесь фильтруют и

50 фильтрат концентрируют в вакууме.

Остаток растворяют в этилацетате и раствор промывают последовательно

1 М водным раствором бикарбоната натрия, водой, холодной .0,75 М лимонной кислотой и водой. После сушки чад сульфатом магния раствор фильтруют . и концентрируют в вакууме. Остаток кристаллиэуют из водного этанола, получают 4,0 г (63%) целевого соединения; т.пл. 114-116оС, 60

Найдено,%: С 68,17, Н 7,12;

N -6,40.

СйьН4 йзОт (631,77).

Бйчйслено,%: С 68,44; Н 7, 18;

6,65. 65

Найдено,%: С 71,30; Н 7,15;

N 4,79.

С44Н 4М О (574,72)

Вычйслено,%: С 71 06 Н 7,37,"

N 4,87.

В. М -аурел -Бутилоксикарбонил-О-бензил-С-тирозил-б-лейцин.

К 80 мл тетрагидрофурана добавляют 8,0 г (0,0139 моль) продукта, полученного в условиях, описанных в части Б. После добавления 20 мл воды полученную смесь охлаждают до

О С и медленно добавляют к ней

7,25 мл (0,0145 моль) 2 и водного раствора гидроокиси натрия. Смесь перемешивают 30 мин при Î С и 24 ч при комнатной температуре, затем распределяют между водой и эфиром. Водную фазу отделяют, охлаждают до О С, подкисляют 1 М соляной кислотой до рН 2. Продукт экстрагируют этилацетатом. Экстракт промывают водой, сушат над сульфатом магния, фильтруют и концентрируют в вакууме. Получают сиропообразный остаток. Этот остаток кристаллизуют из смеси эфира и петролейного эфира и получают 6,4 г (95%) целевого соединения; т.пл. 90-94 С.

Найдено,%: С 67,14; Н 7,38;

М 5,76.

С2тНзьй 0 в (4 84, 59 ), Вйчислено,%: - 66 г 92; Н 7,49;

М 5,78.

Д. М -арве -Бутилоксикарбонил-LФ

-тироэил-D-лейцилглицин.

К 5 мл безводного диметилформамида добавляют 3,9 r (0,006 моль): соединения, полученного в условиях, описаннйх в части Г, и 1,5 г 5%-ного палладия на угле. После добавления

40 мл этанола смесь продувают азотом и в течение 5 ч вводят в нее водород при атмосферном давлении и комнатной температуре. Катализатор отфильтровывают и фильтрат упаривают в вакууме. Остаток кристаллизуют из смеси эфира и этилацетата, получают 2,3 г (85%) целевого соединеАнализ аминокислоты: НайДено Ту г

1,01.; Leu 1,00; Иу 1,00, Phe 0,99.

753358

30

Ж. Полуторахлористый мои оацет ат (.-тироэ ил-0-лейцилглицил-L-фенилаланил- М -.метйл- L -метиониламида.

К 5 мл ледяной уксусной кислоты, содержащей 0,3 мл анизола, добавляют

О, 900 r (0,0012 моль) соединения, получение которого описано в части Е.

Через смесь пропускают безводный хлористый водород в течение 20 мин.

Продукт сушат лиофилизацией, из уксусной кислоты получают целевое соединение в виде аморфного твердого вещества; > — 2,1 (С= О, 3, метанол).

Найдено,%: С 54,30; Н 6,64;

11,32; СЕ 6,96.

Сз Н N@Og S ° 1,5 НСЮ С Нд О (757, 04).

Вычислено,Ъ: С 53,93; H 6,79;

N 11,1О, CR 7,02.

Анализ аминокислоты: Найдено Tyr

0,99 ; ен 1,03; ОРу 0,99; РЬе 0,99.

Пример 3. Приготовление хлоргидрата L-тирозил-О-аланилглицил-L-фенилаланил-L-метиониламида.

A. Метил-Й "- »Рея-бутилоксикарбонил-L-фенилаланил-L-метионат.

К смеси иэ 200 мл диметилформамида и 19,9 г (О, 1 моль) хлоргидрата метил-L-метионата, охлажденной до О С, при перемешивании добавляют 19,9 мл (0,1 моль) дициклогексиламина, 26,5 r (0,1 моль) и > — трее-бутилоксикарбонил-L-фенилаланина, 13,5 г (0,1 моль) оксибензотиазола и 20,6 (0,1 моль) дициклогексилкарбодиимида. Полученную смесь перемешивают 2 ч при O C u

24 ч при комнатной температуре, затем вновь охлаждают до О С и образовавшийся осадок отфильтровывают.фильтрат концентрируют в вакууме и остаток растворяют в этилацетате.Раствор промывают последовательно холодной

0,75 N лимонной кислотой, водой, 1 и раствором бикарбоната натрия и водой. Этилацетатный слой сушат над сульфатом магния и упаривают в вакууме до получения кристаллического остатка. Остаток дважды перекристаллизовывают из смеси эфира и петролейного эфира и получают 26,6 г (65Ъ) целевого соединения;т.пл. 8992оС.

Найдено,%: С 58,41; Н 7,15;

М 6,71.

CKH+t06S (410, 53).

Вычислено,%: С 58,51; Н 7, 37;

N 6,82.

Б. Й -mpem-Бутилоксикарбонил-L-фенилаланин-(-метиониламид.

К 60 мл метанола добавляют 13,0 г соединения, полученного в условиях, описанных в части А. Полученную суспензию помещают в толстостенную склянку, снабженную мешалкой. Смесь охлаждают до -78 С и добавляют к ней 60 мл жидкого безводного аммиака.

Реакционный сосуд закрывают и предоставляют содержимому воэможность наг5

65 реться до комнатной температуры,при которой жидкость перемешивают 24 ч.

Затем сосуд снова медленно охлаждают до -78©С и открывают. Остаток аммиака испаряют при нагревании смеси и продукт, полученный после выпаривания метанола, перекристаллизовывают иэ метанола, получают 9,7 r (77Ъ) целевого соединения; т.пл. 192-195 С.

Найдено, Ъ: С 57,41; Н 7,17;

N 10,37.

CggH gN 04 S (395,52).

Вычислено, Ъ: С 5 7, 70; Н 7, 39 ", М 10,62.

В. Хлоргидрат L-фенилаланил-L-метиониламида.

К 150 мл ледяной уксусной кислоты, содержащей 10 мл анизола и 10 мл тризтилсилана, добавляют 9,6 r (0,024 моль) продукта части Б. Затем через смесь пропускали безводный хлористый водород с помощью трубки, диспергирующей газ, и через 30 мин реакционную смесь разбавляют эфиром.

Образовавшийся осадок перекристаллизовывают .из смеси этанола и эфира и получают 7,5 r {94Ъ) целевого соединения; т.пл. 214-216 С.

Найдено,Ъ: С 50,75; Н 6,84;

N 12,54.

С„,Н„М, 0,5СЕ (331,87).

Вычислено Ъ: С 50, б 7; Н 6, 68;

N 12,66.

Г. N -mt>em-Бутилоксикарбонил-0-аланилглицил- L-фенилаланил-L-метион иламид.

К 40 мл диметилформамида добавляют 1,66 r (0,005 моль) продукта, описанного в части В, и дициклогексиламин (0,99 мл, 0,005 моль) и раствор перемешивают при охлаждении до О С. Затем к смеси добавляют

0,88 r (0,005 моль) N -epee-бутилоксикарбонилглицина, 0,68 г (0,005 моль) оксибензотиазола и

1,03 r (О, 005 моль) дициклогексилкарбодиимида. Полученную смесь перемешивают 2 ч при ОоС, а затем 24 ч при комнатной температуре. Осадок, образовавшийся после повторного охлаждения смеси до О С, отфильтровывают и фильтрат упаривают в вакууме.

Остаток растворяют в этилацетате и раствор промывают последовательно

1 N раствором бикарбоиата натрия, водой, холодной 0,75 N лимонной кислотой и водой. Органическую фазу сушат над сульфатом магния, фильтруют и упаривают в вакууме. Остаток растворяют в горячем этилацетате.После охлаждения образуется гель, который не поддается кристаллизации, гель фильтруют, сушат, получают 1,7 г аморфного твердого вещества. Вещество суспендируют в 50 мл ацетонитрила, содержащего 5 мл анизола и

5 мл триэтилсилана. После добавления моногидрата п-толуолсульфокислоты смесь перемешивают 5 ч. Полу"3

14

753358 ченный осадок отфильтровывают, сушат и получают 1,6 r {0,003 моль) сырой соли П-толуолсульфокислоты и глицил-L-фенилаланил-L-метиониламида.

Этот продукт растворяют в 30 мл безводного диметилформамида, охлаждают до О С, добавляют 0,336 r (О, 003 моль) DABCO и через 10 мин

0 8 r (0,004 моль) М .- Реп -бутилQL оксикарбонил-D-аланина, 0,540 r (0,004 моль) оксибензотиазола и0,824 г (0,004 моль) дициклогексилкарбодиимида. Полученную смесь перемешивают 2 ч при О С и 48 ч при комнатной температуре. Вновь охлаждают до О С и фильтруют, фильтрат упаривают в вакууме. Остаток растворяют в бутаноле и раствор промывают последовательно 1 М раствором бикарбоната натрия, водой, холодной

0,75 N лимонной кислотой и водой.

Органическую фазу сушат над сульфа- 20 том магния, фильтруют и концентрируют в вакууме. Остаток растворяют в горячем этаноле и при добавлении этилацетата получают в виде осадка целевое соединение (1,1 г 42%).

Анализ аминокислоты: Н айде но РА а

1,01, G%y 1,01; Phe 1,01; Het 0,98.

Д. N -атрее-Бутилоксикарбонил- тирозил -D-аланилглицил-б-фенилаланил— L-метиониламид.

К смеси 20 мл.ледяной уксусной кислоты, 2 мл анизола и 2 мл триэтилсилана добавляют 1,0 г (0,0019 моль) продукта, описанного в части Г. С помощью трубки, диспергирующей газ, в смесь вводят в течение 30 мин безводный хлористый водород. Затем к реакционной смеси добавляют эфир и образовавшийся осадок отфильтровывают и высушивают. Получают 0,870 г твердого вещества, кото- 40 рое растворяют в смеси 20 мл холодного (00C) диметилформамида и О, 38 мл (0,0019 моль) дициклогексиламина.

Через 10 мин к смеси добавляют

0,534 r (0,0019 моль) N - ropom— 45

-бутилоксикарбонил-L-тирозина, 0,257 г (0,0019 моль) оксибензотазола и 0,391 r (0,0019 моль) дициклогексилкарбодиимида. Перемешивание продолжают при О С 2 ч и при комнат- 50 ной температуре 24 ч. После повторного охлаждения смеси до О C образовавшийся осадок отфильтровывают и фильтрат концентрируют в вакууме.

Полученный остаток растворяют в бутаноле и раствор промывают последовательно 1 М раствором бикарбоната натрия, водой, холодной 0,75 N лимонной кислотой и водой. Органическую фазу сушат над сульфатом. магния,фильтруют и фильтрат концентрируют в ваку- 60 уме. При попытках кристаллизовать остаток из этилапетата или этанола получают гель. Остаток растворяют в горячем метаноле и раствор наносят на пластинку для хроматографирования Я в тонком слое, для элюирования используют смесь хлороформа и метанола (9:1). Соответствукицую полосу вырезают с пластинки и экстрагируют смесью хлороформа и метанола. После выпаривания растворителя в вакууме получают 0,270 г (21%) целевого соединения; Р = О, 17.

Анализ аминокислоты: Найдено Tyr

1,00, Ма 1,02, GRy 0,99; Phe 1,02;

Het 0,98.

Е. Хлоргидрат L-тироэил-0-аланилглицил- -фенилаланил-L-метиониламида.

К 5 мл ледяной уксусной кислоты, содержащей 0,25 мл анизола, добавляют

0,270 г (0,0004 моль) продукта, описанного в части Д. В смесь вводят с помощью диспергирующей трубки хлористый водород в течение 20 мин.Затем реакционную смесь охлаждают и лиофилизируют, получают 0,182 r (75%) целевого соединения; R" = 0,5.

Анализ аминокислоты: Найдено Tyr

0,99; А9а 1,00; GRy 0,99; Fhe 1,01;

Met 0,91.

Этот анализ показал присутствие сульфоксида метионина.

Пример 4. Приготовление трехводного хлоргидрата -тирозил-0-аланилглицил-М -метил-L-аланил— N -метил-L-метиониламида.

Ф

А. N -ape>-Бутилоксикарбонил-N

tW Ф

-метил-L-фенилалинат-М,N-дициклогексиламмония.

К 80 мл безводного тетрагидрофурана добавляют 5,3 г (О, 02 моль)

М -rnPe áóòèëîêñèêàðáîíèë-1-фенилаланина. Полученный раствор охлаждают примерно до 10 С и добавляют

10 мл безводного диметилформамида и 0,5 r 18-кроун-6-эфира. Затем к полученной смеси медленно добавляют 10,15 r (содержащей 0,060 моль

КН) масляной дисперсии гидрида калия, Полученную смесь охлаждают.до 00С и добавляют к ней 1,24 мп (0,020 моль) йодистого метила. Перемешивание при комнатной температуре продолжают 24 ч. Затем смесь выливают в дробленный лед и экстрагируюх эфиром. Водную фазу подкисляют до рН 2 лимонной кислотой и продукт экстрагируют этилацетатом. Органическую фазу промывают водой, сушат над сульфатом магния и концентрируют в вакууме. Получают некристаллиэирующийся сироп, спектр ЯМР которого соответствует предполагаемому производному.

ЯИР ).СР 2,72, N-СН,; д 1,35, С(CH3)Ъ).

Сироп растворяют в эфире и к раствору добавляют 4 0 мл дициклогексиламина. При охлаждении выпадают кристаллы, из которых после кристаллизации из смеси метанол-сложный эфир получают 6,8 г (74%) целевого соединения т. пл. 171-174 С, P a J -22, О (С 1, метанол).

753358

16.

Найдено,Ъ: С 70,60, Н 9,49; и 6,19.

Суй»»М» О» (460, 66).

Вычислено, Ъ: С 70,40, Н 9,63, и 6,08.

Б. и -трет-ьутилоксикарбонил-N — 5

-метил-L-фенилаланил-N -метил-L-метиониламид.

Смесь из 30 мл безводного диметилформамида, содержащего 1,98 r (0,010 моль) хлористоводородной соли й®-метил-(.-метиониламида и 4,16 r (.0,010 моль) и -ш/ е -бутилоксикарбонил-М"-метил-L-фенилаланина перемешивают 5 мин, затем охлаждают до

О С и добавляют оксибензотаэол

15 (1,35 г, 0,010 моль) и дициклогексилкарбодиимид (2,06 г, 0,010 моль).

Эту смесь перемешивают 2 ч при ÎОC и 24 ч при комнатной температуре, . Выделившийся осадок отфильтровывают и фильтрат концентрируют в вакууме до получения сиропа, который растворяют в этилацетате. Этот раствор промывают последовательно 1N раствором бикарбоната натрия, водой, холодной 0,75 и лимонной кислотой и водой. Органическую фазу сушат над сульфатом магния и концентрируют в вакууме,до сиропа. Сироп растворяют в хлороформе, вносят в колонку (3x50 см) с силикагелем и продукт 30 элюируют хлороформом, а затем смесью хлороформа с метанолом (9,75:0,25).

Фракции объединяют и после концентрирования в вакууме получают 1,4 r (ЗЗЪ) сиропа, имевшего спектр ЯМР, 35 соответствующий спектру целевого соединения.

ЯМР: Д 2,93, N-CH Phe",d 2,73;

N-CH>Net ; сР 2,10; S-CH>, б 1,37 с(сн ) 40

В. N +- Pen-Бутилоксикарбонил- L-тирозил-0-аланилглицил-N@-метил- -фенилаланил-Ng-метил-L-метиониламид.

К смеси 5 мл ледяной уксусной кис- 45 лоты„ 1 мл аниэола и 1 мл триэтилсилана добавляют 1,4 г (0,0033 моль) продукта части Б. Через смесь пропускают безводный хлористый водород в течение ЗО мин, затем реакционную смесь разбавляют эфиром. Образовавшийся осадок выделяют и сушат (1,1 г), затем растворяют 40 мл диметилформамида. К охлажденной до ООС реакционной смеси добавляют.1,27 г (0,0031 моль) продукта, получение которого описано в части Д примера 1, 0,420 r (0,0031 моль) оксибенэотиазола и 0,640 г (О, 0031 моль) .дицик-, логексилкарбодиимида. Через 10 мин добавляют 0,43 г (0,0031 моль) три- 60 этиламина и перемешивание продолжа" . ют при О С 2 ч и при 4 С вЂ” 48 ч.Образовавшийся осадок отфильтровывают и фильтрат концентрируют в вакууме до сиропа, который затем растворяют в 65 этилацетате. Раствор последовательно промывают 1 И раствором бикарбоната натрия, водой, холодной 0,75 N лимонной кислотой и водой, а затем сушат над сульфатом магния, фильтруют и фильтрат концентрируют .в вакууме до получения 2,0 r сырого продукта.

Продукт растворяют в хлороформе, раствор вносят в колонку (3x50 см) с силикателем и продукт элюируют хлороформом, а затем смесью хлороформа и метанола (9:1). Фракции, содержащие целевой продукт, объединяют, концентрируют в вакууме,, получают 1,,1 r (47Ъ) некристаллического целевого соединения.

Найдено,Ъ: С 59,01; Н 6,78;

N 11,58.

С3рНщф э (714, 88 ), Вычислено,Ъ: С 68,80; Н 7,05, N 11,76 °

Ж. Трехводный хлоргидрат L-тироэил-О-аланилглицил-N -метил-О-фенилаланил-й -метил-L-метиониламида.

К смеси 10 мл ледяной уксусной кислоты и 0,5 мл аниэола добавляют

0,70 г (0,001 моль) продукта, описанного в части В. Через смесь в течение 20 мин пропускают безводный хлористый водород. Затем реакционную смесь охлаждают и лиофилизируют до получения 0,678 г гигроскопического целевого соединения.

Найдено,Ъ: С 51,13; Н 6,.97;

N 11,72.

C p»3Ng0gS CP. ЗН2 О (705, 23) .

Вычйслено, Ъ: С 51, 08; Н 7, О;

М 11,91.

Анализ аминокислот: Найдено Туr

1,03; AQa 1,01; GRy 0,96.

Пример 5. Приготовления моноацетата-1,25-хлоргидрата L-тирозил-D-аланил-L-аланил-L-фенилаланил-N+-метил-L-метиониламида.

А. Бензил-N -mpem -бутилоксикарбонил-О-бензил-L-тирозил-0-аланил-0-алината.

К раствору 3,19 г (0,010 моль) п-толуолсульфонатной соли бенэилалината в 30 мл безводного диметилформамида добавляют 4,43 r (0,010 моль) продукта., описанного в части Б примера 1. Смесь охлаждают до Î C и добавляют к ней 1,12 r (0,010 молЬ) DABCO, а затем через 10 мин -2,135 r (О, 010 моль ) оксибен эотазола и

2,06 г (0,010 моль) дициклогексилкарбодиимида. Полученную смесь перемешивают 2 ч при О С и 48 ч при комнатной температуре. Образовавшийся осадок отфильтровывают и фильтрат упаривают в вакууме до сиропа.

Сироп растворяют в этилацетате и раствор промывают последовательно

1 М раствором бикарбоната натрия, водой,-холодной 0,75 М соляной кислотой и водой. Органическую фазу сушат над сульфатом магния, фильтруют.

17

753358

60

Фильтрат концентрируют в вакууме и получают остаток, который не кристаллизуется из этанола или эфира.

При разбавлении эфирного раствора петролейным эфиром получают гель, который фильтруют и сушат в вакууме.

Сырой аморфный продукт (4,0 г) вносят в колонку 3 50 см с силикагелем и продукт элюируют хлороформом,затем смесью хлороформа и метанола (9,75 : 0,25). Объединяют фракции, содержащие целевой продукт,элюат упаривают в вакууме, получают сиропообраэный остаток. Этот остаток растворяют в эфире и при добавлении к раствору петролейного эфира получают 3,0 г (50Ъ) целевого соединения в виде аморфного твердого вещества; т.пл. 100-104 С.

Найдено,Ъ: С 67,56; Н 6,60;

N 7,16.

С34Н,й Îó (603, 72 ) °

Вычислено,Ъ: С 67,64; Н 6,85, и 6,96.

Б. и -врет-Бутилоксикарбонил-L-тирозил-0-аланил-С-аланил.

К 5 мл безводного диметилформамида добавляют 2,9 г (0,0048 моль) продукта, описанного в части A.3a- тем к смеси добавляют 1,0 г 5Ъ-ного палладия на угле и 50 мл этанола.

В течение б ч в смесь вводят водород при атмосферном давлении и комнатной температуре. Затем реакционный сосуд продувают азотом, отфильтровывают катализатор и фильтрат концентрируют в вакууме. Остаток растворяют в этилацетате и раствор разбавляют эфиром. Образовавшийся осадок отфильтровывают и сушат в вакууме, получают 1,5 г (74Ъ) целевого соединения в виде аморфного твердого вещества; (Og> = 25,9 (С = 5, хлороформ).

Найдено,Ъ: С 56,80; Н 9>95;

N 9,81, С енл йэ О у (423, 47), Вычислено, Ъ: С 56,73; Н 6,90;

N 9,92.

В. N -mpem-Бутилоксикарбоиил-L фь

-тирозил-0-аланил-L-аланил-L-фенилаланил-N -метил-L-метиониламид.

Смесь из 10 мл безводного диметилформамида, 0,692 г (0,002 моль) хлористоводородной соли L -фенилаланин-N -метил-L-метиониламида (приготовлен, как описано в части 3 примера 1) охлаждают до ООС и добавляют к ней 0,28 мл (0,002 моль) триэтиламина. Реакционную смесь перемешивают 10 мин и добавляют к ней

0,846 г (О, 002 моль) продукта, описанного в части Б, затем 0,270 r (0,002 моль) оксибензотиаэола и

0,412 r (0,002 моль) дициклогексилкарбодиимида. Полученную смесь перемешивают 2 ч при ООС и 48 ч при комнатной температуре. После повторного охлаждения до О С смесь фильт5

2Q

50 руют и фильтрат концентрируют в ваку" уме. Остаток растворяют в этилацетате и раствор промывают последовательно 1N раствором бикарбоната натрия, водой, холодной О, 75 и лимонной кислотой и водой. Органичес" кую фазу сушат над сульфатом магния, фильтруют и фильтрат концентрируют в вакууме, получают 1,6 г сырого продукта. Продукт растворяют в хлороформе и помещают на две пластинки для анализа толстослойной хроматографией. Проявление ведут в смеси хлороформ и метанол (9:1). Основные полосы вырезают из каждой пластины и продукт выделяют из силикагеля, экстрагируя смесью хлороформа и метанола. Элюат (1,3 г) растворяют, вновь наносят на одинарную пластинку для толстослойной хроматографии и получают 1,0 г (70Ъ) целевого соединения в виде аморфного твердого вещества; с ) — 25,бо (C = 0,5, метанол).

Найдено, С 58,60; Н 6,87;

N 11,53.

СЗ Н5дй О 85 (714, 88).

Вычислейо,Ъ: С 58,80, Н 7,05;

N 11, 76.

Г. Моноацетат хлоргидрата

-тироэил-0-аланил-L-аланил-L-фенилаланил-N+-метил-L-метиониламида.

Через смесь иэ 5 мл ледяной уксусной кислоты, содержащей 0,5 мл аниэола,и 0,880 г (0,0011 моль) продукта, описанного в части В, барботируют хлористый водород в течение 30 мин, затем реакционную смесь охлаждают и лиофилизируют. Получают

0,704 г целевого соединения; (с, > — 16,2 о (С = 0,5, метанол), Найдено,Ъ: С 53,48; Н 6,47;

N 11,62; CP 6,50.

Сзон )4 06S ° 1,25 НСР -СтН О (719,14)

Вычйслено, Ъ: С 53, 43; Н б, 45;

N 11,68; С 6,16.

Анализ аминокислоты: Найдено Tyr

1,00; А а 1,99; Phe 1, 01.

Пример 6. Приготовление ацетата L-тирозил-0-аланилглицил-L-фенилаланил-С-N -метил-S-этилцист еи нил амид а.

М

A. Дициклогексиламиновая соль

N — nlpem-бутилоксикарбонил-S-этил-L-цистеина.

К 400 мл диметилформамида добавляют 50 г (0,336 моль) L-(S-этил)-цистеина, а затем тетраметилгуанидин (44,8 мл, 0,336 моль) и дициклогексиламин (66,8 мл, 0,336 моль).

После этого по каплям при перемешивании добавляют mpem -бутиловый эфир азидомуравьиной кислоты (68 мл, 0,50 моль). в течение 1 ч и смесь продолжают перемешивать в течение

48 ч при комнатной температуре.

Выпавший в осадок аэид дициклогексиламмония отфильтровывают и фильтрат упаривают в вакууме. Остаток

19

753358

5

d0

Б5 распределяют между эфиром и водой. рН водного слоя повышают до 8,0.

Органический слой отделяют и отбрасывают. Водный слой подкисляют до рН 2,0 холодной разбавленной соляной кислотой и экстрагируют холодным этилацетатом. Этилацетатную фазу промывают водой, сушат над сульфатом магния и концентрируют в вакууме.

Полученный остаток растворяют в эфире и к раствору добавляют 66,8 мл (0,336 моль) дициклогексиламина.

Полученный осадок перекристаллизовывают из этилацетата и получают

32,8 r (23Ъ от теории) целевого соединения, т.пл. 156-159 С; (о )

1о (С 1 О „,. анол).,- 25 7 7 (С = 1, метанол).

Найдено,Ъ: С 61,37, Н 9,98 и 6,26.

С gH4gN 04S (430,6) .

Вычислено,%: С 61,36, Н 9,83;

N 6,51.

Б. и -Еутилоксикарбонил-й-ме 0 » тил-S-этил-L-цистеиниламид.

К 50 мл безводного тетрагидрофурана добавляют 18,58 г (74,3 моль) и -бутилоксикарбонил-S-этил-LФ

-цистеина (приготовлен при нейтрализации продукта, описанного в части А. и экстракции этилацетатом).

Полученную смесь по каплям в течение 30 мин добавляют к перемешиваемой суспенэии 42,45 r гидрида калия (22,1Ъ КН в минеральном масле„

0,234 моль КН) в 375 мл тетрагидрофурана при О С и содержащей 0,35 г

18-кроун-6-эфира. Затем по каплям в течение 15-20 мин добавляют йодистый метил (9,25 мл, 0,149 моль) в 20 мл тетрагидрофурана. Смесь перемешивают при 0 С 1,5 час, к ней по каплям добавляют 7.,5 мл уксусной кислоты в 7,5 мл тетрагидрофурана, а затем 5 мл этанола. Полученную реакционную смесь выливают на лед и устанавливают рН 9 смеси при добавлении

2 N раствора гидроокиси натрия. Полученный водный раствор экстрагируют эфиром, рН 3 водного слоя устанавливают при добавлении твердой лимонной кислоты, затем экстрагируют эфиром (Зх300 мл), Эфирные экстракты обьеди-, няют, промывают водой, сушат над сульфатом магния и концентрируют в вакууме. Полученный остаток растворяют в 200 мл эфира и к раствору добавляют

9,56 мл (74,3 моль) 4-(+)-d-метилбензиламина. К охлажденной смеси добавляют 500 мл петролейного эфира.

Раствор концентрируют в вакууме и остаток вновь растворяют в петролейном эфире. Затем смесь охлаждают до

-78 С и осадок отфильтровывают (2,74 г). Маточный раствор концентрируют в вакууме и остаток растворяют в эфире. Эфирный раствор промывают 1N лимонной кислотой, водой и сушат над сульфатом магния, конценTpHpyloT в вакУУме. Получают 6 56 r (ЗЗЪ от теории) сиропа; p ) (С = 1, этанол);

ЯМР (СОСЯ ) в О 2 90, N

1,45 мРМ -бутил, д 4,9-4 5 СН

Продукт (6 5 г О 025 моль) растворяют в 80 мл диметнлформамида и раствор охлаждают до -15 C. Затем добавляют к нему изобутиловый эфир хлормуравьиной кислоты (3, 6 мл, 0,027 моль) и й-метилморфолин (2,99 мл, 0,027 моль). Реакционную смесь перемешивают 10 мнн при -15 С, а затем через нее пропускают газообразный безводный аммиак в течение

1 ч. Смесь дополнительно перемешивают 4 ч при †15, а затем вливают в смесь льда и 1 и раствора бикарбоната натрия. Холодный водный слой экстрагируют эфиром, эфирный экстракт промывают холодной 0,75 и лимонной кислотой и водой, сушат над сульфатом магния и концентрируют в вакууме. Получают остаток, который кристаллизуют из смеси эфира и петролейного эфира и получают 1,7 г (26Ъ) целевого соединения; т. пл. 56-59ОС,P&j з — 127 6 о(С

О, 5, хлороформ) . ямР (снсе ): сг 2,80, й-сн,, б 1,46 я реп — ; б 4,9-4,5; б-СН.

Найдено,%: С 50,56; Н 7,93;

N 10,51.

С Н лйтОзS (261 36)

Вычислено,Ъ: С 50,55; Н 8,10;

N 10,72.

В. N -ape -Бутилоксикарбонил-L-фенилаланил-й -метил-S — этил-L—

-цистеиниламид.

К 20 мл ледяной уксусной кислоты, содержащей 1 мл триэтилсилана и 4 мл анизола, добавляют 2,5 r (9,5 моль) НР-трет-бутилоксикарбонил-N -метил-S-ýòèë-L-цистеиниламнда.

Через полученную смесь в течение

30 мин пропускают сухой хлористый водород, затем добавляют .фир и получают осадок в виде хлористоводороцной соли (1,8 r). Осадок растворяют в 25 .мл диметилформамида,раствор охлаждают до О С и нейтрализуют 1,31 мл триэтиламина.ДобавЛяют и -repen-бутилоксикарбонил-L-фенилаланин (2,65 г, 0,01 моль); 1,35 г (0,01 моль) оксибензотиазола и

2,06 г (0,01 моль) дициклогексилкарбодиимида. Полученную смесь перемешивают при О С 2 ч и при комнатной температуре 24 ч. Затем ее охлаждают да С С и отфильтровывают образовавшийся осадок. Фильтрат концентрируют в вакууме и полученный остаток растворяют в этилацетате. Раствор экстрагируют 1 и раствором бикарбоната натрия, водой, 0,75 N лимонной кислотой и водой. Затем смесь сушат над сульфатом магния, растворитель

21

753358

45 упаривают в вакууме, полученный сироп растворяют в хлороформе и раствор вносят в колонку (Зх45 см), содерх<ащую силикагель сорта 62 фирмы

"Грэйс и Давидсон". Элюирование ведут смесью хлороформа и метанола при . ступенчатом градиенте (СН С% -

СНСЕ (СН,ОН) Ь: 1)),фРакции объединяют в соответствии с результатами анализа и упаривают в вакууме, получают 3,0 r целевого соединения;

L 2D — 77< (С = 0,5, метанол).

Йайдено,Ъ: С 58,87; Н 7,41

N 9,81.

С ьНЗ Иь04 (409 ° 5

Вычислейо,Ъ: С 58,65; Н 7,63;

N 10 26.. 15

Ж. Дициклогексиламиновая соль и

- pern-бутилоксикарбонил-L-тирозил-О-аланилглицина.

46,80 г продукта, полученного при гидрогенолизе (способом, описанным 20 в части Д примера 1), бензил N -mpem-бутилоксикарбонил-О-бензил-L-THpo зил-D-.аланилглицината, растноряют н 150 мл изопропилового спирта и к раствору добавляют 16 мл (0,081 моль) р5 дициклогексиламина, и эфир, доведя объем раствора до 1,5 л, упаривают полутвердую массу, обрабатывают до затвердения растиранием и полученный осадок сушат. Получают 46,04 г (98%) твердого вещества; т.пл. 194,5-197 С.

Вещество растворяют в 100 мл кипящего метанола и добавляют 500 мл изопропилового спирта. Раствор упаринают до 150 мл, продувая через него азот. После охлаждения продукт выпадает и осадок, осадок отделяют, сушат и получают 41,44 г (88Ъ) целевого соединения,.т.пл. 198-200,5 С, (с )н + 17,9 (C = 1,метанол).

Найдено,Ъ: С 62,95; Н 8,77; 40

N 9,20.

Сэлн ой 0 (590,8).

Вычислено, С 63,03; Н 8,53;

N 9,48.

3. N - mpem-Бутилоксикарбонил-L-тирозил-D-аланилглицил-L-фенилаланил-N -метил-S-этил-L-цистеиниламид.

С

К 20 мл ледяной уксусной кислоты, содержащей 3 мл анизола и 3 мл триэтилсилана, добавляют 2,5 г 50 (6, 1 моль) продукта, описанного в части В. Через реакционную смесь барботируют сухой хлористый водород в течение 25 мин.Добавляют эфир, смесь охлаждают, отфильтровывают осадок и получают 1,9 г (5,5 моль) хлористонодородной соли. Соль растворяют в 25 мл диметилформамида, раствор охлаждают и добавляют к нему 3,2 г (5,5 моль) дициклогексиламиновой соли М®-арю<п -бутилоксикарбонил-L- бб

-тирозил-D-аланилглицина.Полученную смесь перемешинают при 0©С

10 мин. Затем добавляют оксибензотиазол (0,74 г, 5,5 моль) и дицикпагексилкарбодиимид (2,1 г, 5,5 моль) 65 и смесь перемешивают при О С 2 ч и при 4 С вЂ” 48 ч.Образовавшийся осадок

О отфильтровывают и фильтрат упаривают в вакууме. Остаток растворяют в этилацетате и раствор промывают

1N раствором бикарбоната натрия, водой, 0,75 N лимонной кислотой и, водой. Органическую фазу сушат над сульфатом магния и упаривают в вакууме. Получают 3,5 г сырого цЕлевого соединения. Продукт растворяют н хлороформе и вносят в колонку размерами Зх45 см с силикагелем сорта 62 фирмы "Грейс и Давидсон" и элюирование ведут при ступенчатом градиенте смесью хлороформ-метанол (СНСŠ— СНСЕ :СН ОН (9:1)1. Фракции комбинируют на основании результатов анализа хроматографией в тонком слое, упаривают в вакууме. Получают

2,4 r (62Ъ) чистого целевого соединения; P ) — 30,7о(С = 0,5,метанол).

Найдено,Ъ:С 58,14; Н 6,96

N 11,94.

С 4Н Мб OgS (700,86).

Вычислено Ъ: С 58,27; Н 6,90;

N 11,99.

Анализ аминокислоты: Найдейо Tyr

1,01; A9 а 1,00; G y 1,00; Phe

О 98 ННз 109

Е. Ацетат L-тирозил-0-аланилглицил-L-фенилаланил-L-N -метил-S-этилцистеиниламида.

К 20 мл ледяной уксусной кислоты, содержащей 2 мл анизола и 2 мп триэтилсилана, добавляют 2,2 r (3 моль) продукта, описанного в части Д. Через реакционную смесь барботируют и течение 25 мин сухой хлористый водород. Добавляют эфир и смесь охлаждают. Полученный осадок отфильтровывают и сушат (2,0 r).

Осадок (1,2 г) растворяют н достаточном количестве буфера (1% пиридина и 0,05Ъ уксусной кислоты в воде) для достижения объема 10 мл.Раствор вносят в колонку размерами 2,5х99 см, заполненную диэтиламиноэтил — сефадексом А 25 (ацетат), предварительно уравновешенную с тем же буфером.Определенные фракции комбинируют и лиофилизируют. При повторной лиофилизации иэ 10%-ной уксусной кислоты и последующей лиофилизации из смеси воды и ацетонитрила (75:25) получают

0,59 г целевого соединения,t ) +9,9 (C = 0,5, 1 И HCa).

Найдено,Ъ: С 56,63; Н 6,72; и 12,63; S 4,69.

С <Н й6 О S (660,79)

Вйчйслейо,%: С 53,35; Н 6,71;

N 12,72; S 4,85.

Анализ аминокислоты: Найдено Tyr

1,00, A%a 1,01, Ыу 1,00; Phe О 98;

МН 1,09.

Пример 7. Приготовление ацехата L-триозил-0-аланилглицил-L-фенилаланил-N -метил-L-лейциламина.

23

753358

1

A. N -ар -Бутилоксикарбонил-й "-.

-метил-L-лейцина в Форме d-(+)-d-ме тилбензиламиновой соли.

К 20 мл эфира добавляют 12,5 r (0,05 моль) гидрата N@-re -бутилоксикарбонил-L-лейцина и смесь сушат над сульфатом магния и концентрируют в вакууме. Остаток растворяют в 75 мл тетрагидрофурана и раствор по каплям при перемешивании добавляют в течение 35 мин к охлажденной суспензии (ООС} 27,9 гидрида калия (22,1Ъ-ная суспензия в минеральном масле, 0,154 моль КН) в 200 мл тетрагидрофурана, содержащего 0,25 г 18-кроун-6-эфира. Затем в течение 15 мин по каплям добавляют йодистый метил (6,4 г) в 10 мл тетрагидрофуране.

Смесь выдерживают при ООС в течение

3 ч, затем в нее по каплям вносят

5 мл уксусной кислоты в 5 мл тетрагидрофурана и 5 мл этанола. Полученную смесь выливают на 500 мл льда при добавлении 1 и раствора гидроокиси натрия устанавливают рН 9.

Водный раствор экстрагируют эфиром и подкисляют до рН 3 при добавлении твердой лимонной кислоты. Подкисленную водную суспензию зкстрагируют эфиром. Объединенные эфирные экстракты промывают. водой, сушат над сульфатом магния и концентрируют в вакууме. ЗО

Получают 13,2 r (107Ъ от теории) сырого продукта. Анализ методом хроматографии в тонком слое показал присутствие в полученном продукте некоторого количества непрореагиро- 35 вавшего исходного продукта. Полученный продукт растворяют в эфире и к раствору добавляют 5,25 мл (0,05 моль) тетрабутиламина.Эфирный раствор разбавляют петролейным эфи- 4О ром и охлаждают в течение. ночи.Образовавшийся осадок отфильтровывают и фильтрат промывают 1 N лимонной кислотой, а затем водой. Органическую фазу сушат над сульфатом магния 45 и концентрируют в вакууме. Остаток (6,45 г) растворяют в 100 мл эфира и к раствору добавляют 3,39 г (0,026 моль) d-(+)-d-метилбензиламина. Раствор охлаждают в течение ночи, затем фильтруют и получают 9,09 г (49Ъ) целевого соединения, т.пл. 120122ОC, (Ng » -14,1 (С = 1,метанол).

Найдено,Ъ С 65,83, Н 9,05;

N 7,35.

C HggNg 04 (366, 5), Вычислено, Ъ: С 65,54; Н 9,35; и 7,64 °

1;

Б. и —.mpern -Вутилоксикарбонил- N

-метил-L-лейциламид.

Смесь из 80 мп диметилформамида 60 и 11,5 г (0,047 моль) и "-rqpern-бутилоксикарбонил-N -метил-L-лейцина сК (приготовлен при нейтрализации продукта, описанного в части А,лимонной кислотой с последующей экстракцией g5 эфиром) охлаждают до -15 C и добавляют к ней изобутиловый эфир oð равьиной кислоты (6,7 мл, 0,052 моль) и N-метилморфолин (5,7 мл, 0,052 моль).

Смесь перемешивают 10 мин при -15 C и в течение 1 ч и через нее барботируют безводный аммиак. Перемешивание продолжают еще 4 ч при -15©С.

Затем реакционную смесь вливают в смесь 1 N раствора бикарбоната натрия и льда. Охлажденную смесь экстрагируют эфиром, эфирный слой промывают

0,75 и лимонной кислотой и водой, сушат над сульфатом магния и упаривают в вакууме. Остаток кристаллизуют из смеси эфира и петролейного эфира и получают 5,5 r (48Ъ) целевого соединения т.пл. 127-128 С;

5<1, 42,2 (С = 1, метанол).

Йайдено,Ъ: С 59,17; Н 9,66;

N 11,21.

С Нр и 0 (244,3) °

Вычислено,Ъ: С 58,99; Н 9,90;

N 11,47, В. N+-tnpem-Вутилоксикарбонил-L-фенилаланил-N"-метил-L-лейциламин.

К 30 мл ледяной уксусной кислоты, содержащей 3 мл анизола и 3 мл триэтилсилана, добавляют 5,0 r (0,02 моль) продукта, описанного в части В, и через смесь барботируют сухой хлористый водород в течение

25 мин, Затем добавляют эфир и смесь охлаждают. Образовавшийся осадок сушат (-3,6 r). Собранную хлористоводородную соль растворяют в 60 мл диметилформамида. Раствор охлаждают до 0 С и добавляют к нему 3,99 мл (0,02 моль) дициклогексиламина.

Смесь перемешивают при 0 С 10 мин, добавляют 5,3 r (0,02 моль) N — Р "1-бутилоксикарбонил-L-фенилаланина, а затем 2,7 r (0,02 моль) оксибензотиазола и 4,12 г (0,02 моль) дициклогексилкарбодиимида. Реакционную смесь перемешивают 2 ч при ОаС, затем при комнатной температуре 24 ч.

После охлаждения до ООС смесь фильтруют и фильтрат .упаривают в вакууме.

Остаток растворяют в этилацетате и полученный раствор промывают 1 N раствором бикарбоната натрия, водой, 0,75 N лимонной кислотой и водой.

Затем раствор. высушивают над сульфатом магния и упаривают в вакууме.

Полученный остаток растворяют в хлороформе и раствор переносят в колонку размерами 3 х 45 см с силикагелем.

Элюирование проводят при градиенте хлороформ-метанол СНСВу — CHCF ..

СН>ОН (9:1)) . Фракций комбинируют на основании результатов анализа методом хроматографии в тонком слое и после упаривания растворителя получают 5,7 r (73Ъ) целевого соединения, б) > -49,5О(С = 0,5,метанол).

75335ч.

ЯМР (СОСФ ) О 1 4 т Гф6г -бутил

d 7,25 фенил, d 0,95-0,75, CH(CH ) j б 2,7 М-СН, Г. N - mph-Бутилоксикарбонил-Lгтироз ил- 0- аланилглицил- L-фенилала4ил-N -метил- L-лейциламид

5

Смесь из 20 мл 1 М HCk в ледяной уксусной кислоте, содержащей 1 мл анизола 2,0 г продукта, описанного в части В, выдерживают при комнатной температуре 30 мин, добавляют эфир и охлаждают. Полученный осадок отделяют и высушивают (1,63 г),Cобранную хлористоводородную соль растворяют в 30 мл диметилформамида и к раствору добавляют 2,95 г 15 (0,05 моль) дихлоргексиламиновой соли N — Р(-бутилоксикарбонил-LЮ

-тироз ил-0- аланилглицина. Смесь перемешивают 15 мин при О С, затем к ней добавляют 0,675 г (0,005 моль) оксибензотиазола и 1,3 г (0,005 моль) дициклогексилкарбодиимида.Реакционную смесь перемешивают 24 ч при

4ОС, полученный осадок отфильтровывают и фильтрат концентрируют в вакууме. Остаток растворяют в этилацетате и раствор промывают 1 N раствором бикарбоната натрия, водой, 0,75 М лимонной кислотой и водой.Этилацетатный раствор сушат над сульфатом магния и концентрируют в вакууме. По- ЗО лученный остаток растворяют в хлороформе и раствор вносят в колонку

Зх45 см с силикагелем. Продукт элюи.руют,используя ступенчатый градиент, смесью хлороформ-зтанола Снбо - . 35 СНИ -CHg0H (9: 1)) . Фракцни объединяют на Основании результатов анализа хроматографией в тонком слое и после упаривания растворителя получают 2,3 r (67Ъ) целевого соедине- 4(} ния; а1 -17,5О(С = О, б, метанол) .

Найденд, Ъ: С 61, 33; Н 7,47;

N 12, 08.

С3rH î 1608 (682, 8) °

Вычислено, Ъ: С 61, 57 Н 7, 38; 45

N 12,31.

Анализ аминокислоты: Найдено Ty r

1,00; АЪа 1,01; GPy 0,99; Phe 1,00, NH3

Д. Ацетат L-тирозил-0-аланилглицил- L-фенилаланил-М -метил- L-лейцил(, 50 амида.

Смесь из 5 мл муравьиной кислоты, содержащей 0,5 мл анизола и 0,1 мп тризтилсилана и 1,8 (0,003 моЛь) продукта, описанного в части Г, перемешивают при комнатной температуре

3 ч, затем разбавляют эфиром и выдерживают в течение 1 ч. От полученного масла декантацией отделяют эфир, масло растворяют в этанолв. При до- 60 бавлении получают осадок, который отфильтровывают, сушат и получают

0,9 r сырого целевого соединения.

Продукт растворяют в достаточном ко" личестве буфера (1Ъ пиридина и 0,05Ъ. 65 муравьиной кислоты в воде } до объема

5 мл. Раствор вводят в колонку размерами 2,5х100 см, заполненную диэтиламиноэтил-сефадексом A-25 (эфир муравьиной кислоты)и элюируют тем же буфером. Соответствующие фракции объединяют на основании УФ-профиля элюирования и лиофилизируют. При повторной лиофилизации из 10Ъ-ной уксусной кислоты и из смеси воды и ацетонитрила .(75:25) получают

О, 852 r целевого соединения $01 >

М

+ 23,2о(С = 0,6, NHCP)

Анализ аминокислоты: Найдено Туг

1 02, Ма 1 00; Gkу 1 01; Phe 0 96, Мй i,îç.

Пример 8. Приготовление хлоргидрата L-тирозил-0-аланилглицил- -фенилаланил-S-параметоксибензил-L-цистеинламида.

A. N - mp(. rn-Бутилоксикарбонил-S-параметоксибензил-L-цистеиниламид.

К 80 мл диметилформамида добавляют 6,82 г (0,02 моль) М -mpem-бутилоксикарбонил-S — è- метоксибензил-L-цистеина и после охлаждения до

-15 C к этой смеси добавляют 2,88 мл (0,022 моль) изобутилового эфира хлормуравьиной кислоты и 2,42 мл (0,022 моль) N-ìåòèëìoðôoëèíà .×åðåç

10 мин через реакционную смесь в течение 1,5 ч пузырьками пропускают безводный аммиак. Перемешивание продолжают еще 2 ч при -15ОС. Затем реакционную смесь вливают в смесь льда и 1 N раствора бикарбоната натрия. Полученную водную суспензию экстрагируют этилацетатом и полученный экстракт промывают водой, 0 75 М лимонной кислотой и водой.

Органический слой сушат над сульфатом магния и концентрируют в вакууме. Остаток перекристаллизовывают из смеси этанола и воды и получают

4,9 г (72Ъ) целево(о соединения, т.пл. 138-140оС;(с(11 -12,8О(С = 5, метанол)

Найдено,Ъ: С 56,58; Н 6,97;

N 8,07.

СцНцМ О) 5 (340,4).

ВычислЕно,Ъ: С 56,45; Н 7,11;

N 8,23, Б.М -еРе® -Бутилоксикарбонил-LФ

-фенилаланил-S-параметоксибензил— L-öèñTåíèëàìèä.

Безводный хлористый водород барботируют через раствор 4,1 г (О, 012 моль) продукта, описанного в части А, в 45 мл ледяной уксусной кислоты, 5 мл анизола и 5 мл триэтилсилана. Через 20 мин добавляют эфир, отделяют и сушат образовавшийся осадок (3,3 r). Собранную хлористоводородную соль растворяют в 50 мл диметилформамида и к раствору добавляют 2,92 r (О, 012 моль) ициклогексиламина, 3,19 г (0,012 моль) N -rap(. m-бутилоксикарбо27

28

753358

Безводный хлористый водород барботируют через раствор 1,3 г

30 (О, 027 моль) продукта, описанного в части А, в 40 мл ледяной уксусной кислоты, 4 мл аниэола и 4 мл триэтилсилана. Через 20 мин к смеси добавляют эфир, образовавшийся осадок собирают и высушивают (1,1 г). Хлористонодородную соль растворяют в 10 мл диметилформамида и смесь охлаждают до ОоС. Затем добавляют триэтиламин (0,34 мл, 0,0026 моль) и через 10 мин

1 06 г (0,0026 моль) N+-mpem-бутил- 40 оксикарбонил-L-тирозил-D-аланилглицина, 0,35 г (0,00?6 моль) оксибенэотиазола и 0,536 г (0,0026 моль) дициклогексилкарбодиимида. Реакционную смесь перемешивают при ООС 2 ч и при 4ОС вЂ” 72 ч. Полученный осадок собирают и фильтрат концентрируют н вакууме. Остаток растворяют в этилацетате и раствор промывают 1 N раствором бикарбоната натрия, водой, 50

О, 75 N лимонной кислотой и нодой.

Экстракт высушивают над сульфатом магния и концентрируют в вакууме.

Остаток растворяют. в этилацетате и чистят хроматографированием на силикагеле. Фракции комбинируют по резуль-55 татам анализа, концентрируют и получают 1,1 r (52%) целевого соединения после кристаллизации из небольшого объема этилацетата; сi $ — 4, 3 (C

О

0,5, диметилсульфоксид).

Найдено,ь: С 59,95, Н 6,24;

N 10,53.

С ЗФ НВ7 N.60OS (778, 9).

Вычислено,%; С 60,14; Н 6,47, и 10,79. 65 бО нил-L-фенилаланина и 1,62 (0,012 моль) оксибензотиазола. Смесь перемешивают 10 мин при О С и добавляют

2,47 г (0,012 моль) дициклогексилкарбодиимида. Через 2 ч перемешивания при О С реакционную смесь еще 24 ч перемешивают при комнатной температуре, затем вновь охлаждают до О С и отфильтровывают полученный осадок. Фильтрат концентрируют в вакууме и остаток растворяют в н-бутиловом спирте. Раствор промывают 1 N раствором бикарбоната натрия и водой, затем высушивают над сульфатом магния и упаринают в вакууме. Полученный остаток кристаллизуют из этанола и получают 4,95 r 15 (85%) целевого соединения, т.пл. 175178 С; 5>l — 35,1 (С = 0,5, диметилформамид)

Найдено Ъ: С 61 78; Н 6 78; N 8, 28. 20

С Н ььй ь Оь S (4 87 ° б )

Вычислено,Ъ:С 61,58; Н 6,82;

N 8,62.

Б. N -трет-Бутилоксикарбонил-L-тирозил-D-аланилглицил-L-фенилаланил-S — п-метоксибензил-L-цистеиниламид.

Анализ аминокислоты: Найдено Ty r

0,98; АРа 1,03, СР у 1,01Ä Phe 0,98;

NH1 0,99.

Г. Хлоргидрат L-тирозил-D-аланилглицил-L-фенилаланил-S è-метоксибен з ил- L --цистеи нил амида.

К 20 мл ледяной уксусной кислоты, содержащей 0,5 мл анизола, добавляют

0,90 r (0,0012 моль) продукта, описанного в части В. Безводный хлористый водород барботируют через раствор н течение 30 мин. Затем смесь лиофилизируют и получают 0,862 г (100%) целевого соединения,(oL) + 2,6 (С = 0,5, 1NHC< )

Найдено,%: С 56,85; H 6,06, М 11,48, С 5,21, Сьд Н ь N 0 7 S (715,2)

Вычислено,Ъ: С 57,09; Н 6,06; N 11,75

С1 4,96.

Анализ аминокислоты: Найдено Туг

0,99; АРа 1,01; GPу 1,01; Phe 0,98, NH 0,99.

Пример 9. Приготовление ацетата L-тирозил-D-аланилглицил-L-фенилаланин-N -метил-L-ìåòèoíèëàìèäà.

А. Соль N -mpem-бутилоксикарбонил—

-N+-метил-L-метионина и 4(+)d-метилбензиламина.

Суспензию дициклогексиламиновой соли и -mpem-бутилоксикарбонил-L

-метионина (86,13 r, 0,2 моль) в

600 мл холодного эфира промывают

4 раза порциями по 100 мл холодной

1,5 N лимонной кислотой и водой.

Отделенную органическую фазу высушивают над сульфатом магния и концентрируют н вакууме. Остаток растворяют в 150 мл тетрагидрофурана и раствор по каплям в течение 30 мин добавляют к перемешинаемой суспензии

0,6 моль гидрида калия в 1000 мл безводного тетрагидрофурана (ООC), содержавшего 1,0 r 18 — кроун-б-эфира. К реакционной смеси добавляют по каплям в течение 15 минут йодистый метил (25 мл, 0,4 моль). Через

2 ч снова по каплям добавляют смесь 20 мл уксусной кислоты и 20 мл тетрагидрофурана, а затем 40 мл этанола. Смесь перемешивают н течение

30 мин и выливают на 2 .л льда. При добавлении 2й раствора гидроокиси калия устанавлинают рН 7 водной смеси и продукт экстрагируют эфиром (3x400 мл), затем подкисляют до рН 3 твердой лимонной кислотой.

Смесь зкстрагируют эфиром (Зх500 мл).

Эфирные экстракты объединяют, промывают и сушат над сульфатом магния, упаривают в вакууме до получения сиропа (44,76 r, 84% от теории).Сироп растноряют в 450 мл этилацетата и добавляют 25,78 мл (0,2 моль)

4-(+)-4-метилбензиламина. Охлаждают, выпавший в осадок продукт отфильтровывают, получают 51,05 г (66%) целевого соединения; т.пл. 131-134 С;

E+l g -18,9 (С = 1, этанол).

29

753358

Найдено,%: С 59,15, Н 8,12

N 7,29.

C)gHg N 2 04 S (384, 54 )

Вычислено,%: С 59, 35; Н S 39, М 7,29.

Б. Й - P+ Бутилоксикарбонил-N -метил-L-метиониламид.

N -врет-Бутилоксикарбонил-М -меЫ» Ы тил- -метионин (33,3 г, 0,127 моль), полученный при подкислении соли

d-(+)-d-метилбензиламина, описанной в части A,ðàñòâoðÿþò в 160 мл диметилформамида и экстрагируют эфиром.

Раствор охлаждают до -15оС и добавляют к нему 18,3 мл (0,14 моль) изобутилхлорформиата (15,4 мл, 0,14 моль) N-метилморфолина. Смесь перемешивают 10 мин при -15 C u через нее барботируют безводный аммиак в течение 1 ч. Перемешивание при -15 С продолжают в течение

4 ч, затем реакционную смесь выливают.в 300 мл холодного раствора

1N бикарбоната натрия. Водную суспензию экстрагируют эфиром. Эфирный экстракт промывают водой, холодной

0,75 N лимонной кислотой и водой, сушат над сульфатом магния и упаривают в вакууме до сиропа. Сироп кристаллиэуют из смеси эфира и петролейного эфира и получают 16 г (48%) целевого соединения, т.пл. 75-77оС;

177,3 (С = 0,5, хлороформ).

Найдено,%: С 50,63, Н 8,57;

N 10,45.

СПН„М. 5ОЭ (262 17)

Вычислено,%: С 50,36; Н 8,45;

М 10,78.

B. N -трВ -Бутилоксикарбонил- -фенилаланиí-N -метил-L-метиониламид.

Через смесь 70 мл ледяной уксусной кислоты, 5 мл анизола, 7 мл триэтилсилана и 13,15 r (0,05 моль) продукта, описанного в части Б,барботируют безводный хлористый водород в течение 25 минут и выливают ее в эфир. Образовавшийся осадок (9,9 г) сушат. Хлоргидрат растворяют в

200 мл диметилформамида. Смесь охлаждают до ООC и добавляют 9,9 мл (О, 05 моль) дициклогексиламина.После

10 мин перемешивания вносят 6,8 r (0,05 моль) оксибензотиазола, 13,3 г (О, 05 моль) М -mpern-бутилоксикарбонил-L-фенилаланина и 10,3 г (0,05 моль) дициклогексилкарбодиимида

Полученную смесь перемешивают 2 ч при 00С и 48 ч при комнатной температуре. После охлаждения до О С смесь

0 фильтруют и фильтрат концентрируют в вакууме. Полученное масло растворяют в этилацетате и раствор промывают последовательно 1 N раствором биР карбоната натрия, водой, О, 75 N лимонной кислотой и водой. Этилацетат ный раствор сушат над сульфатом магния, упаривают в вакууме и получают остаток, который кристаллизуют из эфира и получают 16,4 г (80%) це60

65 лоты. Соль растворяют в достаточном объеме воднбго буфера, содержащего

1% пиридина и 0,05% уксусной кислоты, чтобы довести общий объем до

60 мл.Раствор переносят в колоику (5x138 см) с диэтиламиноэтил-сефалевого соединения; т.пл. 114-115 С Ф1в д — 43,4 (С = 0,5, метанол), Найдено,%: С 58,76; Н 7,42;

М 10,30.

С20НЭФМЭ 04 5 (409 55

Вычислено,%: С 58,65; Н 7,63;

N1О,,26 °

Г. N -трет-Бутилоксикарбонил-LФ

-тирозил-0-аланилглицил-L-фенилаланил-М -метил-L-метиониламид.

К смеси 20 мл ледяной уксусной кислоты, 2 мл анизола и 2 мл триэтилсилана добавляют 3,5 г (8,56 моль) продукта, описанного в части В, и через смесь барботируют безводный хлористый водород в течение 25 мин.

Затем добавляют эфир, осажденный хлоргидрат отфильтровывают и фильтрат сушат в вакууме. Раствор 5,0 r (8,47 . моль) соли N -шРе -бутилоксиck карбонил-L-тирозил-0-аланилглицина

20 и дициклогексиламина в 40 мл диметилформамида охлаждают до 00С и к раствору добавляют ранее полученную хлористоводородную соль. После перемешивания при О C в течение нескольких

g5 минут добавляют 1,1 г (8,47, моль) оксибенэотиаэола и 1,7 г (8,47 моль) дициклогексилкарбодиимида. Смесь перемешивают в течение 24 ч при 4 С.

Полученный нерастворимый продукт отфильтровывают и фильтрат упаривают в вакууме. Остаток растворяют в этилацетате и раствор промывают последовательно 1 N водным раствором бикарбоната натрия, водой, холодной

0,75 N лимонной кислотой и водой .

Раствор сушат над сульфатом магния и упаривают в вакууме. Остаток хроматографируют, как описано в предыдущих примерах, получают„ 4,1 r (69%) целевого соединения;1Ы), -13,10

40 (C = 0,5, метанол).

Найдено,%: С 58,05; Н 6,62;

М 11,73.

С уН(N 0 з5 (700, 86 )

Вычислено,%: С 58,27; Н 6,90;

45 N 11, 99.

Анализ аминокислоты:Найдено Tyr

1,00; ALa 1,01; 6%у 0,99; Phe 1,00;

МНЭ 1,01.

Д. Ацет ат L тироз ил-0- аланилглицил- L-фенилаланил-М -метил- L-метиониламида.

Смесь иэ 15 мл тиоанизола, 8,3 r (0,012 моль) продукта, описан.ого в части Г, охлаждают до О С и добаво ляют к ней 50 мп холодной трифторуксусной кислоты. Смесь перемешивают при 0@C 30 мин, затем разбавляют несколькими объемами эфира.

Полученный осадок. сушат, получают

8 г сырой соли трифторуксусной кис32

753358 дексом A-25 (ацетатная форма),предварительно уравновешенным тем же буфером. .Ориентируясь на поглощение УФ при 280 nm собирают продукт, элюированный в промежутке от 1270 до 1850 иm. .Элюат лиофилиэируют.

Остаток растворяют примерно в

200 мл 1 и уксусной кислоты и раствор лиофилизируют вновь. После окончательной лиофилизации иэ смеси воды и ацетонитрила (3:1) получают

6,64 r (83%) целевого соединения, 2Ц + 21 7©(С = 1, 1 и H CP. ) (Ц 0 (В)

-м-сн- с-м-сн-с-мн-сн

22а сн

Формула изобретения

0 Rs ! !! I — С=И-С22-С вЂ” Я-СН- z ! 1

СН2 СН2

ЪК

ОН

8eH2 / 0CH3 тем, = -С14 СН21 — СН(СНЗ) 21 — ДСН2СН

3 р

0 R 0

222 ll I il

„, м-сн — с -м — сн- с -мн3L сн, В

0 Кв О !! I !!

СН вЂ” С - N — СН вЂ” С - N — СН вЂ” г Б

R СЕ2 СН2

0Н

40 R = R = R — водород или метил;

6 т

W = -СН -S-CH

2 2 1 г= — С -14Н

20.06. 77 при = — CH(CH ) 50

Источники информации, принятые во внимание при экспертизе

1. Э. ц!редер, К. Любке, Пептиды, М., "Мир", 1967, с. 112.

Составитель В. Волкова

Техред M.- Келемеш Корректор Н. Стец

Редактор Л. Герасимова

Тираж 495 Подписное

ЦНИИПИ Государственного комитета СССР по делам изобретений и открытий

113035, Москва, Ж-35, Раушская наб., д. 4/5

Заказ 52 30/1

Филиал ППП "Патент", г. Ужгород, ул. Проектная,4 где RI= R2 R 2 — водород, R — С4 — C4 .- алкил,"

R< RII R — независимо водород т или метил, где 40 -Н, О - в!рвпь -бутилоксикарбонил, R -R „Z и W имеют указанные выше значения, отщепляют .защитные группы в безводной кислой среде.

2. Способ по п.1, отличающийся тем, что процесс проводят в трифторуксусной или ледяной уксусной кислоте с газообразным хлористым водородом или в 98%-ной муравьиной кислоте .

Приоритет по признакам:

27.09.76 при R" =R2=R2 — водород

R4 - С4 - С4 -алкил, Найдено, В: С 56,50 Н 6,46, N 12,62,0 19,25.

C2gH44NlI0I2S (660,79 ).

Вычислено, Ъ: С 56, 35, Н 6, 71, и 12,72, 0 19,37.

Анализ аминокислоты: Найдено Ty r

1,00, А2а 1,01, 02у 100, Phe

0,99; йН2 1,03.

1.Способ получения пептидов общей формулы г= — С -3H

0 или их солей отличающийся что в соединении формулы

CH2 OeH3, — У вЂ” CH2CÍ3 .